肺炎链球菌的分离和鉴定PPT课件
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肺炎链球菌的分离和鉴定
耐青霉素肺炎链球菌的传播主要有两种途径:
(1)克隆传播，是耐药菌株从一个国家或地区传播到另 一个国家或地区。 (2)基因水平转移，是把耐药基因转移到敏感菌株中。 过度使用抗生素是耐药菌株传播的危险因素。一般认 为在抗生素的压力选择下，敏感菌株被杀死，耐药菌株确 能生存下来, 或者其他相关链球菌耐药的DNA序列通过基 因转移在肺炎链球菌之间传播。 研究发现证实儿童鼻咽部存在“隐匿性耐药克隆株” 。 随着我国儿童β-内酰胺类抗生素大量使用, 可以预计不 久的将来, 不敏感的肺炎链球菌将会急剧增加。
谢谢！！！
3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁 酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙 酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁， 使菌溶解。 自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也 可被胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促 进培养物中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁 溶菌试验为阳性，甲型溶血性链球菌的胆 汁溶菌试验为阴性。
2. Optochin(OP)敏感试验
optochin即乙基氢化叩卟啉，因结构似于奎 宁，故又称为乙基氢化羟基奎宁。该药对肺炎链 球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。 optochin敏感试验方法似药敏试验。挑取被 检菌，密涂于血平板上，贴上含5μ g/片的 optochin纸片，置5~10%CO2的大气中（或烛缸）， 35℃孵育过夜。抑菌环直径>=14mm为敏感，推 断为肺炎链球菌。抑菌环直径<14mm时参照胆汁 溶菌试验。肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm 以上，甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm。
三、肺炎链球菌的药敏试验
K-B 法：采用 Mueller-Hinton 琼脂＋ 5 ％羊血 培养基。直接菌落悬液法 (0.5 麦氏单位菌液， 在15分钟内接种完)作为接种液。 稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。 培养条件：为 35℃ 、 5 ％ CO2 培养 20 ～ 24 小 时。质控菌株ATCC 49619。
肺炎链球菌分离与鉴定
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肺炎链球菌药敏报告（续1）
当苯唑西林抑菌圈≤19mm时应确定青霉素、头 孢 噻 肟 或 头 孢 曲 松 MICs ， 因 为 抑 菌 环 ≤ 19mm 可以发生在青霉素耐药、中介或敏感菌株中。
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肺炎链球菌药敏报告（续2）
当从血液或脑脊液中分离出肺炎链球菌，应常 规报告MICs。测定药物应包括青霉素、头孢噻 肟或头孢曲松、美罗培南和万古霉素。
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4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
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5. 荚膜肿胀试验
取一滴抗血清及一滴菌悬液混匀，加少量
美蓝液混合后加盖片，室温10~20min后，用油
镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明
显未染色膨大空白圈为阳性。可用于肺炎链球
*d.不同菌株
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三、肺炎链球菌药敏试验
K-B法：采用Mueller-Hinton琼脂＋5％羊血 培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液， 在15分钟内接种完)作为接种液。
稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。
培养条件：为35℃ 、5％CO2培养20～24小 时。质控菌株ATCC 49619。
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一、生物学性状
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1. 形态及染色
肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛 头状，成双排列，少呈链状。在组织中 可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失）， 无鞭毛及芽孢。
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肺炎链球菌分离和鉴定
（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋白质， 无特异性。
肺炎链球菌分离和鉴定
二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血性 链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖 发酵和optochin试验最为常用。必要时可作 小鼠毒力试验加以鉴别。在上述试验中， 肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血性链球 菌为阴性。必要时可用特异性单克隆乳胶 或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。
肺炎链球菌分离和鉴定
也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。 应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大 大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿色链 球菌相区别。
肺炎链球菌分离和鉴定
2. Optochin(OP)敏感试验
optochin即乙基氢化叩卟啉，因结构似于奎 宁，故又称为乙基氢化羟基奎宁。该药对肺炎链 球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
（1） 培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采用质量好的哥 伦比亚琼脂基础和新鲜血液（ 5％马血或羊血） 。
肺炎链球菌分离和鉴定
二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血性 链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、菊糖 发酵和optochin试验最为常用。必要时可作 小鼠毒力试验加以鉴别。在上述试验中， 肺炎链球菌均应阳性，而甲型溶血性链球 菌为阴性。必要时可用特异性单克隆乳胶 或自动化仪器等相应鉴定卡作鉴定。
肺炎链球菌分离和鉴定
也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。 应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力大 大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿色链 球菌相区别。
肺炎链球菌分离和鉴定
2. Optochin(OP)敏感试验
optochin即乙基氢化叩卟啉，因结构似于奎 宁，故又称为乙基氢化羟基奎宁。该药对肺炎链 球菌的作用机制是干扰其叶酸的合成。
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
肺炎链球菌分离和鉴定
肺炎链球菌分离和鉴定
（1） 培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采用质量好的哥 伦比亚琼脂基础和新鲜血液（ 5％马血或羊血） 。
肺炎链球菌的分离及鉴定
第五十页，编辑于星期五：十九点 三十分。
肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要为 靶位的改变，即核糖体50S亚单位改变所致，由
ersB(erythromycin resistance methylase)基因介导，
其耐药表型为MLS，即对大环内酯类、林可酰胺类 和链阳霉素B交叉耐药。另一耐药机制为主动外排系 统，由mefA基因介导，其耐药表型为M，即对14
(1)克隆传播，是耐药菌株从一个国家或地区传播到另一个国
家或地区。
(2)基因水平转移，是把耐药基因转移到敏感菌株中。
过度使用抗生素是耐药菌株传播的危险因素。一般认为在
抗生素的压力选择下，敏感菌株被杀死，耐药菌株确能生存下来,
或者其他相关链球菌耐药的DNA序列通过基因转移在肺炎链球
菌之间传播。
研究发现证实儿童鼻咽部存在“隐匿性耐药克隆株” 。
（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基上 是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌对 干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开 机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率十 分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低
的主要原因。
第十一页，编辑于星期五：十九点 三十分。
2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球菌
空白圈为阳性。可用于肺炎链球菌的分型。
第四十五页，编辑于星期五：十九点 三十分。
6. 凝集试验
包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白A）
协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
第四十六页，编辑于星期五：十九点 三十分。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
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肺炎链球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制主要为 靶位的改变，即核糖体50S亚单位改变所致，由
ersB(erythromycin resistance methylase)基因介导，
其耐药表型为MLS，即对大环内酯类、林可酰胺类 和链阳霉素B交叉耐药。另一耐药机制为主动外排系 统，由mefA基因介导，其耐药表型为M，即对14
(1)克隆传播，是耐药菌株从一个国家或地区传播到另一个国
家或地区。
(2)基因水平转移，是把耐药基因转移到敏感菌株中。
过度使用抗生素是耐药菌株传播的危险因素。一般认为在
抗生素的压力选择下，敏感菌株被杀死，耐药菌株确能生存下来,
或者其他相关链球菌耐药的DNA序列通过基因转移在肺炎链球
菌之间传播。
研究发现证实儿童鼻咽部存在“隐匿性耐药克隆株” 。
（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基上 是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌对 干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离开 机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率十 分低，不及时接种适当培养基是导致分离率低
的主要原因。
第十一页，编辑于星期五：十九点 三十分。
2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球菌
空白圈为阳性。可用于肺炎链球菌的分型。
第四十五页，编辑于星期五：十九点 三十分。
6. 凝集试验
包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白A）
协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。
第四十六页，编辑于星期五：十九点 三十分。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
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肺炎链球菌的分离和鉴定
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肺炎链球菌鉴定要点
革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链； 血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌
落 表 面 无 小 白 点； 培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； 胆汁溶解试验阳性； 荚膜肿胀试验阳性； 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。
2
肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠
荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起 人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。
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3
细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有
重要价值，同时对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。
肺炎链球菌的分离和鉴定
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1
概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称 肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于 正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成 带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。 尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年 体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
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肺炎链球菌对营养要求较高，需采 用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5％ 马血或羊血） 。
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（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致分离 率低的主要原因。
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
肺炎链球菌PPT课件
防御功能下降
细菌侵入肺泡
细菌大量繁殖
诱
发
肺
组
织
的
变
态
通过肺泡间
大量浆液、血
肺泡间隔毛
反
孔向邻近肺
细胞、纤维蛋
细血管扩张
应
组织蔓延
白原渗出
通透性增加
四、发病机制（以肺炎链球菌肺炎为例）
• 荚膜： 抗吞噬作用； 粘附作用； 抗有害物质损害 ； 抗干燥； 细菌分型及鉴定；
不引起原发性组织坏死不 形成空洞，炎症消散后不 留瘢痕
• 对于青霉素过敏者，或者感染耐青霉素菌株者，用呼吸氟喹诺酮 类、头孢噻肟或头孢曲松等药物；
• 感染MDR菌株者可应用万古霉素、替考拉宁或利奈唑胺
谢谢聆听
喻秀峰
谢谢您的观看！
四、发病机制（以肺炎链球菌肺炎为例）
•体经 典途径，引起发热、炎症及组织损伤；
• 磷壁酸：在肺炎链球菌粘附到肺上皮细胞及血管内皮的表面起重 要作用；
• 神经氨酸酶：与肺炎链球菌在粘膜上定植、繁殖和扩散有关；
五、抗生素的应用
• β-内酰胺类抗生素（首选青霉素G） 与青霉素结合蛋白(PBPs)结合，抑制转肽酶活性，干扰细菌
肺炎链球菌
急诊医学科
一、概述
• 俗称肺炎球菌（S.p），肺炎链球菌属于链球菌科、链球菌属； • 一种条件致病菌，定植于人类鼻腔部，多数不致病； • 常引起社区获得性肺炎、中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎、脓毒血症；
二、形态结构特点
• 革兰阳性球菌； • 菌体呈矛头状； • 多数呈双排列； • 无鞭毛及芽孢； • 组织形成荚膜；
细胞壁合成，造成细胞壁缺损，菌体迅速溶解。 触发细菌自溶酶的活性，加速细菌死亡。
细菌对β-内酰胺抗生素耐药机制
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3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁酰胺酶， 能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的 连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。
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4.乳胶凝集试验
结果准确、快速、特异性高。
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5. 荚膜肿胀试验
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2）选择性分离培养基
培养基中添加5μg/ml庆大霉素有利于肺炎链球 菌的分离。
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3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。
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（3）肺炎链球菌的菌落形态
在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形 成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。
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肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠
荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起 人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。
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细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有
重要价值，同时对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。
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3.抗原结构
（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在 于肺炎链球菌的细胞壁。
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概述
肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称 肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于 正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成 带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。 尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年 体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。
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（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜 中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可 将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其 中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。
（3）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋 白质，无特异性。
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二、肺炎链球菌鉴定
肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血 性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、 菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要 时可作荚膜肿胀试验或小鼠毒力试验加 以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均 应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。 也可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器 等相应鉴定卡作鉴定。
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（2）平皿法:
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
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1. 溶血性检查
肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力 大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿 色链球菌相区别。
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2. Optochin(OP，奥普托欣)敏感试验
该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰 其叶酸的合成。
optochin敏感试验方法是药敏试验。 挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5气μ中g（/片或的烛op缸to）chi，n纸35片℃，孵置育5过~1夜0%。C抑O菌2的环大 直径>=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。 抑菌环直径<14mm时参照胆汁溶菌试验。 肺炎链球菌的抑制圈直径常在20mm以上， 甲型溶血性链球菌（约98%）小于12mm。
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也有例外，我们在实际工作中检出过耐optochin 的肺炎链球菌，并发现大多数的缓症链球菌和部 分口腔链球菌对optochin的抑菌环直径>=14mm。 应注意鉴别。
但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。
自溶酶在菌生长的稳定期被激活，也可被 胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物 中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳 性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
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（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水 两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解， 试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
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肺炎链球菌鉴定要点
革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链； 血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌
落 表 面 无 小 白 点； 培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； 胆汁溶解试验阳性； 荚膜肿胀试验阳性； 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。
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2. 培养特点
（1） 培养基
肺炎链球菌对营养要求较高，需采 用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5％ 马血或羊血） 。
肺炎链球菌的分离和鉴定
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（2）分离培养
1）标本处理
及时将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致分离 率低的主要原因。
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一、生物学性状
肺炎链球菌的分离和鉴定学习交流
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1. 形态与染色
肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛 头状，成双排列，少呈链状。在组织中 可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失）， 无鞭毛及芽孢。球菌的分离和鉴定
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