溶藻弧菌菌体及其外膜蛋白多克隆抗体的研究
溶藻细菌胞外溶藻活性物质分离的研究进展
进 行 了研 究 。 通 过 氯仿 和 旋转 蒸 发获 得粗 提 物 ， 后利 用 先 然
硅 胶 柱层 析 和 薄层 层 析 对 胞 外 溶 藻 物质 进 行 了分 离 纯 化 ，
的溶藻活性代谢产物已经成 为开发生物杀藻剂 的新思路 。
目前 报 道 的细 菌 胞 外 溶藻 活性 物 质 主要 有 蛋 白质 ［］ Ｉ、 － 多肽 ｄ
王飞， 燕 华 理 大 环 科 与 程 院广 广 １４ 李 （南 工 学 境 学 工 学 ，东 州５６） ００
摘 要 利用 溶藻 细 菌治 理水 华 引起 了人 们越 来越 多的 关注 。通过 间接 方式释 放特 异 性 或 非特 异性 的胞 外物 质是 溶 藻 细菌溶 藻 的主 要 方式 。 总结 了 国内外在 溶 藻 细 菌胞 外 溶藻 活性 物 质 方面 的最 新 分 离进 展 ， 讨 了研 究的趋 势 和应 用前 景 。 探 关 键词 溶 藻细 菌 ； 溶藻 活性 物 质 ； 离 分
中图分 类号 Ｑ ３ ． 文 献标 识码 ９ ９１ Ａ 文章 编号 ０ １ — ６ １ ２ ０ ）７ ０ ０ １ ０ ５ ７ ６ １ （ ０ ８ １— ７ ７ — ３
Ｄｅ ｅｏ ｖ ｌ ｐｍ ｅ ｏ ｅ ｓｏｆｔ ｐａ ａ ｏｎｏｆ ｔ ａ ｅ ｌ ｌａ ｙｓｎｇＣｏ ｐ ｅ ｔ ｒ ｍ ｌａ ｙｓｎｇＢａ ｔｒａ ｎｔＰｒ ｇｒ ｓ Ｓｅ ｒ ｔ ｒ ｃ ＨｕａｒＡ ｇ ｅ４ ｉ ｍ ｏｎ ｎ ｓｆｏ Ａ ｇ ｅ４ ｉ ｃｅ ｉ ｈｅ ｉ Ｅｘ
溶藻弧菌附着定植因子ACFA原核载体构建、表达条件优化及多克隆抗体制备
摘要 ： 为构建水产致病菌 溶藻 弧菌 附着定 植 因子 Ａ Ｃ Ｆ Ａ原 核表达 载体 ， 优化 Ａ Ｃ Ｆ Ａ蛋 白的诱导 表达 条件 ， 制 备 Ａ Ｃ Ｆ Ａ蛋 白小 鼠 多 克 隆抗 体 。通 过 分 子 克 隆 获 得 Ａ Ｃ Ｆ Ａ蛋白的表达菌株 ， 利用切胶纯 化获得 Ａ Ｃ Ｆ Ａ蛋 白， 免 疫 小 鼠 制 备多克隆抗体 ， 采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法检测抗体 滴度 为 １ ： ３ ２ ０ ０倍 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ — Ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ法 检 测 抗 血 清 特 异 性 较 好 。通 过 正 交 试 验， 获得 Ａ Ｃ Ｆ Ａ 菌株 的最 佳 表 达 条件 为 ： 诱 导时菌液 Ｏ Ｄ 。 。 值０ ． ５ ， 加Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ终 浓 度 ０ ． ３ ｍ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ， 诱导时 间 ８ ｈ ， 诱 导 温 度 ３ ２℃ ； 最 佳培养条件为 ： 葡 萄糖 浓 度 ０ ， 转速 ２ ３ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ， 装 液量 ５ ０ ｍ Ｌ 。
ａ ｎ ｔ ｉ — ＡＣＦ Ａ． Ｔｈ ｅ ＡＣＦＡ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｗａ ｓ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ． ＡＣＦ Ａ ｗａ ｓ ｐ ｕ ｒ ｉ ｉｅ ｆ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈｅ ｗａ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｇ ｅ ｌ
ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ Ａ（ Ａ Ｃ Ｆ Ａ） ， ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａ Ｃ Ｆ Ａ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｌ ｙ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｍｏ ｕ ｓ ｅ
创伤弧菌、溶藻弧菌外膜蛋白特性的比较研究
创伤弧菌、溶藻弧菌外膜蛋白特性的比较研究田丁;林天龙;许斌福【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2011(30)1【摘要】对用Sarkosyl法分离的创伤孤菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌的外膜蛋白进行了初步的比较分析.这4种弧菌外膜蛋白的SDS-PAGE和Western blotting的图谱有相似性亦有差异.SDS-PAGE显示,4种弧菌中除副溶血弧菌外均能分离到47、38 ku的外膜蛋白;创伤弧菌和溶藻弧菌存在4种共同的外膜蛋白,大致相对分子量为47、40、38、36 ku;溶藻弧菌和鳗弧菌有75、47、43、38 ku的4种共同的外膜蛋白.免疫印迹结果显示,兔抗创伤弧菌外膜蛋白血清能与创伤弧菌外膜蛋白、溶藻弧菌外膜蛋白、鳗弧菌外膜蛋白进行免疫反应,其中与溶藻弧菌外膜蛋白的反应性相对较强,有3条清晰的反应发色带,大致相对分子量为38、30、29 ku;而38 ku的外膜蛋白是创伤弧菌和溶藻弧菌共同的免疫反应带;说明这2种弧菌可能有共同的特异性抗原.【总页数】4页(P27-30)【作者】田丁;林天龙;许斌福【作者单位】福建农业科学院生物技术研究所,福建,福州,350003;福建农业科学院生物技术研究所,福建,福州,350003;福建农业科学院生物技术研究所,福建,福州,350003【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达 [J], 李素一;吴唯维;李盼;柯翎;许斌福;林晨韬;林天龙;陈叙2.创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物最小免疫剂量测定 [J], 许斌福;龚晖;陈秀锦;田丁;陈强;陈永聪;林天龙3.创伤弧菌OmpU与嗜水气单胞菌OmpⅡ外膜蛋白二联表达及其初步免疫原性[J], 郭松林;陆盼盼;冯建军;林鹏4.创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析 [J], 田丁;许斌福;林能峰;龚晖;林天龙5.创伤弧菌外膜蛋白多克隆抗体的制备及其特性分析 [J], 古小莉;李永贤;李惠青;陈洁文;李刘冬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
溶藻弧菌Qrr1-5的分子克隆及其生理功能的鉴定
溶藻弧菌Qrr1-5的分子克隆及其生理功能的鉴定溶藻弧菌Qrr1-5的分子克隆及其生理功能的鉴定摘要：溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）是一种广泛存在于海洋环境中的革兰氏阴性菌，其在海洋生态系统中具有重要的生态功能。
本研究利用分子生物学技术对溶藻弧菌中的Qrr1-5基因进行了克隆，并通过一系列生化实验鉴定了其生理功能。
结果显示，Qrr1-5基因在溶藻弧菌的生长与适应环境中起着重要的调控作用，对细菌的生理活性具有直接的影响。
1. 引言溶藻弧菌是一种常见的海洋细菌，在海洋生态系统中广泛分布。
它不仅是一种重要的腐生细菌，还是一种可致病菌。
溶藻弧菌对海洋生态系统的影响广泛且复杂，对其生理功能的研究对理解海洋生态系统的稳定性具有重要意义。
2. 材料与方法本研究选择溶藻弧菌Qrr1-5基因进行分子克隆，采用聚合酶链反应(PCR)技术从溶藻弧菌基因组中扩增目标基因。
将扩增得到的PCR产物进行电泳纯化并连接到目标载体上，然后转化到大肠杆菌中。
利用羟基丁酰胺蓝(HOEB)染色判断转化是否成功。
将成功克隆的重组质粒经酶切鉴定，并进行测序确认。
利用测序结果进行基因序列分析，包括密码子优化、跨膜结构预测和亚细胞定位预测。
3. 结果与讨论通过PCR扩增，成功克隆了溶藻弧菌Qrr1-5基因。
酶切鉴定结果显示，重组质粒构建成功。
测序结果验证了目标基因的正确性。
基因序列分析结果显示Qrr1-5基因编码五种不同的蛋白质，分别命名为Qrr1、Qrr2、Qrr3、Qrr4和Qrr5。
密码子优化结果显示这些蛋白质的密码子使用频率与细菌的整体基因组相似。
跨膜结构预测结果表明Qrr1、Qrr2、Qrr3、Qrr4和Qrr5都含有跨膜结构域，推测其可能是细菌胞膜上的受体或信号传递分子。
亚细胞定位预测结果表明这些蛋白质可能在细菌胞内定位。
通过一系列的生理实验，我们发现通过过表达Qrr1-5基因，细菌的生长速度明显加快，生长周期显著缩短。
两个溶藻弧菌胞外多糖合成基因簇的生物信息学分析
两个溶藻弧菌胞外多糖合成基因簇的生物信息学分析黄晓纯;陈偿;李颖颖;田雨顺;谢媚【期刊名称】《热带生物学报》【年(卷),期】2017(008)003【摘要】溶藻弧菌是我国南方海水养殖最重要的病原菌之一.胞外多糖(EPSs)是细菌产生的一类具有复杂结构的多糖类物质,影响其致病性和环境适应力.基因组分析发现溶藻弧菌Z J-51存在4个与胞外多糖合成有关的基因簇,笔者对其中2个基因簇CPS1357和CPS4543进行了生物信息学分析和实验验证.结果表明,基因簇CPS4543编码3个多糖外膜转运体系的同源蛋白Wza-Wzb-Wzc,而CPS1357编码的17个蛋白与多糖合成、转运以及调控有关.但通过染色实验、菌落形态观察和运动性分析证实这2个基因簇的缺失并不影响EPSs的合成、生物膜的形成、菌落形态及运动性.这可能是这2个基因簇在当前测试条件下受到抑制或需要特殊的环境因子诱导表达,对溶藻弧菌EPSs合成调控机制的研究,能更好地了解该病原菌在环境中的适应性.【总页数】12页(P255-266)【作者】黄晓纯;陈偿;李颖颖;田雨顺;谢媚【作者单位】中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室,广州,510301;广东省中国科学院南海海洋研究所应用海洋生物重点实验室,广州,510301;中国科学院大学,北京,100049;中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室,广州,510301;广东省中国科学院南海海洋研究所应用海洋生物重点实验室,广州,510301;中国科学院南海海洋研究所西沙深海海洋环境观测研究站,广州,510301;暨南大学生命科学技术学院,广州,510632;中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室,广州,510301;广东省中国科学院南海海洋研究所应用海洋生物重点实验室,广州,510301;中国科学院大学,北京,100049;暨南大学生命科学技术学院,广州,510632【正文语种】中文【中图分类】Q754【相关文献】1.干酪乳杆菌胞外多糖基因簇的调控基因在大肠杆菌中异源表达 [J], 孔令慧;周炜;王光强;夏永军;张汇;李红梅;艾连中;熊智强2.鼠李糖乳杆菌JAAS8胞外多糖生物合成基因的克隆及生物信息学分析 [J], 李盛钰;赵玉娟;张雪;戴大海;曾宪鹏;张贵斌;杨贞耐3.干酪乳杆菌LC2W胞外多糖生物合成基因簇启动子的鉴定 [J], 杜心恬;宋馨;刘欣欣;夏永军;艾连中;熊智强4.乳酸乳球菌乳酸亚种IMAU11823全基因组测序及胞外多糖基因簇分析 [J], 李敏;李伟程;刘亚华;尤利军;马腾;赵洁;孙志宏5.产胞外多糖嗜热链球菌eps基因簇的表达及生物信息学分析 [J], 田佳乐;刘洋;李嘉雯;乔少婷;胡海敏;丹彤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
溶藻弧菌ompW基因的克隆表达及DNA疫苗的研制的开题报告
溶藻弧菌ompW基因的克隆表达及DNA疫苗的研制的开题报告研究背景：溶藻弧菌是一种致病菌，能够引起鱼类的溶血和组织坏死等症状，给养殖业造成严重的经济损失。
目前，防治溶藻弧菌感染的主要手段是使用抗生素，但由于抗生素滥用导致细菌产生耐药性，因此寻找一种新的防治手段显得尤为重要。
DNA疫苗是利用含有特定抗原基因的质粒对宿主进行免疫，从而产生特异性免疫反应。
与传统疫苗相比，DNA疫苗具有方便、快捷、安全等优点，因此被广泛应用于动物疫苗的研制。
因此，本课题拟将溶藻弧菌中的ompW基因进行克隆表达，并制备DNA疫苗，作为一种新的防治手段。
研究内容：1.ompW基因的克隆表达2.构建带有ompW基因的质粒3.大肠杆菌中的表达和纯化4.小鼠免疫试验研究目的：1.建立一种新的防治溶藻弧菌感染的手段。
2.探究ompW基因在DNA疫苗中的免疫效果。
3.为溶藻弧菌感染的防治提供新的思路。
研究方法：1.从溶藻弧菌中提取总RNA，将其中的ompW基因进行PCR扩增。
2.将PCR产物连接到pMD19-T载体中，转化到DH5α菌株中。
3.对含有ompW基因的正向菌落进行筛选和鉴定。
4.将ompW基因连接到pET-28a(+)质粒中，转化到BL21(DE3)菌株中进行表达。
5.利用亲和层析纯化获得重组蛋白。
6.将重组蛋白免疫小鼠，检测其免疫效果。
预期结果：1.成功将ompW基因克隆表达，并制备出带有ompW基因的质粒。
2.成功表达和纯化重组蛋白。
3.免疫小鼠后，检测其产生的免疫效果，并探究ompW基因在DNA疫苗中的作用。
研究意义：本研究将探究一种基于DNA疫苗的新型疫苗，为溶藻弧菌感染的防治提供新思路。
同时，建立的克隆和表达技术也可为相关研究提供实验技术支持。
溶藻弧菌重要外膜蛋白免疫识别层次的研究的开题报告
溶藻弧菌重要外膜蛋白免疫识别层次的研究的开题报告
一、选题背景
溶藻弧菌是常见的一种细菌，它生存在河、海、湖等水域中，是一种肠道外病原菌，能引起食物中毒、感染性腹泻等人畜共患疾病。
因此，了解溶藻弧菌的免疫规律
和其重要外膜蛋白的免疫识别层次，对于防治食物中毒和感染性腹泻等疾病具有重要
意义。
二、研究目的
本研究旨在探究溶藻弧菌重要外膜蛋白在免疫识别中的作用机制和免疫识别层次，为防治食物中毒和感染性腹泻等疾病提供理论依据。
三、研究内容和方法
1. 确定溶藻弧菌重要外膜蛋白：利用生物信息学方法分析溶藻弧菌基因组数据，结合转录组和蛋白质组数据，筛选出可能具有免疫识别作用的外膜蛋白。
2. 确定免疫识别层次：利用蛋白质质谱技术分析不同细胞壁分离物的蛋白组成，探究重要外膜蛋白在不同分离物中的存在情况，确定其免疫识别层次。
3. 确定免疫作用机制：利用流式细胞仪和Western blot等技术分析不同分离物
对免疫细胞的刺激作用，探究免疫识别作用机制。
四、预期结果
本研究将能够确定溶藻弧菌重要外膜蛋白在免疫识别中的作用机制和免疫识别层次，为防治食物中毒和感染性腹泻等疾病提供理论依据。
同时，也有望为免疫疫苗的
设计和开发提供新思路。
五、研究意义
本研究对于深入理解溶藻弧菌的免疫规律、建立针对该菌的免疫防治策略具有积极意义。
在治疗和预防食物中毒和感染性腹泻等疾病的过程中，溶藻弧菌重要外膜蛋
白的免疫识别层次和机制的研究为疾病的防治提供了新的思路。
同时，本研究也为细
菌免疫的研究提供了一个新的研究方向。
溶藻细菌研究的最新进展
兰氏阴性菌， 它们的作用对象比较广泛， 既有蓝藻， 也有硅藻和甲藻。
/
溶藻细菌作用方式
溶藻细菌作用方式， 一般分为下列 ! 种情况： !
直接溶藻， 即直接进攻宿主， 它需要细菌与藻细胞直 接接触， 甚至侵入藻细胞内； 即间接进 " 间接溶藻，
万方数据
((
环
境
科
学
研
究
第 "? 卷
［!］ ［"］ 攻宿主 ， 主要包括细菌同藻竞争有限营养 或细
［?］ 又用诱变剂 （亚硝基胍） 处理 >2/ 获得 2 OGG = #
同蓝藻细胞相互接触， 导致藻细胞溶解， 但是这种溶 藻仅发生于宿主的营养细胞， 对异形胞、 静息孢子不
［22］ 产生影响。0+1+1’-’ 从土壤中分离一株细菌 30 （包括异形胞和静息 4 " 通过直接方式溶解鱼腥藻
孢子） 。3+*%+ 5 6 从发生水华的铜绿微囊藻中分 离一株类似蛭弧菌的细菌， 这种细菌能够侵入铜绿 微囊藻的细胞内并溶解宿主。细菌可内生于不同种 类的淡水或海洋藻类中， 它们既可存在于细胞核中， 也可存在于细胞质内， 甚至细胞器中， 但是这种寄生 并不引起宿主的溶解。因此能够侵入宿主细胞并溶 ， ;1+% ; 分别报道 噬胞菌 （ !"#$%&’(’ 8< = >?0 和 @"/A3B"） 的培养物对 硅藻有强烈的溶解作用， 而无菌滤液则不起任何作 藻就有特殊的意义。3%-89-+:% 用。;1+% ;
株海洋弧菌 （ =1>,1$ 8< = 6 4 .!.） 在没有氰化物存在 的情况下产生! 4 氰丙氨酸， 在质量浓度为 BL( Z 2? 能够溶解铜绿微囊藻 （ ? ’+,2(1.$/’ N;S# [A1O 时， $ 、 绿色微囊藻 （ ? @1,131/ N;S# 4 "B2 和 "B7） 、 聚 4 2./） 球藻 （ 9".+8&$8$882/ 8< = 6#;C\.(） 、 颤藻 （ 7 ’-%&1>1’
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Ｖｏ． ５ Ｎｏ ３ １４ ． Ｍａ ２ ０ ｙ ０６
溶藻弧菌菌体及其 外膜蛋 白多克隆抗体的研究
黄志 坚，何 建 国
（ 中山大学生命科学学院，广东 广州 ５０ ７ ） １２ ５
摘 要 ：采用常规方法制备抗溶藻弧菌及其外膜蛋 白的多克隆抗体 （ｏｃ ｎｌｎｂｄ，ＰＡ ） Ｐｌｌ ａａｔｏｙ ｃｂ。制备的抗溶 ｙｏ ｉ
关 键 词 ：溶藻弧菌； 外膜蛋白；多克隆抗体
中图分类号 ： ９１ ￥４
文献标识码 ：Ａ 文章编号： ５９ ５ ２ ６ ３ ０８ ４ ０２－ ７ ０ ）０－ ７－ ６ ９（ ０ ． ０ ０
近年来 ，我国海水养殖业发展迅速，网箱养殖 石斑鱼规模也不断扩大。养殖海 区网箱数量增多 ， 养殖密度增大，养殖水域环境逐渐恶化 ，疾病的危 害也 日 益严重 。细菌病是石斑鱼养殖中的主要病害
ｔ ）测 定 。 ｅ ｒ
１４ 免疫血清的制备 ． １４ １ 材料 ．． 选择健康的雄性 新西兰大白兔 ，取 少量静脉血分离血清 ，与抗原做凝集试验 ，检测没 有天然凝集素存在 的大白兔用于实验。
１４ ２ 免疫 方法 ．．
（ ａ Ｍ ）多克隆抗体，以用于检测 Ｖ 及为 Ｏ Ｐ Ｖ． Ｐ Ｏ ａ Ｍ 被动保 护性提供抗血清，并建立 了 Ｅ ＩＡ ＦＡ等 ＬＳ 、ＩＩ
３ Ｏ Ｐ 一 Ｍ 。超声处理采用超声波破碎仪为 （ ｉ ｅ Ｆ ｈｒ ｓ
Ｓｉ ｔｉ， ５ ｏｉ Ｄｓ ｅ ｂａ ｒ 。样品的蛋 白浓 ｃ ｎ ｆ ５０Ｓｎ ｉ ｍ ｒ ｏ） ｅ ｉｃ ｃ ｍ ｔ 度用紫外／ 可见蛋 白核酸分光光度 （ ｈｒ ａｉ Ｂｏ Ｐａ ｃ ｉ ｍ ａ —
ｔｃ ｅ ｈ，Ｕｈ ｃ ｐ ｃ ２ ０ ｍｓ ｏ ｅ ０ ０， ＵＶ Ｖｉｉ ｌ ｐ ｃｒ ｐ ｏ ｏ — ／ ｓｂ ｅ Ｓ ｅ ｔ ｈ ｔｍｅ ｏ
采用较常用的背部皮下多点注射免疫途径 ，注 射程序见表 １ 。
１４ ３ 抗血清效价检测及血清保存 末次注射后 ．．
第 ７天取少量静脉血 ，分离血清 ， 进行凝集试验和 免疫双扩散实验 ，达到一定效价即可放血。将血清
用 ＝ ０３ 甲醛生 理盐 水洗下 菌 苔 ，制 成 浓悬 ．％
液。然后 ６ ｏ℃水浴 １ ， 并不时摇动。无活菌实验 ｈ
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第４ ５卷
２０ ０ ６年
第 ３期
５月
中山大学学报 （ 自然科学版 ）
Ａ Ｔ Ｓ Ｉ Ｎ Ｉ Ｒ Ｍ Ｎ Ｔ Ｒ ＬＵ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ ＴＳ Ｓ Ｎ Ａ Ｓ Ｎ Ｃ Ａ ＣＥ ＴＡ Ｕ Ａ Ｕ Ａ Ｉ Ｍ Ｎ Ｖ Ｒ ＩＡ Ｉ Ｕ Ｙ Ｔ Ｅ Ｉ
藻弧菌 （ ａ Ｖ ）及其外膜蛋白的多克隆抗体 （ ａ ｃｂ和 Ｖ ・Ｍ ・ｃ ｂ Ｖ— Ａ Ｐ ａ ＰＰＡ ）的效价达到 １３０ Ｏ ：２０以上，特异性较好， 只与 Ｖ 菌不同菌株反应，与其他弧菌及不同属的菌株没有交叉。同时建立的 Ｅ Ｉ ＩＩ ａ ＬＳ ＦＡ等免疫学检测方法可 Ａ、
应用 于生产 实践 ，适应 不同的需要 。
它是许 多 水产 动 物 特别 是海 水 养 殖 品 种 的致 病 菌 Ｊ 。本文在从患病鲑点石斑鱼分离得到对鲑点 石斑鱼及多种海水养殖鱼类有较强致病性的溶藻弧 菌 ６ ０ａ ｉ ｌｉ ｓ的研 究工 作基 础上 ¨，制 ｌ ｎ ｙｃ ｇ ｏ ｔｕ 备 、纯化 了溶 藻 弧菌 菌 体及 溶 藻 弧 菌外 膜 蛋 白
检查合格后 ，菌液用灭菌生理盐水稀释，测 值，
使每毫升含细菌 ９ ｌ 一 ０亿个 ，置冰箱备用 。 １３２ 外膜蛋 白抗原 （ ａＯ ＰＡ ） 参照有关 ．． Ｖ —Ｍ — ｇ 外膜蛋 白的制备方法＿ ，选取 Ｖ 一 菌株制备 Ｖ ｌ ａ ３ ａ
一
之一 ，其 中溶藻弧菌是一种危害较严重的条件性致 病弧菌… ，广泛存在于世界各地海水和海产品 中，
免疫学检测方法 ，以期应用于生产实践 ，为快速检 测诊断提供依据。
１ 材料和方法
１１ 菌株 ． 溶藻弧菌 Ｖ ． ａ ３菌株分 离 自患病鲑 点石斑 鱼 ， 本研究室保存 。
１２ 试 验动 物 ．
ａ ．菌体抗原免疫 采用较常用的耳静脉注射免疫途径 ，每次注射 量约为 ｌ。 ｌｍ ０ ～ ０ 个细菌，分别于第 １ ，４ ６天 ，２ ， 注射 ，剂量分别为 ０ ２ｍ ， ． Ｌ ． Ｌ ２０ ． Ｌ ０４ｍ ，０６ｍ ， ． ｍ 。末次注射后第 ７天 自 Ｌ 耳静脉采血 １ｍ ，分离 Ｌ
血清 ，检测其凝集效价 ，如合格即可大量采血。
ｂ ａＯ ．Ｖ —ＭＰ抗 原免疫
新西兰大白兔 ，雄性 ，来源于广东省医学试验 动物 中心。经饲喂 １ 周无异常后用于试验。 １３ 抗原制备 ． １３１ 溶藻弧茵茵体抗原 （ ａＡ ） 将 Ｖ 一 ．． Ｖ — ｇ ａ ３菌 株接种 ＴＡ＋１ Ｎ Ｃ Ｗ）培养基 ，２ Ｓ ％ ａ １（ ８℃培养 ，
装入灭菌细 口瓶 中，加入 Ｗ＝００ ％叠 氮钠置冰 ．５ 箱低温保存。
・
收稿 日期 ：２０ ０ ５—１ ０ ２— ８
基金项 目：国家 “ ６ ”计划基金资 助项 目 （０ １ Ａ ２ ００ ；广东省科技厅 资助项 目 （ ３ ５ ２ １ ８３ ２０ Ａ ６２ ２ ） Ａ ０ ００ ）
作者简介 ：黄志坚 （９０ １７ 年生 ） 男 ， ， 博士 ， 师 ；通讯联 系人 ：何建 国 ； ・ａ ： ｓ ｚ ＠ｍ ｉ ｓ ｕｅｕｃ 讲 Ｅｍ ｉ ｌ ｈｈ ａ．ｙ ．ｄ．ｎ ｌ ｓ ｊ ｌ ｓ
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第 ３期
酋忐 坚等 ： 藻弧菌 菌体 及其 外膜 蛋白多克隆抗 体的研究 溶
７ ９
表 １ 制备 Ｖ ． ＭＰＰ Ａ ａＯ ．ｃ ｂ的免 疫 方案
Ｔ ｂ １ Ｔ ｅｉ ａ ． ｈ ｍｍｕ ｉａｉ ｎ ｐ ｏ ｒ ｍ ｆ ｎｚ ｔ ｒ ｇ ａ ｏ ｏ