重组鼠疫菌F1抗原的纯化及其在ELISA检测鼠疫免疫中的应用

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海关检疫疾病资料-鼠疫

鼠疫概况鼠疫是一种人和动物共患的自然疫源性、烈性传染病。

在亚洲、非洲和美洲的一些国家和地区迄今每年仍有散在的流行。

甚至在美国也有感染者将鼠疫带人首都华盛顿的报告。

世界上曾发生三次大流行，第一次发生在公元6世纪，从地中海地区传入欧洲，死亡近1亿人；第二次发生在14世纪，波及欧、亚、非；第三次是18世纪，传播32个国家。

14世纪大流行时波及我国。

进入20世纪以后，世界上仍然有60多个国家和地区曾有过鼠疫流行。

病因鼠疫耶尔森氏菌于1894年在香港首次分离，属肠杆菌科，耶尔森氏菌属，是革兰氏染色阴性的兼性厌氧菌，显微镜下观为两头钝圆的短小杆菌，有荚膜，无鞭毛，无芽孢，菌落中心隆起，有粗糙颗粒，边缘不整齐。

它生长的最适PH为6.9-7.1，温度28-30℃，对高温和化学消毒剂敏感。

大多数鼠疫菌有6MD、45MD、65MD三个质粒。

其中6MD质粒为鼠疫菌所独有，在这个质粒上有产生鼠疫杆菌素的pst基因和血浆凝固酶及胞浆素原活化因子pla基因，后者被认为与人类致病有关。

45MD质粒为耶尔森氏菌属中三种致病菌共有，它参与温度与低Ca2+反应调节作用，主要分泌一些外膜蛋白(Yops)和产生具有抗吞噬作用的V抗原，这个质粒丢失后，鼠疫耶尔森氏菌将失去对低Ca2+反应的能力和相应的毒力。

65MD质粒为鼠疫菌特有，在这个质粒上存在着编码鼠疫菌最为重要的特异性和保护性抗原?F1抗原的基因。

鼠疫F1抗原的单克隆抗体是近年来开展鼠疫快速诊断研究的重要课题。

在鼠疫菌的染色体上还存在着一个能够聚集氯化血红素的hms基因和另一个与细胞铁转运机制有关的irp基因，与它们相对应的pgm阳性表型和铁调节蛋白都与鼠疫菌在特定条件下的毒力有关。

同时，在37℃，pH6时，鼠疫耶尔森氏菌还可以产生一种抗原，它对巨噬细胞有细胞毒性作用。

传播方式通过跳蚤传播，流行于鼠类间的自然疫源性疾病。

该病病原体的贮存宿主是野生啮齿类动物，兔形目和食肉目动物也可是人类的传染源。

鼠疫耶尔森菌F1抗原的性质研究

出这种封套抗原，名为Ｆ命１抗原。Ｆ１抗原一直被认为是鼠疫菌鉴别、鼠疫诊断和监测、鼠疫疫苗所必
不可少的，Ｆ对ｌ抗原的性质研究将有助于新疫苗和
新型诊断试剂的开发。
因以假基因形式存在，些是点突变，一些被插入一另序列断裂，这些变异有一大部分是发生在鼠疫耶尔
行，罪魁祸首即为耶尔森菌属中能引起致死性疾其病的鼠疫耶尔森菌（ｅｉｉｐｓｓ。毒性和无毒的Ｙｒｎｅｔ）ｓａｉ鼠疫耶尔森菌株均能在３７℃ 产生一种凝胶样的荚膜封套抗原，种封套抗原本身无毒，这却是一种抗鼠
鼠毒素或磷脂酶Ｄ（ｍ）＠ｐｓｐｓｃ）ｐＣ，Ｙｔ；Ｐｔｅｉｎ（ＰＰ（ｔｉ
９５ｋ）编码纤溶酶原激活物（ｌ）具有溶解纤维．ｂ：Ｐａ，蛋白的活性；ｐ ③ ｋｒ（Ｙｐａ，０～５ｋ）编码ｐＶ，Ｃｄ７７ｂ：
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｌｇａｕｅ；Ｙｒｉｉｓｉ；Ｓｂｕｉａｃｎｅ；Ｃｈａａｔｒｓｉｓｅｓｎａｐｅｔｓｕｎｔｖｃｉｒｃｅｉｔｃ
人类历史上曾发生过三次毁灭性的鼠疫大流
假 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 核耶尔森菌（可能为１最ｂ血清型）变异出来的。不同于小肠结肠炎耶尔森菌及假结核耶尔森
疫感染的重要免疫原。１４９７年Ｂｋｒ先成功分离ａｅ首

鼠疫临床诊断标准

鼠疫临床诊断标准
【诊断标准】
一、疑似病例：
起病前10日内，曾到过鼠疫动物病流行区或有接触鼠疫疫源动物及其制品，鼠疫病人或鼠疫菌培养物的历史。

突然发病，病情迅速恶化的高热病人，具有下列症候群之一者，应考虑为疑似病例。

1.急性淋巴结肿胀，剧烈疼痛、出现被迫性体位；
2.呼吸困难，咳血性痰；
3.具有毒血症候、迅速虚脱；
4.伴有重度中毒症候的其他症候群；
5.在没有接种过鼠疫菌苗的病人血清中，被动血凝试
验1:20以上滴度的抗鼠疫菌杆菌F1抗体，或用其
他经国家级单
位认可（确定）的试验方法检测达到诊断标准的，亦
应做出疑似病例的追溯诊断。

二、确诊病例：
1.在疑似病人或尸体材料中检出具有毒力的鼠疫杆
菌，是确诊首例鼠疫病人的唯一依据。

2.当一起人间鼠疫已经确诊后，在病人或尸体材料中
检出鼠疫杆菌的F1抗原或血清F1抗体升高4倍以
上，亦可对续发病例做出确诊。

实验确诊：疑似病例加1或2。

【传播途径】
人间鼠疫主要由蚤类为媒介，主要途径为：鼠→蚤→人。

肺鼠疫经呼吸道形成人→人的传播，可迅速造成人类肺鼠疫大流行。

【消毒】
对光、热、干燥及一般消毒剂均敏感，加热100℃1分钟，日光照射4-5小时及5%来苏儿、5%氯胺等均可迅速杀灭。

鼠疫传染病培训试题及答案

商丘市第二人民医院鼠疫防治知识培训测试题一、选择题1、鼠疫是我国法定传染病。

A.甲类B.乙类C.丙类D.丁类2、鼠疫主要以为媒介而传播。

A.蚊虫B.鼠蚤C.昆虫D.家禽3、鼠疫的临床分型中，最为凶险。

A.腺鼠疫B.肺鼠疫C.败血症鼠疫D.其他类鼠疫4、在鼠疫的血清检查中，可对鼠疫感染做出快速诊断的是。

A.接血凝法（PHA）B.酶联免疫吸附试验（ELISA）C.放射免疫沉淀试验（RIP）D.荧光抗体法（FA）5、是消灭鼠疫的根本性措施。

A.鼠疫疫苗接种B.消灭鼠疫传染源C.切断传播环节D.抗生素治疗6、鼠疫是主要通过下列哪种媒介传播的自然疫源性烈性传染病。

A.野鼠B.鼠蚤C.蚊子D.家鼠7、鼠疫耶尔森菌属肠杆菌科耶尔森菌属，是哪种细菌：A.G-，需氧菌B.，厌氧菌C.需氧菌D.厌氧菌8、发现鼠疫疑似病例后，应以最快的通讯方式向当地疾控中心报告，报道的时限为A.城市2小时内，农村4小时内B.城市4小时内,农村6小时内C.城市6小时内，农村12小时内D.城市12小时内，农村24小时内9、鼠疫分型中病死率极高，最严重的临床类型是。

A.肺鼠疫B.腺鼠疫C.败血症型鼠疫D.肠鼠疫二、是非题1.鼠疫是危害人类最严重的烈性传染病之一。

（）2.鼠疫杆菌对抗菌素中的青霉素很敏感。

（）3.鼠疫杆菌耐热但不耐寒，在-30度低温下即可死亡。

（）4.鼠疫不存在有隐性感染及带菌现象，隐性感染者和带菌者不可作为传染源传播鼠疫。

（）5.鼠疫的发病率及病死率一般无年龄、性别差异。

不同人群发病率的高低主要取决于与传染源接触的机会。

（）6.肺鼠疫为最严重的一型，病死率极高，俗称“黑死病”。

（）7.对鼠疫接触者应检疫7天，对曾接受预防接种者，检疫期应延至14天。

（）8.检测鼠疫患者或动物血清中F1抗体，急性期间隔两周的血清抗体滴度呈4倍以上增长，或一次滴度》1：100时有诊断价值。

（）9.鼠疫疫苗一般每年接种一次，必要时6个月后再接种一次。

ELISA的基本原理与应用

37℃温育60min，而后洗涤
加入酶标二抗（HRP-FI）
37℃温育60min，而后洗涤
加底物（TMB）显色
室温反应30min
加终止液（10%H2SO4）终止反应
用鼠疫菌免疫兔血清（1:2000）包被酶标板
4℃，静置过夜；次日，洗涤
用5%的牛血清白蛋白（BSA）封闭各孔
4℃静置过夜,次日，洗涤
加入待检标本（如血清、脑脊液、淋巴穿刺液等）。初筛试验：每份标本的首孔加180µl稀释液，而后各孔加100µl。首孔加入标本20µl，混匀后吸出100µl加入下一孔中，依次倍比稀释，最后100µl弃掉。还需设空白对照、阴性对照和阳性对照。复判试验：第一列为抑制列，首孔加90µl稀释液，而后每孔加稀释液50µl，第二列为血凝列，首孔加190µl稀释液，而后每孔加 100µl稀释液。在每列首孔中各加入标本10µl，抑制列50µl倍比稀释，最后50µl弃掉。血凝列100µl倍比稀释，最后100µl弃掉。抑制列每孔中加入1:20稀释的鼠疫菌免疫兔血清50µl。还需设空白对照、阴性对照和阳性对照。
流水冲洗式：流水冲洗最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液为蒸馏水。已有实验表明，流水冲洗式同样适用于微量滴定板的洗涤，让水流冲击板孔表面，洗涤效果也很好。
（6）显色显色是酶催化无色的底物生成有色产物的温育反应。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。 TMB受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应边观察结果。但为保证实验结果的稳定性，宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。
性对照（N）的A值后，计算S/N值。在鼠疫F1抗原和F1抗体

鼠疫诊疗方案(2023版)

鼠疫诊疗方案（2023 年版）鼠疫（Plague）是由鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）感染引起的，在啮齿动物等宿主动物间流行的一种自然疫源性疾病，在一定条件下通过蚤叮咬及其他途径（直接接触传播、呼吸道传播等）传播给人类，造成人间鼠疫。

鼠疫是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病。

为做到对鼠疫病例的早发现、早治疗，减少重症与死亡，在2011 年《鼠疫诊疗方案（试行）》的基础上，结合国内外研究进展和诊疗经验，制定本诊疗方案。

一、病原学鼠疫的病原菌为鼠疫耶尔森菌（以下简称鼠疫菌），属于肠杆菌科、耶尔森菌属。

在光学显微镜下为革兰染色阴性、两端钝圆、两极浓染的短小杆菌，菌体长约1~3μm，宽.5~0.8μm，有荚膜，无鞭毛，无芽孢。

鼠疫菌基因组由一条环状染色体（约4.6Mb，G+C%约47.6mol%）和至少3 个质粒pPCP1（pPst，约9.5kb）、pCD1 （pYV，约70kb）和pMT1（pFra，约100kb）组成，含有4000 多个编码序列（CDS）和100~140 个插入序列，在致病上起到关键作用。

其中，pPCP1 编码外膜蛋白纤溶酶原激活物（Pla, plasminogen activator），可干扰血液凝固和补体激活，以增强鼠疫菌株的毒力。

pCD1 编码一系列Yops 和Ⅲ型分泌系统（T3SS），T3SS 将Yops 输送到宿主细胞内，在感染过程中抗吞噬和诱导巨噬细胞凋亡，促进感染早期的免疫逃逸。

pMT1 编码合成F1 抗原和鼠毒素，可增强对单核细胞的抗吞噬能力。

鼠疫菌的脂多糖缺乏O 侧链，即缺乏O 抗原，因此鼠疫菌没有血清分型。

与其他细菌的荚膜为多糖不同，鼠疫菌的荚膜成分为糖基化蛋白，是鼠疫菌的主要表面抗原，被称为F1 抗原。

我国学者依据鼠疫菌生化反应、生态学特征等，将我国的鼠疫菌分为17 个生态型。

鼠疫菌在4~40℃都可生长，最适生长温度为28~30℃，最适pH 值为6.9~7.1，对紫外线、高温和常用化学消毒剂敏感。

鼠疫的治疗方法及预防措施

鼠疫的治疗方法及预防措施随着人类饮食文化的发展，越来越多的动物被人类当做新奇的食物，而由此导致越来越多动物疾病由口进入人体，引发疫病。

那么，鼠疫的预防措施有哪些呢?下面和小编一起来了解一下吧。

什么是鼠疫?鼠疫是鼠疫杆菌借鼠蚤传播为主的烈性传染病，系广泛流行于野生啮齿动物间的一种自然疫源性疾病。

临床上表现为发热、严重毒血症症状、淋巴结肿大、肺炎、出血倾向等。

鼠疫在世界历史上曾有多次大流行，死者以千万计，我国在解放前也曾发生多次流行，病死率极高。

患鼠疫原因有哪些?1、鼠蚤叮咬经鼠蚤传播，鼠蚤叮咬是主要的传播途径，啮齿动物→蚤→人的传播是腺鼠疫的主要传播方式。

2、呼吸道感染经呼吸道飞沫传播，通过呼吸、谈话、咳嗽等，借飞沫形成“人→人”的方式传播，并可造成人间鼠疫的大流行。

3、皮肤感染经皮肤传播，剥食患病啮齿动物的皮、肉或直接接触患者的脓血或痰，经皮肤伤口而感染。

4、消化道感染人吃了未彻底煮熟的染菌肉而感染。

鼠疫的症状有哪些?潜伏期：腺型2～8天;肺型数小时至2～3天;曾经预防接种者可延至9～12天。

1、轻型有不规则低热，全身症状轻微，局部淋巴结肿痛，偶可化脓，无出血现象，多见于流行初、末期或预防接种者。

2、腺型最多见，常发生于流行初期。

急起寒战、高热、头痛、乏力、全身酸痛偶有恶心、呕吐、烦躁不安、皮肤瘀斑、出血。

发病时即可见蚤叮咬处引流区淋巴结肿痛，发展迅速，第2～4天达高峰。

腹股沟淋巴结最常受累，其次为腋下、颈部及颌下。

由于淋巴结及周围组织炎症剧烈，使患者呈强迫体位。

如不及时治疗，肿大的淋巴结迅速化脓、破溃、于3～5天内因严重毒血症、继发肺炎或败血症死亡。

治疗及时或病情轻缓者腺肿逐渐消散或伤口愈合而康复。

3、肺型可原发或继发于腺型，多见于流行高峰。

肺鼠疫发展迅猛，急起高热，全身中毒症状明显，发病数小时后出现胸痛、咳嗽、咳痰，痰由少量迅速转为大量鲜红色血痰。

呼吸困难与发绀迅速加重。

肺部可以闻及湿性?音，呼吸音减低，体征与症状常不相称。

鼠疫放射免疫沉淀试验在鼠疫监测中的应用及效果评价

【ｙＫｅｗｏｄ】ｒｓ
Ｐａｕ；ＲＩ；ＭｏｉｒｆｃｅａｕｔｎｌｇｅＰｎｔ；Ｅｆｔｖｌａｉｏｅｏ
鼠疫的常规诊断包括细菌学检验和血清学检验方法。目前，国内外检查鼠疫抗体的血清学方法普遍
测定仪：一６９放免测定仪，京２１；测丌０北６厂检方法：文献Ｉ２１道的方法及标准检测各类血清。按Ｉ，报．４
２结果
应用的是鼠疫间接血球凝集试验（Ｈ。８ＩＡ）０年代初我们建立了鼠疫放射免疫沉淀试验（Ｉ）ＲＰ，并推广应用到全国大部分省（）经过２区，０余年的现场应用证明，ＲＰ检查鼠疫抗体是一种敏感、异的方法【１本文Ｉ特ｌ。一
ｃｐｔｔｎ（Ｐ）ａｄｏｆｒｄａｎｉｓａｄｒｆｔｅｌｇｅＩｉｉｉＲＩａｏｎｃｎｍｉｇｏｓｔｎａｄｏｈｐａｕＲＰ，ｐｏｕｅｐａｅａｔｏｙａｉｉｉｓｒｄｃｌｇｉｄｒｄｏｍｍｕｉｂｘｎｏｒ・ｕｎｂｎｔｏａｄｐａｙｅ
ｍｏｈｌｒｍ，ｖｒｏｓｎｍａｓｅｕｉｐｒｎｒａａｄｎｒｌｒｍ．Ｒｅｕｔｐｉｓｕｅｅａｕｉｌｒｍｎｅｅｉｉａｓｘｍｅｔｅｎｏｍａｕａｅｓｓｌｏｅｔｂｉｌｇｅｒｄｏｍｍｕｏｒ — Ｔｓａｌｈｔｅｐａｕａｉｉｓｈｎｐｅ

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ｂｔｅｎｒ１ａｄｎｔｅＦ，ａｄｔｅｆｒｒｉｓｐｒｒｏｔｅｌｔｒｈｅｕｔｄｍｏｓｒｔｄｔａＦｎｉｅａｅｕｅｅｗｅＦｎａｉ１ｎｈｏｍｅｕｅｏｈａｔ．Ｔｅｒｓｌｅｎｔｅｈｔｒ１ａｔｎｃｎｂｓｄｖｓｉｔｅｓａｇ
材料和方法
１材料
１１抗原及诊断血清．鼠疫菌ＥＶ株及重组大肠杆菌Ｄ３ＦＴ均Ｅ一１Ｈ，Ｓ
因此对Ｆ抗体的检测是鼠疫的血清学诊断标准的】基础。问接ＥＩＡ作为成熟的检测手段，ＬＳ以其突出的优点被用于多种生物样本的定量及定性分析，也被用于鼠疫的血清学检测，而且在许多鼠疫诊断方
ａｔｅｎｌｓ。Ｓ．ＡＧＥｒｖａｅｈｎｍｅｃｆｒｏＦｉｌｃｌｒｗｉｈｆ１．ｋｎｉｎａａｙｉｇｓＤＳＰｅｅｌｄｔｅｍｏｏｒｏｍｆｒｌｗｔａｍｏｅｕａｅｇｔ７６Ｄ．Ｉｉｈｏｍｍｕｏｉｕｉｎｉ－ｎｄｆｓｏｎ
ＷＮｅＨＮａｌＡａ，ｔ１ＬｎｈｕｈｔｕｅｆＢｏｏｉｌｒｄｃ，ａｚｏ３０６ＣｉＡＧＧ，ＣＡＧＹ－，ＷＮＹｎｅａ．（ａｚｏ￣ｉｔｏｉｇｃｏｕｔＬｎｈｕ７０４，ｈｎｉｔｌａＰｓａ）
维普资讯
邀生物学免疫掌进展２０年第３０６４卷第１期
ห้องสมุดไป่ตู้
ＰｏｉＭｅｂｌｍｕｏＦｂ２０，ｏ３ｏ１ｒｉｏｉｍｎｌｅ．０６Ｖ１４Ｎ．ｇｎｒｏＩ．
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重组鼠疫菌Ｆ抗原的纯化及其在ＥＩＡ１ＬＳ检测鼠疫免疫中的应用
ＥＩＬＳＡ分析免疫动物血清中抗Ｆ抗体的水平，１并与天然Ｆ抗原相比较，１证明ｒ１Ｆ抗原优于天然Ｆ抗原分析结果，１
可用于鼠疫的血清学检测。关键词：重组Ｆ抗原；化；１纯血清学检测
中图分类号：３８・Ｒ７７２文献标识码：Ａ文章编号：０５７（０６０４０７０１０￣６３２０）１）２－４
ｄｃｔｄｔａｈＦｎｉｅｅｃｅｉｈ１ｓｅｉｃａｔｏｙｎｃｍｐｒｏｆｔｅａｔｉｅｔｎｉｄｒｃＬＳｉｉａｅｈｔｔｅｒ１ａｔｎｒａｔｄｗｔｔｅＦ－ｐｃｆｎｉｄ．ＩｏａｓｎｏｃｉｔｓｗｈａｎｉｔＥＩＡｇｈｉｂｉｈｖｉｉｅｎ
ＡｂｔａｔＥ．ｌＤ３ＦＴｓｒｉａｕｔａｅｉＢ．Ｔｈｒｄｘｒｓｅｃｍｂｎｎ１ａｔｅａｕｔｅｕ－ｓｒｃ：ＣｏｉＥ。１ＨｔａｎｗｓｃｌｖｔｄｗｔＬＳｉｈｅｃｕｅｅｐｅｓｄｒｏｉａｔＦｎｉｎｗｓｆｒｒｒｅｇｈｐｌ
王革，常娅莉，艳，超，万马王秉翔
（兰州生物制品研究所，州７０４）兰３０６
摘要：从表达ｒ１Ｆ抗原的大肠杆菌中以Ｓｐｒｘ０凝胶过滤层析纯化ｒ１ｕｅｅ－０ｄ２Ｆ抗原，电泳扫描显示纯化率＞０。９％
ＳＳＡＥ及琼脂免疫双扩散结果显示纯化的ｒ１Ｄ・ＧＰＦ抗原具天然Ｆ抗原的活性。将此纯化的ｒ１原用于间接１Ｆ抗
ＰｒｆｃｔｎｏＦ１ａｔｇｎｅｐｅｓｄｉ／ａｄｉ ’ ｐｌａｉｎｉｅｅｔｎｏｎｉｐａｕｅｐｎｅｂｕｉａｉｆｒｎｉｅｘｒｓｅＥＣｏ／ｎｓａｐｉｔｎｄｔｃｉｆａｔｌｑｅｒｓｏｓｙＥＬＩＡｉｏｎｔｃｏｏ－Ｓ
ａｉｇｏｔｅｇｎｏｑａｔｙｔｅｃｎｅｔａｉｎｏｎｉｌｇｅａｔｏｙｉｅｕｓａｄａｎｓｉｒａｅｔｔｕｎｉｈｏｃｎｒｔｆａｔｐａｕｎｉｄｎｓｒｍ．ｃｆｏ－ｂ
ＫｅｒｓＦｎｉｅｙｗｏｄ：ｒ１ａｔｎ；Ｐｒｃｔｎ；Ｉｇｕｆａｉｉｉｏｍｍｕｅｓｒｍｓａｎｅｕａｓｙ
鼠疫菌Ｆ抗原是存在于鼠疫菌体表面的荚膜ｌ
物质，３ ℃培养时可以产生，鼠疫菌的特异性在７是抗原，也是重要的保护性抗原… 。由于被鼠疫感染的人及动物可产生强烈的针对Ｆ抗原的体液免疫，１
ｌｙＳｐｅｄｘ２０Ｈｉｅｐｅａａｉｅｔｔｈｏｔｇａｈ．ｈｕｔａｅｃｅｏｍｏｅｔａ０ｆｄｂｕｈｒｅ－０ｌｄｒｐｒｔｅｇｌｌａｉｎｃｒｍａｏｒｐｙＴｅｐｒｙｗｓｒａｈｄｔｒｈｎ９％．Ａｆｒｅｏｖｉｆｒｏｉｔｅ