PCR技术的研究与现状分析课程论文

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PCR行业分析调研报告

PCR行业分析调研报告

PCR行业分析调研报告PCR(聚合酶链式反应)是一种分子生物学技术,被广泛应用于基因检测、疾病诊断、法医学和生物学研究等领域。

PCR技术的使用对于科学研究和医学诊断起到了重要作用,因此PCR行业也逐渐发展壮大。

本文将对PCR行业进行分析调研。

首先,PCR行业的市场规模逐年增长。

随着生物技术和基因工程的进步,PCR技术得到了广泛的应用,对技术和产品的需求不断增加。

根据市场研究机构的报告,PCR市场在过去几年中保持了稳定的增长,预计未来几年内将继续保持增长态势。

市场规模的增加带动了PCR行业的发展,吸引了越来越多的企业投入到PCR技术的研发和生产中。

其次,PCR技术的应用领域不断扩大。

PCR技术最初主要应用于基因分析和疾病诊断领域,随着技术的不断革新和发展,其应用范围已经扩展到了农业、食品安全、环境检测等多个领域。

PCR技术在农业领域可以用于检测种子品质、农作物种类鉴定等;在食品安全领域可以用于检测食品中的病原体和致病菌;在环境检测领域可以用于水质和土壤污染的监测等。

PCR技术的应用领域的不断扩大将为PCR行业带来更多的发展机会。

第三,PCR行业的竞争日趋激烈。

随着市场规模的扩大和应用领域的扩展,越来越多的企业进入到PCR行业中。

市场上已经存在一些大型知名企业,它们拥有先进的技术和生产能力,具有较强的竞争力。

此外,还有一些中小型企业进入到PCR行业中,它们往往在特定领域有专注和深耕的优势。

因此,PCR行业的竞争日益激烈,企业需要不断提高产品质量和技术创新能力,才能在市场上取得竞争优势。

最后,PCR行业面临的挑战也不容忽视。

一方面,PCR技术的应用仍存在一定的局限性,需要进一步发展和改进。

例如,PCR技术在样本准备和扩增效率方面仍存在一些问题,需要不断改进和优化。

另一方面,PCR行业还面临着法规和监管的挑战。

随着PCR技术的广泛应用,相关的法规和监管也在不断完善和加强,企业需要不断适应和遵守相关的法规和标准。

pcr原理及应用中存在的问题

pcr原理及应用中存在的问题

pcr原理及应用中存在的问题
PCR(聚合酶链反应)是一种利用酶催化的反应,可以在几小时内从微量样本中大量扩增DNA片段,是一种非常有效的DNA扩增技术。

它的原理是,在一定的温度和时间内,利用DNA聚合酶将DNA片段进行复制,从而获得大量的DNA片段。

PCR技术在生物学研究中有着广泛的应用,如基因组学、分
子诊断、基因工程等。

但是,PCR技术也存在一些问题。

首先,PCR技术的反应条件要求严格,如温度、时间、pH值等,如果反应条件不合适,可能会导致反应失败,从而影响结果的准确性。

其次,PCR技术的反应过程中,可能会受到外界环境的干扰,如污染物、抗生素等,这些物质可能会影响反应的准确性,从而影响结果的准确性。

此外,PCR技术的反应过程中,可能会受到DNA片段的长度
和结构的影响,如果DNA片段过长或结构复杂,可能会影响
反应的准确性,从而影响结果的准确性。

最后,PCR技术的反应过程中,可能会受到DNA片段的浓度
的影响,如果DNA片段的浓度过低,可能会影响反应的准确性,从而影响结果的准确性。

总之,PCR技术的反应条件要求严格,可能会受到外界环境
的干扰,DNA片段的长度和结构以及浓度的影响,都可能会
影响反应的准确性,从而影响结果的准确性。

因此,在使用PCR技术时,应该注意控制反应条件,避免外界环境的干扰,以及控制DNA片段的长度和结构以及浓度,以保证反应的准
确性,从而获得准确的结果。

pcr 国内发展现状

pcr 国内发展现状

pcr 国内发展现状PCR(聚合酶链反应)是一种可以在体外复制和扩增特定DNA片段的分子生物学技术。

自1983年PCR技术被开发以来,它在许多领域的应用取得了巨大成功,如医学诊断、基因工程、体外复制等。

以下是PCR在国内的发展现状:首先,PCR在医学诊断领域的应用十分广泛。

例如,PCR可以用于检测各种病原体,如细菌、病毒和寄生虫。

临床上,PCR被广泛用于诊断肿瘤、传染病和遗传病等疾病。

通过检测特定的DNA序列,PCR可以提供高度敏感和特异性的诊断结果,有助于早期发现和治疗。

其次,PCR在农业科学中的应用也越来越重要。

PCR可以用于检测和鉴定农作物病害、害虫和转基因作物。

通过PCR技术,可以快速、准确地鉴定受感染植物或有害昆虫的存在,有助于保护农作物的质量和产量。

此外,PCR还可以用于育种和品种鉴定等农业研究领域。

此外,PCR在环境监测和食品安全领域也有广泛的应用。

例如,PCR可以用于检测水源中的细菌、寄生虫和病毒,以及环境中的重金属和污染物。

在食品安全方面,PCR可以用于检测食品中的潜在病原体和转基因成分。

这些应用可以提高环境和食品安全的监测能力,保护公众的健康和安全。

此外,PCR技术也在基础研究中发挥了重要作用。

例如,PCR 可以用于DNA测序、基因突变分析、基因表达研究等。

PCR 的快速、高效、准确的特性为基础研究提供了强有力的工具,推动了生命科学等领域的发展。

不过,尽管PCR技术在国内已经得到广泛应用,但还存在一些挑战。

首先,PCR技术的操作较为复杂,需要高度的专业知识和实验技术。

此外,PCR技术中的污染问题也需要重视,否则可能会导致假阳性结果。

另外,PCR技术的成本相对较高,限制了其在一些基层医疗机构和农村地区的应用。

总结起来,PCR技术在国内的发展已经取得了显著进展,广泛应用于医学诊断、农业科学、环境监测和基础研究等领域。

随着技术的不断进步和成本的降低,相信PCR技术的应用将进一步扩展,并在更多领域发挥重要作用。

PCR行业分析调研报告

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PCR仪器产业所处阶段


荧光定量PCR


数字PCR
普通PCR仪
导入期
快速增长期
成熟期
衰退期
时间
▪ 总体来看,我国的PCR仪器产业相比于PCR试剂产业有更强劲的增长趋势,处于快速增长期。 ▪ 国产各类定性的PCR仪器从技术到市场已经趋近于完全成熟;市场体量仍在小幅增长,趋势为国产替
工业企业、政府机构、医疗系统和 教育/科研等
如各省市三甲医院、中科院、 生命科学院等尖端医疗/科 研机构
非常成熟,几乎没有进步空间
较为成熟,国产仪器与国外知名品 牌仪器的差距在逐渐缩小
在世界范围内均为起步阶段
相关法律法规
▪ PCR仪器只有在医疗行业进行生产或销售时是需要进行注册,有相应的国家标准要求;而在科研、工业等其他
PCR仪)
试剂
(主要分为核酸提 取试剂和核酸检测
试剂两大类)
▪ 中游产业是中国
厂家的竞争热点。
▪ 国内试剂发展较
为迅速,国产仪 器占比相对较小 。
▪ 分子诊断试剂盒
基本已经国产化。
产品流通 经销商分销
厂家直销 (上门/招投标)
销售市场 医院、部队 疾控中心 大学实验室 第三方实验室 卫生保健中心
...等
DNA片段的分子生物学技术。
▪ 原理:双链DNA在升温后可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复
制成同样的两分子拷贝。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、 dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
▪ 应用领域:PCR适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、

pcr行业研究报告

pcr行业研究报告

pcr行业研究报告PCR行业研究报告摘要本文旨在对聚合酶链反应(PCR)行业进行深入研究和分析。

首先,我们将介绍PCR技术的基本原理和应用领域。

然后,我们将审查PCR行业的市场规模、发展趋势以及影响PCR 行业的主要驱动因素和挑战。

最后,我们将对PCR行业的未来发展前景和竞争态势进行前瞻性分析。

1. 简介PCR技术是一种在分子生物学领域广泛应用的技术,它通过使核酸序列得以放大,从而使科学家能够在短时间内快速复制和分析DNA或RNA样本。

PCR技术在基因组学、医学诊断、疾病预测和个体认证等领域具有重要的应用价值。

2. PCR技术的原理和应用PCR技术基于DNA复制的自然过程,通过循环反应的方式,在实验室中迅速扩增DNA 片段。

PCR技术的核心成分包括DNA模板、引物(primers)、酶(DNA聚合酶)和核苷酸。

PCR技术在生物医学和生物科学研究中扮演着至关重要的角色。

它被广泛应用于基因测序、重组DNA技术、基因突变分析等领域。

此外,PCR技术在医学诊断中也具有广泛的应用,例如病原体检测、遗传病筛查和肿瘤标志物检测等。

3. PCR行业市场规模PCR行业在过去几年中取得了显著的增长,主要驱动因素包括技术的不断改进、产品的多样性和广泛应用以及生物医学研究和临床诊断领域的需求增加。

根据市场研究报告,PCR 行业的市场规模预计将在未来几年内保持稳定增长。

4. PCR行业发展趋势4.1 技术进步和自动化PCR技术的不断进步和自动化将进一步推动PCR行业的发展。

高通量测序技术和自动化仪器的引入使得PCR分析变得更加快速和高效,同时也降低了成本和人力投入。

4.2 新兴应用领域的拓展随着基因组学和个体化医疗的不断发展,PCR技术在新兴应用领域的需求也在增加。

例如,单细胞测序、液体活检和微生物组学等领域的研究对PCR技术提出了新的挑战和需求。

4.3 市场竞争与合作PCR行业市场竞争激烈,许多公司在产品创新、市场推广和合作发展方面进行积极探索。

PCR技术-实验操作论文

PCR技术-实验操作论文

分子生物学和生化实验操作、设计与技能论文——PCR技术一、原理聚合酶链式反应Polymerase Chain Reaction(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA 片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。

因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:1.模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR 扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2.模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3.引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

二、最新进展数字PCR(Digital PCR-dPCR)技术是一种新的核酸检测和定量方法,与传统定量PCR (qPCR)技术不同,数字PCR采用绝对定量的方式,不依赖于标准曲线和参照样本,直接检测目标序列的拷贝数。

由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性,dPCR迅速得到广泛的应用,这项技术在极微量核酸样本检测、复杂背景下稀有突变检测和表达量微小差异鉴定方面变现出的优势已被普遍认可,而其在基因表达研究、microRNA研究、基因组拷贝数鉴定、癌症标志物稀有突变检测、致病微生物鉴定、转基因成分鉴定、NGS测序文库精确定量和结果验证等诸多方面具有的广阔应用前景已经受到越来越多的关注。

PCR论文

PCR论文

聚合酶链式反应(PCR)技术研究新进展生物与环境工程系09生物技术姓名:张玉红学号:0902021020摘要聚合酶链式反应(PCR)在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用,文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述,其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用。

关键词定量PCR 纳米PCR PCR芯片原位PCR 免疫PCR1983年Mullis等发明了一种特异性DNA体外扩增技术—聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),PCR是一种在体外模拟体内DNA复制的核酸扩增技术,以少量的DNA 分子为模板,经过变性-退火-延伸的多次循环,已接近指数扩增的形式产生大量的目标DNA 分子。

短短几十年,该技术已经成为最常用、也最重要的分子生物学技术之一。

其应用范围从基本的基因扩增,扩展到基因克隆、基因改造、传染病源分析、遗传指纹鉴定等,甚至扩展到许多非生物领域。

在该领域衍生出的新方法更是层出不穷。

本文简述近几年在PCR方法研究领域中的新进展,这些新方法有望弥补现有技术的缺陷,使PCR反应在特异性、速度、定量的准确性等方面得到进一步优化和提高。

1 高灵敏度的定量PCR技术随着应用范围的不断扩大认识的不断加深,研究者们不再满足于仅仅得知某一特异的DNA序列是否存在,他们还希望对其进行精确的定量,因而基于经典PCR衍生出一种新技术—定量PCR(quantitative PCR),以其实时监测、定量准确、灵敏度高、反应后不用电泳检测等优点成为分子生物学研究中的重要工具。

在PCR扩增过程中,随循环扩增产物的不断增加,与扩增产物结合的染料所产生的荧光也不断增强,可通过荧光剂检测到的荧光强度来测定扩增物产量。

在扩增物产量一定的情况下,起始模板数越多,所需循环数就越少。

以循环数为横坐标,以一系列标准DNA的起始拷贝数的对数值为纵坐标,可得到一条标准曲线。

PCR扩增反应综合分析与性能改善方法研究

PCR扩增反应综合分析与性能改善方法研究

PCR扩增反应综合分析与性能改善方法研究PCR(聚合酶链反应)是一种重要的分子生物学技术,广泛应用于基因分型、基因克隆、病原体检测等领域。

然而,PCR扩增反应在实际应用中存在一些问题,如低特异性、低扩增效率、扩增产物污染等,因此需要开展综合分析与性能改善方法的研究,以提高PCR的可靠性和准确性。

首先,对PCR扩增反应进行综合分析十分重要。

我们可以从以下几个方面进行综合分析:1. 反应体系优化:PCR反应体系的优化对提高扩增效率和特异性具有重要作用。

反应体系包括引物浓度、酶浓度、模板浓度、缓冲液配方等。

通过优化这些参数,可以减少非特异性扩增产物的产生,提高特异性。

2. 引物设计优化:引物是PCR反应的重要组成部分,其特异性和合适的长度对PCR扩增反应的准确性至关重要。

引物设计时可以借助生物信息学工具进行,确保其与目标序列的互补性和特异性。

另外,通过引物设计中的修饰,如添加磷酸基团或化学修饰物等,可以增加引物的特异性和扩增效率。

3. PCR条件优化:PCR反应的条件优化也是提高扩增效率和特异性的重要步骤。

包括反应温度、时间、循环数等。

通过优化反应条件,可以减少非特异性扩增产物的产生,提高PCR反应的特异性和准确性。

另外,还可以通过使用热启动酶、热稳定酶等专门设计的酶来提高PCR反应的特异性和扩增效率。

在进行PCR扩增反应性能改善时,以下几种方法可供参考:1. 增加模板DNA浓度:模板DNA浓度是影响PCR反应效果的关键因素之一。

适当增加模板DNA浓度可以提高扩增效率和特异性。

2. 增加引物浓度:引物浓度的适当调整也对PCR反应的性能改善有效。

增加引物浓度可以增加扩增效率和特异性。

3. 预处理样品:PCR反应中常常伴随着目标DNA以外的非特异性扩增产物的产生。

通过预处理样品,如DNA提取、酶切消化等,可以减少非特异性扩增产物的形成,提高PCR反应的特异性。

4. 寻找更合适的引物:有时,PCR扩增反应的性能不佳可能与引物的选择有关。

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PCR技术的研究与现状分析摘要:PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。

因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,该技术已经广泛地应用于水产、微生物检测、临床微生物、基因表达、肿瘤免疫、微小残留病变的检测,DNA拷贝数的测量、基因组变异和多态性等许多方面。

本文主要介绍4种PCR技术及其在各个领域的应用现状。

关键词:PCR技术;分类;研究现状;应用;Research and Application Status of PCR TechnologyClass 1 Bio-engineering 10 Student: Lao Yangyan Student ID: 1031250019 Tutor: Wei DongmeiAbstract: PCR is an in vitro enzymatic synthesis,amplification of specific DNA fragment. Because of its high-strength specificity and sensitivity,detection speed and good accuracy,it has been widely applied in many fields such as the aquatic,microbial detection,clinical microbiology,gene expression,tumor immunology,detect ion of minimal residual lesion,measurement of DNA copy number,genome mutation,polymorphism and so on. This article summarize 4 kinds of PCR technology,with its application status is analysed.Keywords: PCR technology;Category;Progress research;Application引言聚合酶链反应( PCR) 技术问世20多年以来, 已经在生物学研究领域内得到了巨大的发展并不断的完善, 不仅广泛应用在基础研究领域, 在疾病诊断等方面也有了越来越广泛深入的研究和应用。

1985年,美国Karray等学者首创了PCR 技术,并且由美国Cetus 公司开发研制[1]。

随着科学技术的发展和突破,PCR 技术已在多个领域得到广泛地应用,如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。

由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性,又能快速进行检测,因而其应用领域也在不断延伸[2]。

随着PCR 技术的不断发展,在常规PCR 技术的基础上又衍生出了许多技术,如多重PCR技术、实时荧光定量PCR技术、单分子PCR 技术、变性梯度凝胶电泳技术。

目前应用最多的为荧光定量。

本文主要介绍4种PCR技术及其在各个领域的应用现状。

并对PCR的前景进行了展望,让其更好的服务于人们的生活。

PCR技术原理PCR 技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物,在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。

PCR 的整个技术过程经若干个循环组成,一个循环包括连续的3个步骤:第1步是高温条件下的DNA模板变性,即模板DNA在93~94℃的条件下变性解链;第2步是退火,即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55℃退火;第3步是延伸,即在4种dNTP底物同时存在的情况下,借助TaqDNA聚合酶的作用,引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[3]。

经过这个循环后,合成了新链,可将其作为DNA模板继续反应,由此循环进行。

循环进程中,扩增产物的量以指数方式增加,一般单一拷贝的基因循环25~30次,DNA可扩增l00 ~200万倍。

PCR反应的步骤很简单,但是具体的操作是复杂的,如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。

因此,不同的反应体系应该确定适当的反应条件,以避免假阴性或假阳性等情况的产生。

PCR技术的分类在传统PCR 技术的基础上,根据人们的需要以及各个领域的应用要求,又衍生出很多种类的PCR 技术。

新技术在各领域广泛应用并逐渐改进,为进一步的研究提供了基础。

2.1 实时荧光定量PCR技术1996 年,学者经过研究,在传统PCR 技术的基础上,首创了实时荧光定量PCR 技术,新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。

实时荧光定量PCR 技术基于传统技术的优势,还具有实时性、准确性、无污染,实现了自动化操作和多重反应,是PCR 技术研究史上从定性到定量的飞跃[4]。

荧光定量PCR 技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR 反应体系中,借助于荧光信号,累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[5]。

实时监测这一特点是常规PCR 技术所不具有的,因为其对扩增反应不能进行随时的检测。

常规PCR 技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行,无法对起始模板进行准确的定量,而荧光定量PCR 技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[6]。

一个PCR 循环反应结束之后,定量PCR 仪可以收集1个荧光强度信号,荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况,这样就可以得到1条荧光扩增曲线[7]。

荧光信号在指数扩增阶段,PCR 产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系,然后进行定量分析[8]。

2.2 多重PCR 技术多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR 技术的一种,为同一管中加入多对特异性引物,与PCR 管内的多个模板反应,在一个PCR 管中同时检测多个目标DNA分子。

多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段,也可以同时扩增多个物种的不同片段[9]。

在同一反应体系中,多重PCR 技术进行多个位点的特异性扩增时,引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。

一方面,如果能选择适宜的反应体系和反应条件,可极大地提高多重PCR 的扩增效果[10]。

主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR 缓冲液成分、dNTP 的用量、引物及模板的量等。

另一方面,DNA的抽提质量也影响多重PCR 扩增效率,如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR 扩增效果[11]。

2.3 单分子PCR 技术(SM-PCR)单分子PCR 技术是在传统PCR 技术的基础上发展的,基本循环过程相同,但在反应条件、模板数量、DNA聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。

该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[12]。

单分子PCR 技术反应中,DNA模板浓度极低,这就要求模板有较高的质量。

因为这是试验成败的决定性因素。

在设计引物时,应该严格控制GC 的含量和Tm 值,同时尽量避免引物间存在可配对序列。

在反应混合物模板数极低的情况下,若引物之间存在少量配对序列,扩增时极易形成二聚体,使反应无法进行,得不到所需要的产物[13]。

由于单分子PCR 技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR 技术(94 ℃)略高,因而对DNA聚合酶热稳定性的要求也更加严格,需要有较好的热稳定性,以防止温度过高而使其失活。

其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术。

2.4 变性梯度凝胶电泳PCR技术(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)PCR-DGGE 技术是基于核酸序列的不同,将片段大小相同的DNA序列分开的一种技术方法[14]。

在进行变性梯度凝胶电泳时,序列不同的DNA片段因为碱基组成和排列的差异,在聚丙烯酰胺凝胶中解链时需要不同的变性剂浓度,并会发生空间构型的变化,最终导致电泳迁移率的差异。

将通过PCR扩增之后得到的等长双链DNA分子,在含梯度变性剂( 如尿素、甲酰胺) 的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳时,电泳迁移率的差异会使不同序列的DNA片段停留在凝胶的不同位置,从而形成相互分开的条带图谱[15]。

从理论上讲, 只要选择的电泳条件足够精细, 就可以分开仅有1个碱基差异的DNA片段[ 16]。

PCR技术的应用3.1 PCR技术在水产上的应用基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化,或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。

有学者应用real-time PCR 技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK 以及PEPCK表达量的影响[17],研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据[18]。

孙淑娜等研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响,表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大,可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常,并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b 及HAS2 的表达,这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。

Sawyer et al以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料,采用实时荧光定量PCR 技术,检测了P450aromA和P450aromB 在不同组织的表达量,表明在各组织中均有2种基因的表达,但表达量显著不同,呈现组织特异性。

3.2 PCR技术在食品微生物检测中的应用实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

该技术实现了PCR 从定性到定量的飞跃,除了具有常规PCR的快速、灵敏、操作方便等特点外,还具有以下优点:全封闭反应,无需凝胶电泳等PCR后处理,减小对环境的污染;不使用有毒试剂,操作安全;定量准确;仪器在线实时监测,结果直观。

多重PCR技术是通过对普通PCR技术的改进而建立起来的一种技术,是将多条引物和多条模板混合在一个反应体系中分别特异扩增不同的目的条带,或者多条引物和单一的模板DNA 混合在同一反应体系中扩增同一模板的不同片断,常用于对超长片断的扩增。

与常规的PCR 相比,还具有扩增效率高、产物特异性高和经济简便等特点,特别适合食品中多种致病菌的快速检测。

PCR-DGGE技术具有可检测不可培养类细菌、检测时间短、检测率高、重复性好等优点。

近些年来,此技术在食品中检测微生物后应用也有报道。

3.3 PCR技术在临床微生物中的应用许多传染病的特点是具有高度的变异率,这会严重影响对致病菌的评估,分子信标可以用于病原菌的定量。

它的优点是: 一个没有荧光的淬灭物可以用于4个不同的荧光染料,这样就可以同时检测和定量4个样本。

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