最终版-实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁
荧光法测定硫酸奎尼丁发射光谱及含量.
荧光法测定硫酸奎尼丁发射光谱及含量
一、实验目的
1、掌握激光光谱和发射光谱的概念及其测定方法。
2、熟悉荧光分光光度计的基本原理和实验技术。
二、实验原理（略）
三、仪器和试剂（略）
四、实验步骤
µ；吸取体积*分1．标准溶液制备：按照讲义方法，标准溶液浓度改为10/g mL 别为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL（或2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL）；
2．样品溶液制备：50.0mg样品→定容500mL（储备液）→吸取1.00mL→定容100mL；
3．测量：
①空白溶液瑞利光谱及拉曼光谱扫描；
②标准溶液（浓度最大）发射光谱扫描（具体参数见白板）；
③标准曲线绘制；
④样品浓度测定（具体参数见白板）。
五、结果计算：
1、计算通式：
2、数据处理三线表：
荧光法测定硫酸奎尼丁测定结果表
C
F(INT)
回归方程：相关系数：
①绘制F－C标准曲线（电脑或坐标纸）；
②求F－C回归方程及线性相关系数；
③求试样中硫酸奎尼丁的含量（以百分质量分数表示，样品重50.0mg）。
3、计算过程
六、讨论
七、思考题：P109：1、2&P111：1、2
注意事项：
1、使用1、
2、
3、5、9号荧光分光光度计，吸取标准溶液体积2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL；
2、使用4、6、8号荧光分光度计，吸取标准溶液体积2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL。
中国药典2000版二部：硫酸奎尼丁
药品名称硫酸奎尼丁拼⾳名 Liusuan Kuiniding英⽂名 QUINIDINE SULFATE来源(分⼦式)与标准本品为(9S)-6’－甲氧基脱氧⾟可宁-9- 醇硫酸盐⼆⽔合物。
按⼲燥品计算，含 (C20H24N2O2)2.H2SO4 应为99.0～101.5 ％。
性状 本品为⽩⾊细针状结晶；⽆臭，味极苦；遇光渐变⾊；⽔溶液显右旋性，并显中性或碱性反应。
本品在沸⽔或⼄醇中易溶，在氯仿中溶解，在⽔中略溶，在⼄醚中⼏乎不溶。
检查 ⽆机盐与其他⽣物碱取本品1.0g，加氯仿－⽆⽔⼄醇(2:1)5ml，加热使溶解，溶液应澄清。
其他⾦鸡纳碱取本品，加稀⼄醇制成每1ml 中含10mg的溶液；照薄层⾊谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述溶液5µl，点于硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿－丙酮－⼆⼄胺(5:4 :1.25)为展开剂，展开后，微热使展开剂挥散，喷以碘铂酸钾试液使显⾊，除紫棕⾊主斑点外，不得显其他斑点。
⼲燥失重 取本品，在120 ℃⼲燥⾄恒重，减失重量不得过5.0 ％（附录Ⅷ L）。
炽灼残渣 不得过0.1 ％（附录Ⅷ N）鉴别 (1) 取本品约20mg，加⽔20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即显蓝⾊荧光。
(2) 取上述溶液5ml ，加溴试液1 ～2 滴后，加氨试液1ml ，即显翠绿⾊。
(3) 本品的⽔溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。
含量测定 取本品约0.15g ，精密称定，加冰醋酸7ml 溶解后，加醋酐3ml 与结晶紫指⽰液1 滴，⽤⾼氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，⾄溶液显绿⾊。
每1ml 的⾼氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg 的(C20H24N2O2)2.H2SO4 。
类别抗⼼律失常药。
剂量⼝服 ⼀次0.2 ～0.4g ⼀⽇1 ～2g注意严重⼼肌损害者禁⽤；⼼⼒衰竭，低⾎压及肝、肾功能不全者慎⽤。
贮藏遮光，密封保存。
制剂硫酸奎尼丁⽚。
2016-2017年分子荧光法测定奎宁的含量-学生实验记录（总结）
实验十一分子荧光法测定奎宁的含量一、实验目的1. 了解荧光分光光度计的性能与结构，掌握仪器的基本操作；2．学会绘制荧光激发光谱和发射光谱图(即确定最大的λex和λem)；3．定量测定奎宁的含量（标准曲线法）二、实验原理奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250nm和350nm，荧光发射峰在450nm。
在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：I f = k c，通过标准曲线法可以测定未知样品中的奎宁含量。
三、仪器与试剂1．仪器：岛津RF-5301型荧光分光光度计2．试剂：10.0 μg·mL-1奎宁储备液；0.05 mol·L-1 H2SO4溶液四、实验步骤1．系列标准溶液的配制取6支25mL的容量瓶，分别加入0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL 的10.0 μg·mL-1奎宁标准溶液，用0.05 mol·L-1 H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。
2. 绘制荧光发射光谱和激发光谱(以1.2μg·mL-1的标准溶液找最大λem和λex)将λex固定在250 nm, 选择合适的实验条件, 在350～600 nm范围内扫描即得荧光发射光谱，从谱图中找出最大λem值；将λem固定在450 nm, 选择合适的实验条件，在220～400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱，从谱图中找出最大λex 值。
3．绘制标准曲线将激发波长λex固定在250 nm处，荧光发射波长λem固定在450 nm左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度，以荧光强度为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标作图，得到标准溶液的荧光强度标准曲线。
4．未知样品的测定取约4 mL待测样品，按照标准溶液相同的测定条件测定其荧光强度，扫描三次，从标准曲线上计算出对应的浓度。
五、实验结果1．发射光谱和激发光谱的绘制以1.2μg·mL-1的标准溶液测定奎宁的发射光谱，固定激发波长为250nm，激发和发射狭缝分别设定为nm和nm，激发光谱扫描范围为350 ~ 600nm，得到奎宁的发射光谱，从图中可知其最大发射波长在nm左右。
分子荧光法测定奎宁的含量-学生实验记录
实验十一分子荧光法测定奎宁的含量一、实验目的1. 了解荧光分光光度计的性能与结构，掌握仪器的基本操作；2．学会绘制荧光激发光谱和发射光谱图(即确定最大的λex和λem)；3．定量测定奎宁的含量（标准曲线法）二、实验原理奎宁在稀酸溶液中是强荧光物质，它有两个激发波长250nm和350nm，荧光发射峰在450nm。
在低浓度时，荧光强度与荧光物质量浓度呈正比：I f = k c，通过标准曲线法可以测定未知样品中的奎宁含量。
三、仪器与试剂1．仪器：岛津RF-5301型荧光分光光度计2．试剂：10.0 μg·mL-1奎宁储备液；0.05 mol·L-1 H2SO4溶液四、实验步骤1．系列标准溶液的配制取6支25mL的容量瓶，分别加入0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL 的10.0 μg·mL-1奎宁标准溶液，用0.05 mol·L-1 H2SO4溶液稀释至刻度，摇匀。
2. 绘制荧光发射光谱和激发光谱(以1.2μg·mL-1的标准溶液找最大λem和λex)将λex固定在250 nm, 选择合适的实验条件, 在350～600 nm范围内扫描即得荧光发射光谱，从谱图中找出最大λem值；将λem固定在450 nm, 选择合适的实验条件，在220～400 nm范围内扫描即得荧光激发光谱，从谱图中找出最大λex值。
3．绘制标准曲线将激发波长λex固定在250 nm处，荧光发射波长λem固定在450 nm左右处，在选定条件下，测量系列标准溶液的荧光强度，以荧光强度为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标作图，得到标准溶液的荧光强度标准曲线。
4．未知样品的测定取约4 mL待测样品，按照标准溶液相同的测定条件测定其荧光强度，扫描三次，从标准曲线上计算出对应的浓度。
五、实验结果1．发射光谱和激发光谱的绘制以1.2μg·mL-1的标准溶液测定奎宁的发射光谱，固定激发波长为250nm，激发和发射狭缝分别设定为nm和nm，激发光谱扫描范围为350 ~ 600nm，得到奎宁的发射光谱，从图中可知其最大发射波长在nm左右。
实验2紫外性能和实验3奎尼丁荧_...
先进行荧光扫描，确定λex和λem。 激发光谱：固定荧光波长430nm，扫描 250-400nm，获得λex≈350nm(实测值) 发射光谱：固定激发波长(实测值) ，扫 描400-600nm，获得λem≈449nm(实测值) 荧光测定：在实测λex和λem条件下测定 空白、标准曲线（低→高浓度）、样品 （荧光杯必须洗净）。 每个测定溶液读数3次。
光源 光源
单色光
扇面镜
光电倍增管 或光电池
光电倍增管 或光电池
样品池
双波长
单色器2 单色器 λ2 λ1
⊿A
λ测 λ参 斩光器
光源
λ λ21
单色器1 单色器 特点：有两个单色器，利用吸光度差值定量， 特点：有两个单色器，利用吸光度差值定量， 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。 消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。
根据读数和标准液浓度绘制标准曲线 浓度 单位 计算样品液浓度C样，然后计算硫酸奎尼 丁百分含量： C样×D %= ×100%。稀释 倍数 W 注意事项： 容量仪器的准确操作； 荧光比色皿的拿取、使用、洗涤注意点； 浓度 单位 荧光测定时应先用空白溶剂校零，标准与 样品为相同溶剂时，校零只做1次即可。
实验三、荧光法测定硫酸奎尼丁含量
实验目的
掌握荧光物质的激发光谱与发射光 谱的概念与测定方法；
掌握用校正曲线法进行荧光定量分析； 熟悉荧光分光光度仪的使用方法。 仪器 日本分光FP-6500荧光分光光度仪 日本日立F-5000荧光光谱仪
激发光谱 荧光光谱 ？
荧光分光光度计结构示意图
Ex
光源
激发单色器
中国药典对紫外仪的性能测试要求： 波长精度（氘灯的486.02nm与656.10nm谱 （ 线进行校正 ） 吸收度准确性——用重铬酸钾的硫酸溶液 需波长较远的光（来源于仪器的瑕 疵和使用保养不善）。用碘化钠和亚硝酸 钠溶液检定√
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
四、实验步骤
3. 测定 （ 1 ）选择合适的荧光滤光片：降级发光滤光片（暂 用360nm的）置于被测液前面的光径中，将波长稍长 于360nm的滤光片在被测液后的光径中，接通一起电 源开关，打开样品室箱盖，旋动调零电位器，使电表 指针处于“ 0 ”位，仪器预热 20 分钟，放入某一浓度 的标准溶液，测定其荧光强度，必要时调节刻度旋钮 及灵敏钮（注意：一经调节，词梁钮不得再变动）。 更换波长再长一些的滤光片，依次同上法测定各滤光 片的荧光强度，选择荧光强度最强的一块荧光滤光片 作测定用。
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
五、操作要点和注意事项
1、注意观察激发光路与发射光路的夹角。
2、把样品池放入荧光分光光度计时，注意
每次要使同样的池壁面对激发单色器与
发射单色器。
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
六、 思考题
1、测量样品液、标准液时，为什么要同时
测定硫酸的空白溶液？ 。
2、选择360nm、400nm两块滤光片分别作激
N
2
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
二、实验原理
基于本品分子具有奎啉环结构，可产生荧光这一特 性，在实验中用930型荧光光度计测量其荧光强度， 由标准曲线法求出本品的含量。
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
三、仪器与试剂
930型荧光光度计； 硫酸奎尼丁对照品，硫酸奎尼丁
H2SO4溶液（0.05mol/L）
发光片时，对测定结果有无差异？
荧光分析法测定硫酸奎尼丁的含量
四、实验步骤
（ 2 ）选择合适的激发光滤光片：将已选择好的荧光 滤光片（暂定120nm的）固定，用各种波长（其波长 要小于荧光滤光片的波长）的滤光片代替 360nm的一 块激发光滤光片。一次同上法测定其荧光强度，选择 荧光最强的一块激发光滤光片作测定用。
实验5非水滴定法测定硫酸奎宁的含量
实验5 非水滴定法测定硫酸奎宁的含量
一、目的要求
通过本实验掌握非水滴定法的原理和操作。
二、原理
硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接进行滴定，而在非水酸性介质中，碱性显著增强，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸直接滴定，以指示剂或是点位法确定终点。
硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质中，只能解离为HSO4-，所以生物碱中的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐。
奎宁为二元碱，奎核氮可与硫酸成盐，奎啉环氮不与硫酸成盐，但在冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。
即：
三、操作
取硫酸奎宁（（C20H24N2O2）2·H2SO4·H2O，782.96）约0.2g，精密称定，加冰醋酸10 mL使其全部溶解后，再加醋酐5 mL和结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。
即得。
每1 mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于24.90 mg的
（C20H24N2O2）·H2SO4（746.93，无水）。
每人做两份样品，有精密度要求。
四、计算公式
含量% =
五、实验记录、计算结果
六、思考题
1、高氯酸滴定液（0.1mol/L）的配置方法。
2、标定高氯酸滴定液（0.1mol/L）的方法有哪些？。
分析化学实验：荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量
（三）直接比较法测定测定硫酸奎宁含量
Fx Cx Cs Fs
式中： CX——待测液的浓度； CS—标准液的浓度； FX—待测液的荧光强度 FS—标准液的荧光强度。
实验二十八
荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量
内转换
S2 S1 能 量 吸 收
内转换 振动弛豫 系间跨越3
T1
T2
发 射 荧 光
外转换
发 射 磷 振动弛豫 光
S0
l1
l2
l 2
l3
一、实验目的 1．掌握荧光分光光度法的基本原理 2．学会使用F- 4500荧光分光光度计
二、方法原理
利用荧光分析方法，测定能产生荧光的
物质含量，对不能产生荧光的物质，可以利 用某些具有能发生荧光基团的有机试剂，与 非荧光物质形成较纯的荧光化合物，然后进 行测定，是一种高灵敏度的分析方法。
定性依据：
激发光光谱 荧光光谱 定量依据： 当 l c≦0.05时,将括号项近似处理后： F= 2.3 I0 l c = Kc
定量方法
固定荧光波长为443 nm，从300 nm到400 nm，
每间隔10 nm测定一次荧光相对ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度。以波长为横
坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出
激发光谱图，指出最大激发波长λmax为345 nm。
• （二）硫酸奎宁荧光光谱的绘制
• 用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。
• 从380 nm到600 nm，每隔20 nm测定一次
标准曲线法：
配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，
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实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁
一、目的要求
1. 掌握用校正曲线法进行荧光定量分析。
2. 熟悉荧光分光光度计的使用方法。
二、实验原理
硫酸奎尼丁属生物碱类抗心律失常药，分子结构如图所示。
由于其分子结构中具有喹啉环结构（奎尼丁为奎宁的右旋体），故能产生较强的荧光，可用直接荧光法测定其荧光强度，由校正曲线法或回归方程求出试样中奎尼丁的含量。
三、主要仪器与试剂
仪器 岛津RF-1501型荧光分光光度计，移液管（1ml ，5ml ），刻度吸量管（5ml ），量瓶（50ml ）
试剂 H 2SO 4溶液（0.05mol/L ），硫酸奎尼丁（原料药），硫酸奎尼丁对照品
四、操作步骤
1.硫酸奎尼丁标准储备液的制备 精密称取硫酸奎尼丁对照品约50mg ，置50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取5ml ，置50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得硫酸奎尼丁标准贮备液。
2.标准系列溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁标准贮备液1、2、3、4及5ml ，分别置50ml 量瓶中，用硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，制得对照品标准系列溶液。
3.试样溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁试样约10mg ，置50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1ml ，置50ml 量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得待测样品溶液。
4.测定
（1）开机：先开主机电源，再开氙灯（Xe lamp ）。
（2）确定最大激发波长和最大发射波长。
（3）校正曲线测定：将空白硫酸溶液放入吸收池，点击自动调零按钮“Autozero ”，仪器自动进行空白校正（自动扣除空白）。
输入浓度值，按顺序放入标准溶液，点击“Start ”
H 32●H 2SO 4●2H 2O H 2
进行测定。
标准系列溶液测定完毕后，绘制标准曲线，仪器窗口将显示标准曲线回归方程（FI=K*C+B）和相关系数(r)。
（5）试样测定：按弹出对话框的提示进行。
试样测定的数据（荧光强度和浓度）将显示在数据表格里。
根据浓度计算试样中硫酸奎尼丁的百分含量。
5.关机：先关氙灯，待仪器降至室温后，再关总机电源。
五、注意事项
1. 在溶液的配制过程中要注意容量仪器的规范操作和使用。
2. 测量顺序为低浓度到高浓度，以减少测量误差。
3. 进行校正曲线测定和试样测定时，应保证仪器参数设置一致。
六、思考题
1. 测定试样溶液、标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？
2. 如何选择激发光波长（λex）和发射光波长（λem）？采用不同的λex或对λem 测定结果有何影响？
1. 答：消除硫酸溶液中荧光物质对于测定的影响。
2. 答：（1）①固定发射波长，测定激发光谱；再固定激发波长，测定发射光谱。
通常选择在最大激发波长和最大发射波长进行物质测定。
②查阅相关文献。
（2）可能造成定量的灵敏度降低。