磁珠法土壤基因DNA提取试剂盒

合集下载

基因组DNA提取试剂盒 说明书

基因组DNA提取试剂盒 说明书

基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒,,使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容,,若有任何疑问若有任何疑问,,欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司((4006618810*************)进行咨询进行咨询,,您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站(( )了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。

一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠,用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。

我们根据磁珠的独特分离作用,提供了一个极其简便的操作程序:样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。

在最适的试剂及操作条件下,可获得高质量DNA。

该方法具有简便、快捷、高效等特点,整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。

品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇(DTT ) 10管,0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件::本试剂盒所有试剂(除DTT 外)均可以室温保存,应避免阳光直射。

当室温低于15℃时,裂解液中可能有结晶析出,38℃水浴加热几分钟,恢复澄清后即可使用,提取效率不受影响。

DTT 需要于冰箱4℃保存。

本试剂盒有效期为12个月, 请于有效期内使用。

安全信息:试剂中含刺激性化合物,操作时应小心,避免沾染皮肤,眼睛和衣服,若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。

三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。

百泰克石蜡组织基因组DNA自动提取试剂盒(磁珠法)说明书

百泰克石蜡组织基因组DNA自动提取试剂盒(磁珠法)说明书

北京百泰克生物技术有限公司BioTeke Corporation地址:北京海淀区留学人员创业园电话:************传真:************网址: Email:****************一般实验室使用,仅用于体外石蜡组织基因组DNA自动提取试剂盒(磁珠法)自动、快速提取石蜡组织基因组DNA目录号:AU7111116次使用手册2016年11月,第4版北京百泰克生物技术有限公司BiotekeCorporation一、试剂盒组成、储存、稳定性本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

注意事项1.为避免降低活性,方便运输,提供蛋白酶K为冻干粉状,使用时可短暂离心后,加入1mL灭菌水溶解,-20℃保存,经常使用可以放在4℃。

2.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

3.核酸提取仪在运行前请先检查仪器是否正常,磁力架是否在水平位置。

4.深孔板在核酸提取仪中放置时要平稳,并用底部卡槽卡紧,避免晃动。

二、操作步骤1)将石蜡组织切成4~10um厚的薄片,用灭菌小镊子将切片放入1.5ml离心管中,组织的量在5-20mg左右(5-10片),加入400uL溶液B,90°C 水浴30min。

2)12,000rpm离心2min,石蜡会浮于液体表面,组织沉于管底,将除石蜡外的液体及组织转移至预装深孔板的第1、7列,加入20ul蛋白酶K。

裂解温度设置65°C,按照下面程序,点击“运行”开始实验,运行40分钟之后加入300ul无水乙醇。

步骤孔位名称等待时间(min)混合时间(min)磁吸时间(s)混合速度容积运行状态11裂解0400慢500否22转移磁珠0130慢300否31吸附核酸02060慢500否42洗涤0030中400否53漂洗0330中400否64漂洗0230中500否75漂洗0130中600否86洗脱21560中200否92弃磁珠000慢0否3)DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,请放置在-20℃。

核酸提取试剂盒介绍

核酸提取试剂盒介绍

步骤详解
操作步骤(植物)
1.裂解 取新鲜植物组织xxxmg,与研钵中稍加研磨。加入xxxµl Buffer A、xxx µl Buffer B、xxxµl Buffer C,研磨均匀, 然后转移至1.5ml EP管中,混合均匀(可用漩涡振荡器,xxxrpm)。然后把EP管置于恒温水箱中xxx℃温育 xxxmin。
DNA到离心管中。为了得到更多的DNA,可以再加100‐200µl洗脱液EB,室温放置2分钟后, 再次洗脱DNA。 15. 取10µlDNA进行0.8%琼脂糖电泳检测提取DNA的完整性和质量。
离心柱注意事项
1.起始菌量对DNA提取的产量和质量有很大影响。起始菌量过多会引起细菌裂解不充分,导致堵塞离心 柱。一般情况下,LB液体培养基培养的大肠杆菌细菌在对数生长期中后期时的细菌浓度约为107~108 个/ml 之间。OD600在1.0时,大肠杆菌浓度大致为109个/ml。过夜(12‐16小时)培养细菌OD600值
DNA提取方法
5.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于 水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体 积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥 ,即得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取 过程中加入SDS。 6.阴离子去污剂法:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA . 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
核酸提取试剂盒

磁珠法核酸提取试剂盒说明书

磁珠法核酸提取试剂盒说明书

磁珠法核酸提取试剂盒说明书磁珠法核酸提取试剂盒说明书在科学研究和临床诊断中,核酸提取是至关重要的一步。

随着技术的不断发展,磁珠法核酸提取试剂盒逐渐成为了研究人员和临床医生们的首选。

那么,什么是磁珠法核酸提取试剂盒?它的工作原理是什么?在使用过程中需要注意哪些事项?本文将从广度和深度两方面进行全面评估,带你深入了解磁珠法核酸提取试剂盒。

一、磁珠法核酸提取试剂盒的工作原理磁珠法核酸提取试剂盒是利用磁珠的磁性特性,结合核酸和其他杂质的不同特性,通过磁场的作用将目标核酸分离提取出来的一种试剂盒。

具体步骤包括细胞裂解、磁珠与核酸结合、洗涤和最终洗脱等过程。

通过这一系列步骤,能够快速、高效地从样本中提取出纯度较高的核酸,为后续的分子生物学实验和临床检测打下基础。

磁珠法核酸提取试剂盒本质上是一种高度精密的技术产品,涉及到多方面的知识和技术。

在使用过程中需要严格按照说明书上的操作步骤进行,以确保提取的核酸具有良好的质量。

二、磁珠法核酸提取试剂盒的使用注意事项在使用磁珠法核酸提取试剂盒时,有一些注意事项是需要特别关注的。

首先是样本的处理和裂解步骤,不同样本的裂解条件可能会有所不同,需要根据具体情况进行调整。

其次是磁珠的使用,需要注意磁珠的悬浮情况和使用量,以确保能够有效地结合目标核酸。

在洗涤和洗脱步骤中,也需要注意洗涤缓冲液的温度和使用次数,以及洗脱缓冲液的使用量和温度等细节。

只有严格按照说明书上的要求进行操作,才能够得到高质量的核酸提取物。

三、磁珠法核酸提取试剂盒的个人观点和理解从个人角度来看,磁珠法核酸提取试剂盒无疑是一种高效、便捷的核酸提取工具。

相比传统的有机溶剂提取法和硅基膜法,磁珠法核酸提取试剂盒具有操作简便、提取效率高、纯度好等优点。

在日常的科研工作或临床诊断中,使用磁珠法核酸提取试剂盒能够大大提高工作效率,节约时间和成本。

总结回顾通过本文对磁珠法核酸提取试剂盒的深度评估,相信读者已经对这一产品有了更全面、深刻的理解。

磁珠法基因组DNA 提取试剂盒 (细胞)

磁珠法基因组DNA 提取试剂盒 (细胞)

磁珠法基因组DNA 提取试剂盒(细胞)样本前处理:细胞用PBS洗两次后,6000rpm/min 离心3min,弃上清,加入500ul Buffer CGP重悬沉淀,12000rpm/min离心1min,弃上清,取沉淀备用。

2.裂解结合:在细胞沉淀中,加入500μLBuffer CGL,室温放置5-10min,再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB) (使用前充分重悬),颠倒混匀,室温放置5min(期间不时颠倒混匀);将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体。

3.漂洗:(1)将离心管从磁力架上取下,向离心管中加入500 μl Buffer CGW 0,涡旋振荡5s,重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体,重复该步骤1次。

(2)将离心管从磁力架上取下,向离心管中加入500 μl Buffer CGW I,涡旋振荡5s,重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上,待磁珠完全吸附后吸弃液体。

重复该步骤一次,待磁珠完全吸附后吸弃液体(液体一定要弃尽,不然残留会影响下游实验),晾干2min。

实验准备56°C加热源磁珠用前一定要充分混匀;使用前需在Buffer CGW I中加入相应体积的无水乙醇。

4.洗脱:将离心管从磁力架上取下加入50-100μl Buffer EB ,涡旋振荡结合移液器吹打,充分吹散磁珠(一定要完全吹散磁珠,若未充分重悬会影响DNA 得率),56°C 放置5min(每隔2min振荡混匀重悬磁珠),置于磁力架上,将上清DNA转移至一新的离心管中,放入-20 °C保存备用,保质期为2 年。

纯度效果评价通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量,通常情况下A260值在0.1~1.0之间数据比较可信。

如果不在此范围内,请稀释或浓缩样品调整;通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定DNA纯度,A260/A280比值在1.8-2.0之间,小于1.8表示可能有蛋白质污染。

磁珠法细菌DNA提取试剂盒

磁珠法细菌DNA提取试剂盒

MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒( 磁珠型)适合:G+,G-细菌,酵母,真菌,乳酸菌,霉菌等Cat. # 504001(50 preps)504002(100 preps)504003(200 preps)Note: for laboratory research use only.MagDNA TM 磁珠细菌DNA提取试剂盒( 磁珠型)适用范围:适用于手动快速提取各种细菌基因组DNA,无需蛋白酶消化,也适用于SPRI-TE;雅培m2000;MagNA Pure LC 2.0 System;BioRobot MDx Workstation;King Fisher(ml);King Fisher 96 process,ABIgen Magstation等系列核酸提取仪,适合大规模提取!试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存50次100次200次Lysis Buffer A 室温25ml 50ml 100 ml Solution AB 室温12ml 22ml 44 ml Binding Buffer PQ 室温25ml 50ml 100 mlWash Buffer B 室温15ml 30ml 60ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇Wash Buffer C 室温10 ml 20ml 30ml第一次使用前按说明加指定量乙醇(3倍)Wash Buffer D 室温10 ml 20ml 30ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇(3倍)Elution Buffer E 室温10ml 15ml 25ml MagDNA磁珠室温 1.2ml 1.2ml X 2 1.2ml X 4本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项:1.Lysis Buffer A或者W ash Buffer B低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒

磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒概述本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA 具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。

整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的DNA纯度高。

使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。

适用范围适用于从各种革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌等中提取基因组DNA,适用于自动化核酸提取平台。

试剂盒包装及组成试剂盒组成数量Buffer A20 ml×1瓶Buffer B 1 ml×1瓶Buffer C 1 ml×1瓶磁珠结合液25 ml×1瓶洗涤液Ⅰ50 ml×1瓶洗涤液Ⅱ30 ml×1瓶,使用前加入80 ml无水乙醇,混匀洗脱液10 ml×1瓶使用说明书1份注意事项1. Buffer A在使用前在温浴设备中温育至白色沉淀完全溶解后使用。

2.如果下游实验对RNA污染比较敏感,可在裂解中第⑶步加1µl RNaseA(10mg/ml)。

3. Buffer B 4℃保存,可能会析出白色粉末状沉淀,使用前混合均匀,不影响使用效果。

4.磁珠结合液用前一定要充分混匀。

5.溶菌酶用缓冲液稀释,缓冲液为(20mMTris,pH8.0;2mMNa2-EDTA;1.2%TritonX-100 )。

6.如果同等取样量下欲得到更多DNA可以增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3次)。

操作方法1.裂解⑴取1ml过夜培养的菌液至1.5ml EP管中,12000 rpm离心1min,尽量吸净上清。

⑵如果样品为革兰氏阳性菌(葡萄球菌除外,葡萄球菌可直接按照阴性菌步骤操作,加入适量溶葡萄球菌酶裂解效果更好)可加入25µl20mg/ml的溶菌酶(客户自备)反复吹打使菌体充分悬浮,37℃消化30~60min(注:消化时间取决于所用的菌种),如果样品为革兰氏阴性菌可直接进行步骤⑶。

游离DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书

游离DNA提取试剂盒(磁珠法)说明书【产品名称】通用名称:核酸提取或纯化试剂商品名称:游离DNA 提取试剂盒(磁珠法)英文名称:Magbind CFDNA Kit 该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的游离DNA (Free circulating / Cell-free DNA)提取方法,适用于从血清、血浆、淋巴液、尿液等无细胞体液中提取游离DNA 。

纯化得到的离DNA 质量稳定、可靠,可用于下游常规实验。

 该试剂盒可与转移液体法的核酸提取仪配套使用,简单、快速地进行大规模提取,大大降低了实验者的工作量和实验中的人为误差。

【预期用途】 样品裂解后,在高盐存在时,DNA 结合于硅基包被的磁珠表面,漂洗后,高纯度DNA 被洗脱于洗脱缓冲液或去离子水中。

DNA 得率与样品的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。

【检验原理】50次/盒;400次/盒【包装规格】版本号:11/2020【样本要求】1.适用标本类型:新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA 或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、淋巴细胞、无细胞体液等样本。

2.标本处理与保存:血清及血浆样本按常规方法制备,新鲜样本应尽快处理或分装后于-70℃冻存,避免反复冻融。

3.样本运输:应采用冰壶或者泡沫箱加冰或干冰密封运输。

【检验方法】实验前准备:向蛋白酶K 中加入指定用量的蛋白酶K 保存液使其溶解,终浓度为20 mg/ml ,-20℃保存。

1.向1.5 ml 离心管中加入20 μl 蛋白酶K 溶液。

2.向上一步的离心管中加入200 μl 血清/血浆样品。

注意:冻存样品需提前在4℃冰箱中放置使其溶化。

溶化过程中反复颠倒样品储存管使其混匀。

3.向上一步的离心管中加入200 μl 裂解缓冲液,涡旋振荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃、1300 rpm 的Thermomixer 上振荡裂解10分钟。

注意:1)如无Thermomixer ,需将离心管放于56℃水浴锅或金属浴中孵育10分钟,期间每隔2分钟涡旋振荡5秒钟。

磁珠法核酸提取试剂盒说明书

磁珠法核酸提取试剂盒说明书
一、磁珠法核酸提取概述
磁珠法核酸提取是一种快速、高效、便捷的核酸提取方法。

通过采用磁珠作为吸附介质,可实现对样品中核酸的高效提取,减少实验操作步骤,提高实验效率。

二、核酸提取试剂盒的组成及作用
核酸提取试剂盒主要包括以下组件:磁珠、核酸酶抑制剂、缓冲液等。

其中,磁珠用于吸附样品中的核酸,核酸酶抑制剂可有效抑制核酸降解,缓冲液则用于调节实验体系的酸碱度,保证核酸提取效果。

三、核酸提取流程
1.准备样品:收集待检测样本,如血液、唾液、组织等。

2.裂解细胞:将样品进行充分裂解,释放核酸。

3.磁珠吸附:将磁珠与裂解液混合,磁珠吸附核酸。

4.洗涤磁珠:加入洗涤液,去除磁珠上非核酸物质。

5.核酸释放:加入核酸释放液,使吸附在磁珠上的核酸溶解。

6.检测核酸:将释放后的核酸进行实时荧光定量PCR等检测。

四、产品优势与特点
1.高效:磁珠法核酸提取具有较高的提取效率,可节省实验时间。

2.便捷:试剂盒内成分齐全,实验操作简单,易于上手。

3.稳定:核酸酶抑制剂有效保护核酸完整性,确保实验结果可靠。

4.安全:避免液氮、酒精等危险物质的使用,降低实验风险。

五、注意事项与储存方法
1.实验过程中需严格遵循操作步骤,避免实验误差。

2.试剂盒应在-20℃储存,避免反复冻融。

3.核酸提取过程中避免剧烈振荡,以免破坏磁珠结构。

4.使用时应注意个人防护,避免核酸污染。

综上,磁珠法核酸提取试剂盒为实验人员提供了一种高效、便捷、可靠的核酸提取方法。

土壤DNA提取试剂盒说明书

土壤基因组DNA提取及PCR报告一、步骤试剂盒22℃--25℃储存使用前:用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer 1、0.5g【500ml】玻璃珠加入15ml离心管中(15ml离心管可以更好的涡旋、悬浮),加0.5g【0.4—0.5g】土样,加1ml Buffer SLX Mlus 【裂解菌体】,最高速度涡旋3-5 min;2、加100ul Buffer DS,涡旋混匀;3、70℃水浴10 min,并短暂涡旋;(对于难提取样品可以在90℃水浴)4、3000rpm 室温【25℃】离心3min,转移800ul上清液于一新的2ml离心管中,加入270ul Buffer SP2,涡旋混匀;5、冰浴5 min,4℃,13000xg 离心5 min;6、小心转移上清液于一新的2ml离心管,加0.7体积【约600—900ul】的异丙醇,反复颠倒离心管20-30次以混合,(若样品DNA含量低,可以放置于-20℃1h );7、13000xg 4℃离心10min,获得沉淀DNA;8、小心去除上清液,将离心管在吸水纸上倒置1min;9、加200ul Elution Buffer,涡旋10s,溶解DNA,【预热EB,保存60℃,15min水浴】;10、加100ul HTR Reagent,涡旋10s混匀;(HTR Reagent使用前要摇匀,吸取时将枪头剪大一点儿);11、室温静置2min后13000xg 室温离心2min;12、取上清液于新2ml离心管中(若上清液有黑色则重复步骤10-12);13、加上清液的等体积【300—350ul】XP2 Buffer并涡旋混匀;14、将HiBind DNA柱置于2ml 收集管中,将上一步样品转移到柱中,10000xg 室温离心1min,弃流液,保留收集管;15、将柱移入上一步中的收集管,加入300ul XP2 Buffer,10000xg 离心1min,弃流液、收集管;16、将柱移入新2ml离心管中,加入700ul SPW Wash Buffer(用无水乙醇稀释过的)洗涤,10000xg 离心1min,弃流液保留收集管;17、重复16步;18、弃流液,将柱插入空收集管中,13000xg 室温离心2min,空甩干燥柱子;(是为了除去乙醇,乙醇对后续操作有影响)19、将柱移入干净1.5ml 离心管,将50ul Elution Buffer 直接加入HiBind matrix 中心,65℃水浴10-15min,室温放置3—5min;20、13000xg 离心1min 以洗脱DNA21、加入30-100ul Elution Buffer,重复19-20步22、检测二、结果1、OD值Nanodrop 2000 analysis2、电泳:土样量6ul;1%琼脂糖凝胶分析3、PCR:20ul体系:PCR Mix:10ul 引物:0.3+0.3ul 模板:1ul 加水补齐预变性:94℃10 min变性:94℃20s退火:52℃20s延伸:72℃20s终延伸:72℃5minPCR电泳:上样量:8ul;1%琼脂糖凝胶分析。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

磁珠法土壤基因组DNA提取试剂盒
MagBeads Soil DNA Extraction Kit
[目录号】SMDE-5005、SMDE-5010
【运输条件】2~25 C;
【保存条件】磁珠分散液2~8 C;蛋白酶K -20 C;其它组分室温保存; 【试剂盒组成】
【注意事项】
1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心,以免磁珠受到损害,使用前务必充分混匀;
2. 使用前请检查裂解液1和裂解液2是否出现沉淀,如有沉淀请将试剂瓶置于65 C水浴中温热至
液体澄清;
3. 蛋白酶K长期不使用,请置于-20 C保存,融化后4C保存,并尽快使用;
【产品简介】
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的干燥土壤中提取基因组DNA。

试剂盒采用独特的缓冲液
体系,在裂解液环境中基因组DNA与磁珠高效结合,经过清洗和洗脱等步骤之后,可去除土壤中的杂质与腐植酸,获得高质量基因组DNA产物,OD260/OD280比值一般在1.7~1.9之间, 可直接用于酶切、PCR、电泳、Southern Blot、分子标记等下游分子生物学实验。

【试剂盒说明】
【自备仪器、耗材和试剂】
手动普通版:涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管(2.0mL )、EP管配套用磁力架、异丙醇、无水乙醇、RNase A 溶液(100mg/mL,分散液:10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH值8.0)。

手动高通量版:涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、48孔尖底板、48孔板配套专用磁力架、超强
磁板架48孔板专用硅胶盖、异丙醇、无水乙醇、RNase A溶液(100mg/mL,分散液:10mM Tris-HCl、1mM EDTA、pH 值8.0 )。

【手动普通版】
本操作方法在2.0mL EP管中进行操作。

1. 释放土壤微生物
称取100~500mg 土壤样本至2.0mL EP管中,依次加入1.0mL裂解液1和20卩蛋白酶K,
涡旋振荡1~3min,将土壤样本分散均匀,58 C温浴10min,期间每隔5min颠倒3次混匀内容物。

注:1)如需去除RNA,请额外加入5 RNase A溶液;2)干燥的土壤样本请研磨至均一细小颗粒,有助于微生物的高效释放。

2. 获得土壤基因组DNA粗液
室温、12000rpm将EP管离心5min,然后转移全部上清液至新的 2.0mL EP管中。

加入
400卩裂解液2,颠倒混匀,再次室温、12000rpm将EP管离心5min。

3. 核酸结合
转移全部上清液至另一只2.0mLEP管,依次加入400卩屏丙醇和50卩磁珠悬浮液(提前摇晃均匀),涡旋振荡5min。

4. 磁性分离
将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全,如EP管内盖有残留磁珠,可保持EP管
在磁力架上,上下颠倒2~3次,磁珠可完全被磁力架吸附。

保持EP管于磁力架上,吸弃上清液,期间避免接触磁珠。

5. 清洗
1)向EP管中加入600卩清洗液,将EP管从磁力架上取下,剧烈摇动使磁珠充分分散,涡旋震荡2min ,磁性分离(参照步骤4操作);
2)使用600^L80%乙醇,参照上一步操作2次。

6. 除醇
将除尽上清液后的EP管保持在磁力架上,加入600卩除醇液,快速手摇润洗吸附的磁珠表面,之后快速弃去除醇液。

注:该步骤操作时间不宜过长,且不可吹散磁珠,否则影响核酸得量。

7. 洗脱:
向EP管中加入100 洗脱液,移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀,将EP管置于58 C环境中加热洗脱10min,期间每隔3min涡旋振荡30s。

注:洗脱液要求》25卩,100~200^L效果较好,洗脱液体积较少时会影响核酸得率。

8. 核酸转移
将EP管放置于磁力架上静置30s至磁珠吸附完全,用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP 管中,提取过程完毕,此时可以弃去磁珠。

【手动高通量版】
该方法配套48孔尖底板、超强磁板架,以及英芮诚48孔板专用磁力架进行操作,可同步完成48个样本的提取工作。

1 .释放土壤微生物
称取100~500mg 土壤样本至2.0mL EP管中,依次加入1mL裂解液1和20卩蛋白酶K,涡旋振荡1~3min将土壤样本分散均匀,58 °C温浴10min,期间每隔5min颠倒3次混匀内容物。

注:1)如需去除RNA,请额外加入5 RNase A溶液;2)干燥的土壤样本请研磨至细小均一,有助于微生物的高效释放。

2.获得土壤基因组DNA 粗液
室温、12000rpm将EP管离心5min,然后转移全部上清液至新的 2.0mL EP管中。

加入400卩裂解液2,颠倒混匀,再次室温、12000rpm将EP管离心5min。

3.核酸结合
转移全部上清液至48孔板对应样品孔,并做好位置记录。

向样品孔中加入400卩异丙醇
和50卩磁珠悬浮液(提前摇晃均匀),盖上48孔板专用硅胶盖,将48孔板置于涡旋混合仪上1200rpm振荡5min,使磁珠与核酸充分结合。

4.磁性分离
将48孔板置于超强磁板架上约10~20s ,磁珠快速吸附到48孔板底部;将48孔板转移至专用磁力架,轻微小范围四周移动至磁珠完全集中于底部孔尖端;保持48孔板固定于磁力架上,直接倒扣弃去上清液,保持倒扣状置于吸水纸(提前铺好)上吸尽上清液(操作方式下同)。

5.清洗
1)向48孔板中分别加入600 uL青洗液,1200rpm涡旋振荡1min,确保磁珠充分分散。

磁性分离弃上清液(参照步骤4操作);
2)使用600 uL80%乙醇,参照上一步操作2次。

6.除醇
将除尽上清液的48孔板固定于磁力架上,加入600 uL除醇液,快速手摇润洗吸附的磁珠表面,之后快速倒扣48孔板弃上清液,继续呈倒扣状置于吸水纸上吸尽上清液。

注:该步骤操作时间不宜过长,且不可震散磁珠,否则影响核酸得量。

7.洗脱
向48孔板孔位中分别加入100 uL洗脱液,盖上硅胶盖,涡旋振荡30s使磁珠与洗脱液充分混匀。

将48孔板置于58 C水浴中加热洗脱10min,期间每隔3min涡旋振荡30秒,确保磁珠与核酸洗脱完全。

注:洗脱液要求》25 uL,100~200^L效果较好,洗脱液体积较少时会影响核酸得率。

8.核酸转移
将48孔板置于磁力架上,静置30s至磁珠完全吸附于48孔板底部尖端,将48孔板固定于磁力架上,倾斜45°轻磕3-4次,使洗脱液集中于48孔板尖端一侧(完全与磁珠分离);保持45° 倾斜同时用移液枪将洗脱液转移至干净的EP管中,做好标记,提取过程完毕,此时可弃去磁珠。

* 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其它用途。

版权声明:? 英芮诚生化科技(上海)有限公司保留本使用指南的所有权利。

版本:V201702.221。

相关文档
最新文档