植物抗病基因工程的基本原理与方法
植物基因工程技术的发展与应用
植物基因工程技术的发展与应用植物基因工程技术是现代生物技术的一大突破和重要组成部分，其应用范围涵盖了农业、药用、工业等领域，不仅能够提高植物的品质和产量，还可以开发出新型农药、生物制品、生物材料和绿色能源等，对于人类社会的发展起着不可忽视的作用。
本文将就植物基因工程技术的相关概念、技术发展、应用前景等方面进行较为全面的论述。
一、植物基因工程技术的相关概念和基本原理植物基因工程指的是在植物细胞内对基因进行改造，从而获得新的基因型和表现型的一种技术。
其基本原理是将外源基因导入植物细胞，利用植物细胞自身的遗传物质修饰目标基因或创造新的功能基因，并通过细胞培养和选育等手段使成果得以表现出来。
该技术的发展离不开分子生物学、细胞生物学、遗传学等多学科的支持和贡献。
二、植物基因工程技术的发展历程随着分子生物学和生物技术研究的不断深入，植物基因工程技术也得以不断发展完善。
其中，早期的相关成果主要以菌株Agrobacterium-mediated transformation和基于农杆菌的转瞬间法（Biolistic or particle bombardment）为主。
1983年首次将生长激素合成基因导入一种植物模式（烟草）成功表达，并证实基因转移能在工业作物中成功。
1986年由丹尼斯·H·维达（Dennis H. Vaida）在科罗拉多州通过农杆菌转化法将雏菊从褐色变为紫色。
90年代以来，随着技术的不断进步，植物工程技术实现了从基因拷贝到化学合成等多领域的迅速发展，并且逐步转变为整合化的技术系统。
例如，基因组学、基因编辑技术以及蛋白质组学等技术的加入，更大程度地推动了植物基因工程技术的发展。
三、植物基因工程技术的应用前景1.农业在农业领域，应用植物基因工程技术可以有效地增加作物的产量和改善作物的品质，提高抗病性。
例如，现在已经实现了多种作物的抗虫、抗草甘膦、抗病毒等优化特性，从而使作物的品质和产量得到了大幅度的提高，增加了农业的生产效益。
基因工程基本原理
基因工程基本原理
基因工程是通过改变生物体的基因组来实现对其性状的调控的技术。
其基本原理包括以下几个步骤：
1. 基因选择：从目标生物体中选择具有所需性状的基因。
2. 基因克隆：将目标基因从生物体中分离出来，通常通过
PCR等方法进行基因扩增。
3. 基因构建：将目标基因插入到载体DNA中，构建重组DNA。
载体可以是细菌、酵母或其他生物的染色体片段，一
般被称为质粒。
4. 基因转导：将重组DNA导入到宿主生物体中。
这通常使用
基因枪、电穿孔和细菌介导等技术来实现。
5. 检验与筛选：对转导后的宿主生物进行筛选，确认目标基因达到预期效果。
这可能需要对基因表达进行检测，例如通过PCR、基因表达测定等方法。
6. 基因表达：在宿主生物中，目标基因会被表达为蛋白质，进而影响其性状。
这可能需要使用特定的启动子、RBS和终止
子等元件来调控基因表达水平。
基因工程的基本原理就是通过这些步骤来实现对基因组的改造，从而达到人为调控生物性状的目的。
这项技术在农业、医学和
生物工程等领域有广泛应用，例如改良植物品种、生产特定药物和生物材料等。
基因工程的优点以及原理
基因工程的优点以及原理
基因工程是利用人为手段对生物体基因进行改造和调整的一种技术。
其优点包括：
1. 治疗遗传性疾病：基因工程可以通过修复或替换有缺陷的基因，为患有遗传性疾病的患者提供有效的治疗方法。
2. 生产药物和疫苗：基因工程技术可以通过将目标基因导入细菌、动植物等生物体中，使其产生特定的蛋白质，用于制造药物和疫苗，提高产量和效率。
3. 农业增产：基因工程可以通过转基因作物，使其具有抗虫、抗病、抗草药性等特性，提高农作物的产量和质量，减少农药的使用。
4. 资源和能源开发：基因工程可以通过改造微生物，使其能够更高效地转化废物、产生清洁能源，例如生物燃料。
基因工程的原理主要包括：
1. 基因克隆：将目标基因从一个生物体中剪取出来，并将其插入另一个生物体的染色体中，使其能够被该生物体表达。
2. 基因编辑：利用特定的蛋白质酶，例如CRISPR/Cas9系统，将基因组中的特定部分进行剪切、插入或替换。
3. 基因合成：人工合成基因序列，设计出特定的功能蛋白质，然后将其导入生物体中。
4. 基因传递：通过载体（例如质粒、病毒）将目标基因导入到生物体中的细胞，并使其在细胞中稳定表达。
5. 基因表达：利用细胞的生物合成机制，将导入的基因转录成mRNA，进一步翻译为蛋白质，从而实现目标基因的功能表达。
基因工程育种的原理
基因工程育种的原理
基因工程育种是指利用分子生物学和生物技术手段对作物的遗传物质进行改良，以达到提高作物产量、抗病性和适应性的目的。
基因工程育种的原理主要包括基因定位、基因克隆、基因转移和基因表达等几个方面。
首先，基因定位是基因工程育种的第一步。
通过分子标记技术和遗传连锁图谱，可以精确定位到目标基因的位置，确定其在染色体上的具体位置和序列信息。
这为后续的基因克隆和转移奠定了基础。
其次，基因克隆是基因工程育种的关键环节。
通过PCR扩增、限制酶切割和
连接、转化等技术，可以将目标基因从原始植物中精确地克隆出来，并进行进一步的分析和改造。
基因转移是基因工程育种的核心技术之一。
通过载体介导的转基因技术，可以
将目标基因导入到受体植物中，实现外源基因的稳定表达。
这样就可以使受体植物获得目标基因所带来的新性状，比如抗病性、耐逆性、提高产量等。
最后，基因表达是基因工程育种的最终目的。
通过转录、翻译和后转录修饰等
生物学过程，外源基因被转录成mRNA，再翻译成蛋白质，从而表达出新的功能
性状。
这就是基因工程育种实现作物改良的关键步骤。
总的来说，基因工程育种的原理是通过精确定位、克隆、转移和表达目标基因，实现对作物遗传物质的改良和优化，从而获得具有新性状和优良特性的新品种。
这一技术的应用为农业生产提供了新的手段和途径，对于解决粮食安全、提高农业生产效率具有重要意义。
随着生物技术的不断发展和进步，基因工程育种将在未来发挥更加重要的作用，为人类粮食生产和农业可持续发展做出更大的贡献。
植物抗病虫害的基因工程技术与应用
汇报人：可编辑 2024-01-07
目 录
• 植物抗病虫害基因工程概述 • 植物抗病虫害基因工程技术 • 植物抗病虫害基因工程的应用 • 植物抗病虫害基因工程的前景与挑战
01
植物抗病虫害基因工程概述
植物抗病虫害基因工程定义
植物抗病虫害基因工程是指利用基因 工程技术将抗病虫害基因导入植物细 胞，使植物获得抗病虫害的性状，提 高植物的抗病虫害能力。
植物抗病虫害基因工程面临的挑战
01
安全性问题
转基因植物的安全性尚未得到全 球范围内的广泛认可，需要进一 步研究和验证。
02
03
环境适应性
技术瓶颈
转基因植物在环境中的适应性尚 未得到充分验证，可能对生态环 境造成不良影响。
目前基因工程技术仍存在技术瓶 颈，如转化效率、基因表达调控 等方面的问题。
提高植物抗病虫害基因工程效果的策略
促进农业可持续发展
植物抗病虫害基因工程的实施可以提高农作物的抗性，减少化肥和农 药的使用，降低农业成本，促进农业的可持续发展。
植物抗病虫害基因工程的历史与发展
起始阶段
20世纪80年代初，科学家开始尝 试利用基因工程技术培育抗病虫 害的植物。
发展阶段
随着基因克隆和转化技术的不断 进步，越来越多的抗病虫害基因 被发现和克隆，植物抗病虫害基 因工程得到了迅速发展。
应用阶段
目前，植物抗病虫害基因工程已 经广泛应用于农业生产和园艺等 领域，为农作物和植物的保护提 供了有效的手段。
02
植物抗病虫害基因工程技术
基因克隆技术
基因克隆技术是植物抗病虫害基因工程技术的基础，通过该技术可以分离和克隆抗病虫术能够快速、准确地获取目标基 因。
植物病理学中的抗病基因与病害抗性机制
植物病理学中的抗病基因与病害抗性机制植物病理学是研究植物与病原微生物之间相互作用的学科，其中抗病基因和病害抗性机制是研究的重要内容。
本文将介绍植物病理学中的抗病基因和病害抗性机制，旨在加深对这些方面的理解。
一、抗病基因的概念与分类抗病基因是指植物基因组中能够使植物对病原微生物产生抗性或耐受性的基因。
根据基因的作用机制和表达方式，抗病基因可以分为两类：直接抗病基因和间接抗病基因。
1. 直接抗病基因直接抗病基因是指通过抗病效应蛋白（effector proteins）对抗病原微生物的基因。
这些蛋白质可以与病原微生物的分子成分发生特异性结合，从而触发一系列的反应，最终阻止病原微生物的侵染。
直接抗病基因通常通过编码特定的蛋白质来实现对病原微生物的抵抗。
2. 间接抗病基因间接抗病基因是指通过调节植物的信号通路和固有免疫系统来增强抗病能力的基因。
这类基因通常与植物的免疫反应相关，可以增强植物的抗病能力。
间接抗病基因包括调控转录因子、信号转导分子等。
二、病害抗性机制的研究进展除了抗病基因的分类，病害抗性机制的研究也是植物病理学的重要方向之一。
在这个领域，研究者们通过揭示植物对病原微生物反应的分子机制，进一步了解病害的发生和防控。
1. PAMP-PRR互作模式PAMPs（pathogen-associated molecular patterns，病原联想分子模式）是病原微生物分子结构的一部分，PRRs（pattern recognition receptors，模式识别受体）是植物细胞表面的受体蛋白，可以识别和结合PAMPs。
当PRRs与PAMPs结合时，会激活一系列的防御反应，从而增强植物对病原微生物的抵抗能力。
2. R蛋白介导的免疫反应R蛋白（Resistance proteins）是植物免疫系统中的重要组成部分，可以识别病原微生物效应物质，并触发免疫反应。
R蛋白介导的免疫反应被称为特异性（异种）免疫反应，能够防御特定的病原微生物，并引发快速而持久的抗病反应。
植物的免疫机制和抗病性育种
番茄抗青枯病育种
01
番茄青枯病是一种由细菌引起 的病害，对番茄生产造成极大 危害。
02
通过筛选具有抗病基因的番茄 品种，结合分子生物学技术和 遗传育种手段，可以培育出抗 青枯病的番茄新品种。
03
目前已经成功培育出多个抗青 枯病的番茄品种，并在生产上 得到了推广应用。
其他作物抗病性育种进展
1
除了水稻、小麦和番茄外，其他作物如玉米、马 铃薯、棉花等也开展了抗病性育种工作。
。
细胞壁加固
植保素是植物在受到病原体攻击时合成的一 类小分子化合物，具有抗菌、抗病毒等作用 。
病程相关蛋白的表达
病程相关蛋白是植物在受到病原体攻击时表 达的一类蛋白，参与植物的防御反应。
02
抗病性育种原理与方法
抗病性育种目标与策略
抗病性育种目标
培育出具有广谱、持久抗性的新品种 ，降低病害对农作物的危害，提高农 作物产量和品质。
抗病性与产量、品质的平衡
在提高植物抗病性的同时，如何保持或提高植物的产量和 品质是一个需要解决的问题。
抗病基因的挖掘与利用
目前已知的抗病基因数量有限，且不同植物间的抗病基因 存在较大差异，如何有效挖掘和利用抗病基因是抗病性育 种的关键。
新型抗病性育种技术发展
基因编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因编辑技 术，可以精准地对植物基因组进 行编辑，为抗病性育种提供新的 手段。
后天免疫
植物在受到病原体攻击后，通过识别 病原体并激活特定的防御反应来抵抗 病害。
免疫信号传导途径
病原体相关分子模式（ PAMP）触发免疫
植物通过识别病原体表面的特定分子模式， 激活免疫信号传导途径，引发防御反应。
效应子触发免疫
基因工程及其应用
环境保护
基因工程可用于生物修复、 环境监测和生态系统保护， 有助于解决环境问题和提高 可持续发展。
基因工程在医学领域的应用
ห้องสมุดไป่ตู้
1
基因治疗
通过基因工程技术修复或替换患者的缺陷
药物研发
2
基因，为治疗遗传性疾病提供新的方法。
基因工程用于制备重组蛋白和抗体，加速
药物开发和生产过程。
3
疾病诊断
基因工程技术使得疾病的早期诊断更加准 确和可靠，为个性化医学提供了新的途径。
基因工程在农业领域的应用
转基因作物
基因工程可用于在作物中导入外 源基因，以提高作物的抗虫性、 耐旱性和营养价值。
植物组织培养
基因工程技术可用于培育不孕植 株、繁殖珍稀植物和提高植物生 长速度。
农业生物技术
基因工程在农业领域还可用于动 物遗传改良、育种和疫苗研发， 提高农业生产效率。
基因工程在环境领域的应用
生物修复
基因工程可以用于修复受污染土壤和水体中的有害物质，加速环境恢复过程。
环境监测
通过基因工程技术，可以开发植物和微生物传感器来监测环境中的有害物质。
生态系统保护
基因工程可用于保护濒危物种、恢复破坏的生态系统，维持生物多样性。
基因工程使用了许多工具 和技术，如限制性酶、 DNA合成和蛋白质表达系 统等，以便研究和操作基 因。
基因编辑技术如CRISPRCas9已经革命性地改变了 基因工程领域，使得基因 编辑更加精确和高效。
基因工程的应用领域
生物医学
基因工程在生物医学研究中 有广泛应用，如基因治疗、 药物研发和疾病诊断。
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2.1 目的基因的分离和鉴定
◆ 对已知序列进行分子克隆
PCR扩增 扩增
◆与已知基因紧密连锁基因的分离
◆ 根据植株或细胞表型变异进行基因分离
转座子导入细胞 野生型 细胞核 DNA
转座子标签法
目的形状突变NA同源的序列 同源的序列 加入与植物中特定 为了实现将目的基因和植物基因组有效整合， 为了实现将目的基因和植物基因组有效整合，植物基因 工程中常在目的基因两端接上能和植物特定基因能整合的 DNA序列，一方面可以提高外源基因的插入效率；另一方 序列，一方面可以提高外源基因的插入效率； 序列 面也可以结合植物基因组表达调控规律， 面也可以结合植物基因组表达调控规律，通过调整所加同 源序列的碱基序列有效地控制外源基因的插入位点和表达 时间，使目的基因更便于操作以及整合后更好地发挥作用。 时间，使目的基因更便于操作以及整合后更好地发挥作用。 加入报道基因 常用的报道基因： 常用的报道基因：lacZ、ocs、cat、nptⅡ、lux和gus 、 、 、 Ⅱ 和
第六章 植物抗病基因工程的基本 原理与方法
植物抗病基因工程是通过分子生物学技术获得对植物病 病毒、细菌、真菌、线虫等病害） 害（病毒、细菌、真菌、线虫等病害）具有一定抗性的转基 因植株。 因植株。
► 1983年首例转基因烟草问世。 年首例转基因烟草问世。 年首例转基因烟草问世 ► 1994年首批转基因作物如延熟西红柿和抗除草剂棉花等获得批准 年首批转基因作物如延熟西红柿和抗除草剂棉花等获得批准
2.4 转化植物细胞的筛选及转基因植物的鉴定 ◆ 植物外植体经过农杆菌或 植物外植体经过农杆菌或DNA直接转化后，大部分 直接转化后， 直接转化后
细胞是没有转化的，只有极少数是转化的， 细胞是没有转化的，只有极少数是转化的，这就需要采用 特定的的方式将未转化细胞与转化细胞区分开来， 特定的的方式将未转化细胞与转化细胞区分开来，淘汰未 转化的细胞， 转化的细胞，然后利用植物细胞的全能性在适宜的环境条 件下使转化的细胞再生成可育的转基因植株。 件下使转化的细胞再生成可育的转基因植株。
加入翻译起始密码子 由于植物中mRNA的翻译起始密码子多数也是 的翻译起始密码子多数也是AUG， 由于植物中 的翻译起始密码子多数也是 ， 因此， 因此，要在目的基因功能蛋白的编码序列前加上适当的 核苷酸序列。 核苷酸序列。 加入终止密码子 植物基因工程中所使用的mRNA翻译终止密码子有 翻译终止密码子有 植物基因工程中所使用的 UAA、UAG、UGA三种。一般在目的基因功能蛋白的 三种。 、 、 三种 编码序列后直接加上对应的碱基序列。 编码序列后直接加上对应的碱基序列。实验中通常采用 的是Ti质粒中的 质粒中的Nos终止子。 终止子。 的是 质粒中的 终止子 加入增强序列
加入转录的加尾序列 真核生物为保证一个结构基因表达完全末端需要有 一个加尾序列。其功能一方面保证转录的终止； 一个加尾序列。其功能一方面保证转录的终止；另一 方面保证形成有活性的mRNA链。植物基因工程中常 方面保证形成有活性的 链 用的加尾序列是AATAAA。 用的加尾序列是 。 插入内含子 内含子是真核生物基因组结构的特点之一。 内含子是真核生物基因组结构的特点之一。在基因 工程中， 工程中，多数不用在目的基因中插入这种片段就能得到 有效的表达，因此，认为它是基因产物功能非必需的。 有效的表达，因此，认为它是基因产物功能非必需的。 但是在实际操作中， 但是在实际操作中，如果在目的基因适当的位置插入这 种序列，其表达量可以提高几十到几百倍。因此， 种序列，其表达量可以提高几十到几百倍。因此，有人 推测，内含子可能在基因翻译中起增强子的作用。 推测，内含子可能子基因
◆ H. Anzai(1989),et al.分离到了抗烟毒素（tabtoxin） 分离到了抗烟毒素（ 分离到了抗烟毒素 ） 的基因ttr，将基因ttr与 的基因 ，将基因 与CaMV 35S启动子融合成嵌合基 启动子融合成嵌合基 通过农杆菌介导的转化法转入烟草，获得ttr高表达 因，通过农杆菌介导的转化法转入烟草，获得 高表达 量的转基因植株， 量的转基因植株，对烟毒素和病原菌的侵染均表现出良 好的抗性。 好的抗性。 ◆ 菜豆毒素（phaseolotoxin）是一种非寄主专化性毒 菜豆毒素（ ） 产菜豆毒素的P.s.pv.phaseolicola菌株通过 菌株通过argK基因 素，产菜豆毒素的 菌株通过 基因 合成一种不被菜豆毒素抑制的OCTaseR酶，从而对该毒 合成一种不被菜豆毒素抑制的 酶 素不敏感。 基因导入烟草和菜豆， 素不敏感。将argK基因导入烟草和菜豆，获得的转基因 基因导入烟草和菜豆 烟草和菜豆对P.s.pv.phaseolicola有较高的抗性。 有较高的抗性。 烟草和菜豆对 有较高的抗性
►目前，已经商品化的转基因作物所转入的外源基因主要是抗性基 目前，
因，只有少数是改良作物品种性状的。 只有少数是改良作物品种性状的。
1 植物抗病基因工程策略
1.1 导入植物抗病相关基因和病原菌致病相关基因 在植物抗性基因的利用方面 根据已有的R基因结构特征 设计新的R基因 基因结构特征， 基因。 ◆ 根据已有的 基因结构特征，设计新的 基因。 ◆ 异源表达 基因。 异源表达R基因 基因。 向同一株植物中导入多个R基因 基因。 ◆ 向同一株植物中导入多个 基因。 在病原菌无毒基因的利用方面 转病原菌无毒基因。 ◇ 转病原菌无毒基因。 将病原菌无毒基因和相应的R基因一起导入植物 基因一起导入植物。 ◇ 将病原菌无毒基因和相应的 基因一起导入植物。 导入与植物抗病信号有关的基因。 ◇ 导入与植物抗病信号有关的基因。
第七章 转基因作物及其外源 抗性基因检测技术
概况
世界上已批准 进行商品化转基因 作物：大豆、玉米、棉花、 西红柿、马铃薯、甜椒、 作物：大豆、玉米、棉花、 西红柿、马铃薯、甜椒、西 葫芦、木瓜、甜菜、矮牵牛、亚麻、烟草、西瓜等， 葫芦、木瓜、甜菜、矮牵牛、亚麻、烟草、西瓜等，其中 前四种超过了99％，种植面积最大的是转基因大豆，种植 前四种超过了 ％，种植面积最大的是转基因大豆， ％，种植面积最大的是转基因大豆 面积为3650万公顷，占62％，其次是转基因玉米，种植面 万公顷， ％，其次是转基因玉米 面积为 万公顷 ％，其次是转基因玉米， 积为1240万公顷，占21％，第三是转基因棉花，种植面积 万公顷， ％，第三是转基因棉花 积为 万公顷 ％，第三是转基因棉花， 万公顷， ％，第四是转基因油菜 为680万公顷，占12％，第四是转基因油菜，种植面积 万公顷 ％，第四是转基因油菜，种植面积300 万公顷， 万公顷，占5％。 ％。
进行商品化生产。目前，国内外已报道的转基因作物有 种 多个品系 多个品系。 进行商品化生产。目前，国内外已报道的转基因作物有1 6种70多个品系。
►自1986年3月以后，我国已研究的转基因作物 类，涉及的转基因 月以后， 年 月以后 我国已研究的转基因作物47类
103种。正式公布的转基因作物：棉花、大豆、西红柿、青椒和矮牵牛。 种 正式公布的转基因作物：棉花、大豆、西红柿、青椒和矮牵牛。
2 植物抗病基因工程的技术环节
◆ 至今已分离的供植物基因工程应用的目的
基因有100多个，其中研究得比较多的是抗病毒、 多个，其中研究得比较多的是抗病毒、 基因有 多个 细菌和真菌的基因， 细菌和真菌的基因，能杀死害虫或使害虫拒食的 基因，能抵抗各种除草剂的基因，能抗逆境如干 基因，能抵抗各种除草剂的基因， 高寒、高温盐碱等的基因， 旱、高寒、高温盐碱等的基因，能提高植物体中 蛋白质含量或蛋白质品质的基因等等。 蛋白质含量或蛋白质品质的基因等等。这些基因 中有些是来自植物本身，有些来自微生物， 中有些是来自植物本身，有些来自微生物，还有 少数是人工合成的。 少数是人工合成的。
◆ 目前，转化细胞与非转化细胞的区分及非转化细胞 目前，
的淘汰常采用抗菌素抗性基因及抗除草剂基因， 的淘汰常采用抗菌素抗性基因及抗除草剂基因，总称筛选 标记。植物基因工程中常用的筛选标记是nptⅡ 标记。植物基因工程中常用的筛选标记是 Ⅱ（neomycin phosphotransferase）基因和 （chloramphenicol acetyltr）基因和cat（ ansferase ）基因
基因挽救技术 基因组相减法 cDNA差式显示 差式显示
用转座子序列
完整的目的 性状基因 转座子标签法流程图
2.2 表达载体的构建
◆ 目的基因分离后，往往需要经过修饰才能应用于 目的基因分离后， 植物基因工程。构建植物表达载体就是在目的基因的5’ 植物基因工程。构建植物表达载体就是在目的基因的 端加上启动子，在基因的3’端加上中止子 端加上中止子， 端加上启动子，在基因的 端加上中止子，以便使外源 基因能在植物中有效地表达，充分发挥其功能。 基因能在植物中有效地表达，充分发挥其功能。 加入启动子区 目前植物基因工程中外源基因常选用的启动子主要 质粒的T-DNA序列上分离的启动 有3类：第一类是从 质粒的 类 第一类是从Ti质粒的 序列上分离的启动 具有真核生物转基因起始所需的TATA盒和 盒和CAT盒； 区。具有真核生物转基因起始所需的 盒和 盒 第二类是CaMV的35S和19S启动子；第三类是从植物 启动子； 第二类是 的 和 启动子 本身分离出来的启动子。 本身分离出来的启动子。
2.3 目的基因向植物的转化
◆ 近年来，植物的遗传转化技术得到了迅 近年来， 速的发展，已建立了多种转化系统， 速的发展，已建立了多种转化系统，如以农杆 质粒及Ri质粒为载体的转化系统 菌Ti质粒及 质粒为载体的转化系统，以PEG 质粒及 质粒为载体的转化系统， 介导的原生质化学导入法、电激法、基因枪法、 介导的原生质化学导入法、电激法、基因枪法、 花管导入法等等。总之， 花管导入法等等。总之，植物细胞遗传转化系 统可分为两大类： 统可分为两大类：以载体为介导的基因转化 （vector mediated gene transfer）和DNA直接 ） 直接 转化（ 转化（naked DNA transfer）。 ）。