γ干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较

２０１１，２７（２）中国人兽共患病学报ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｏｏｎｏｓｅｓ９７

文章编号：１００２—２６９４（２０１１）０２—００９７—０４

丫一干扰素试验和皮试变态反应对检测奶牛结核病的比较＊

陈祥１，徐正中１，时振华１，范峰２，蒋锁俊３，孟闯１，黄根成１，单锋丽１，焦新安‘摘要：目的评价ｒ干扰素试验、单纯颈部皮试变态反应和比较皮试变态反应检测在牛结核病检疫过程中的效果。方

法在牛结核病检疫过程中。９５３头奶牛同时进行ｒ干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测。其中的１９０头奶牛进行了比较变态反应试验。结果在同步进行７一干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应检测的９５３头奶牛中，两者的阳性符合数为１４７

头，阳性符合率为６３．８％（２９４／４６１）。两者的阴性符合数为６３９头。阴性符合率为８８．４％（１２７８／ｌ４４５）；在进行比较皮试变态反应的１９０头奶牛中，卜干扰素试验与比较皮试变态反应的阳性符合数为３头，阳性符合率为７５％（６／８）。阴性符合数为１８５头，阴性符合率为９９．５％（３７０／３７２）；单纯颈部皮试变态反应与比较皮试变态反应的阳性符合数为４头。阳性符合率为７２．７％（８／１１），阴性符合数为１８３头。阴性符合率为９９．２％（３６６／３６９）。结论单纯颈部皮试变态反应有较高的检出率；同单纯颈部皮试变态反应相比，比较皮试变态反应有较好的特异性；丫－干扰素试验在保持较高灵敏度的同时，具有较好的特异性。关键词：牛结核；ｒ干扰素试验；单纯颈部皮试变态反应；比较皮试变态反应中图分类号：Ｒ３７８文献标识码：Ａ

Ｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎｏｆｇａｍｍａ‘ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎａｓｓａｙ

ａｎｄｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎｓｋｉｎｔｅｓｔｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｔｕｂｅｒｃｕＩｏｓｉｓ

ＣＨＥＮＸｉａｎ９１，ＸＵＺｈｅｎｇ—ｚｈｏｎ９１，ＳＨＩＺｈｅｎ—ｈｕａｌ，ＦＡＮＦｅｎ９２，ＪＩＡＮＧＳｕｏ—ｊｕｎ３，ＭＥＮＧ

Ｃｈｕａｎ９１，

ＨＵＡＮＧＧｅｎ～ｃｈｅｎ９１，ＳＨＡＮＦｅｎｇ—ｌｉｌ，Ｊ１ＡｏＸｉｎ—ａｎｌ

（１．．，ｉ口打譬ｓ“ＫＰｙＬｎ６ｏ厂Ｚｏｏ玎ＤＪｉ５，１ｙａ力ｇｚ＾ｏ“Ｕ行ｉｔ肥，．ｓｉｆｙ，ｙ＆玎ｇｚ＾Ｄ“２２５００９，（Ｍｉ行口；２．Ｗ“．ｒｉＣＰ竹￡Ｐｒｏ，Ａ竹ｉｍｎＺＤｉｓＰｎｓｅＣｏ行ｆ，’ＤＺⅡ＂ｄＰ，℃ｔ肥以ｆｉｏ打，Ｗ“．ｒｉ２１４０２６，Ｃ＾ｉ玎口；

３．Ｈ￡以ｉⅡ行ＣＰ村ｆＰｒｏＪｒＡｎｉｍ口ｆＤｉｓＰ口ｓＰ（１０珂ｆ，∞Ｚ口打ｄＰｒ已ｔ肥行￡ｉｏｎ，Ｈ船ｉｎ对２２３００１，Ｃ如ｉ行口）

ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ一７（ＩＦＮ一７）ａｓｓａｙｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄ

ｗｉｔｈｔｈｅｔｕｂｅｒｃｕｌｉｎｓｋｉｎｔｅｓｔｉｎｃａｔｔｌｅｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｔｕ—

ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ９５３ｃａｔｔｌｅｗｈｉｃｈｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｗ“ｈｔｈｅｌＦＮ一丫ａｓｓａｙａｎｄｔｈｅｓｉｎｇｌｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ（ＳＣＴ）ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ，ａｎｄ１９０ｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅａｌｓｏｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ（ＣＣＴ）．１ｎｔｈｅｓｅ９５３ｃａｔｔｌｅｔｅｓｔｅｄｂｏｔｈｗｉｔｈｔｈｅｌＦＮ一７ａｓｓａｙ

ａｎｄＳＣＴ，１４７ｃａｔｔｌｅｗｅｒｅｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎｂｏｔｈｔｅｓｔｓｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ６３．８％（２９４／４６１），ａｎｄ６３９ｃａｔｔｌｅｗｅｒｅ

ｎｅｇａｔｉｖｅｉｎｂｏｔｈｔｅｓｔｓｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ８８．４％（１２７８／１４４５）．Ａｍｏｎｇ

ｔｈｅｍ１９０ｃａｔｔｌｅａｌｓｏｔｅｓｔｅｄｗｉｔｈＣＣＴ。３ｃａｔｔｌｅ

ｗｅｒｅｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎｂｏｔｈｔｈｅｌＦＮ一７ａｓｓａｙａｎｄＣＣＴｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ７５％（６／８），ａｎｄ１８５ｃａｔｔｌｅｗｅｒｅｎｅｇａｔｉＶｅ

ｉｎｂｏｔｈｔｅｓｔｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ９９．５％（３７０／３７２）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，４ｃａｔｔｌｅｗｅｒｅｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｐｏｓｉｔｉｖｅ

ｉｎｂｏｔｈＳｃＴａｎｄ

ＣＣＴｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ７２．７％（８／１１），１８３ｃａｔｔｌｅｗｅｒｅｎｅｇａｔｉｖｅｉｎｂｏｔｈｔｅｓｔｓｗｉｔｈａｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆ９９．２％（３６６／３６９）．１ｔｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｔｈａｔＳＣＴｈａｄｈｉｇｈｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ｂｕｔｉｎｌｏｗｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．ＣＣＴｈａｄｈｉｇｈｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｖｅｒｓｕｓＳ’ＣＴａｎｄｔｈｅＩＦＮ一７ａｓｓａｙｈａｄｂｏｔｈｈｉｇｈｓｅｎｓｉ“ｖｉｆｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ＫＥＹＷｏＲＤＳ：ｂｏｖｉｎｅｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ｔｈｅＩＦＮ一７ａｓｓａｙ；ｔｈｅｓｉｎｇｌｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ；ｔｈｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ

牛结核病（ｂｏｖｉｎｅｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）是由牛型分枝＊国家公益性行业科研专项（ｚ００９０３０２７）和国家科技重大专项（２００８ＺＸｌｏ００３一０１０）联合资助通讯作者：焦新安．Ｅｍａｌｌ：ｊｉａｏ＠ｙｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ作者单位：１．扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室，扬州２２５００９：２．无锡市动物疫病预防控制中心．无锡２１４０２６；

３．淮安市动物疫病预防控制中心。淮安２２３００１

杆菌（ＭｙｆＤ妇ｆ抛ｒｉ“聊幻钉ｉｓ）等所引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，被国际动物卫生组织（（）ＩＥ）列为需通报的动物疫病¨ｊ。近年来随着人们生活水平的提高。居民对牛奶、牛肉的需求也日益增多，我国的养牛业取得突飞猛进的发展。牛结核病作为一种重要的人兽共患病不仅严重影响奶牛养殖

万方数据９８中国人兽共患病学报

业的发展，也是公共卫生的重大威胁。据统计，人结核病有１０％以上由牛分枝杆菌引起‘２｜。因此掌握我国奶牛结核病现状、检测淘汰感染奶牛具有重要的意义。根除牛结核病是人类近一个世纪来的梦想，欧美国家实施牛结核根除计划已有４０余年，已有多个国家如丹麦、比利时、挪威、德国、荷兰、瑞典、芬兰、卢森堡、澳大利亚、加拿大等已消灭了牛结核，日本、英国、美国、法国等已控制了牛结核。但至今尚无任何国家获得（）ＩＥ“无结核”认可。另外，许多发展中国家仍然严重地流行，我国也是牛结核病流行的国家之一。目前，许多发达国家主要采用比较变态反应（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ，ＣＣＴ）和牛７一干扰素试验进行检疫［１’３］，并凭借其强大的经济实力做支撑进行结核阳性牛的扑杀，以达到控制和消灭牛结核病的目的。７一干扰素试验是一种新型的牛结核诊断方法，已被（）ＩＥ认可，并作为唯一的辅助诊断试验，成为皮试变态反应之外的一种活畜诊断试验方法［１］。据澳大利亚、巴西、爱尔兰、意大利、新西兰、罗马尼亚、西班牙、美国等数十万头牛临床应用表明，该方法的灵敏度为８１．８％～１００％，特异性为９４％～１００％“］。与皮试变态反应相比，７一干扰素测定不仅简单、快速，灵敏度和特异性高，而且由于减少了前者试验中操作和解释的主观性，使结果更为客观、可靠。目前，我国主要采用牛型提纯结核菌素（ＰＰＤ）进行单纯颈部皮试变态反应（ｓｉｎｇｌｅｃｅｒｖｉｃａｌｔｅｓｔ，ＳＣＴ）来进行牛结核病的检疫，对于阳性牛应进行隔离或扑杀，但是许多被扑杀的牛并没有可见的病理变化，这对于牛结核病的检疫造成了巨大的阻力。因此采用灵敏度更高、特异性更好的检测方法具有重要的意义。为此，本研究旨在比较单纯颈部皮试变态反应、比较皮试变态反应和７一干扰素试验之效果，为临床实际应用提供依据。１材料与方法１．１ＰＰＤ与试剂盒皮肤试验用牛型ＰＰＤ、禽型ＰＰＤ为国内产品。ＢＯＶＩＧＡＭ’。Ｍ＾缸ｆ０６口ｆ胞一“优６０ｕｉｓＧａｍｍａＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＴｅｓｔＫｉｔｆｏｒｃａｔｔｌｅ、刺激原ＡｖｉａｎＰＰＤ、ＢｏｖｉｎｅＰＰＤ购自瑞士Ｐｒｉｏｎｉｃｓ公司。１．２试验用牛中国东部地区１４个奶牛群，随机抽取健康奶牛和结核病疑似阳性奶牛，共计９５３头活畜。１．３牛７一干扰素试验奶牛尾静脉无菌采血５ｍＬ／头，将采集的血液置于肝素钠抗凝管中，轻轻颠倒混匀，使肝素钠溶解。室温下将血样运送到实验室，在采血后８ｈ内进行刺激培养。将全血样品无菌分装至２４孔板中，每份血样分装３孔，１．５ｍＩ。／孔。向各孔中分别无菌加入１００肛ＬＰＢＳ、ＡＶｉａｎＰＰＤ、ＢｏｖｉｎｅＰＰＤ，震荡混匀１ｍｉｎ。将含有血液与抗原的２４孔板置于３７℃湿温培养箱中孵育２４ｈ。次日从各培养孑Ｌ吸取５００弘Ｌ血浆上清转入１．５ｍＬ离心管中，即为刺激产生的ｒ干扰素上清。以Ｍ乡一ｆＤ６ｎｆｆＰｒｉ“优６０可ｊｓＧａｍｍａＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎＴｅｓｔＫｉｔｆｏｒｃａｔｔｌｅ检测牛全血上清液中的７一干扰素，具体操作参照试剂盒说明书进行。结果判定标准：牛型ＰＰＤ刺激上清的０Ｄ值一ＰＢＳ刺激上清的ｏＤ值≥ｏ．１，且牛型ＰＰＤ刺激上清的０Ｄ值一禽型ＰＰＤ刺激上清的０Ｄ值≥０．１判为阳性；牛型ＰＰＤ刺激上清的（）Ｄ值一ＰＢＳ刺激上清的（）Ｄ值＜０．１或牛型ＰＰＤ刺激上清的０Ｄ值一禽型ＰＰＤ刺激上清的０Ｄ值＜Ｏｌ，则判为阴性。１．４单纯颈部皮试变态反应试验参照国家标准《动物结核病诊断技术（ＧＢ／Ｔ１８６４５—２００２）》进行，仅采用牛型ＰＰＤ在奶牛颈部进行皮试变态反应，剂量为２０００国际单位（ＩＵ）／头，分别于注射前和注射后７２ｈ测量皮肤厚度，并计算出皮厚差，依据国家标准判断结果。１．５比较变态反应试验参照（）ＩＥ《动物疫苗和诊断手册》中牛结核病诊断方法进行，该方法在欧盟（ＥＵ）国家广泛使用，并以议会指令６４／４３２／ＥＥＣ推荐［１］。在牛颈部同时分点注射牛型和禽型ＰＰＤ，使用剂量均为２ｏｏｏ

ＩＵ／头，禽型ＰＰＤ注射位点在牛

型ＰＰＤ下方间隔约１０～１５ｃｍ处。分别于注射前和注射后７２ｈ测量牛型ＰＰＤ和禽型ＰＰＤ注射处的皮肤厚度，并计算出各自的皮厚差。如果牛型ＰＰＤ的皮厚差大于禽型ＰＰＤ的皮厚差且超过４ｍｍ判为阳性，１～４ｍｍ为可疑，小于或等于禽型ＰＰＤ的皮厚差为阴性。２结果２．１７一干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应的比较９５３头奶牛同时进行７一干扰素试验和单纯颈部皮试变态反应，结果显示ｒ干扰素试验检出阳性牛１５４头，阳性检出率为１６．２％（１５４／９５３）；单纯颈部皮试变态反应检出阳性牛３０７头，阳性检出率为３２．２％（３０７／９５３）；两种方法的阳性符合数为１４７头，阳性符合率为６３．８％（２９４／４６１）；阴性符合数为６３９头，阴性符合率为８８．４％（１２７８／１４４５）；两者总