乳腺癌中DNA聚合酶-β的表达及其对乳腺癌细胞增殖的影响解析
KRT81_在乳腺癌组织中的表达及其调控AKT
[收稿日期]2022-02-14 [修回日期]2022-05-08[基金项目]蚌埠医学院自然科学研究重点项目(2020byzd148)[作者单位]蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科,安徽蚌埠233004[作者简介]王 腾(1988-),男,主治医师.[通信作者]张 晖,硕士,主任医师.E⁃mail:dajian0629@[文章编号]1000⁃2200(2023)11⁃1488⁃07㊃基础医学㊃KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控AKT /mTOR 通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用王 腾,张 晖[摘要]目的:探究KRT81在乳腺癌组织中的表达及其调控AKT /mTOR 通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖的作用㊂方法:收集100例乳腺癌病人的病理切片,免疫组织化学检测KRT81在乳腺癌中的表达,分析KRT81表达量与临床病理特征相关性㊂同时在MCF⁃7细胞中分别转染过表达质粒㊁对照质粒㊁对照敲低质粒㊁敲低质粒,记作oeKRT81组㊁NC 组㊁Control 组及si⁃KRT81组㊂通过集落克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡细胞,蛋白印迹实验检测AKT /mTOR 通路相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达㊂结果:免疫组织化学检测结果显示,KRT81蛋白在癌组织中阳性表达明显低于癌旁正常组织(P <0.01)㊂KRT81表达水平与Her2㊁TNM 分期㊁远处转移和组织分级相关(P <0.05~P <0.01)㊂细胞集落克隆形成实验结果显示,oeKRT81组MCF⁃7细胞集落克隆数明显低于NC 组,siKRT81组MCF⁃7细胞集落克隆数明显高于Control 组(P <0.01)㊂流式细胞术结果显示,与NC 组相比,oeKRT81组MCF⁃7细胞凋亡率明显增加(P <0.01);与Control 组相比,si⁃KRT81组MCF⁃7细胞凋亡率明显减少(P <0.01)㊂蛋白印迹实验结果显示,oeKRT81组MCF⁃7细胞中Bax 蛋白水平明显高于NC 组,Bcl2㊁GLUT1㊁LDH㊁p⁃AKT㊁p⁃mTOR 蛋白水平明显低于NC 组(P <0.01);si⁃KRT81组Bax 蛋白水平明显低于Control 组,Bcl2㊁GLUT1㊁LDH㊁p⁃AKT㊁p⁃mTOR 蛋白水平明显Control 组(P <0.01)㊂结论:KRT81低表达与乳腺癌的不良预后结局相关,其可能通过抑制AKT /mTOR 通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖㊂[关键词]乳腺肿瘤;角蛋白81;增殖;AKT /mTOR 通路;糖代谢[中图法分类号]R 737.9 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2023.11.002Expression of KRT81in breast cancer tissues and its inhibitory effect on proliferation of breast cancer cells by affecting glucose metabolism through regulating AKT /mTOR pathwayWANG Teng,ZHANG Hui(Department of Tumor Surgery ,The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College ,Bengbu Anhui 233004,China )[Abstract ]Objective :To investigate the expression of KRT81in breast cancer tissues and its inhibitory effect on proliferation of breast cancer cells by affecting glucose metabolism through regulating AKT /mTOR pathway.Methods :The pathological sections of 100patients with breast cancer were collected,the expression of KRT81in breast cancer was detected by immunohistochemistry,and the correlation between KRT81expression level and clinical pathological characteristics was analyzed.Simultaneously,overexpression plasmids,control plasmids,control knockdown plasmids,and knockdown plasmids were transfected into MCF⁃7cells,which were recorded as oeKRT81group,NC group,Control group,and si⁃KRT81group.The cell proliferation was detected by colony formation assay,apoptosis was determined by flow cytometry,and the expression of AKT /mTOR pathway⁃related proteins and apoptosis⁃related proteins were detected by Western blotting.Results :The results of immunohistochemistry showed that the positive expression of KRT81protein in cancer tissues was significantly lower than that in normal adjacent tissues (P <0.01).The expression level of KRT81was correlated with Her2,TNM staging,distant metastasis,and tissue grading (P <0.05to P <0.01).The results of the colony formation assay showed that the number of MCF⁃7cell colonies in the oeKRT81group was significantly lower than that in the NC group,while the number of MCF⁃7cell colonies in the siKRT81group was significantly higher than that in the Control group (P <0.01).The results of flow cytometry showed that compared with the NC group,the apoptosis rate of MCF⁃7cells in the oeKRT81group was significantly increased (P <0.01);compared with the Control group,the apoptosis rate of MCF⁃7cells in the si⁃KRT81group was significantly reduced (P <0.01).The results of Western blotting indicated that the level of Bax protein in MCF⁃7cells in the oeKRT81group were significantly higher than that in the NC group,while the levels of Bcl2,GLUT1,LDH,p⁃AKT,and p⁃mTOR proteins were significantly lower than those in the NC group (P <0.01);the level of Baxprotein in the si⁃KRT81group was significantly lower than that in the Control group,while the levels of Bcl2,GLUT1,LDH,p⁃AKT,and p⁃mTOR proteins were significantly higher than those in the Control group (P <0.01).Conclusions :The lowexpression of KRT81is related to poor prognosis of breastcancer,which may inhibit the proliferation of breast cancer cells by affecting glucose metabolism through inhibiting AKT/mTOR pathway.[Key words]breast neoplasms;KRT81;proliferation;AKT/mTOR pathway;glucose metabolism 乳腺癌是全球女性最常见的致命癌症[1]㊂尽管各种治疗方法取得了进展,但乳腺癌仍然是女性肿瘤相关死亡的第二个主要原因[2-3]㊂辅助治疗㊁根治性手术和早期诊断可提高乳腺癌病人的生存时间和预后,但死亡率仍不能令人满意[4]㊂为了制定实用的治疗策略,迫切需要全面了解乳腺癌发病机制中的分子信号传导[5]㊂角蛋白是一种在特定区域的表皮细胞中表达的中间丝㊂大的角蛋白多基因家族由细胞角蛋白组成,它们在各种类型的上皮中差异表达[6-8]㊂角蛋白81(KRT81)是一种Ⅱ型头发角蛋白,是头发皮质中表达的主要头发蛋白质之一㊂据报道[9],KRT81表达在黑色素瘤组织中上调,在人黑色素瘤细胞系中也发现了KRT81的过表达,并且KRT81通过调节白细胞介素8(IL⁃8)来抑制黑素瘤的进展㊂然而,截至目前KRT81在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌的影响机制尚无报道㊂因此,本研究分析KRT81在乳腺癌组织中的表达及与临床病理因素的相关性,体外实验观察KRT81调控AKT/mTOR 通路影响糖代谢从而干预乳腺癌细胞的增殖,为寻找较为特异的分子标志物提供实验依据㊂1 材料与方法1.1 一般资料 收集2016-2021年就诊于我院的100例乳腺癌病人的肿瘤和癌旁组织(距离肿瘤> 4cm)的标本㊂纳入标准:(1)病理学诊断为乳腺癌;(2)术前未放化疗治疗㊂排除标准:(1)非原发性乳腺癌;(2)失访及预后信息不全者㊂根据病人信息电话随访,日期至2021年12月㊂1.2 免疫组织化学分析 病人组织经过低温保存固定后,石蜡包埋㊂并收集相关临床资料,包括年龄㊁肿瘤大小㊁雌激素受体(estrogen receptor,ER)㊁孕激素受体(progesterone receptor,PR)㊁人类表皮生长因子⁃2(epidermal growth factor⁃2,Her2)㊁TNM分期㊁淋巴结转移㊁远处转移㊁组织分级㊁生存时间和预后结局㊂肿瘤组织经过两位病理学专家诊断为乳腺癌,免疫组织化学检测KRT81的表达和位置㊂判定标准:根据染色强度和染色范围判定结果㊂其中染色强度,根据颜色分为无染色(0分),淡黄色(1分),棕黄色(2分),深棕色(3分);染色范围为0分(0~10%)㊁1分(>10%~25%)㊁2分(>25%~ 50%)㊁3分(>50%~76%)和4分(>75%~ 100%)㊂用染色强度得分和细胞数得分的作为判断表达结果,积分0~4分为阴性,>4~12分为阳性㊂本研究获得蚌埠医学院第一附属医院研究伦理委员会的批准,并且所有病人知情同意㊂1.3 细胞培养及主要试剂 乳腺癌细胞MCF⁃7㊁MDA⁃MB⁃231和人乳腺上皮细胞MCF⁃10A购自中国科学院上海细胞库㊂使用含10%胎牛血清(FBS)和1%青-链霉素的RPMI1640培养基培养㊂细胞在37℃㊁含5%CO2的培养箱中培养㊂KRT81过表达质粒(pcDNA3.1⁃KRT81⁃Flag)购自上海吉凯公司,一抗(KRT81㊁GAPDH㊁GLUT1㊁LDH㊁AKT㊁p⁃AKT㊁mTOR㊁p⁃mTOR㊁Bax㊁Bcl2)均购买于Abcam公司,二抗购于武汉三鹰生物科技有限公司,蛋白印迹试剂盒㊁BCA蛋白浓度测量试剂盒和RIPA裂解液购自碧云天生物技术公司,CCK8购自Biofroxx公司㊂Transwell购自NEST公司㊂1.4 细胞转染 取对数生长期细胞,于转染前24h 将细胞以3.0×104个/孔接种于6孔板;转染时按照脂质体Lipofectamine TM2000转染试剂说明书, MCF⁃7细胞分别转染过表达质粒㊁对照质粒㊁对照敲低质粒㊁敲低质粒,记作oeKRT81㊁NC㊁Control及si⁃KRT81组㊂转染时加入相应试剂并混合均匀,将细胞培养基换为无血清培养基,5%CO2㊁37℃培养箱培养6h后更换新鲜培养基,然后进行后续实验㊂实验分组:NC组㊁oeKRT81组㊁Control组㊁si⁃KRT81组㊂1.5 细胞集落克隆形成实验 取转染的细胞消化离心后,以1000/孔的密度种植于6孔板中,加入含10%FBS的培养基,随后培养10d㊂去上清,加入4%的多聚甲醛固定30min,加入1∶8稀释的结晶紫染液,染色30min,PBS冲洗3~4遍,拍照计数㊂1.6 流式细胞术检测细胞凋亡 取处理好的细胞悬浮液,密度为40×104个/毫升,种植于6孔板中,培养24h后换液,换取不含血清的培养基并按照处理要求转染质粒后培养48h,采用不含EDTA的胰酶消化,并离心(2500r/min),收集细胞用PBS重悬后,继续离心(2500r/min),随后按照凋亡试剂盒操作指南依次加入试剂,上机检测㊂1.7 蛋白印迹实验 收集细胞,用RIPA裂解液提取总蛋白裂解物,用于蛋白印迹实验㊂使用BCA蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度㊂将等量配置好的蛋白质(40μg)加载到凝胶上,在10%凝胶上电泳分离,然后转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上㊂用TBST 洗膜5min,共3次,用5%脱脂牛奶溶液封闭1h,然后与一抗孵化,4℃孵育过夜㊂第二天用TBST溶液清洗膜3次,再与二抗在37℃下孵育1h㊂用TBST溶液清洗膜3次,曝光㊂1.8 统计学方法 采用χ2检验㊁t检验㊁方差分析和q检验㊂2 结果2.1 乳腺癌病人的组织样本中KRT81的表达情况及与病理特征的相关性 免疫组织化学检测结果显示,KRT81蛋白在癌组织中阳性表达明显低于癌旁正常组织(P<0.01)(见表1㊁图1)㊂临床资料结合免疫组织化学结果分析显示,Her2为阳性时KRT81表达升高;TNM分期越大,KRT81的表达越低;当病人有远处转移时,KRT81的表达越低;组织分级越高,KRT81的表达越低,差异均有统计学意义(P< 0.05~P<0.01)(见表2)㊂表1 KRT81在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达(n)分组n KRT81阴性KRT81阳性χ2P癌组织癌旁组织1001007030307032.00<0.012.2 KRT81在乳腺癌细胞株中的表达水平及转染效率 相比于乳腺上皮细胞MCF⁃10A,KRT81在乳腺癌细胞株中表达下降(P<0.05)(见表3㊁图2A)㊂采用oeKRT81质粒及si⁃KRT81质粒转染乳腺癌细胞MCF⁃7,蛋白印迹实验检测转染效率,结果显示,过表达KRT81后,KRT81蛋白表达升高;敲低KRT81后,KRT81蛋白表达降低(P<0.05)(见图2B㊁2C㊁表4)㊂MCF⁃7细胞中KRT81表达水平最低,因此选用其作为后续实验细胞株㊂表2 乳腺癌病人KRT81表达与临床资料的关系(n)特征nKRT81水平 低 高 χ2P 年龄/岁 <60 ≥604456333711190.94>0.05肿瘤大小/cm ≤2 >219811060921 3.37>0.05 ER 阴性 阳性6040412919110.20>0.05 PR 阴性 阳性72284822246 1.36>0.05 Her2 阴性 阳性5347472362418.74<0.01 TNM分期 Ⅰ~Ⅱ Ⅲ~Ⅳ514931392010 4.21<0.05淋巴结转移 无 有4753353512180.84>0.05远处转移 有 无3664333732712.57<0.01组织分级 G124619 G257471035.13<0.01 G319181 表3 KRT81在乳腺癌细胞株中的表达水平比较(n i=3;x±s)分组KRT81蛋白相对表达量F P MS组内MCF⁃10A细胞0.86±0.10MDA⁃MB⁃231细胞0.55±0.11*20.39<0.010.010 MCF⁃7细胞0.34±0.09*# q检验:与MCF⁃10A细胞比较*P<0.05;与MDA⁃MB⁃231细胞比较#P<0.05 表4 KRT81在乳腺癌细胞株中的转染效率(n i =3;x ±s )分组KRT81蛋白相对表达量FPMS 组内NC 组0.31±0.06oeKRT81组Control 组0.96±0.08*0.98±0.04*140.60<0.010.004si⁃KRT81组0.18±0.06*#▲ q 检验:与NC 组比较*P <0.05;与oeKRT81组比较#P <0.05;与Control 组比较▲P <0.052.3 KRT81对MCF⁃7细胞集落克隆形成能力的影响 细胞集落克隆形成实验结果显示,oeKRT81组MCF⁃7细胞集落克隆数明显低于NC 组[(31.0±8.9)个vs(85.0±16.2)个,t =4.78,P <0.01)];siKRT81组MCF⁃7细胞集落克隆数明显高于Control 组[(241.0±23.1)个vs(113.0±8.6)个,t =8.99,P <0.01)](见图3)㊂2.4 KRT81对MCF⁃7细胞凋亡的影响 与NC 组相比,oeKRT81组MCF⁃7细胞凋亡率明显增加(P <0.01);与Control 组相比,si⁃KRT81组MCF⁃7细胞凋亡率明显减少(P <0.01)(见表5㊁表6㊁图4A)㊂蛋白印迹实验结果显示,oeKRT81组MCF⁃7细胞中Bax 蛋白水平明显高于NC 组,si⁃KRT81组Bax 蛋白水平明显低于Control 组(P <0.01);oeKRT81组MCF⁃7细胞中Bcl2蛋白水平明显低于NC 组,si⁃KRT81组Bcl2蛋白水平明显高于Control 组(P <0.01)(见图4B㊁图4C㊁表5~6)㊂ 表5 过表达KRT81对MCF⁃7细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响(n i =3;x ±s )分组Bax 蛋白相对表达量Bcl2蛋白相对表达量细胞凋亡率/%NC 组0.48±0.14 1.37±0.14 5.38±1.02oeKRT81组1.26±0.030.55±0.1015.06±3.21t9.448.43 4.978P<0.01<0.01<0.01 表6 敲低KRT81对MCF⁃7细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响(n i =3;x ±s )分组BAX 蛋白相对表达量Bcl2蛋白相对表达量细胞凋亡率/%Control 组0.89±0.100.36±0.087.12±0.68si⁃KRT81组0.22±0.091.52±0.15 4.11±0.11t8.1511.567.58P<0.01<0.01<0.012.5 KRT81对MCF⁃7细胞糖代谢相关蛋白表达的影响 oeKRT81组MCF⁃7细胞中GLUT1㊁LDH 水平均明显低于NC 组(P <0.01),si⁃KRT81组GLUT1㊁LDH 水平均明显高于Control 组(P <0.01)(见图5㊁表7~8)㊂2.6 KRT81对MCF⁃7细胞AKT /mTOR 信号通路相关蛋白表达的影响 蛋白印迹实验结果显示,与NC 组比较,oeKRT81组MCF⁃7细胞中p⁃AKT㊁p⁃mTOR 蛋白水平均明显下降(P <0.01),而AKT㊁mTOR 蛋白水平差异均无统计学意义(P >0.05);与Control 组比较,si⁃KRT81组p⁃AKT㊁p⁃mTOR 蛋白水平均明显升高(P <0.01),而AKT㊁mTOR 蛋白水平差异均无统计学意义(P >0.05)(见表9~10㊁图6)㊂ 表7 敲低KRT81对MCF⁃7细胞糖代谢相关蛋白表达的影响(n i =3;x ±s )分组GLUT1LDH Control0.69±0.120.66±0.10si⁃KRT811.35±0.101.31±0.11t 7.487.63P <0.01<0.01 表8 过表达KRT81对MCF⁃7细胞糖代谢相关蛋白表达的影响(n i=3;x±s)分组GLUT1LDHNC组 1.13±0.21 1.31±0.11oeKRT81组0.31±0.090.25±0.19t 6.999.77P<0.01<0.01 表9 敲低KRT81对MCF⁃7细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响(n i=3;x±s)分组p⁃AKT p⁃mTORControl0.45±0.100.46±0.11si⁃KRT81 1.00±0.12 1.13±0.10t 6.158.38P<0.01<0.01 表10 过表达KRT81对MCF⁃7细胞AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响(n i=3;x±s)分组p⁃AKT p⁃mTORNC组0.77±0.110.89±0.11oeKRT81组0.33±0.100.25±0.09t 5.277.12P<0.01<0.013 讨论 乳腺癌是中国最常见的妇科肿瘤类型[10]㊂根据全球癌症项目(GLOBOCAN,2020),2020年全球约有684996例乳腺癌死亡[11]㊂尽管努力集中在诊断技术和病人管理上,但在提高乳腺癌病人的总体生存率方面进展甚微[12]㊂此外,据报道[13],乳腺癌的发病率和死亡率有明显上升的趋势㊂目前,乳腺癌治疗包括手术在内的综合治疗㊁放射疗法㊁化学疗法㊁内分泌疗法和生物靶向剂[14-15]㊂随着诊断技术和治疗方法的改进,乳腺癌相关死亡率随着生存率的总体上升而下降㊂然而,晚期乳腺癌目前几乎无法治愈,治疗的主要目标是姑息治疗,重点是控制疾病的快速进展㊁提高生活质量和延长生存期[16]㊂尽管已经开发出多种新的靶向药物来治疗乳腺癌病人;然而,特效药物尚未出现㊂因此,有必要研究乳腺癌的发生发展机制,寻找新的治疗靶点㊂本研究细胞集落克隆形成实验结果显示,过表达KRT81可抑制乳腺癌细胞增殖,敲低KRT81促进乳腺癌增殖,提示KRT81的表达水平可影响乳腺癌细胞增殖㊂流式细胞术细胞凋亡实验及凋亡蛋白表达检测结果显示,过表达KRT81可促进乳腺癌细胞凋亡,敲低KRT81抑制乳腺癌细胞凋亡㊂KRT81是一种Ⅱ型头发角蛋白,是头发皮质中表达的主要头发蛋白质之一㊂其已经被证实在多种疾病中发挥重要作用[17-18]㊂然而,其在乳腺癌中的作用尚不清楚㊂本研究收集了100例乳腺癌病人病例资料,进行免疫组织化学实验,结果显示,乳腺癌组织蜡块和与其相匹配的癌旁正常组织中,KRT81在癌组织中阳性表达明显低于癌旁正常组织㊂并且KRT81表达水平与Her2㊁TNM分期㊁远处转移和组织分级相关㊂这些结果均提示KRT81对乳腺癌的预后具有影响㊂癌细胞糖代谢的重要性主要体现在能量供应维持其生命活动;生物合成为癌细胞的生长和分裂提供原料;调节信号通路参与调节细胞生长㊁分化㊁凋亡等重要生物学过程;免疫逃避逃避免疫系统的攻击㊂这种代谢重编程的特点是,即使在存在足够氧气的情况下,癌细胞或其他高度增殖的细胞也倾向于将葡萄糖代谢成乳酸,而不是丙酮酸(有氧糖酵解)[19]㊂糖代谢与肿瘤微环境的变化㊁癌基因和肿瘤抑制基因的转录㊁线粒体功能的调节以及糖代谢酶的异常表达密切相关㊂这种现象为癌细胞提供了生长优势,帮助它们逃避凋亡并促进肿瘤转移[20]㊂本研究通过蛋白印迹实验检测糖代谢相关蛋白水平,相较于NC组,oeKRT81组MCF⁃7细胞中GLUT1㊁LDH蛋白表达均明显下降;然而,相较于Control组,si⁃KRT81组GLUT1㊁LDH蛋白表达均明显升高㊂结果说明改变KRT81的表达水平,可影响细胞糖代谢过程㊂AKT/mTOR信号通路与乳腺癌进展相关[21-22]㊂在乳腺癌中,新型锰络合物PdpaMn通过下调Akt/mTOR信号通路抑制糖酵解[23]㊂本研究中,敲低KRT81可上调Akt/mTOR 信号通路的关键蛋白p⁃AKT和p⁃mTOR表达,同时,糖代谢相关蛋白GLUT1㊁LDH的表达量升高;过表达KRT81可抑制Akt/mTOR信号通路的关键蛋白p⁃AKT和p⁃mTOR表达,糖代谢相关蛋白GLUT1㊁LDH的表达量降低㊂综上所述,KRT81在乳腺癌组织中低表达,且与乳腺癌病人的预后相关㊂同时,KRT81可能通过抑制AKT/mTOR通路影响糖代谢抑制乳腺癌细胞增殖,将为乳腺癌靶向治疗提供基础依据㊂[参考文献][1] ZHAO Y,HU Z,LI J,et al.EZH2exacerbates breast cancer bymethylating and activating STAT3directly[J].J Cancer,2021,12(17):5220.[2] ZHANG H,GE Z,WANG Z,et al.Circular RNA RHOT1promotes progression and inhibits ferroptosis via mir⁃106a⁃5p/STAT3axis in breast cancer[J].Aging(Albany NY),2021,13(6):8115.[3] SUN D,LI YC,ZHANG XY.Lidocaine promoted ferroptosis bytargeting miR⁃382⁃5p/SLC7A11axis in ovarian and breastcancer[J].Front Pharmacol,2021,12:681223.[4] GUO C,LI S,LIANG A,et al.PPA1Promotes breast cancerproliferation and metastasis through PI3K/AKT/GSK3βsignalingpathway[J].Front Cell Dev Biol,2021,9:730558. 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miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响
miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响刘奎;孔繁九;杜善梅;李倩;张春福;陶泽华;孙晓春【摘要】目的检测miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平并探讨其对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响.方法用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-29a的表达水平;用脂质体法将miR-29a mimic及miR-29a inhibitor分别转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过MTT实验和Transwell实验观察miR-29a对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;miRanda软件预测miR-29a 的靶基因,western blot验证其表达结果.结果荧光定量RT-PCR检测结果表明,与癌旁组织(2.17±0.89)比较,miR-29a在乳腺癌组织(5.65 ±1.45)中的表达水平上调(t=3.94,P＜0.01);MTT实验和Transwell实验结果显示,与mimics阴性对照组[(106.36±5.15)％,(216.70±7.20)个]相比,miR-29a mimics组[(133.32±6.31)％,(294.30±8.60)个]乳腺癌细胞的增殖和迁移能力增加(t分别为3.36和6.85,P均＜0.01);与inhibitor阴性对照组[(105.35±3.42)％,(240.30±9.50)个]相比,miR-29a inhibitor组[(66.63±3.82)％,(156.30±7.80)个]乳腺癌细胞的增殖和迁移能力降低(t分别为8.18和6.81,P均＜0.01).miRanda软件预测人第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)可能为miR-29a的靶基因.western blot结果显示,与mimics阴性对照组(0.55±0.01)相比,乳腺癌细胞转染miR-29a mimic后,其PTEN蛋白质的表达水平(0.22±0.01)下调(t=14.29,P＜0.01);与inhibitor阴性对照组(0.49±0.02)相比,转染miR-29a inhibitor后,PTEN蛋白质的表达水平(1.25±0.02)上调(t=19.39,P＜0.01).结论 miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平增高,并可能通过下调PTEN蛋白的表达促进乳腺癌细胞的增殖和转移.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2015(033)011【总页数】5页(P818-822)【关键词】miR-29a;乳腺癌;增殖;迁移;PTEN蛋白【作者】刘奎;孔繁九;杜善梅;李倩;张春福;陶泽华;孙晓春【作者单位】江苏大学医学院,江苏省检验医学重点实验室,江苏镇江212013;淄博市第一医院输血科,山东淄博255200;东南大学医学院,南京210009;淄博职业学院医学技术学院,山东淄博255314;淄博职业学院医学技术学院,山东淄博255314;昆山市第二人民医院检验科,江苏昆山215300;江苏大学医学院,江苏省检验医学重点实验室,江苏镇江212013;江苏大学医学院,江苏省检验医学重点实验室,江苏镇江212013【正文语种】中文【中图分类】R737.9微小RNA(microRNA,miRNA)是近年来发现的一类长度约为22～24 nt的单链非编码小RNA。
乳腺癌的基因组学和突变负荷
乳腺癌的基因组学和突变负荷乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，也可发生在男性身上。
对于乳腺癌的研究和治疗，基因组学和突变负荷是两个重要的方面。
本文将探讨乳腺癌的基因组学研究以及突变负荷的意义。
一、乳腺癌的基因组学研究乳腺癌的基因组学研究旨在揭示肿瘤细胞的遗传背景以及肿瘤发展的分子机制。
通过对乳腺癌组织样本的基因测序和表达谱分析，可以找到与乳腺癌发生和发展相关的基因突变和基因表达异常。
这些基因的突变可以分为两类：驱动基因突变和副作用基因突变。
驱动基因突变是指那些直接推动癌症发展的突变，这些基因的突变会使肿瘤细胞获得增殖和转移的能力。
乳腺癌中最常见的驱动基因突变包括TP53、PIK3CA、PTEN和BRCA1/2等。
这些基因的突变与乳腺癌的病理特征和预后密切相关。
副作用基因突变是指那些在癌症发展中起到辅助作用的突变。
这些突变不直接推动癌症的发展，但是会增加癌症细胞在进化过程中的适应能力。
乳腺癌中常见的副作用基因突变包括CCND1、CDH1和MAPK等。
这些基因的突变会影响肿瘤的微环境以及治疗的反应性。
乳腺癌的基因组学研究为临床提供了诊断和治疗的新选择。
通过分析肿瘤细胞的基因突变情况，可以为患者提供个体化的治疗方案，包括靶向治疗和免疫疗法。
二、乳腺癌的突变负荷突变负荷是指肿瘤细胞在基因组水平上发生的突变数量和频率。
乳腺癌的突变负荷与肿瘤的遗传稳定性和免疫系统的活性密切相关。
高突变负荷的肿瘤通常具有更高的抗原负荷，即更多的新抗原表达，这使得肿瘤细胞更容易被免疫系统识别和攻击。
突变负荷的高低与肿瘤的治疗反应性和预后有密切关系。
高突变负荷的乳腺癌往往对免疫疗法的治疗反应更好。
通过抑制肿瘤细胞的逃逸机制，免疫疗法可以激活免疫系统对肿瘤的攻击，从而达到抑制肿瘤发展的效果。
因此，突变负荷的评估可以为临床提供指导，选择合适的治疗策略。
三、结论乳腺癌的基因组学和突变负荷对于研究乳腺癌的发病机制、诊断和治疗具有重要意义。
乳腺癌放疗抵抗机制的研究进展
- 172 -*基金项目：国家自然科学基金青年项目（81903119）；中山大学高校基本科研业务费青年教师培育项目（20ykpy52）①中山大学附属第一医院 广东 广州 510080通信作者：毕月乳腺癌放疗抵抗机制的研究进展*毕月① 【摘要】 放疗是鼻咽癌、乳腺癌及直肠癌等多种恶性肿瘤的重要治疗手段，不过部分患者会出现放疗抵抗的现象，造成转移及复发，从而降低患者生存率。
乳腺癌患者放疗抵抗的发生与多种因素有关，如肿瘤干细胞及肿瘤微环境等。
乳腺癌放疗患者的治疗效果与放疗抵抗密切相关，对放疗抵抗的产生机制进行研究有助于减少或者抑制放疗抵抗，提高放疗效果，改善患者预后。
本文从肿瘤干细胞、自噬性调节及DNA 损伤修复等多个方面做一综述，旨在为随后研究提供思路。
【关键词】 乳腺癌 放疗抵抗 肿瘤干细胞 自噬性调节 细胞周期调控 上皮间充质转化 DNA 损伤修复 Research Progress on the Mechanism of Radiotherapy Resistance in Breast Cancer/BI Yue. //Medical Innovation of China, 2023, 20(30): 172-176 [Abstract] Radiotherapy is an important treatment method for nasopharyngeal carcinoma, breast cancer, rectal cancer and other malignant tumors. However, some patients may experience resistance to radiotherapy, which may cause metastasis and recurrence, thus reducing the survival rate of patients. The occurrence of radiotherapy resistance in breast cancer patients is related to many factors, such as cancer stem cell and tumor microenvironment. The therapeutic effect of breast cancer patients undergoing radiotherapy is closely related to their resistance to radiotherapy. Studying the mechanism of resistance to radiotherapy can help reduce or inhibit resistance to radiotherapy, improve the effect of radiotherapy, and improve the prognosis of patients. This article reviews cancer stem cell, autophagy regulation, DNA damage repair and other aspects in order to provide ideas for subsequent research. [Key words] Breast cancer Radiotherapy resistance Cancer stem cell Autophagy regulation Cell cycle regulation Epithelial mesenchymal transformation DNA damage repair First-author's address: First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.30.040 乳腺癌是严重危害女性身心健康的一种恶性肿瘤。
PTEN在乳腺癌中的表达及其与细胞增殖活性的关系
彩 色 多 普 勒 显 示 血 流 信 号 消 失 ， 示 组 织 灭 活 ； 内 部 回 声 提 ③
增 强 ， 化 ， 示 组 织 坏 死 、 化 。根 据 本 组 研 究 ， 者 认 为 液 提 液 作 ｄ Ｄ 瘤 的治 疗 较 为确 切 ， 此 达 完 全 毁 损 后 的 复 查 以 发 现 新 ， 因 病灶更有意义 ， 在发现ｄＤ块上超声有其优势 。 而 ， 总之 ， 超声 引 导 射 频 消 融 技 术 是 一 种 治 疗 肝 脏 肿 瘤 的有 效手段 ， 有以下优点 ： 操作 方便 ， 术 时间短 ， 于掌握 ； 具 ① 手 易 ② 创 伤 小 ， 确 性 高 ， 全 性 好 。该 技 术 属 于 微 创 治 疗 ， 超 准 安 在 声正确 引导下可避免 伤及 重要 血管 和胆 管 ； 疗 效显 著 ， ③ 治 疗 区 内 局 部 温 度 可 高 达 ９ ℃ 以 上 ， 治 疗 区 发 生 凝 固 性 坏 Ｏ 使
维普资讯
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３ ８ ・ ９
广西 医科 大 学 学 报
２ ０ ｕ ； ４ ３ ０ ７Ｊ ｎ ２ （ ）
术后细针穿刺活检毁损组织病 理结果 为凝 固性坏死 ， 周 边 区 域 见 炎 细 胞 浸 润 。术 后 所 有 病 例 随访 时 间 ３个 月 以 上 ， 临 床 及 影 像 诊 断 均 未 发 现 原 位 复 发 的 征 象 。１ ７例 （ ４ ０ ） １．５ 病 人 的 肝 功 能 出现 下 降 ， 中 ２例 病 人 在 术 后 １月 内 出 现 肝 其
疗 效 的判 断是 治 疗过 程 的关 键技 术 ， 目前 普 遍 以增 强 Ｃ 为标 准 ， 块 无 增 强为 完全 毁 损 。 。超 声 虽 不 能 区 分 毁 Ｔ 肿 ］ 损 与残 留组 织 ， 仍 有 一 些 征 象 提 示 肿 瘤 组 织 的 变 化 ： 治 但 ① 疗 结 束 后 １ 声 像 图显 示 肿块 均 较 术 前 有 增 大 ， 部 呈 低 回 周 内 声 ， 边 有 低 回声 晕 ， 周 经穿 刺 活 检 证 实 周 边 为 炎 症 水 肿 带 ； ②
1试题(生物)：福建省四地市高中毕业班第一次质检
福建省四地市2022届高中毕业班第一次质量检测生物学试题注意事项：1．答题前，考生先将自已的姓名、考生号、座号填写在相应位置，认真核对条形码上的姓名、考生号和座号，并将条形码粘贴在指定位置上。
2．选择题答案必须使用2B铅笔（按填涂样例）正确填涂；非选择题答案必须使用0.5毫米黑色签字笔书写。
3．请按照题号在各题目的答题区域内作答，超出答题区域书写的答案无效；在草稿纸、试题卷上答题无效。
第Ⅰ卷（选择题共40分）一、单项选择题：本题共16小题，其中，1~12小题，每题2分，13~16小题，每题4分，共40分。
在给出的四个选项中，只有一项是最符合题目要求的。
1．下列关于破伤风芽孢杆菌和酵母菌的叙述，正确的是A．在生命系统层次中都既属于细胞，又属于个体B．都具有细胞壁、细胞膜、细胞质和染色体等结构C．二者在有氧条件下的生长状况均好于在无氧条件下D．前者通过无丝分裂增殖，后者可通过有丝分裂增殖2．溶酶体内含有多种水解酶，其膜上的V-ATPase是一种ATP水解酶。
它在水解ATP的同时，能将H+泵入溶酶体内。
下列叙述错误的是A．溶酶体内多种水解酶的最适pH偏酸性B．抑制V-ATPase活性将导致溶酶体活性增强C．V-ATPase也是一种参与主动运输的蛋白D．溶酶体降解大分子后所得产物可被细胞再利用3．观察细胞的有丝分裂（Ⅰ）和探究植物细胞的吸水和失水实验（Ⅱ）均用到了洋葱和显微镜。
下列叙述正确的是A．紫色洋葱鳞片叶是完成这两个实验的理想材料B．两个实验中所观察到的细胞均为代谢旺盛的活细胞C．Ⅰ中的染色体和Ⅱ中的液泡均能在光学显微镜下观察到D．两个实验均需要染色后，才能观察到明显的现象4．在高等植物中，光合作用的产物常以蔗糖的形式运输。
蔗糖逆浓度梯度通过转运蛋白——SUT1进入筛管细胞（其细胞核退化，仅保留了线粒体等细胞器），进而运往储存糖类的细胞。
下列叙述正确的是A．成熟的筛管细胞不具有生物膜系统B．植物细胞所含的多糖都是能源物质C．细胞存储糖类后有利于提高细胞液的渗透压，增强抗旱能力D．筛管细胞有氧呼吸的三个阶段均在线粒体中进行，为SUT1发挥作用供能5．人参是阴生植物，常生长在以红松为主的针阔混交林中。
Oct4在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭性的影响的开题报告
Oct4在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭性的影响的开题报告一、研究背景乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，对女性健康造成很大威胁。
乳腺癌的发病机制非常复杂，其中基因调控是一方面的重要因素。
Oct4是一种重要的转录因子，可以调控基因的表达，影响细胞的增殖、分化、凋亡等过程。
近年来的研究表明，Oct4在多种肿瘤细胞中的表达与恶性程度密切相关，并且可能参与了肿瘤细胞的侵袭和转移等过程。
然而，有关Oct4在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭性的影响的研究还不够多，因此本研究将进一步探讨这一问题。
二、研究目的本研究的主要目的是探讨Oct4在乳腺癌组织中的表达情况，并进一步分析其与乳腺癌细胞的侵袭性之间的关系。
具体研究目标如下：1. 分析Oct4在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达差异。
2. 探究Oct4对乳腺癌细胞侵袭性的影响。
3. 探讨Oct4调控的相关通路及分子机制。
三、研究方法1.采集乳腺癌组织和正常乳腺组织标本，通过免疫组化等方法检测Oct4在两种组织中的表达情况。
2. 采用细胞实验技术，通过过表达和沉默Oct4基因的方法，检测Oct4的表达对乳腺癌细胞侵袭性的影响。
3.通过基因芯片技术，筛选出Oct4调控的一些关键的基因，并进一步探究其调控的通路和分子机制。
四、预期研究结果本研究结果将有助于深入解析Oct4在乳腺癌发生发展中的作用及其分子机制。
具体预期研究结果如下：1. Oct4在乳腺癌组织中表达较高，且与乳腺癌的恶性程度密切相关。
2. Oct4上调可促进乳腺癌细胞的侵袭性，下调则抑制乳腺癌细胞的侵袭性。
3. Oct4可能通过激活多种信号通路和调节多种基因表达，影响乳腺癌细胞的侵袭和转移。
NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生长的影响
损伤区域远端的有髓鞘纤维几乎全部脱髓鞘，但无髓鞘 C 纤 维保持完整，损伤区域近端神经纤维正常 。 本研究还发现，CCI 模型大鼠非手术侧 ( 右侧 ) 在术前、 术后无显著变化，说明未发生超敏反应，无 “镜像”痛发生。 CCI 大鼠行为学的改变及痛阈指标的变化有一定联系，与经 典文献报道相符，说明模型建立成功，为进一步的深入研究 奠定了良好基础。 参 考 文 献
。NDRG2 是一种抑癌基因，在多种肿瘤组
织和肿瘤细胞系中表达下调。 1 材料与方法 1.1 材 料 乳 腺 癌 细 胞 系 T47D、MCF7、MDA-MB-453、 MDA-MB-231 均购自武汉大学典型培养物典藏中心。质粒 pcDNA3.1-NRDG2 为本实验室构建并测序正确。anti-NDRG2 单克隆抗体购自 cell signaling 公司，anti-beta actin 及 HRPIgG 抗体购自博士德公司。 1.2 方 法 Western blot ：将胰蛋白酶消化的 5×10 6 个细胞 用 PBS 洗 2 遍，裂解 0.5 h 后，4 ℃离心 10 min，取上清，加 入缓冲液，煮沸。将待测蛋白电泳，转膜，封闭非特异性抗 体。然后分别加入鼠抗人 NRDG2T 抗体，4 ℃过夜。次日用
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ｃｅｌｌｓ．
Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ—Ｂ
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｈｅｎａｎ Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｍｉｅｅｔ（１４２３００４１０２０７）
ＤＮＡ聚合酶一ｐ（ＤＮＡ ｐｏｌ—ｐ）是广泛存在于哺乳动
３０００与所需要转染的ＲＮＡ各自加
表达显著增加（Ｐ＜０．０５，／Ｚ＝３）。
４．ＤＮＡ
入无血清培养基中，室温放置５ ｍｉｎ后将两种溶液混合 均匀，室温放置５ ｍｉｎ后加人培养基中。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ
ｐｏｌ—Ｂ对人乳腺癌细胞株ＭＣＦ－７增殖性的
影响：Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ结果显示，与空白对照组和ｓｉＲＮＡ
（∥＝７．６７７，Ｐ＜０．０５）。与人正常乳腺上皮细胞ＭＣＦ一１０Ａ比较，人乳腺癌上皮细胞株ＭＣＦ一７中
ＤＮＡ
ｐｏｌ－ｐ的表达显著增加（０．８７±０．２６比２．０７±０．５６，Ｐ＜０．０５）。与空白对照组和阴性对照组比
较，ｓｉＲＮＡ—ＤＮＡ ｐｏｌ—ｐ转染组细胞的增殖性显著下降（Ｐ＜０．０５）。结论ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ在乳腺癌中表 达上调，可能是乳腺癌细胞恶性增生的机制之一。
３０００终质量浓度为３．７５∥ｍｌ，ｓｉＲＮＡ终质量浓度为
物核内的最小的ＤＮＡ聚合酶，其生物学功能主要表现 在ＤＮＡ修复‘１’２ｊ。正常情况下，ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ的表达保
持着持续的低水平，以保持基因组的稳定‘３圳。研究表
明，在胃癌、卵巢癌及前列腺癌等多种肿瘤组织中，
ＤＮＡ
ｐｏｌ－ｐ的表达增高‘５剖，表明ＤＮＡ ｐ０１．Ｂ与肿瘤的
万方数据
空堡塞堕丛型苤查！！！！生！！旦筮！！鲞箜！Ｑ塑ｇ！也』垦翌！！垡：Ｑ！塑！竺！！！！：！！！：！！：№：！！
细胞增殖性的影响。 材料与方法
ｐ０１．Ｂ组（转染ｓｉＲＮＡ—ＤＮＡ ｐｏｌ—ｐ
４８
ｈ）。
５．统计学方法：各组数据以均数±标准差（夏±ｓ）
表示，应用ＳＰＳＳ １１．０统计软件分析。组间比较采用
成对ｔ检验和单因素方差分析，统计之前进行方差齐 性分析和正态分布检验。方差不齐或者非正态分布者 均进行变量变换，变换后再进行方差齐性分析和正态 分布检验，若变换后方差不齐或者非正态分布者进行
ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｉｓ ａ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ａｓ ｃａｎｃｅｒ
ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ
ｃａｎｃｅｒ
ＤＮＡ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ—Ｂ（ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ）ｉｎ
Ｔｈｅ ｍＲＮＡ １ｅｖｅｌ ｏｆ ＤＮＡ
ｂｒｅａｓｔ
ａｎｄ
ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ
ｏｎ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆ ｂｒｅａｓｔ
ｃａｎｃｅｒ
ｃａｎｃｅｒ
ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｄ ｐａｉｒｅｄ ｐａｒａｃａｎｃｅｒｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｖ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ）ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＤＮＡ ｐｏｌ一１３ ｏｎ
１．材料：收集２０１５年３月至９月郑州大学第二附 属医院乳腺癌患者切除的癌组织及配对癌旁组织共 ６０例，年龄（１．６７±７．２０）岁。患者术前均未行放疗、 化疗以及生物治疗，术后均由病理科医师诊断为浸润
性导管癌。郑州大学医学伦理委员批准该实验，患者
非参数检验。构成比的比较采用，检验。以Ｐ＜０．０５
为差异有统计学意义。 结
当肿瘤直径大于５ ｃｍ时，该比例升高为８６．７％（表
ＲＮＡ：收集细胞后按顺序加入ＲＮＡｉｓｏ Ｒｅａｇｅｎｔ和氯仿， 静置离心吸取上清并加入异丙醇，静置离心后弃掉上 清，加入７５％乙醇，离心后弃掉上清，加人无酶水。
ＲＮＡ转录为ｃＤＮＡ：Ｏｌｉｇ（ｄＴ）Ｐｒｉｍｅｒ
０．５¨１，５
Ｘ
１）。实验结果表明，３组之间差异有统计学意义（表
【关键词】乳腺癌；增殖；ＤＮＡ聚合酶．Ｂ
基金项目：河南省基础与前沿技术研究计划（１４２３００４１０２０７）
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ—Ｂ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃｅｌｌｓ
ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ Ｚｈｅｎｇ Ｙｉｎｇｂｉｎ．Ｚｈａｏ Ｗｅｎｃｈａｏ。ｘ记Ｐｕ．Ｈｏｕ Ｓｈｕａｉｈｅｎｇ．Ｈａｎ Ｎａ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００１４。 Ｃｈｉｎａ（Ｚｈｅｎｇ ＹＢ）；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．
郑９’Ｉ＇ｌ大学基础医学院生理学与神经生物学系（赵文超）；４５０００１郑州大学基础医学院 （解璞、侯帅恒） 通信作者：韩娜，Ｅｍａｉｌ：ｈａｎｎａｎａ２００５＠１６３．ｃｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１６．１０．０４２ 【摘要】 目的 观察ＤＮＡ聚合酶・Ｂ（ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ）在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖性
的影响。方法实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ）检测乳腺上皮细胞株和印例乳腺癌组织及 配对的癌旁组织中ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ的表达，分析其与肿瘤大小的关系。转染小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）一ＤＮＡ ｐｏｌ－Ｂ以观察ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ对乳腺癌细胞增殖的影响。结果与癌旁组织比较，癌组织中ＤＮＡ ｐａｌ．Ｂ的 表达显著升高（２．３７±１．８１比３．１５±２．２０，Ｐ＜０．００１），肿瘤体积大小与ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ的表达密切相关
１次２＝７．６７７，Ｐ＜０．０５）。
表１
ＤＮＡ
Ｐｒｉｍｅｒ
ＳｃｒｉｐｔｌＭ缓冲液２¨ｌ，Ｒａｎｄｏｍ
Ｓｃｒｉｐｔ。Ｍ ＲＴ Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｘ １
６ ｍｅｒｓ ０．５
ｔｘｌ，Ｐｒｉｍｅｒ
ｐｏｌ一８的表达与肿瘤大／Ｊ，雕ｊ关系
０．５灿ｌ，总ＲＮＡ ４斗ｌ，加无酶
ｍｉｎ＋
水至总体积为ｌｏ恤ｌ。反转录条件：３７℃１５
ｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００１，Ｃ＾ｉｎａ（Ｘｉｅ Ｐ．Ｈｏｕ ＳＨ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｈａｎ
Ｎａ．Ｅｎｔａｉｌ：ｈａｎｎａｎａ２００５＠Ｊ甜．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＧＡＧＡＣＡＴＧＧＡＴＧＴ－５’．
ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ
ＧＡＡＧＴｒ．５’］由生工生物工程（上海）股份有限公司合
成；／ｂ干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）一ＤＮＡ ｐｏｌ－Ｂ（５’－ＣＡＡＡＡＡＧＣＴ・
ＣＡＣＡＧＡＡＣＴＣＧＣＡＡＡＣＴＩ＇ＣＴＣＴＩ？ＧＡＡＡＧＴｒＴＧＣＧＡＧＴ．
较，癌组织中ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ ｍＲＮＡ的表达显著升高（Ｐ＜ ０．００１，／＇ｔ＝６０）。
・２３８６・
虫堡塞坠皇｝型苤查！！！鱼生！旦旦筮翌鲞箍！Ｑ塑堡！垫』垦翌墨坠强：Ｑ！！些竺垫！鱼：∑尘：翌：№：！鱼
・临床研究・
乳腺癌中ＤＮＡ聚合酶一１３的表达及其对
乳腺癌细胞增殖的影响
郑英斌赵文超解璞侯帅恒韩娜
作者单位：４５００１４郑州大学第二附属医院普通外科（郑英斌），肿瘤科（韩娜）；４５０００１
２．ＤＮＡ
ｐ０１．Ｂ的表达与肿瘤大小的关系：当肿瘤
ＴＣＴＧＴＧＡＧＣＧ一３’）购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；细胞计数
直径小于２ ｃｍ时，在４２．１％的标本中，癌组织中ＤＮＡ
试剂盒（ＣＣＫ一８）购自南京诺唯赞生物科技有限公司。
２．实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ）：提取
ｐ０１．Ｂ的表达高于配对的癌旁组织。当肿瘤直径小于 等于５ ｃｎｌ且大于等于２ ｃｍ时，该比例升高为６９．２％，
ｃａｎｃｅｒ
Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｔｉｓｓｕｅｓ ｗａｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｘ２＝７．６７７，Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＣＦ一７ ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｍａｍｍａｒｙ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＣＦ一１０Ａ
（０．８７±０．２６ ｖｓ．２．０７±０．５６，Ｐ＜０．０５）．ＭＣＦ一７ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ
（ｓｉＲＮＡ）一ＤＮＡ ｐｏｌ—Ｂ ｓｈｏｗｅｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｓｉＲＮＡ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
ｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ