常见荧光定量PCR仪汇总讲解
四种常见PCR仪的区别及运用-科邦实验室-2020.6.24
四种常见PCR仪的区别及运用PCR扩增仪（俗称PCR仪）PCR：PCR（聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
PCR仪实际就是一个温控设备，能在95℃，55℃，72℃之间很好地进行温度控制。
PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制以及亲子鉴定等。
根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR 仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。
1). 普通PCR仪（2万以下，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪称作传统PCR仪，也叫普通PCR仪。
如果要做不同的退火温度需要多次运行。
主要是用于简单的、对目的基因退火温度的扩增。
该仪器主要应用于科学研究、教学、医学临床、检验检疫等机构。
如:启步BSW-2P,BSW-3P,BSW-6P-I/II ,ABI 2720型2). 梯度PCR仪（2万-8万，赛默飞、伯乐、大龙，艾本德）一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度，通常有12种温度梯度）的PCR仪称作梯度PCR仪。
因为被扩增的不同DNA片段，其最适退火温度是不同的，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR 扩增，就可以筛选出表达量高的最适退火温度，进行有效的扩增。
用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间。
PCR仪的种类
PCR仪的种类1. 实时定量PCR仪实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，简称实时定量PCR）是一种用于快速、敏感且准确测定DNA、RNA拷贝数目的方法。
实时定量PCR仪是进行实时定量PCR实验的关键设备之一。
实时定量PCR仪的主要特点是能够对PCR反应过程中产生的荧光信号进行即时检测和分析，从而实现实时监测PCR反应的进程，并测定样品中目标序列的拷贝数。
实时定量PCR仪的应用非常广泛，包括基因表达检测、病原体检测、单核苷酸多态性分析等。
其高灵敏度、高特异性以及广泛的应用领域使其成为现代分子生物学和遗传学研究的重要工具。
2. 普通PCR仪普通PCR仪是进行普通聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）实验的基本设备。
普通PCR仪可以进行常规PCR实验，即通过PCR反应在体外扩增目标DNA片段。
普通PCR仪的特点是温控系统可以实现快速、精确的温度调节，从而使PCR反应在不同温度下的环境条件得以满足。
普通PCR仪的操作简单、成本较低，适用于常规PCR 实验的需求。
普通PCR仪的应用广泛，包括基因克隆、DNA测序、基因检测等。
它已成为分子生物学、医学和生物技术等领域中的一种基础设备。
3. 数字PCR仪数字PCR仪是一种相对较新的PCR仪器，它采用数字分析的方法对PCR产物进行定量，具有极高的准确性和可靠性。
数字PCR仪的工作原理是将PCR反应体系分成数百、甚至上千个微小反应体，从而形成多个独立的PCR反应。
每个微小反应体内含有目标序列与参考序列，通过数百或数千个微小反应的计数结果进行定量分析。
这种方法可以极大地降低PCR反应中的误差，提高PCR反应的准确性。
数字PCR仪的应用主要集中在绝对定量PCR、稀释样品的精确定量、病原体检测等领域。
其高准确性和可靠性使其在遗传学研究和临床诊断中得到广泛应用。
罗氏荧光定量pcr仪器
罗氏荧光定量PCR仪器简介罗氏荧光定量PCR仪器（Roche Real-Time PCR System）是一种用于荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）的仪器。
PCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，可以在体外大量复制DNA序列。
荧光定量PCR通过荧光信号的强度来定量PCR反应产物的数量，具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点，被广泛应用于生命科学研究、疾病诊断和药物研发等领域。
罗氏是一家全球领先的医药和诊断解决方案提供商，旗下的荧光定量PCR仪器采用先进的技术和设计，为用户提供可靠和精确的PCR分析结果。
主要特点1.高灵敏度：罗氏荧光定量PCR仪器采用先进的光学系统，能够检测和定量非常低浓度的荧光信号，提高了实验的灵敏度。
2.高准确性：仪器内置的精确温度控制系统和优化的PCR反应条件，保证了实验结果的准确性和可重复性。
3.高通量：罗氏荧光定量PCR仪器支持多样品同时进行PCR反应，大大提高了实验的通量，节省了时间和成本。
4.灵活性：仪器配备了多样的PCR试剂和芯片，可以适应不同实验需求的扩增反应。
5.友好的用户界面：仪器具有直观的用户界面和易于操作的软件，用户可以轻松设置实验参数、监控实时反应和分析数据结果。
主要应用罗氏荧光定量PCR仪器在各种领域都有广泛的应用，包括但不限于以下几个方面：1.基因表达分析：通过定量PCR技术，可以准确测量基因在不同组织、细胞或疾病状态下的表达水平，帮助科研人员了解基因的功能和调控机制。
2.微生物检测：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于检测和定量微生物如细菌、病毒、真菌等的核酸序列，广泛应用于食品安全、临床微生物学和环境监测等领域。
3.病毒载量检测：病毒载量是评估病毒感染严重程度的重要指标，罗氏荧光定量PCR仪器可以定量分析病毒的核酸含量，用于临床病毒学研究和病毒感染诊断。
4.药物研发：罗氏荧光定量PCR仪器可以用于药物研发过程中的基因表达分析、药物代谢相关基因的筛选和药物安全性评估等方面，为药物研发提供有力支持。
常见荧光定量PCR仪汇总讲解
而3320为双通道检测（FAM，HEX），支持三种荧光染料
杭州 博日FQD-48a
性能描述
FQD-48a具有单通道和4通道两种规格，通
过硬件转换可升级至4通道，支持0.2mlPCR 管，支持本公司体系：40ul 梯度温度范围：1℃~24℃ 升温速率：4.0℃/S 光路：LED激发+PMT检测
杭州 博日FQD-66A
孔数：96孔（10-100ul）检测1小时,384孔（5-20ul）检
测40min 材料：专用板，理论支持本公司PCR体系：40ul
集多个优点于一身，目前市面上最强悍的PCR仪
LightCycler Nano
优缺点：
检测通道：12个以上 加热模式：空气加热/冷却
升温：20℃/S
孔数： 32孔（4×8联管） 理论支持本公司PCR体系：40ul,价格为LC480的一半
进口定量PCR仪器厂商
市 场 占 有 率
ABI
ROChe （罗氏）
Bio-Rad （伯乐）
市 场 价 格
ROChe ABI Bio-Rad
ROChe
厂家介绍：
市 场 罗氏公司始创于1896年，总部位于瑞士巴塞尔，主要涉及药品、医疗诊 占 断、维生素和精细化工、香精香料等四个领域。LightCycler以运行速度 有 快而著称，在国内市场占有率单款最高 率
支持本公司体系：40ul
杭州 博日 linegene-3310/3320
性能描述
linegene-3310/3320具体的型号为FQD -33a 。最多检测33个样本， 支持0.2mlPCR管和8联管，支持本公司体系：40ul 升温速率：6℃/秒，通过Peltier技术控温 光路：LED激发+PMT检测 其中3310为单通道检测（FAM），支持两种荧光染料 （FAM/SYBR）
仪器培训-荧光定量PCR
3’
SG SG
Emission
SG
5’
3’
SG
SG
Part II 荧光定量PCR原理
SYBR-Green I
Excitation
SG
5’ 3’
SG
Emission
3’ 5’
SG SG
SG
Part II 荧光定量PCR原理
双标记探针（Taqman Probe）
5’端标记荧光分子（如：FAM），在3’端标记一个吸收
仪器培训
——荧光定量PCR仪
二○○七年九月
Part I 中心仪器简介 Part II 荧光定量PCR原理
Part III 荧光定量PCR仪操作规程
Part I 中心仪器简介
普通PCR仪
荧光定量PCR仪 Rotor gene 3000
Gene AMP System 9700
Part I 中心仪器简介
信号的增强来计算PCR扩增产物的增加。
SYBR-Green I
5’
Excitation
SG
Emission
3’
SG
SG
3’
5’
SG
SG
SYBR-Green I
Excitation
Emission
SG
5’ 3’
SG
3’ 5’
SG
SG
SG
Part II 荧光定量PCR原理
SYBR-Green I
5’
点Perform last run, new
点36-well Rotor,并选中No Domed 0.2ml Tubes 前面的复选框，点 next 设定自己的反应体系，点next 点Edit profile,按自己预实验的每个基因的最佳条件设置hold 和 cycling, 设好后点OK. 点next, 点Start Run, 将当次实验保存至自己的文件夹中。
PCR仪的几种分类及操作规程
PCR仪的几种分类及操作规程PCR仪的几种分类依据DNA扩增的目的和检测的标准可以将PCR仪分为一般PCR 仪，梯度PCR仪，原位PCR，实时荧光定量PCR仪等几类。
1、一般PCR仪一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为一般PCR仪。
假如要用它做不同的退火温度则需要多次运行。
紧要是用作简单的，对目的基因退火温度的扩增。
紧要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
2、梯度PCR仪一次性PCR扩增可以设臵一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称之为梯度PCR仪。
由于被扩增的不同的DNA片段其比较适合的退火温度不同，通过设臵一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的比较适合退火温度进行有效的扩增。
紧要用于讨论未知DNA退火温度的扩增，这样既节省时间，也节省经费。
在不设臵梯度的情况下亦可当做一般的PCR用。
真正的梯度，是每一排管都有精准明确的加热控温探头，2023年为止只有美国ABI公司可以做到。
其他的都是从两头的热传递来设计控温。
梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。
3、原位PCR仪（有些品牌的PCR仪具有一般PCR、梯度PCR、原位PCR的功能，通过替换模块进行多用途开展试验工作）是用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪。
如病原基因在细胞的位臵或目的基因在细胞内的作用位臵等。
可保持细胞或组织的完整性，使PCR反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶DNA所在的位臵进行基因扩增。
不但可以检测到靶DNA，还能标出靶序列在细胞内的位臵。
于分子和细胞水平上讨论疾病的发病机理和临床过程及病理的变化有侧重点的应用价值。
4、实时荧光定量PCR仪（fluorescencerquantitivepolymerasechainreaction,FQPCR）在一般PCR仪设计基础上加添荧光信号激发和采集系统和计算机分析处理系统，形成了具有荧光定量PCR功能的仪器。
双通道16孔荧光定量PCR仪
双通道16孔荧光定量PCR仪一、仪器用途非洲猪瘟病毒检测是非洲猪瘟防控工作的紧要举措，意义重点。
为进一步提高非洲猪瘟病毒检测结果精准性，规范非洲猪瘟病毒诊断制品生产、经营和使用行为，2023年1月1日起，各有关部门和单位在动物检疫或疫病监测、诊断中，对生猪及其产品开展非洲猪瘟病毒检测，应当使用已取得农业农村部核发的产品批准文号的非洲猪瘟病毒诊断制品，确保检测结果精准。
竞道非洲猪瘟PCR检测仪（实时荧光定量PCR仪支持变温检测）用于运行病毒检测试验，并对试验数据进行分析；仪器既可在试验室内操作，又可用于野外科学试验，搭配相应试剂，对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、精准的定性检测。
竞道非洲猪瘟检测仪配套非洲猪瘟病毒荧光pcr检测试剂盒、非洲猪瘟病毒荧光pcr核酸检测试剂盒均已经获得农业农村部产品批准，可以充足非洲猪瘟核酸现场快速检测需求。
可定量快速畜牧类疾病诊断如非洲猪瘟、q流感、猪瘟、猪蓝耳、伪狂犬等疾病，广泛应用于养殖场、屠宰场、食品加工厂、肉产品深加工企业、农业农村部、畜牧局、检验检疫单位使用。
试验员需要经过试验室技术和仪器、软件操作的专门培训，具备娴熟的相关操作技能。
二、仪器特点1.体积小，重量轻，易于携带。
轻松充足外出试验的需求。
2.内置7寸高清电容屏PDA，触屏操作，简便快捷。
3.Marlow高品质Peltier制冷片，结合德国g端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度掌控模式，最大升温速度7℃，最大降温速度5℃，大大缩短试验时间。
4.整板3s快速采光模式，保证试验结果孔位一致性。
5.简洁直观的软件引导，轻松开启检测试验。
三、非洲猪瘟PCR检测仪应用领域□ 基础科学讨论□ 病原体检测□ 肉制品掺假□ 转基因检测□ 食品安全检测□ 药物开发及合理用药□ 基因表达□ 水体监测四、技术参数样品容量：16x0.2ml、支持8联管适用耗材：常见透亮PCR 耗材，8x0.2ml 排管，0.2ml 单管反应体系：5—120ul反应模式体系加热/制冷模块：高性能进口半导体热电模块温度掌控范围：4°C—99℃热盖温度：30℃—108℃（默认105℃，热盖温度可调）升温速率：3.5℃/s（MAX）降温速率：2.5℃/s（MAX）温控精度：0.1°C温度均匀性：0.25°C温度精准度：0.1℃温控区域数量：多点（2 点）梯度数：0 个梯度温度范围：无梯度孔数：无激发光源：大功率LED（免维护，寿命长）激发光波长范围：400—700nm检测部件：进口高灵敏度光电传感器激发和检测传播介质：耐高温专业导光光纤检测通道数：标配 2通道（FAM/VIC）适用染料和探针：FAM,SYBR GreenHEX,JOE,VIC软件功能：具多重qPCR数据分析功能，可同时检测2个检测通道扩增曲线，标准曲线定量、熔解曲线、支持HRM检测数据导出：可将试验结果以图形和表格的形式直接导出；认真的数据报告内容包括试验条件，数据坐标和表格，数据分析参数。
qPCR仪器介绍(新)
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
part1荧光定量PCR技术发展及原理
二、荧光定量PCR仪器的组成
• 滤光镜
二、荧光定量PCR仪器的组成
• 荧光检测器 1. 光电倍增管 （PMT）；MX3005P；rotor-gene;博日Fqd系列；国产 2. 电荷耦合元件 （CCD）；ABI 7500；V7；7300; light cycler 480II；iQ5 3. 光敏二极管（PHT）；stepone / stepone plus; light cycler 2.0 ;CFX96； PMT/PHT是电子管技术，CCD是半导体技术
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料
part1荧光定量PCR技术发展及原理
SYBR® Green I 染料的缺点
非特异结合任意 双链DNA
非特异性PCR产物信号
part1荧光定量PCR技术发展及原理
PCR
一滴残留在裙子上的精液使得美 国总统Bill Clinton不得不坦承他与白 宫实习生有不正当的关系。
将极微量的生物标本化为可供鉴定的 现代技术正是PCR具有的特色之一。 这也是分子生物医学令人震撼的一例。
part1荧光定量PCR技术发展及原理
PCR 的发展史