华法林抗凝治疗患者 CYP2C9 基因多态性的研究
基因检测指导华法林抗凝治疗
基因检测指导华法林抗凝治疗摘要：华法林是一种常用的口服抗凝药物，在预防和治疗血栓性疾病中发挥着重要作用。
然而，由于华法林剂量的个体差异性较大，容易导致不良反应。
而基因检测技术的引入为华法林抗凝治疗个体化提供了新的思路。
本文旨在综述基因检测在华法林抗凝治疗中的应用现状和前景，探讨其对用药效果及安全性的影响，并讨论相关问题和挑战。
关键词：基因检测；华法林；抗凝治疗引言：华法林是一种维生素K拮抗剂，通过抑制凝血因子的合成来预防和治疗血栓性疾病。
然而，华法林的用药存在剂量调整困难、个体反应差异大等问题，容易导致出血或血栓复发等不良反应。
近年来，随着基因检测技术的快速发展，个体化用药逐渐成为可能，通过基因检测可以了解患者的遗传变异情况，进而指导华法林的剂量调整，提高治疗效果和安全性。
一、基因检测指导华法林抗凝治疗的必要性（一）华法林用药中的个体差异和不良反应问题尽管华法林在临床中被广泛应用，但其剂量的个体化调整仍然存在困难。
华法林的剂量由多个因素决定，包括患者的年龄、体重、性别、基础疾病、遗传因素以及与华法林相互作用的药物等。
这些因素的不同组合会导致不同患者之间对华法林的敏感性存在显著差异。
如果华法林的剂量过大，可能会增加出血的风险；而剂量过小，则可能无法达到预期的抗凝效果，增加血栓事件的发生风险。
（二）基因检测技术在个体化医疗中的作用基因检测技术能够对个体的遗传信息进行分析和解读，从而为个体化医疗提供有价值的信息。
在华法林抗凝治疗中，基因检测可以鉴定与华法林敏感性相关的基因变异，帮助医生预测患者对华法林的反应，并调整合适的剂量。
通过基因检测，医生可以了解患者是否携带与华法林敏感性相关的基因变异，进而根据个体患者的遗传背景和其他临床因素，选择合适的华法林剂量和监测方案，从而实现个体化的治疗。
目前，常用的基因检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）、测序技术、芯片技术等。
这些技术具有高通量、高灵敏度和高特异性等优点，可以同时检测多个基因位点的变异情况。
CYP2C9、CYP2C19基因多态性对抗凝药物华法林代谢及个体化用药影响研究
CYP2C9、CYP2C19基因多态性对抗凝药物华法林代谢及个体化用药影响研究摘要】目的：探讨CYP2C9、CYP2C19基因多态性对心脏瓣膜置换术后患者华法林代谢及个体化用药的影响。
方法：随机选取2012年1月～2015年1月期间我院收治的风湿性心脏病心脏瓣膜置换术后患者120例，均用PCR-荧光探针法对患者CYP2C9*3(A1075C)基因多态性进行检测，从而辅助临床指导患者个体化华法林的使用；检测CYP2C19*2（G681A）和CYP2C19*3（G636A）基因多态性，通过对患者基因分型检测，判定患者的华法林代谢速率类型，从而合理调整药物剂量，提高药物的有效性。
结果：CYP2C9、CYP2C19基因多态性对华法林血药浓度具有影响；PM、M与EM标准血药浓度比较，差异明显（P＜0.05），具有统计学意义。
结论：CYP2C9、CYP2C19基因多态性对个体华法林代谢存在一定影响，为提高患者个体用药效果提供参考与借鉴。
【关键词】CYP2C9；CYP2C19；基因多态性；血药浓度【中图分类号】R3 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）24-0015-02当前，随着临床研究的不断深入，基因学不断发展，个体化治疗在临床治疗上得到了更多的重视。
研究认为，在患者个体化用药中，基因指导发挥着重要的作用，可降低甚至避免治疗失败或不良反应[1]。
心脏瓣膜置换术后患者需长期服用抗凝药物华法林[2]，但华法林安全治疗窗窄，用药剂量上个体差异较大[3]，其中遗传因素是造成个体剂量差异的主要原因之一[4]。
术后抗凝不足出现血栓栓塞导致卡瓣和抗凝过多导致脏器内出血是影响患者术后生存的重要因素[5]。
尽管采用国际化标准比值（INR）对华法林药物用量进行调整，但国内有关术后初期阶段药物剂量的研究相对较少。
本研究收集我院收治的风湿性心脏病心脏瓣膜置换术后患者120例作为研究对象，探讨CYP2C9、CYP2C19基因多态性对华法林药物代谢及个体化用药的影响，现报道如下。
CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林抗凝剂量的相关性研究
Ａ ｓｒｃ ｂｔ ｔ ａ Ｏｂ ｃｉ ：ｏ ｎｅｔ ａｅｈ ｕｎｉ ｔｅｉ ｕ ｎｅ ｆ ｙ ｃｒｍ ４ ０２ ９Ｃ Ｐ Ｃ ） ｎ ｔ ｎＫｅ ｏｉｅ ｊ ｔ ｅ Ｔ ｖｓｇｔ ｔｅ ａｔａｖ ｆ ｅｃ ｔ ｈｏ ｅ ５ Ｃ （Ｙ ２ ９ ａ ｄ ｉ ｍｉ ｐｘｄ ｅ ｖ ｉ ｉ ｑ ｔｉ ｎ ｌ ｏｃ ｏ Ｐ ｖａ
限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 分 析 （ Ｆ Ｐ 方 法 检测 Ｃ Ｐ Ｃ — ０ １ ／ ＲＬ ） Ｙ ２ ９ １６ ＡＣ和 Ｖ Ｏ Ｃ — ６ ９ＧＡ基 因 多 态性 ， 比较 不 同基 因 Ｋ Ｒ １ １３ ／ 并
型问平均华法林剂量 。结果 ： 法林组检 出 Ｃ Ｐ Ｃ — ０ １ ／ Ａ、 Ｃ Ｃ 华 Ｙ ２ ９ １６ Ａ ＣＡ Ａ 、 Ｃ型分别有 ５ ９例（０８ 、２例（ ６ ％） ２ ８ ．％） １ １． 及 ４ 例（ ． ， 者华法林剂量 分别 为（６２ ＿ １ ６ ｍ ／ 、 １．８ ７２ ） ｇ周及 （３５ ＿ ． ） ｇ周 ， ２８ 患 ％） ２ ． ＋ ． ） ｇ周 （７３ ＿ ． ｍ ／ ５ １３ ＋ ０ １． ＋ １ ｒ ／ 变异 型（ ｃ型和 ７７ ０ ａ Ａ Ｃ Ｃ型 ） 较野生纯合型 Ａ Ａ型华法林需求剂量减少 ， 差异有统计学意义（ Ｐ＜００ ） Ｋ Ｒ １ １３ Ｇ ＡＡ Ｇ Ｇ ． 。Ｖ Ｏ Ｃ — ６ ９ ／ Ａ、 Ａ、 Ｇ型分 ５
Ｎ ｎｏｇａ ａｔｋｎ ａ ａ ｎｗ ｒ ｎｏｌ ｅｓ ｄ． Ｃ Ｒ Ｌ ｃ ｎ ｕ ａ ｓｄｔ ｇｎ ｔ ｅ ｈ Ｙ ２ ９ １６ ＡＣ ａｔｎ ｒ ）ａｉｇｗ ｒ ｒ ｅｅｅｒｌ ｄｉ ｔ ｔ ｙ Ｐ Ｒ— Ｆ Ｐｔ ｈ ｉ ｅｗ ｓ ｅ ｅ ｏ ｐ ｅＣ Ｐ Ｃ － ０ １ ／ ｅ ｆ ｉ ｅ ｎｈ ｕ ｅ ｑ ｕ ｏ ｙ ｔ
华法林抗凝治疗患者 CYP2C9 基因多态性的研究
110 bp和21 bp的片段,由于21 bp片段的分子量较小,在琼
脂糖凝胶电泳中难以显示,所以当受检个体为野生型纯合子
时,酶切产物可见110 bp一条带;如为突变纯合子,则不能
被NsiⅠ酶切,电泳图上只有131 bp的片段;如为杂合子,则
显示110 bp、131 bp两条带。本文检测了151例口服华法林
15 min,分别收集血浆和血细胞部分,分装后- 80℃保存待检。
1.3方法
1.3.1基因组DNA提取采用EZ- 10柱式血液基因组DNA
抽提试剂盒抽提全血DNA,相关试剂盒购自上海生物工程公司。
1.3.2目的片段的PCR扩增分析CYP2C9*2的PCR上游引
物序列为5'- TACAAATACAATGAAAATATCATG - 3';下游引
华法林抗凝治疗患者CYP2C9基因多态性的研究
霍梅1,刘春1,杨超2,李体远3,龚亮4
摘要: [目的]研究深圳地区口服华法林抗凝治疗患者细胞色素P4502C9 ( CYP2C9)基因CYP2C9*1、CYP2C9*2、CYP2C9*3多态性的特点。[方法]应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR- RFLP)检测151例口服华法林抗凝治疗患者CYP2C9基因CYP2C9*1、CYP2C9*2、CYP2C9*3的多态性。[结果] 151例口服华法林抗凝治疗患者中未检测出CYP2C9*2等位基因, CYP2C9*1、CYP2C9*3等位基因的频率分别为92.7%和7.3%,CYP2C9*1*1、CYP2C9*1*3、CYP2C9*3*3基因型频率分别为85.4% (129)、14.6% (22)、0 (0)。[结论]深圳地区口服华法林抗凝治疗病人中存在CYP2C9*3突变基因,使用华法林抗凝治疗时应检测患者CYP2C9的基因型。
CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林个体化用药的临床研究
CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林个体化用药的临床研究摘要目的探讨细胞色素P450同工酶2C9（CYP2C9）及维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1（VKORC1）基因多态性对华法林个体化用药的影响。
方法110例临床初次和维持口服华法林抗凝治疗的患者，记录患者的年龄、性别、身高、体重和服用华法林5～7 d后每次国际标准化比值（INR）的测定值，INR达到目标值时华法林的总用量以及华法林的日均用量。
同时检测CYP2C9 *1、*2、*3位点和VKORC1-1639 AA、AG、GG位点基因型。
结果对于初次口服华法林的患者，CYP2C9 *2或*3 基因型患者在抗凝治疗初期易发生INR 值超过治疗窗（INR>3.0）；而VKORC1-1639 AG或GG基因型患者INR达标时间明显延长，并且INR达标时所服用的华法林总剂量和日均剂量均高于AA基因型患者。
结论CYP2C9和VKORC1基因检测对于指导患者华法林的个体化用药具有一定的临床意义。
关键词华法林；个体化用药；基因多态性；细胞色素P450同工酶2C9；维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1华法林在血栓性疾病的抗凝治疗中发挥着重要作用，但是华法林的应用剂量个体差异大，为达到相同的抗凝效果，不同个体所需华法林剂量甚至可以相差20余倍。
目前绝大多数临床医生在使用过程中需要反复抽取静脉血化验，根据INR的结果调整华法林剂量。
遗传因素是造成其剂量个体差异的主要原因之一[1]。
近年来的研究发现，华法林的代谢酶CYP2C9和华法林的作用靶点VKORC1的基因多态性是造成不同个体间华法林剂量差异的重要原因[2]。
本研究通过检测患者的CYP2C9和VKORC1基因情况，了解不同的基因型与华法林用药量的关系。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料110例研究病例均为2012年1月～2013年12月在郑州大学附属郑州中心医院心内科就诊的心房颤动、换瓣术后、肺栓塞和下肢静脉血栓的患者，资料按时间顺序收集。
CYP2C9和VKORC1基因多态性指导临床华法林初始抗凝的研究
CYP2C9和VKORC1基因多态性指导临床华法林初始抗凝的研究黄振勇;毛振敏;肖诚胤;陈素敏;陈清群;蔡凯;李介华【摘要】目的探讨CYP2C9和VKORC1基因多态性指导临床华法林初始抗凝的效果.方法 48例初次服用华法林的患者,按照随机分配原则分为对照组和研究组,各24例.对照组给予常规华法林方式治疗,研究组根据所检测CYP2C9和VKORC1的基因多态性来控制华法林剂量进行治疗.对比两组患者的治疗效果、国际标准化比值(INR)首次达标时间和华法林日用剂量.结果研究组总有效率91.7％高于对照组的66.7％,差异具有统计学意义(P<0.05).研究组患者的INR首次达标时间短于对照组,华法林日用剂量少于对照组,差异均具有统计学意义(t=4.932、7.583,P<0.05).结论运用CYP2C9和VKORC1的基因多态性来指导临床使用华法林,具有良好的临床效果,对所用华法林的剂量有一定的确定作用,值得在临床上进一步推广使用.【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2018(013)029【总页数】3页(P15-17)【关键词】CYP2C9基因;VKORC1基因;基因多态性;华法林;初始抗凝【作者】黄振勇;毛振敏;肖诚胤;陈素敏;陈清群;蔡凯;李介华【作者单位】511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院;511518 广州医科大学附属第六医院清远市人民医院【正文语种】中文华法林是抗凝剂的一种, 属于香豆素类, 该药的起效时间短、作用持久, 常用来预防和治疗血栓栓塞性、心肌梗死等疾病, 其治疗效果良好, 但是由于患者个体存在差异, 造成华法林所用剂量无法准确控制, 剂量太小, 则患者病情无法有效控制, 剂量太大, 又会引起抗凝过度甚至是出血的情况发生。
基因多态性与华法林的起始给药剂量的相关性研究
基因多态性与华法林的起始给药剂量的相关性研究袁璞珺【摘要】目的:探讨CYP2C9与VKORC1基因多态性对于个体华法林的起始给药剂量的影响,为临床个体化使用华法林提供实验依据.方法:选取某院2014年1月～2016年1月收治的232例心血管疾病患者,平均分为对照组和观察组.对照组采取常规华法林治疗模式,观察组通过基因测序法检测116例患者CYP2C9、VKORC1基因多态性后,分基因型个性化用药,检测不同给药剂量的INR值,统计并分析两组之间的华法林起始给药剂量、治疗效果及不良事件的发生率.结果:相比于对照组,观察组的华法林起始剂量降低,具有统计学差异(P<0.05);不良反应发生率明显减少.结论:在个体化使用华法林的临床疗效中,CYP2C9和VKORC1基因与相应华法林的起始给药剂量及最终治疗疗效存在着密不可分的联系,对心血管疾病给药剂量具有重要性.【期刊名称】《数理医药学杂志》【年(卷),期】2018(031)005【总页数】2页(P727-728)【关键词】基因多态性;华法林给药剂量;相关性【作者】袁璞珺【作者单位】河南省职工医院郑州 450000【正文语种】中文【中图分类】R96心血管内科疾病主要包括心力衰竭、心绞痛、心肌梗塞等，且心血管内科疾病往往呈现急性发作，病情发展迅速，预后较差，临床上以重症为主要特点。
抗凝治疗是栓塞类疾病非常重要的治疗手段，涉及临床多个学科[1]。
目前临床常用的抗凝药物有肝素和华法林等传统药物。
华法林安全范围较小，剂量存在明显的个体化差异。
因此如何进行个体化的抗凝治疗有着非常重要的临床意义。
为探讨CYP2C9、VKORC1基因的突变对于个体华法林的起始给药剂量的影响，以我院232例心血管疾病患者为研究对象，现将有关结果报道如下。
1 一般资料与方法1.1 一般资料选取本院2014年1月～2016年1月收治的232例心血管疾病患者，平均分为对照组和观察组，每组各116例。
CYP2C9、VKORC1基因多态性与华法林个体化用药研究进展
CYP2C9、VKORC1基因多态性与华法林个体化用药研究进展刘跃平;杨翔;徐含青;李永川;李明;黄庆;府伟灵【摘要】尽管具有治疗指数狭窄和出血并发症频繁的弊病,华法林仍是临床上应用非常广泛的口服抗凝血药物.不同患者对华法林的反应差异很大,在达到相同治疗效果的情况下,不同个体的用药剂量可能相差20倍之多.华法林的治疗剂量受多种因素影响,包括基因多态性、体重指数、年龄等及其他药物因素等,这就要求临床医师在应用华法林时需注重个体化用药及选择最优治疗方案.多种基因可影响华法林的药物代谢,其中细胞色素P450 2C9(CYP2C9)及维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性是目前研究的重点.本文将综述以上两个基因的基因多态性及其与华法林个体化用药相关性的研究进展.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2015(040)002【总页数】6页(P163-168)【关键词】细胞色素P450 CYP2C9;维生素K环氧化物还原酶复合体1;遗传药理学;华法林;个体化医学;多态性,单核苷酸【作者】刘跃平;杨翔;徐含青;李永川;李明;黄庆;府伟灵【作者单位】400038重庆第三军医大学西南医院检验科;400038重庆第三军医大学西南医院检验科;400038重庆第三军医大学西南医院检验科;400038重庆第三军医大学西南医院检验科;441000湖北襄阳解放军477医院检验科;400038重庆第三军医大学西南医院检验科;400038重庆第三军医大学西南医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R973.2华法林是当今抗凝治疗的首选药，主要用于机械心脏瓣膜置换术术后、非瓣膜性心房颤动以及深静脉血栓等患者的抗凝治疗[1-3]。
华法林的缺点在于其治疗指数狭窄，剂量个体差异大，即使同一个个体在不同时期所需的剂量也可能不同[4]。
华法林的剂量受多种因素影响，如遗传基因多态性、体重指数、年龄等及其他药物因素等[5]。
CYP2C9基因多态性在房颤患者华法林抗凝治疗中的意义
CYP2C9基因多态性在房颤患者华法林抗凝治疗中的意义作者：吕游杨杰孚来源：《中国医药导报》2017年第20期[摘要] 目的研究汉族人群CYP2C9基因多态性对房颤患者华法林抗凝治疗的意义，探讨华法林用药个体差异显著的原因。
方法对北京医院住院治疗的符合研究入选标准的100例应用华法林抗凝治疗的房颤患者提取静脉血DNA，并用聚合酶链反应分别从基因组DNA中特异性扩增CYP2C9基因的第3号外显子及第7号外显子，对DNA产物测序分析，计算其基因型和等位基因频率，同时记录患者基本信息、服药期间的华法林用药剂量及凝血功能。
结果 100例因房颤应用华法林抗凝治疗患者中共筛选到两种等位基因：CYP2C9*1和CYP2C9*3，等位基因频率分别为96%和4%。
同时，CYP2C9基因多态性共检测到两种基因型，以CYP2C9*1/*1基因型常见，基因型频率为92%；其次为CYP2C9*1/*3型，基因型频率为8%。
在达到抗凝指标（国际标准化比值INR 2.0～3.0）后，CYP2C9*1/*3突变型患者的华法林维持剂量为（2.14±0.55）mg，低于CYP2C9*1/*1野生型组的平均剂量[（3.17±0.74）mg]，两组间剂量差异有统计学意义（P < 0.05）。
结论 CYP2C9基因多态性与房颤患者华法林抗凝治疗维持剂量有关系，可以部分解释华法林用药个体差异的原因。
[关键词] 房颤；CYP2C9；基因多态性；华法林；抗凝治疗[中图分类号] R541.75 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）07（b）-0004-04The role of the polymorphism of CYP2C9 in Warfarin anticoagulation therapy for patients with atrial fibrillationLYU You YANG JiefuDepartment of Caidiology， Beijing Hospital， Beijing 100730， China[Abstract] Objective To investigate the significance of CYP2C9 gene polymorphism in Warfarin anticoagulation therapy for patients with atrial fibrillation， in order to explore the causes of Warfarin individual difference. Methods The 3rd and 7th exon of CYP2C9 in 100 patients with atrial fibrillation given Warfarin anticoagulation therapy in Beijing Hospital were detected by PCR and restriction enzyme digestion. The genotype and allelic frequencies were calculated and patients information，coagulation function and the individual Warfarin dosage requirements were recorded. Results In this group of patients with atrial fibrillation given Warfarin anticoagulation therapy， two kinds of allele were detected： CYP2C9*1 and CYP2C9*3， the frequency of *1 allele and *3 allele was 96% and 4% respectively. CYP2C9*1/*1 was the most common genotype， with the frequency of 92%. The frequency of CYP2C9*1/*3 was 8% in these 100 patients. After similar target INR range （2.0-3.0）achieved， variant CYP2C9*1/*3 homozygotes or heterozygotes required lower daily mean maintain doses [（2.14±0.55） mg] than wild-type CYP2C9*1/*1 patients did [（3.17±0.74） mg]， with statistically significant difference （P < 0.05）. Conclusion Polymorphism of CYP2C9 is associated with Warfarin dose requirements in patients with atrial fibrillation， which is partly the factor causing Warfarin individual difference .[Key words] Atrial fibrillation； CYP2C9； Genetic polymorphism； Warfarin；Anticoagulation therapy心房颤动是临床中最常见的心律失常类型，心房颤动对患者的主要危害是缺血性脑卒中风险升高。
CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林稳定剂量的影响
明显 低 于 ＡＡ 型 （ ２ ． ９ ２ ±１ ． １ １ ） ｍｇ ／ ｄ （ Ｐ ＜０ ． ０ ５ ） 。Ⅵ（ Ｏ Ｒ Ｃ １ —１ ６ ３ ９ Ｇ＞Ａ Ｇ Ｇ、 Ｇ Ａ、 从 型 分 别 为 ０例 、 ２ ２ 例（ １ ２ ． ３ ） 、 １ ５ ７例 （ ８ ７ ． ７ Ａ） ￣ ， Ａ Ａ
ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｓ ｍｓ ， ａ ｇ ｅ ， ｇ ｅ ｎ ｄ ｅ ｒ ， ｂ ｏ ｄ ｙ ｍａ ｓ ｓ ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ （ ＢＭ Ｉ ）ｏ ｎ ｗａ ｒ ｆ ａ ｒ ｉ ｎ ｍａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｎ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓ ａ ｇ ｅ ｉ ｎ Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｈａ ｎ ｐ ｏ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｏｎ ｅ ｈ ｕ ｎ —
１ ５ Ｏ例 ， 采 用 扩 增 阻滞 突 变体 系一 聚合 酶链 式反 应 技 术 （ ＡＲＭＳ—Ｐ ＣＲ） 检 测 ＣＹＰ ２ Ｃ９＊３ （ １ ０ ７ ５ Ａ＞ Ｃ） 、 ＶＫＯＲＣＩ一１ ６ ３ ９ Ｇ＞ Ａ 基 因 多 态性 ， 并 比较 不 同基 因 型 间 华 法 林稳 定 剂 量 以及 年 龄 、 性 别 和 体 重 指 数 对 华 法 林 稳 定 剂 量 的 影 响 。结 果 病 例 组 检 出 Ｃ ＹＰ ２ Ｃ９＊３
关键词 ： 华法林 ； 基 因型 ； 多 态性 ； 细胞 色素 Ｐ ４ ５ ０ ２ Ｃ ９ ； 维 生 素 Ｋ 环 氧 化 物 还 原 酶 复合 体 亚 单 位 １ 中 图分 类 号 ： Ｒ ９ ７ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ４— ０ ４ ６ ５ —０ ３
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脂糖凝胶电泳中难以显示,所以当受检个体为野生型纯合子
时,酶切产物可见110 bp一条带;如为突变纯合子,则不能
被NsiⅠ酶切,电泳图上只有131 bp的片段;如为杂合子,则
显示110 bp、131 bp两条带。本文检测了151例口服华法林
为Leu,导致该处的一个限制性内切酶Nsi I位点的丢失。国外
基金项目:深圳市科技和信息局资助(200602119)
作者简介:霍梅(1970- ) ,女,硕士,副主任技师,研究方向:血液
学检验
作者单位: 1.暨南大学医学院附属二院深圳市人民医院检验科; 2.暨
南大学医学院附属二院深圳市人民医院心外科; 3深圳市
人民医院临床医学研究中心; 4.广东医学院检验系实习生
研究表明携带CYP2C9*2和*3的个体,影响华法林的代谢,
使个体间华法林的剂量相差较大,国内关于口服华法林抗凝治
疗患者CYP2C9基因多态性的分布特点研究较少,本文检测了
151例口服华法林抗凝治疗患者CYP2C9基因CYP2C9*1、
CYP2C9*2、CYP2C9*3的多态性,现报道如下。
华法林抗凝治疗患者CYP2C9基因多态性的研究
霍梅1,刘春1,杨超2,李体远3,龚亮4
摘要: [目的]研究深圳地区口服华法林抗凝治疗患者细胞色素P4502C9 ( CYP2C9)基因CYP2C9*1、CYP2C9*2、CYP2C9*3多态性的特点。[方法]应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR- RFLP)检测151例口服华法林抗凝治疗患者CYP2C9基因CYP2C9*1、CYP2C9*2、CYP2C9*3的多态性。[结果] 151例口服华法林抗凝治疗患者中未检测出CYP2C9*2等位基因, CYP2C9*1、CYP2C9*3等位基因的频率分别为92.7%和7.3%,CYP2C9*1*1、CYP2C9*1*3、CYP2C9*3*3基因型频率分别为85.4% (129)、14.6% (22)、0 (0)。[结论]深圳地区口服华法林抗凝治疗病人中存在CYP2C9*3突变基因,使用华法林抗凝治疗时应检测患者CYP2C9的基因型。
凝作用
[1]
,是广泛应用于临床的一种口服抗凝药,存在S-华法
林(左旋华法林)和R-华法林(右旋华法林) , S-华法林是消
旋华法林片剂的主要成分,人类对华法林的药物代谢也主要针
对S-华法林。华法林的代谢主要由一系列细胞色素P450酶催
化, CYP2C9是细胞色素P450酶的一种亚型,在人肝脏主要
由CYP2C9介导华法林的羟化代谢, CYP2C9基因具有遗传多
分析CYP2C9*3的PCR上游引物序列为5' -
TGCACGAGGTCCAGAGATGC - 3';下游引物序列为5' -
AAACATGGAGTTGCAGTGTAG - 3', PCR引物由上海生物工程
公司合成。PCR反应体系为25μl,含DNA模板3μl, 10 x
PCR缓冲液2.5μl, MgCl
3, 6是PCR产物,泳道2, 4, 7是对应的酶切产物, M是分
子量标志, 3个患者PCR产物酶切后均为520 bp和169 bp的
片段,均是野生型纯合子(CYP2C9* 1*1)。
2.1.2 CYP2C9*3的检测根据引物设计, PCR产物大小应为
131 bห้องสมุดไป่ตู้,如为野生型纯合子,则被限制性内切酶NsiⅠ切成
Abstract: [ Objective] To study on the feature of CYP2C9*1, CYP2C9*2, CYP2C9*3 genetic polymorphisms of cy-tochrome P450 ( CYP2C9) in patients with warfarin anticoagulant therapy in Shenzhen area. [ Methods] The CYP2C9*1,CYP2C9*2, CYP2C9*3 genetic polymorphisms of cytochrome P450 (CYP2C9) were analyzed in 151 patients with warfarin an-ticoagulant therapy by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR- RFLP). [Results] Therewere no CYP2C9*2 allele in 151 patients with warfarin anticoagulant therapy .The allele frequencies of CYP2C9*1, CYP2C9*3were 92.7% and 7.3% respectively. The genotype frequencies of CYP2C9*1*1, CYP2C9*1*3, CYP2C9*3*3 were 85.4%(129) , 14.6% (22) , 0 (0) respectively. [Conclusion] The CYP2C9*3 mutant is present in patients with warfarin anticoag-ulant therapy in Shenzhen area. CYP2C9 genotype should be analyzed when using warfarin anticoagulant therapy.
物序列为5'- CTAACAACCAGACTCATAATG - 3', PCR引物由
上海生物工程公司合成。PCR反应体系为25μl,含DNA模
板3μl, 10 x PCR缓冲液2.5μl, MgCl
2
3μl ( 25 mmol/L) ,
dNTP 0.2μl ( 10 mmol/L) , Taq DNA聚合酶2.5 U,上游引物
象与Hardy- Weinberg平衡( HWE)的符合程度采用χ
2
检验;
应用SPSS软件处理。P﹤0.05为有显著性差异。
2结果
2.1 CYP2C9基因多态性电泳结果
2.1.1 CYP2C9*2的检测根据引物设计, PCR产物大小应为
689 bp,如为野生型纯合子,则被限制性内切酶AvaⅡ切成
520 bp和169 bp的片段;如为突变纯合子,则不能被AvaⅡ
值见表2,经计算基因型分布符合Hardy- Weinberg平衡,Χ
2
=
1.099, P﹥0.05,表明调查人群实际检出基因型频率与预期频
率基本一致,具有群体代表性。
Key words: Warfarin; Anticoagulation; Gene; Polymorphism; Cytochrome P4502C9
华法林( warfarin)是香豆素的衍生物,它通过抑制维生
素K (Vit K)环氧化还原酶活性,阻止Vit K循环利用,并使
Vit K依赖性凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ无法激活,从而发挥抗
抗凝治疗患者,检出了22例杂合子( CYP2C9 *1*3,但未检
出CYP2C9*3*3突变纯合子,见图2。
图2 CYP2C9基因多态性电泳结果(CYP2C9*3突变的检测)
图2为3个患者CYP2C9*3突变的检测结果,泳道1,
3, 6是PCR产物,泳道2, 4, 7是对应的酶切产物, M是分
子量标志,患者1和3是杂合子( CYP2C9 *1*3) ,患者2是
关键词:华法林;抗凝;基因;多态性;细胞色素P4502C9
STUDY ON THE GENETIC POLYMORPHISM OF CYTOCHROME P450 ( CYP2C9) IN PA-
TIENTS WITH WARFARIN ANTICOAGULANT THERAPY HUO Mei, LIU Chun, YANG Chao,et al. (People’s Hospital of Shenzhen, The Second Affiliated Hospital of Medical College, Ji’nan Universi-ty, Shenzhen 518020, China)
野生型纯合子(CYP2C9 *1*1)。
2.2 CYP2C9等位基因和基因型分布频率
由于本文未检测出CYP2C9*2等位基因,因此只计算
CYP2C9*1和CYP2C9*3等位基因及相应的基因型的频率,见
表1。
2.3 CYP2C9基因多态性Hardy- Weinberg平衡检验结果
由于本文未检测出CYP2C9*2基因,因此只对CYP2C9*1
含PCR产物10μl,限制性内切酶AvaⅡ( CYP2C9*2分析)
或NsiⅠ(CYP2C9*3分析) 1.5μl (15 U) , 10 x酶切缓冲液3
μl,混匀后置37℃消化4 h。用4.0%琼脂糖凝胶电泳, Gold
View核酸染料染色分析结果。
1.4统计学方法
应用基因计数法计算基因型频率和等位基因频率,研究对
0.5μl ( 5μmol/L) ,下游引物0.5μl ( 5μmol/L)。Gene Amp
PCR System 9700型扩增仪(美国基因公司生产) ,循环参数:
94℃预变性5 min进入循环, 94℃变性20 s, 55℃复性10 s,
72℃延伸10 s,共35个循环,最后72℃延伸5 min。
2
2μl ( 25 mmol/L) , dNTP 0.7μl
( 10 mmol/L) , Taq DNA聚合酶1.0 U,上游引物1.0μl ( 5
umol/L) ,下游引物1.0μl (5μmol/L)。Gene Amp PCR System