土壤DNA提取试剂盒(Soil
土壤试剂盒操作手册和常见问题
FastDNA Spin Kit for Soil实验步骤1.Add up to 500 mg of soil sample to a Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中最多加入500mg土壤样品。
注意：推荐最多加入500mg土壤样品，含水量比较多的土壤或者碎屑多的土壤可适量减少样品量。
2.Add 978 μL Solution Phosphate Buffer to sample in Lysing Matrix E tube.在裂解介质管E中加入978μl Sodium Phosphate Buffer3.Add 122 μL MT Buffer.What’s happening: Begin to solubilize membrane proteins with detergents as well asextra-cellular proteins and contaminations in soil.加入122μl MT Buffer发生的反应：用洗涤剂溶解细胞膜蛋白以及细胞外蛋白和土壤中的污染物。
注意：为了得到更好的样品处理效果，加入土壤样品及两个缓冲液后，在裂解介质管中仍能保留有250-500μl空间。
4.Homogenize in the FastPrep Instrument for 40 seconds at a speed setting of 6.0What’s happening: mechanical disruption of cell walls of soil organisms and releasing nucleic acids into the protective buffer.将样品置于FastPrep®仪器上匀浆40s，速度为6.0m/s发生的反应：机械破碎土壤微生物的细胞壁，将核酸释放入保护缓冲液中。
5.Centrifuge at 14,000×g for 5-10 minutes to pellet debris.14,000 x g离心5-10min至沉渣注意：如果把离心时间延长到15min，可以更好地使样品量较大的，或者细胞壁结构较复杂的细胞碎片沉降到管底。
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤1.准备样品：选择合适的土壤样品，将其称重至1g。
如果样品中有根、树枝等杂物，需要将其去除。
2. 加入试剂：将1g土壤样品加入50ml试样管中，然后加入4ml试剂A。
用旋转混合器将土壤样品和试剂彻底混合。
3.离心：将混合物离心10分钟，以去除土壤颗粒和杂质。
离心后，样品将分为上清液和沉淀。
4. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
5. 加入试剂：将2ml试剂B加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，使试剂B和上清液充分混合。
6. 震荡：将离心管放入震荡器中，以6000rpm的速度震荡10分钟，以充分裂解细胞。
7.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的土壤颗粒。
8. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
9. 加入试剂：将0.5ml试剂C加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
10.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
注意不要转移沉淀物。
12. 加入试剂：将0.8ml试剂D加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
13.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
14. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
15. 加入试剂：将0.5ml试剂E加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
16.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
17. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
18. 加入试剂：将0.5ml试剂F加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
19.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
20. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
21. 加入试剂：将0.5ml试剂G加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
土壤DNA提取
1 试验材料吉林省松江河镇人参栽培土壤。
每份土壤样品经多点取样后充分混匀，用前过10 目筛，去除土壤中的须根、枯枝等杂物[2]。
1 .2 仪器设备及药品电子分析天平、恒温水浴锅、紫外凝胶成像系统、电泳槽、电泳仪、高速冷冻离心机、微量加样器、PCR 仪等。
TENP 缓冲液（50 mmol/L Tris，20 mmol/L EDTA，100mmol/L Na Cl，1% PVP，pH 10.0）、CTAB 提取缓冲液（100mmol/L Tris，100 mmol/L EDTA，100 mmol/L Na3PO4，1.5mol/L Na Cl，1%CTAB，pH 8.0）、SDS 提取缓冲液（100 mmol/LTris，50 mmol/L EDTA，50 mmol/L Na Cl，pH8.0，灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L）、异丙醇、氯仿、异戊醇、无水乙醇、琼脂糖、EB、Taq DNA 聚合酶、d NTP、6×凝胶上样缓冲液、DNAMarker 等。
主要试剂有十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ）、乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）、十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）、异硫氰酸胍，均为分析纯级。
1 .3 试验方法1.3.1 土壤微生物的洗涤取土壤样品2g，置于50m L 灭菌的离心管中；加入10m L TENP 缓冲液[3]悬浮土样，磁力搅拌器搅拌15 min；10000r/min 离心5min，弃上清，重复洗涤多次至上清基本无色；最后将沉淀收集至1.5ml 离心管中。
1.3.2 DNA 的提取1.3.2.1 CTAB 法按照李钧敏[4]的方法略作改动。
将沉淀重悬于500μl CTAB 提取缓冲液→65℃水浴2h→8000r/min，室温离心15 min，取上清→加入等体积氯仿：异戊醇（24∶1），12,000r/min 离心10 min，取上清→加入0.6 倍体积的异丙醇，4℃淀过夜→12000 r/min 4℃离心20min 收集DNA 沉淀→70%乙醇漂洗两次→干燥后将沉淀溶于100 μl p H 8.0 TE 缓冲液，备用。
四种提取土壤DNA的方法
四种提取土壤DNA的方法OMEGA试剂盒法1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。
加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。
2.加入100μl Buffer DS，震荡混匀。
3.70o C水浴10min,水浴过程中，轻轻震荡。
4.于室温离心（3000rpm）3min，上清吸取800μl至2ml离心管，加入270μl Buffer SP2，充分震荡混匀。
5.冰浴5min, 4o C、12000rpm离心5min。
6.小心将上清移至新的2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀（轻轻地20-30次），于室温放置30min。
7.4o C、12000rpm离心10min，以沉淀DNA。
8.弃上清，确保不将DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上1min，以流干液体。
9.加入200μl Elution Buffer于管内，轻轻震荡10s。
10.加入50-100μl HTR Reagent ,轻轻震荡10S。
11.室温放置2min，12000rpm离心2min。
12.将上清移至新的离心管中，加入等体积XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。
13.将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中，10000rpm室温离心1min，弃上清。
14.加入300μl XP2 Buffer， 10000rpm离心2min，弃收集管。
15.将柱子插入新的收集管，加入700μl SPW Wash Buffer（提前用无水乙醇配好）， 10000rpm离心1min，弃上清。
16.重复上一步。
17.弃液体，12000rpm室温离心2min。
18.将柱子插入新的离心管中，加入30-50μl Elution Buffer于柱子中央，65o C水浴10-15min。
19.12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱液保留。
20.重复步骤18、19。
周法1.称取5g土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2％CTAB提取液pH8.0）和50μl蛋白酶K（20mg／ml），置于37o C恒温摇床上（水平放置），150-180rpm摇1h。
dna提取试剂盒原理
dna提取试剂盒原理
DNA提取试剂盒的原理是利用化学方法和物理方法将细胞膜破坏、细胞蛋白质降解、DNA与其他细胞组分分离，从而获得纯净的DNA样品。
具体步骤如下：
1. 细胞破碎：将待提取DNA的样品加入溶解缓冲液中，通过机械破碎、超声处理或酶解等方法使细胞膜完全破裂，释放细胞内的DNA。
2. 蛋白质降解：加入蛋白酶K等蛋白酶，将细胞内的蛋白质降解为小分子物质，以便后续去除。
3. DNA与蛋白质的分离：加入乙酸酚-氯仿等有机试剂，通过离心将DNA和蛋白质、碎细胞残渣等分为两相，DNA富集于上层而蛋白质和细胞残渣富集于下层。
4. DNA析出：将上层液体转移至新离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，DNA会在其中沉淀出来。
5. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，以去除残留的盐类和杂质。
6. DNA溶解：用脱离蛋白质结构的缓冲液溶解DNA沉淀，得到所需的DNA提取物。
DNA提取试剂盒通过上述原理，能够高效、快速地提取出高
质量的DNA样品，适用于分子生物学、基因组学、遗传学、犯罪学等领域的研究和应用。
实验室土壤DNA提取方法
实验室土壤DNA提取方法1.样品收集和处理：首先，选择代表性的土壤样品进行采集。
可以使用一支消毒过的勺子或铲子，在表层土壤（0-10厘米深度）从多个点上采集土壤样品。
将采集的土壤样品放入带有滴涤酒精的消毒塑料袋中，密封并标记。
2.去除有机污染物：将收集的土壤样品放在室温下放置48小时，以除去土壤中的有机污染物。
然后，使用筛网（孔径为2毫米）将土壤样品筛选，以去除大颗粒物。
3.细胞破碎：将筛好的土壤样品放入5毫升的离心管中，加入细胞破碎缓冲液（含有Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K和SDS），并加入玻璃珠。
用震荡器将土壤样品在高速震荡下破碎数分钟，直至土壤样品完全均质。
4.DNA提取：将土壤样品离心10分钟，以除去残余的土壤颗粒物。
将上清转移到新的离心管中。
加入NaCl和CTAB（cetyltrimethylammonium bromide）缓冲液，并轻轻倒置混匀。
将样品在65摄氏度的水浴中孵育30分钟。
加入异丙醇并轻轻倒置混匀，然后继续孵育5分钟。
用塑料吸管吸取上层的异丙醇溶液，避免吸取到DNA混淆物。
将异丙醇溶液转移至新的离心管中，并加入冷异丙醇，使DNA沉淀。
将离心管放置在-20摄氏度的冰箱中，孵育至少2小时，以沉淀DNA。
使用离心机将混悬液离心10分钟，以将沉淀的DNA分离出来。
去除上清液，并用70%乙醇洗涤DNA沉淀，以去除异丙醇和其他杂质。
将洗涤后的DNA沉淀风干，然后加入含有TE缓冲液（含有Tris-HCl和EDTA）的管中重溶。
对DNA溶液进行浓度和纯度检测，可以使用比色法或分光光度计来确定DNA的浓度和 A260/A280比值。
将DNA溶液储存在-20摄氏度的冰箱中，以便后续分析。
土壤DNA提取具有许多优点，如操作简单、成本低廉，并且可以获得大量的DNA，适用于各种微生物的遗传分析。
然而需要注意的是，土壤样品中存在有机物和多种离子，可能会对DNA提取的效果产生影响，因此在提取过程中需要仔细操作，以确保提取到高质量的DNA。
SoilDNAKit步骤
SoilDNAKit步骤E.Z.N.A. Soil DNA Kit1、将500mg的玻璃珠转移到15mL离心管中2、加0.2-1.0g土壤样品到玻璃珠中3、加1mLSLX-Mlus Buffer，最大速度搅拌3-5分钟直到样品溶解注意：为达到最佳效果，需要用到搅拌磨，如Fastprep-24、Mixer Mill 3004、加入100uL DS Buffer，彻底震荡混匀5、70℃水浴10分钟，水浴过程中稍微震荡离心管注意：为将DNA从革兰氏阳性菌中隔离出来，第二次95℃水浴2分钟6、3000×g，室温离心3分钟7、转移800uL上清液到一个新的2mL离心管中8、加入270uL P2 Buffer，彻底震荡混匀9、冰浴5分钟10、≥13000×g，4℃离心5分钟11、小心转移上清液到一个新的2mL离心管中12、加入0.7体积的异丙醇，倒置离心管20-30次彻底混匀注意：如果土壤中含少量的DNA，-20℃孵育样品1小时13、≥13000×g，4℃离心10分钟14、小心弃掉上清液，不搅动DNA沉淀15、在吸水纸上倒置离心管1分钟，排干水分注意：不需要干燥DNA沉淀16、加入200uL Elution Buffer，震荡10秒17、70℃水浴10-20分钟，以溶解DNA沉淀18、加入100uL HTR Reagent，彻底震荡混匀注意：使用前摇动瓶子，充分悬浮HTR Reagent19、室温放置2分钟20、≥13000×g，离心2分钟21、转移清澈的上清液到一个新的2mL离心管中注意：如果上清液仍然呈土壤中的黑色，重复18-20步骤22、加入等体积的XP1 Buffer，彻底震荡混匀23、将一个HiBind DNA Mini Column插入2mL收集管中24、将22步的样品转移到HiBind DNA Mini Column中25、10000×g，室温离心1分钟26、弃去滤液，保留收集管27、加入300uL XP1 Buffer28、10000×g，离心1分钟29、弃去滤液和收集管30、将HiBind DNA Mini Column转移到一个新的2mL收集管中31、加入700uL SPW Water Buffer注意：SPW Water Buffer使用前用酒精稀释32、10000×g，离心1分钟33、弃去滤液，保留收集管34、重复31-33步35、≥13000×g，室温离心空的HiBind DNA Mini Column2分钟注意：这步是去除残余酒精的关键，36、转移HiBind DNA Mini Column到一个干净的1.5mL离心管中37、加入30-100uL 70℃Elution Buffer到HiBind膜中心上38、室温放置3-5分钟39、≥13000×g，离心1分钟40、重复37-39步41、弃去HiBind DNA Mini Column，-20℃保存洗提的DNA。
土壤总DNA的几种提取方法
土壤总DNA的几种提取方法1.CTAB法CTAB法是一种常用的土壤总DNA提取方法。
该方法使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）缓冲液，可以有效去除土壤中的蛋白质、多糖和有机酸等干扰物质。
首先将土壤样品与CTAB缓冲液混合，然后进行细胞破碎、去蛋白、去RNA等步骤，最后通过苯酚-氯仿提取和酒精沉淀来纯化土壤DNA。
2.醋酸盐法醋酸盐法是一种简单、快速的土壤DNA提取方法。
该方法通过醋酸盐缓冲液以及Tween 20和SDS等表面活性剂，可以迅速裂解土壤颗粒并去除蛋白质、多糖等杂质。
该方法的优点是操作简单、提取时间短，适用于大批量样品。
3.快速CTAB法快速CTAB法是对传统CTAB法的改进。
该方法中加入Na2EDTA可以有效去除DNA上的脱氧核酸酶，从而保护土壤DNA的完整性。
与传统CTAB法相比，快速CTAB法可以在较短的时间内提取优质土壤DNA。
4.商业化土壤DNA提取试剂盒近年来，越来越多的商业化土壤DNA提取试剂盒被开发出来。
这些试剂盒对土壤样品进行了优化处理，可以快速、高效地提取土壤总DNA。
商业化试剂盒通常使用快速离心和滤膜等技术，可提高DNA的纯度和产量，并且操作简单，适用于初学者和大批量样品处理。
5.玻璃珠法玻璃珠法是一种机械破碎法，适用于多样品同时提取。
该方法先将土壤样品与玻璃珠放在试管中，通过震荡破碎方式将细菌和DNA释放出来。
然后通过离心和滤膜等步骤来纯化土壤DNA。
6.CTAB-SDS混合法CTAB-SDS混合法是结合了CTAB法和SDS（十二烷基硫酸钠）法的优点的土壤DNA提取方法。
CTAB-SDS混合法使用CTAB缓冲液同时包含CTAB 和SDS两种表面活性剂，在去除蛋白质的同时也可以有效裂解囊泡等难以破碎的结构，提高土壤DNA的纯度和产量。
总之，土壤总DNA的提取方法有很多种，选择适合的提取方法需要考虑土壤样品的特性、实验目的以及实验室设备和经验等因素。
同时，为了保证提取的DNA质量，需要注意样品的保存和处理过程中的卫生和无菌操作。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
技术咨询电话：400-607-9999
土壤DNA提取试剂盒（Soil DNAout）
货号: M090065
产品及特点：由于土壤中有机质含量丰富,尤其是其中的腐殖酸对PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从土壤微生物提取高纯度的DNA一直是十分棘手的问题。
本产品是本公司精心优化的专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。
1.去污染效果好，OD260/280一般都在1.8以上, OD260/340一般都在3.0以上(表示腐殖酸少),得到的
DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR等后续反应。
2.产量高，每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA，片段长度在30 Kb左右。
3.操作过程简单快速，只需要30分钟。
4.扩容性好，既可以在1.5 mL离心管中微量提取，也可以在50 mL离心管中进行大规模制备。
5.试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：
成份100 次包装
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
使用手册1份
注：溶液A和溶液B均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。
运输及保存：常温运输，4℃保存，保存期为一年。
使用方法：
1.65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃
待用。
2.称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。
如果是扩量
操作，可以使用更多土壤和较大离心管。
也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到
1.5 mL离心管中。
注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4.13000-15000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，具体取
决于腐殖酸的含量，上清的体积一般为300-400 µL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6.将离心管冰浴至少5分钟。
7.13000-15000 g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5 mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上
清的颜色稍淡，体积在0.7 mL左右。
8.加入0.2 mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9.13000-15000 g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。
说明：离心后两相交界面将有白色膜
状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。
上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
10.重复第8步和第9步一次。
最后将上清转移到新的1.5 mL离心管时，不要超过0.5 mL，否则没有空
间加两倍体积的乙醇。
如果有多余的可以弃之不用。
11.加入2倍体积的乙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀，15000 g离心5分钟,弃上清，管底将有微小DNA
沉淀，有时候呈棕色。
注意：不要用异丙醇代替乙醇，否则腐殖酸更容易于DNA共沉淀。
12.加入1mL 75%乙醇，震荡，13000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。
13.重复上步清洗一次。
注意：75%乙醇洗两次有助于去除部分腐殖酸。
技术咨询电话：400-607-9999
14.短暂离心，吸弃残留的75%乙醇（约50uL），室温晾干。
注意：一定要去除残留的75%乙醇，否则会
影响后续反应和电泳上样（样品会飘走）。
15.加入30 uL TE缓冲液溶解沉淀。
注意：不知道样品土壤DNA产率前最好不要加过多TE，如果DNA
浓度高，可以再加TE稀释。
DNA即可用于电泳、酶切和PCR等反应。
电泳时最好采取电泳后染色，因为实验发现，残留腐殖酸会吸附走大量的EB，使在腐殖酸后面的DNA不能染色。
PCR时，最好按终体积的1/10加入随赠的PCR抑制物清除剂（CAT#：M020007）。
疑难解答：
Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。
如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。
方法二是检测最大光吸收。
注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸（humic acid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在260 nm有最大吸收（见Appl.Environ. Microbiol., 63：4993, 1997），有的则在340 nm。
所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。
Sigma, Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q: 本产品是否彻底去除土壤DNA中的所有腐植酸?
A: 腐植酸（humic acid）是动、植物的残骸经过微生物的分解、转化和成千上万年的复杂化学反应而产生的特性各异的一大类物质，其含量和种类随土壤不同而不同。
本产品可以从大部分土壤样品中提取到无腐殖酸污染的DNA。
但对于腐殖酸含量特别高的土壤样品（如泥碳样品，含70%腐殖酸），可能还需要使用柱式腐殖酸清除剂（CAT#：M090146）以便清除DNA样品中残留的腐殖酸。
Q: 是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。
如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的DNA）能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果样品含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行PCR，抑制作用一般可以解除。
如果仍然抑制，可以使用天净沙的PCR Inhibitor Erasol（CA T#：M020007）。
如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂（CAT#：M090146）或先电泳，再用超大片段胶回收试剂Magic Gel DNABACK（CA T#：M060021）纯化土壤DNA，去除残留抑制剂。
其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了 E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。
建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。