Removed_DNA损伤试剂对HeLa细胞的细胞周期检查点的影响
细胞周期检验点与肿瘤发生之间关系的研究进展_牟华
在细胞生命活动过程中，多种内外因素（如氧自由基和紫外辐射）都会影响细胞基因组的完整性。
为确保细胞周期这一生命增殖过程有条不紊地进行，细胞内发展了一系列调控机制，以检测和修复DNA损伤、维持细胞遗传稳定性和完整性。
细胞周期检验点就是其中一种重要的调控机制。
所谓周期检验点就是细胞周期不同时相间存在的类似“开关”式的关键调控点，以保证各个细胞周期事件的启动、完成与忠实地按序进行。
在细胞周期检验点中，如果调节蛋白检测到DNA损伤或其他结构异常，细胞会很快启动DNA损伤修复调控体系，抑制细胞周期运转，以提供足够的时间修复损伤，保证细胞遗传的稳定性。
在人类细胞中，检验点功能缺陷引起的遗传不稳定性与细胞癌变密切相关。
一些检验点蛋白突变显著增加了人类患癌症的几率。
因此，深入研究细胞周期检验点将有助于寻找有效的癌症治疗方法。
1细胞周期检验点通路及其调控机制对细胞周期的研究表明，这些周期检验点可以检测到损伤或结构异常的DNA，启动相应的信号转导途径，引发一系列生物学事件，如阻滞细胞周期和修复受损DNA。
作为蛋白质的网络系统，细胞周期检验点通路包括感受器、转导器和效应器。
感受器［如哺乳动物的毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白（ataxia telangiectasia mutated，ATM）和ATR（ATM－Rad3－related）］负责检测结构异常的DNA并启动检验点信号；转导器负责将信号转导到相应的效应器。
哺乳动物细胞中，检验点激酶（checkpoint kinase，CHK）CHK1、CHK2分别是ATR与ATM激酶的底物；检验点经过一系列信号转导，最后由效应器引发生物学效应。
这些效应器蛋白包括与DNA复制、转录调控和细胞周期调控有关的蛋白，如BRCA1、CDC25A、CDC25C、p21等。
在哺乳动物细胞中存在G1／S、S和G2／M等一系列细胞周期调控检验点[1－3]。
1．1G1期和G1／S检验点通路及其调控机制G1期是M期结束后S期开始前的一段间隙。
临床医学检验：造血检验试题及答案
临床医学检验：造血检验试题及答案1、多选口形红细胞于扫描电镜下，根据红细胞的内凹程度可分为() A．单向凹陷，呈盘形B．双面凹陷，呈面包圈状C．双面凹陷，呈圆盘状D．单向凹陷较深，似面盆或蘑菇帽状E（江南博哥）．单向凹陷更深，似杯状或深臼状正确答案：A, D, E2、判断题粒/红比值是指骨髓有核细胞总数与有核红细胞总和之比。
() 正确答案：错3、单选下列哪项叙述不符合显带染色体命名()A．显带染色体的明暗条纹称为带B．染色体上明显而恒定的形态特征，称为界标C．亚带的描述就是在带的后面加一小数点，再写出指定的亚带数D．如果亚带再被分，则其命名是在亚带后加标点，再加数字E．两个界标间的区域称为染色体区正确答案：D4、单选染色体核型中缩写符号“cen”表示()A．倒位B．嵌合体C．易位D．着丝粒E．无着丝粒碎片正确答案：D5、配伍题单核细胞()淋巴细胞()中性粒细胞()A．POX染色呈局限、粗颗粒状阳性B．POX染色呈弥散、细颗粒状阳性C．POX染色呈阴性D．胞内铁呈阳性E．胞内铁呈阴性正确答案：B,C,A6、填空题苏丹黑(SBB)染色的特异性____过氧化物酶(POX)染色，而苏丹黑(SBB)染色的敏感性____过氧化物酶(POX)染色。
正确答案：低于；高于7、单选染色体核型中缩写符号“r”表示()A．倒位B．嵌合体C．易位D．环形染色体E．次缢痕正确答案：D8、单选FISH检测微小残留白血病，其灵敏度可达多少细胞中检出一个异常细胞()A．101B．102C．103D．104E．105正确答案：C9、单选醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)阳性且能被NaF所抑制的细胞是() A．粒细胞B．红细胞C．淋巴细胞D．单核细胞E．巨核细胞正确答案：D10、单选关于中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)的临床意义，哪项是错误的() A．慢性粒细胞白血病时NAP活性降低B．化脓性感染时NAP活性增强，而病毒感染时则无变化C．类白血病时NAP活性明显增强D．急性淋巴细胞白血病时NAP活性降低，而急性粒细胞白血病时则增强E．再生障碍性贫血患者NAP活性增强，PNH时活性降低正确答案：D11、单选染色体核型为t(15；17)(q22；q22)，最有可能见于()A．AML-M0B．AML-M1C．AML-M2D．AML-M3E．AML-M5正确答案：D12、单选下列哪项不是骨髓穿刺成功的指标()A．抽出骨髓瞬间，病人有特殊的疼痛感B．可见骨髓小粒C．可见脂肪滴D．镜下可见骨髓特有细胞如浆细胞、各类有核细胞等E．骨髓中杆状核与分叶核之比小于外周血杆状核与分叶核之比正确答案：E13、问答题试述造血祖细胞培养在急性白血病的诊断、疗效观察、预后估计及预示复发等方面有何意义。
细胞周期调控
2.cdc基因 Leland Hartwell、 Paul Nurse分别以不同的酵母为实验材料，发现了许多与细胞分裂
有关的基因(cell division cycle gene，CDC)。如芽殖酵母的cdc28、裂殖酵母cdc2基因。 进一步研究发现：P34cdc2与P34cdc28是同源物，二者本身并不具有激酶活性，只有当其与有 关蛋白结合后，其激酶活性才能够表现出来。例如：P34cdc2必须与另一种蛋白P56cdc13结合 后才具有激酶活性。
表皮生长因子（EGF)受体 集落刺激因子－1（CSF-1)受 体 神经生长因子（NGF)受体
酪氨酸激酶 丝氨酸激酶 GTP/GDP结合蛋白
转录因子（AP-1) DNA结合蛋白 类固醇受体家族成员
3．抑癌基因 抑癌基因可抑制细胞周期于静止期，并使DNA复制不完全或损伤的细胞不能进入分裂期，
避免细胞的癌变。
（1）Ink4(Inhibitor of cdk 4) 如P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d，专一地与CDK4、CDK6结合，阻止CDK和 cyclinD的结合。使细胞周期不能从G1期的调控点进入到下一个时相。
（2）Cip/Kip
包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、 P57kip2等，能与多种cyclin - CDK复合物包括cyclinE–CDK2、cyclinD–CDK6、cyclinD– CDK4结合，抑制cyclin - CDK复合物的蛋白激酶活性，使一些细胞增殖所需要的蛋白质磷 酸化受阻，细胞停留在G1期。
此外P21cip1还可与DNA聚合酶δ亚单位PCNA (proliferating cell nuclear antigen, PCNA )相互作用， 抑制DNA复制，但不影响DNA修复。
细胞增殖的调控和细胞周期的调节
细胞增殖的调控和细胞周期的调节细胞的增殖是维持生命的基本过程之一，对于生物体的正常发育和组织修复至关重要。
细胞增殖的调控和细胞周期的调节是维持细胞增殖的平衡和稳定的关键机制。
本文将就细胞增殖的调控和细胞周期的调节进行探讨。
一、细胞增殖的调控细胞增殖的调控主要涉及到三个方面：细胞周期的控制、内环境的调节和外界信号的影响。
1. 细胞周期的控制细胞周期是一种有序的细胞生命周期，包括四个阶段：G1期（前期）、S期（DNA合成期）、G2期（后期）和M期（有丝分裂期）。
其中，G1期主要是准备细胞DNA的复制；S期是细胞进行DNA复制的阶段；G2期是细胞准备进入有丝分裂的阶段；M期是细胞有丝分裂的过程。
细胞周期的控制主要通过细胞周期蛋白（Cyclin）和Cyclin依赖性激酶（CDK）的调节来实现。
Cyclin和CDK在不同的细胞周期阶段表达量和活性不同，从而控制细胞周期的进展。
2. 内环境的调节细胞增殖的调控还受到细胞内环境的影响。
内环境主要包括细胞内的营养物质、DNA损伤的修复和细胞器的功能状态等。
当细胞内的环境发生异常时，细胞增殖的过程也会受到影响。
例如，当细胞内的DNA损伤累积到一定程度时，会激活细胞的DNA损伤应答机制，导致细胞周期的阻滞，并启动DNA修复机制。
这样可以避免损伤的DNA复制和传递给后代细胞。
3. 外界信号的影响细胞增殖还受到外界信号的影响，包括生长因子、细胞因子和细胞外基质等。
生长因子是一类可促进细胞增殖的分子信号物质，它们通过与细胞膜上的受体结合，激活下游信号通路，刺激细胞进入增殖状态。
细胞因子是一类具有调控细胞增殖的蛋白质分子，它们能够通过绑定到特定的细胞表面受体来激活细胞增殖信号通路，从而影响细胞的周期。
细胞外基质是细胞周围的一种复杂的三维网络结构。
细胞通过与细胞外基质相互作用来感知外界环境，并调节细胞增殖。
当细胞外基质发生变化时，会调控细胞的增殖状态。
二、细胞周期的调节细胞周期的调节是细胞增殖的一个重要过程，它主要通过细胞周期检查点和相关蛋白激活、抑制来实现。
细胞周期的调控和细胞增殖
细胞周期的调控和细胞增殖细胞周期是细胞生命周期中的一个重要阶段，通过严密调控确保细胞按照一定的顺序进行有序的DNA复制和细胞分裂。
细胞周期的调控主要包括细胞周期检查点、细胞周期调控因子及其调控网络的作用等方面。
一、细胞周期检查点细胞周期检查点是细胞在特定时期对其自身状态的监测点，主要有G1/S检查点、G2/M检查点和M检查点。
这些检查点的功能在于确保细胞在细胞周期的不同阶段保持稳定和正确的进行。
1. G1/S检查点G1/S检查点位于细胞周期的G1期和S期之间，主要监测细胞的DNA是否完整以及是否有足够的生物小分子供应，这是控制是否进入DNA复制的关键检查点。
如果细胞通过检查，则进入S期进行DNA 复制，否则进入G0期停滞。
2. G2/M检查点G2/M检查点位于细胞周期的G2期和M期之间，主要监测细胞DNA复制是否正确完成以及是否有DNA损伤。
只有当细胞通过这一检查点时，才能进入有丝分裂的M期。
3. M检查点M检查点位于细胞分裂的中期，主要监测染色体是否正确连接到纺锤体上，并确保该连接是稳定的。
只有当细胞通过这一检查点时，才能完成有丝分裂，将染色体均匀地分配给两个子细胞。
二、细胞周期调控因子及其调控网络细胞周期调控因子主要包括Cyclins和Cyclin-dependent kinases (CDKs)。
Cyclins与CDKs形成复合物，通过磷酸化作用来调控细胞周期的不同阶段。
1. CyclinsCyclins是调控细胞周期的关键调节蛋白，其数量在不同的细胞周期阶段发生变化。
不同类型的Cyclins与特定的CDKs形成复合物，起到调控细胞周期的作用。
2. CDKsCDKs是Cyclin-dependent kinases的缩写，是一类酶的家族。
它们与Cyclins结合形成复合物，通过磷酸化调控细胞周期的不同阶段。
CDKs活性的变化在细胞周期的不同阶段发生，由Cyclins的表达调控。
3. 细胞周期调控网络细胞周期调控网络是由各类细胞周期调控因子组成的复杂网络。
细胞周期检查点及其在DNA损伤修复和细胞生命周期中的作用研究
细胞周期检查点及其在DNA损伤修复和细胞生命周期中的作用研究细胞是生命的基本单位，其正常生命周期在细胞周期中完成。
细胞周期是由一系列精密的分子机制调控的。
其中一个关键机制是细胞周期检查点，它能够及时检测DNA损伤和其他异常，并作出正确的反应，维持正常的细胞生命周期和避免异常细胞的增殖。
本文将探讨细胞周期检查点的定义、调控机制及其在DNA损伤修复和细胞生命周期中的作用等方面的研究进展。
一、细胞周期检查点的定义和调控机制细胞周期检查点是细胞周期调控系统的一个重要组成部分，它能够监测细胞周期的进程，并在检测到细胞DNA损伤或其他异常时停止或延迟细胞周期进程，以允许细胞修复DNA损伤或进行其他必要的反应。
根据细胞周期的不同阶段，细胞周期检查点可以分为G1检查点、S检查点和G2/M检查点等。
细胞周期检查点的调控机制涉及一系列复杂的分子信号通路和信号分子。
其中，最重要的是p53蛋白和ATM/ATR信号通路。
当细胞DNA受到损伤时，ATM/ATR激活p53蛋白，并促使其进入细胞核，从而引发DNA损伤反应。
p53蛋白可通过多种方式抑制细胞继续进入细胞周期的下一个阶段，如抑制CDK4/6和Cyclin D1启动G1/S转换。
此外，细胞周期检查点的调控还涉及许多其他重要的分子，如CDK抑制剂p21、p16和p27等。
二、细胞周期检查点在DNA损伤修复中的作用DNA损伤是一种常见的细胞异常状态，如放射线、化学物质的作用或其他因素可能引起DNA损伤，进而导致细胞出现不稳定和突变。
小分子DNA损伤通常通过细胞自身的损伤修复机制进行修复。
然而，严重的DNA损伤，如双链断裂，如果不能及时和有效地被修复，则会导致基因突变和细胞凋亡。
因此，细胞周期检查点的作用在于，当细胞遇到DNA损伤时，通过检查点启动系统信号机制，停滞细胞周期进程，从而使细胞拥有足够的时间和机会去修复损伤的DNA。
在此过程中，细胞周期检查点可以促进DNA修复蛋白的表达和激活，如通过p53抑制G1/S转换促进DNA修复蛋白的表达和激活。
Chk1和p53在肿瘤细胞S期DNA损伤检查点中的复杂关系研究的开题报告
Chk1和p53在肿瘤细胞S期DNA损伤检查点中的复杂关系研究的开题报告研究背景DNA损伤是导致肿瘤发生的重要原因之一。
在S期DNA损伤检查点中，Chk1和p53两种蛋白质扮演着关键角色。
Chk1是一个重要的激酶，在DNA损伤发生后，能够磷酸化多个底物，从而激活细胞周期的检查点，阻止细胞进入有问题的S期。
与此同时，DNA损伤也会导致p53的活化，从而促进细胞凋亡、修复和细胞周期的阻滞。
然而，Chk1和p53在S期DNA损伤检查点中的作用还没有完全澄清，尤其是它们之间的相互作用和调节机制。
研究目的本研究旨在探究Chk1和p53在肿瘤细胞S期DNA损伤检查点中的复杂关系。
具体研究目的包括：1. 确定Chk1和p53在S期DNA损伤检查点中的相互作用关系。
2. 探究Chk1和p53在S期DNA损伤检查点的调控机制。
3. 研究Chk1和p53在肿瘤细胞中的表达模式及其与肿瘤发生的关系。
研究内容本研究将从以下几个方面展开：1. 针对Chk1和p53在S期DNA损伤检查点中的相互作用，我们将通过免疫共沉淀和荧光共定位实验来探究它们之间的相互作用关系。
2. 针对Chk1和p53在S期DNA损伤检查点的调控机制，我们将对Chk1和p53的下游底物进行筛选，并研究它们在细胞周期中的表达模式及功能。
3. 针对Chk1和p53在肿瘤细胞中的表达模式及其与肿瘤发生的关系，我们将在大量肿瘤标本中检测Chk1和p53的表达水平，并分析其与肿瘤发生的相关性。
研究意义本研究的意义在于深入理解Chk1和p53在S期DNA损伤检查点中的作用、相互作用和调控机制，揭示它们之间在肿瘤发生过程中的复杂关系，为肿瘤治疗提供新的靶点和方法。
Cyclin D1在肿瘤及妇科领域的研究进展
Cyclin D1在肿瘤及妇科领域的研究进展丁玉梅【摘要】Cyclin D1是细胞周期蛋白(cyclin)家族的一个成员,具有调控细胞周期进程的功能.随着细胞周期的进程,cyclin D1的水平呈周期性变化,并与多种蛋白相互作用,促使细胞的分裂与增殖.Cyclin D1是与肿瘤有直接关系的癌基因.Cyclin D1在许多恶性肿瘤中均过度表达,导致细胞周期缩短,使细胞过度增殖.近年的研究显示,cyclin D1蛋白的过度表达与妇科恶性肿瘤的发生、发展及预后有关.作为一项新指标,cyclin D1可能为今后妇科肿瘤的诊断、预测发生、发展及预后开辟广阔的前景.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2014(020)002【总页数】3页(P254-256)【关键词】细胞周期蛋白D1;肿瘤;妇科;进展【作者】丁玉梅【作者单位】淄博市中心医院妇科,山东,淄博,255036【正文语种】中文【中图分类】R737.3细胞周期蛋白(cyclin) D1是cyclin家族的一个成员。
Cyclin D1的过度表达与恶性肿瘤的发生、组织学类型、分化程度、侵袭性及患者预后存在密切关系,cyclinD1的扩增在许多癌变组织早期即可出现。
近年来，在妇科肿瘤领域，cyclin D1也成为了基础与临床研究的热点。
作为临床病理诊断的辅助指标，cyclin D1已成为判断病情和预后的重要参考，测定其表达可早期发现癌前病变，其研究在肿瘤的诊断和治疗上具有潜在的价值。
1 Cyclin家族与cyclin D11.1 Cyclin家族简介人cyclin家族分为8种(cyclin A-H)，共有14个成员，分别为cyclin A1、A2，cyclin B1、B2，cyclin C，cyclin D1、D2、D3，cyclin E1、E2，cyclin F，cyclin G1、G2，cyclin H，它们的高表达可以分别出现在不同的细胞周期。
Cyclin家族作为一系列周期性表达的核蛋白，分为三大类：调控细胞周期进程，如cyclin C，cyclin D1、D3，cyclin E；调控DNA合成，如cyclin A；调节有丝分裂，如cyclin B[1]。
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摘要
摘要
ｐ５３蛋白参与了细胞周期检查点和ＤＮＡ修复等多种生命活动中，在维护基因 组完整性中发挥重要的作用。多种类型的肿瘤中均发现ｐ５３的突变，提示肿瘤细 胞体系中ＤＮＡ损伤检查点的机制可能不同于正常的组织细胞。
为探讨在ｐ５３失活的肿瘤细胞中ＤＮＡ甲基化试剂引发的ＤＮＡ损伤对于细胞周 期的影响，我们将同步化在Ｇ１期、Ｓ期和Ｇ２／Ｍ期的ＨｅＬａ细胞分别进行甲磺酸 甲酯（ＭＭＳ）处理。ＭＭＳ的处理结果表明，各个时相的细胞周期进程均发生延迟 或阻滞，其中Ｓ期细胞对药物最为敏感。进一步分子机理研究表明，三个时相中 ＡＴＭ－Ｃｈｋ２和ｐ３８ ＭＡＰＫ通路均被激活，但是检查点激酶ｌ（Ｃｈｋｌ）仅在Ｓ期中被 活化，提示Ｃｈｋｌ特异地参与了Ｓ期的ＤＮＡ损伤检查点（ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ） 或者ＤＮＡ复制检查点（ＤＮＡ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）的作用。为了进一步确定 Ｃｈｋｌ在Ｓ期检查点中的功能，我们用专一的小分子抑制剂抑制Ｃｈｋｌ的磷酸化， 发现被ＭＭＳ处理的Ｓ期细胞能在未完成复制的情况下进行异常的有丝分裂；提示 Ｃｈｋｌ主要是在ＨｅＬａ细胞Ｓ期的ＤＮＡ损伤检查点而不是ＤＮＡ复制检查点发挥其作 用。我们还检查了参与Ｇ２／Ｍ期进程的ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１的表达变化情况，在ＭＭＳ处理 的Ｓ期细胞中ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１表达量不能上调，而在加入Ｃｈｋｌ抑制剂处理后，ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１则有所增加。这一结果进一步支持ＤＮＡ损伤Ｓ期细胞在Ｃｈｋｌ失活时进入异常 有丝分裂的推论。我们的研究结果表明，Ｃｈｋｌ是删Ｓ诱发的ＨｅＬａ细胞Ｓ期ＤＮＡ 损伤检查点的专一性的重要蛋白激酶；当ＭＭＳ引发ＤＮＡ损伤后，上游蛋白激酶对 Ｃｈｋｌ进行磷酸化，从而激活了Ｓ期的ＤＮＡ损伤检查点，阻止细胞进入Ｇ２／Ｍ期。 由于这一过程不依赖于ｐ５３的活性，因此Ｃｈｋｌ有可能作为ｐ５３失活的肿瘤细胞 的药物靶标。