mobio试剂盒提取土壤DNA的步骤(翻译)
土壤DNA提取试剂盒(Soil
技术咨询电话：400-607-9999土壤DNA提取试剂盒（Soil DNAout）货号: M090065产品及特点：由于土壤中有机质含量丰富,尤其是其中的腐殖酸对PCR等后续反应有极大的抑制作用,所以从土壤微生物提取高纯度的DNA一直是十分棘手的问题。
本产品是本公司精心优化的专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。
1.去污染效果好，OD260/280一般都在1.8以上, OD260/340一般都在3.0以上(表示腐殖酸少),得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR等后续反应。
2.产量高，每克土壤一般可以提取到5 ug 左右DNA，片段长度在30 Kb左右。
3.操作过程简单快速，只需要30分钟。
4.扩容性好，既可以在1.5 mL离心管中微量提取，也可以在50 mL离心管中进行大规模制备。
5.试剂无毒无害, 环保。
规格及成分：成份100 次包装溶液A 50 mL溶液B 50 mL使用手册1份注：溶液A和溶液B均为无色液体，溶液A 4℃保存时会产生沉淀，用前需要65℃溶化并混匀。
运输及保存：常温运输，4℃保存，保存期为一年。
使用方法：1.65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取0.5 mL加入到1.5 mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2.称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。
如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。
也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5 mL离心管中。
注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3.将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4.13000-15000 g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，具体取决于腐殖酸的含量，上清的体积一般为300-400 µL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤
FastDNASPINKitforSoil土壤DNA快速提取试剂盒提取步骤1.准备样品：选择合适的土壤样品，将其称重至1g。
如果样品中有根、树枝等杂物，需要将其去除。
2. 加入试剂：将1g土壤样品加入50ml试样管中，然后加入4ml试剂A。
用旋转混合器将土壤样品和试剂彻底混合。
3.离心：将混合物离心10分钟，以去除土壤颗粒和杂质。
离心后，样品将分为上清液和沉淀。
4. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
5. 加入试剂：将2ml试剂B加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，使试剂B和上清液充分混合。
6. 震荡：将离心管放入震荡器中，以6000rpm的速度震荡10分钟，以充分裂解细胞。
7.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的土壤颗粒。
8. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
9. 加入试剂：将0.5ml试剂C加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
10.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
注意不要转移沉淀物。
12. 加入试剂：将0.8ml试剂D加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
13.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
14. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
15. 加入试剂：将0.5ml试剂E加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
16.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
17. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
18. 加入试剂：将0.5ml试剂F加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
19.离心：将离心管离心10分钟，以去除残余的杂质。
20. 转移上清液：使用移液器将上清液转移到新的1.5ml离心管中。
注意不要转移沉淀物。
21. 加入试剂：将0.5ml试剂G加入离心管中，用手轻轻颠倒离心管，以充分混合。
土壤DNA提取Part II 化学篇
土壤DNA提取Part II 化学篇接着前一篇文章关于如何提高土壤DNA提取得率的话题。
我们已经十分彻底的谈了样品研磨裂解、选择研磨珠类型的重要性、研磨设备以及裂解缓冲液。
从中你也可以发现，裂解步骤是提高得率的最值得钻研的地方。
研磨裂解后最终DNA抽提前，需要清洗去杂。
这一步主要由抑制因子去除技术（IRT）完成。
跟着操作说明书流程走，抑制因子去除完成后，文章的再下一段就是使用化学溶液配合硅胶离心柱抽提DNA了。
去除抑制因子：把土壤样品研磨破碎后就可以进行PCR抑制因子去除工作。
所谓的腐植酸其实就是使得样品呈现棕色的物质。
如果样品中有植物残骸甚至生物薄膜（Biofilm），杂质中还会含多糖类物质。
MO BIO以及Powersoil kits之所以在同行、同类试剂盒中出类拔萃就是因为其抑制因子去除。
MO BIO实验室开发出了一个专利技术，叫抑制因子去除技术（IRT）。
它能从细胞裂解物中沉淀去除腐植酸、多糖、多酚等。
IRT技术分两步，先去除蛋白质和其它残骸，然后去除不溶性大分子絮状沉淀物。
IRT处理后，样品看起来就清亮很多了。
PowerSoil 和PowerWater经过实验计算使用了充足的IRS量来对付最最难搞的问题土壤。
若最终依然存在有抑制因子（PCR扩增检测），重复一次IRS步骤。
IRT的第一步需要低温来加强絮状物形成。
而第二步，我们建议不要延长孵育时间超过5min。
试验证明过长孵育时间会降低DNA得率。
中点？如果要临时中止实验，时间点最好是在IRS结束后，加入绑定液之前。
把溶解产物存放在-20℃留到第二天再做硅胶离心柱绑定。
绑定到硅胶薄膜上：此时，DNA已经可以过硅胶薄膜用于抽提了。
一般上一步得到的细胞裂解产物应该是清亮的（如果土壤有机物含量很多，有可能微微发黄）。
为了把DNA吸附到硅胶薄膜上，需要离液盐的帮助。
绑定液（C4溶液）与溶解产物的比例是得率的又一关键点。
绑定液用太多，会导致降解RNA过多回收；要是太少，大分子量的基因组DNA回收率就不高。
四种提取土壤DNA的方法
四种提取土壤DNA的方法OMEGA试剂盒法1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入0.2-0.5g土壤样品。
加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。
2.加入100μl Buffer DS，震荡混匀。
3.70o C水浴10min,水浴过程中，轻轻震荡。
4.于室温离心（3000rpm）3min，上清吸取800μl至2ml离心管，加入270μl Buffer SP2，充分震荡混匀。
5.冰浴5min, 4o C、12000rpm离心5min。
6.小心将上清移至新的2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀（轻轻地20-30次），于室温放置30min。
7.4o C、12000rpm离心10min，以沉淀DNA。
8.弃上清，确保不将DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上1min，以流干液体。
9.加入200μl Elution Buffer于管内，轻轻震荡10s。
10.加入50-100μl HTR Reagent ,轻轻震荡10S。
11.室温放置2min，12000rpm离心2min。
12.将上清移至新的离心管中，加入等体积XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。
13.将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中，10000rpm室温离心1min，弃上清。
14.加入300μl XP2 Buffer， 10000rpm离心2min，弃收集管。
15.将柱子插入新的收集管，加入700μl SPW Wash Buffer（提前用无水乙醇配好）， 10000rpm离心1min，弃上清。
16.重复上一步。
17.弃液体，12000rpm室温离心2min。
18.将柱子插入新的离心管中，加入30-50μl Elution Buffer于柱子中央，65o C水浴10-15min。
19.12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱液保留。
20.重复步骤18、19。
周法1.称取5g土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2％CTAB提取液pH8.0）和50μl蛋白酶K（20mg／ml），置于37o C恒温摇床上（水平放置），150-180rpm摇1h。
土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明
土壤基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D2600规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：D2600-50T D2600-100T溶液A25ml50ml溶液B3ml6ml溶液C5ml10ml溶液D10ml20ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个PCR增强剂500ul1ml说明书1份1份注：试剂盒开封后溶液A、B、C、D需在2-8℃保存。
PCR增强剂-20℃保存。
产品简介:本试剂盒适合于从褐土、淤泥、火山灰等各种极端土壤环境中提取微生物DNA。
对土壤中各种细菌、真菌有很好裂解效果，最大限度的保留了微生物DNA的多态性。
本试剂盒采用我公司特有的腐殖质吸附材料，可高效专一的去除各种腐殖质成分而丝毫不会影响DNA的产率，纯度较酚、氯仿抽提法提高数倍。
使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好，可直接用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称取土壤样本0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入450ul溶液A震荡混匀。
*也可直接称取样本0.1-0.5g于离心管(建议使用2ml圆底管)，加入450ul溶液A剧烈震荡混匀1-2min至没有固体块。
使用液氮研磨效果最佳。
2、加入50ul溶液B充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，65℃水浴6min，每2min充分颠倒混匀一次。
3、加入100ul溶液C充分颠倒混匀(不要剧烈震荡)，12000rpm离心10min。
4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心2min。
5、在吸附柱中加入200ul溶液D，将离心后的上清加入到带有溶液D 的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心1min。
mobioDNA提取试剂盒说明书翻译
1.加2g土壤到15mL Bead Tube中2.加入0.25mLSR1和0.8mLSR2之后，加入2.5mL Bead Solution到Bead Tube3.加入3.5mL酚：氯仿：异戊醇25:24:1到试管中，加盖后涡旋混合直到分层消失。
4.最大转速涡旋震荡15min5.室温，2500g离心10min6.取出后，小心地转移上层水相到干净的15mL收集管中，弃掉下层酚7.加1.5mL SR3到水相中，然后涡旋混匀，4℃孵育10min8.室温，2500g离心10min。
转移上清到一个新的15mL收集管中9.加入5mL SR4溶液到装有上清的收集管中，混匀，室温孵育30min10.室温，2500g离心30min11.倒掉上清，将收集管倒置在纸上5min12.震荡SR5混合。
加1mL SR5到15mL收集管中，并反复吹打使完全重悬。
13.为每一个RNA样品准备一个RNA Capture ColumnA．拿去15mL收集管的盖子，将RNA Capture Column放入15mL收集管中。
B．加2mL SR5到RNA Capture Column中，让其完全流尽。
14.从第12步加入RNA样品至RNA Capture Column中，然后让其在重力作用下流尽。
收集液体。
15.用1mLSR5清洗柱子。
重力流尽，收集洗脱液。
16.转移柱子到新的收集管，加入SR6震荡混合，然后加入1mL SR6到RNA Capture Column洗脱RNA到15mL收集管中，重力流尽。
17.转移洗脱的RNA到2.2mL收集管中，并且加入1mL SR4.颠倒至少一次混合，然后-20℃孵育最少10min18.室温13000g离心15min浓缩RNA19.倒掉上清并倒转收集管在纸上10min晾干20.用100μL SR7溶液重悬RNA沉淀，去除其中的基因组。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
一、试剂盒打开后需要准备的工作1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70C预热ElutionBuffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA
PowerSoil 试剂盒提取土壤DNA1、加入0.25g 土壤样品到一个PowerBead Tubes中。
2、轻轻涡旋混匀。
3、检测Solution C1。
若出现沉淀，60℃水浴至全溶解。
4、加入60μl Solution C1，上下颠倒数次混匀。
5、把PowerBead Tubes固定在涡旋仪适配器上，最大转速（3200rpm，若涡旋仪达不到此速度，可适当延长5~10min）涡旋连续振荡10min。
6、室温10000g离心30s。
7、转移上清至一个干净的2ml Collection Tube（试剂盒提供）中。
8、加入250μl Solution C2到上清中，涡旋混匀5s。
4℃孵育5min。
9、室温10000g离心1min。
10、避开沉淀小珠，转移上清≤600μl 到一个新的收集管（2ml Collection Tube）中。
11、加入200μl Solution C3到上清中，涡旋混匀。
4℃孵育5min。
12、室温10000g离心1min。
13、避开沉淀小珠，转移上清≤750μl到一个新的收集管中。
14、Solution C4 使用前先摇匀。
加入1200μl Solution C4到上清中，涡旋混匀5s。
15、加载约675μl 上清到Spin Filter 中，室温10000g离心1min。
弃去滤液，继续加载675μl 上清，室温10000g离心1min。
重复直至过滤完所有上清。
（每个样品共需加载3 次。
）16、加500μl Solution C5到Spin Filter 中，室温10000g离心30s。
17、弃去上清18、室温10000g 离心1min。
19、小心转移Spin filter 到2ml Collection Tube 中，尽量避免Solution C5 污染。
20、加入100μl Solution C6到白色滤膜中心。
21、室温10000g 离心30s。
22、弃去Spin Filter。
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UltraClean SoilDNA Isolation Kit Sample详细过程
全过程戴上手套
1、在2 ml Bead Solution Tubes 里加入0.25—1g 土样（注意：请参照提示和纠错指南确定
加入土壤的量）。
发生的反应：土样或废渣样本被装入到Bead Tube中。
这是溶解过程的第一步。
Bead Solution 是一种打散土壤颗粒的溶液并开始溶解腐殖酸。
2、轻微地漩涡混合。
发生的反应：混合样本和Bead Solution。
3、检查S1溶液，如果S1溶液有沉淀，使用前加热到60℃使沉淀溶解。
发生的反应：S1溶液中含有SDS。
如果冷却了就会产生沉淀。
加热到60℃会使SDS 溶解。
S1溶液在温热的时候可以使用。
4、加入60 μl S1溶液，漩涡几次或简短地漩涡（3-4s）。
发生的反应：S1溶液含有SDS。
这是一种帮助细胞溶解的洗涤剂。
这种洗涤剂可以破坏脂肪酸和几种微生物细胞膜相关的脂类。
5、加入200μl IRS溶液（抑制剂去除的溶液）。
只有当DNA要用于PCR时才进行此
步。
发生的反应：IRS是一种专门设计的用于沉淀腐殖酸和其他PCR抑制物的试剂。
DNA 要用于PCR时需要进行此步沉淀。
腐殖酸通常呈棕色。
他们属于有机化合物的一个大组分，存在于大多数富含有机质的土壤中。
6、确保使用MO BIO Vortex Adapter tube holder 进行漩涡时bead tube 是水平放置
的。
最大速度漩涡10min。
（更少量的DNA剪切见可选择的溶解方法）
注意：如果使用可放置多于12支试管的24空位的Vortex Adapter，增加5—10min 的漩涡时间。
发生的反应：略，见使用说明。
7、将试管在10000 × g离心30s。
注意：不能超过10000 × g 否则试管会坏。
发生的反应：此时细胞的残骸、土壤、珠子和腐殖酸等的微粒将结合成沉淀。
DNA在液体状的上清液中。
8、将上清液转移到另一支干净的2 ml Collection Tube中。
注意：根据不同土壤类型0.25g 土壤将会有400—450μl 上清液。
上清液中可能仍然包含一些土壤颗粒。
9、在Collection Tube 中加入250μl S2溶液漩涡5s。
4℃静置5min。
发生的反应：S2溶液中含有一种蛋白质沉淀试剂。
这一步对于移除可能降低DNA纯度和抑制后续DNA利用的污染蛋白十分重要。
10、10000 × g 离心1min。
11、为了避免聚集成团，将整个上清液转移到另一只干净的2 ml Collection Tube中。
发生的反应：此时的沉淀物包含了腐殖酸、细胞残骸和蛋白质的残渣。
为了获得最大量和质量最高的DNA，尽量避免将任何的团状物（颗粒）转移到试管中。
12、使用前摇晃S3溶液，加1.3 ml S3溶液到上清液中漩涡5s。
注意：大量的溶液将会漫到试管边缘，手拿试管时要小心。
发生的反应：S3溶液是一种使NA凝结的盐溶液。
DNA在高盐浓度中凝结在硅砂上
13、将700μl 上步的溶液转入Spin Filter 10000 × g 离心1min。
14、弃掉流出液将剩下的上清液加入Spin Filter，10000 × g 离心1min。
重复此步
知道所有的上清液都通过Spin Filter。
注意：每个样本需要三次添加过程。
发生的反应：DNA选择性地结合在spin filter的硅膜上。
几乎所有污染物都通过了过滤膜，只留下需要的DNA。
15、加入300μl S4溶液10000 × g 离心30s。
发生的反应：S4是一种用于进一步清洁附着在spin filter 硅膜上DNA的清洗溶液。
这种洗涤剂移除了使DNA粘附在硅膜上的盐、腐殖酸和其他污染物的残渣。
注意：如果需要可以进行一次以上的进一步DNA清洗。
在土壤中含有很高的腐殖酸成分时，重复清洗的步骤很有益。
16、弃掉2 ml Collection Tube中的上层洗涤流出液。
发生的反应：洗涤流出液只是包含了乙醇洗涤溶液和没有粘附到spin filter 膜上的成分的废物。
17、10000 × g 离心1min。
发生的反应：此步移除掉S4溶液。
移除所有的洗涤溶液是十分必要的，因为洗涤液将会影响DNA的下游反应。
18、小心地将Spin Filter放入新的干净的2 ml Collection Tube中。
避免S4溶液溅到Spin
Filter中。
19、加入500μl S5溶液到白色滤膜的中央。
20、10000 × g 离心 30s。
发生的反应：当S5溶液（洗脱缓冲液）通过硅膜时，DNA脱离下来流经滤膜进入collection tube中。
21、弃掉Spin Filter。
试管中的DNA可用于PCR了。
建议DNA冷冻在-80℃—-20℃中。