胎牛血清制备
生产用细胞基质
生产用细胞基质
生产用细胞基质主要包括以下几种：
1. 胎牛血清：通常用于支持细胞的生长和繁殖。
它提供了一些必需和
非必需氨基酸、生长因子和维生素。
2. 胰蛋白酶：一种酶，用于分解细胞间的蛋白质，使细胞成为单个的
细胞或细胞碎片，用于制备用于培养的细胞。
3. 胶原蛋白：一种细胞外基质，在细胞生长和组织修复中起重要作用。
4. 植物凝胶：如明胶，是一种天然的多糖，可在细胞培养过程中提供
结构支持。
5. 培养皿、培养瓶、培养板等：这些是用于培养细胞的容器和模具。
6. 双抗：即青霉素钠和氯化钠，用于控制培养过程中的细菌生长。
7. MEM、DMEM、F12等基础培养基：这些是用于细胞培养的广泛使用的培养基类型，它们提供了细胞生长和繁殖所需的基本营养物质。
8. 盖玻片：一种支持材料，用于支持贴壁细胞生长。
9. 细胞计数板：一种用于计数培养物中细胞的设备。
此外，还有一些特殊的细胞基质，如用于特定细胞类型或特定用途的
特定血清替代品或小分子药物。
总的来说，生产用细胞基质是一系列用于支持细胞生长和繁殖的生物
和化学物质的混合物，它们为细胞提供了所需的环境和营养，使其能
够正常生长和发育。
具体的基质选择和使用应根据您的细胞类型、实
验目的和时间表等因素来决定。
血清在细胞培养中的作用和质量要求
天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。
细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。
在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性，保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有以下几类：1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎牛血清中含胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等；2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用；3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。
包括：胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关；类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用：促生长激素：促进细胞增殖的效应；氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。
血清制备原理
血清制备原理
血清制备是一种从动物（通常是哺乳动物）的血液中得到的透明液体，其中包含大量的抗体和其他血浆蛋白质。
血清常常被用于实验室研究、临床诊断和治疗等领域。
血清制备的过程主要包括以下步骤：
1. 选择合适的动物供体：通常选择小鼠、兔子、猪等动物作为供体。
供体选择通常基于其体积、免疫反应性和商业可获得性等因素。
2. 免疫刺激：将特定抗原或疫苗注射到动物供体体内，以刺激其免疫系统产生抗体。
注射剂量和时间可根据具体要求进行调整。
3. 收集血清：在一定时间后，通过采集供体动物的血液来获取血清。
最常见的方法是从动物的静脉中采集血液，然后将血液置于离心机中进行离心分离，将血浆与红细胞分离。
4. 血清的保存和处理：分离后的血浆可以通过多种方法进行保存和处理，例如添加抗生素以防止细菌生长、冻干或冷冻在低温下保存。
在血清制备过程中，关键的一点是在注射抗原之后充分免疫供体动物，以激发免疫系统产生大量的抗体。
动物的免疫系统会对抗原做出反应，并产生特异性抗体。
这些抗体会被释放到血液中，从而形成抗体丰富的血清。
血清的制备非常重要，因为血清中含有大量的抗体和其他免疫相关因子，可以被用来检测特定抗原的存在、了解免疫反应机制以及进行疾病的诊断和治疗。
由于血清的制备需要动物供体，并在涉及抗原注射的过程中涉及动物实验伦理问题，因此在实际操作中需要严格遵守伦理规范和法律法规。
牛血清使用说明
牛血清使用说明本使用说明适用于下列产品系列：胎牛血清(FBS) 、新生牛血清和小牛血清产品介绍动物细胞离体培养需要营养丰富的培养基。
动物血清通常添加在合成培养基里用于促进动物细胞的正常生长。
血清是一种天然的促进细胞生长营养物质，它含有极为丰富、并且生物利用率很高的蛋白质、氨基酸、脂肪、生长引子、维生素、激素、蛋白酶抑制因子以及各种无机微量元素。
这些成分可有效地促进细胞的生长。
目前普遍使用的血清种类有胎牛血清(FBS)、新生牛血清、马血清、猪血清和人血清。
根据血清应用范围和采集后加工方法的不同，每类动物血清又可制备成不同的血清产品类型，用于各种动物和人细胞的培养。
然而，胎牛血清(FBS)被广泛认为是最适于细胞培养的动物血清，补充所必需的营养成分。
主要是因为FBS富含平衡的天然生长因子和较低γ球蛋白。
除此之外，FBS还可以防止细胞由于pH变化、重金属离子、内毒素和蛋白酶而引起对细胞的损害。
贮存方法麦迪捷生产的血清是分装在无菌的塑料瓶内，之后冰冻保存。
在运输过程中仍保持在冰冻状态。
如将血清存放在-10到-40o C度的在冰柜里，可连续保存数年，对血清的植板率没有明显的影响。
血清不应存放在无霜冰箱里。
反复冰冻融化过程会使血清中的某些物质沉淀，降低血清的使用效果。
不适当的贮存将迅速降低血清制品的有效成分和稳定性。
解冻方法血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。
最好在4o C低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。
如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法：1. 将血清从冰箱里取出后，在室温下放置15-20分钟。
2. 然后将血清放置在37o C水浴槽里。
过高温度会导致血清出现浑浊现象。
不要让水淹没装有血清的瓶子。
3. 每隔5分钟左右适当摇晃瓶子，直到完全地解冻为止。
血清解冻后要立即使用。
解冻的血清可以在2-8o C条件下存放达2个星期。
为了避免多次解冻/融化血清和长期冷藏,我们建议将没有用完的血清立即分装，然后再冰冻保存，方便以后使用。
高氏培养基配方
高氏培养基配方
高氏培养基是一种常用的细胞培养基，适用于多种细胞的培养和繁殖。
以下是高氏培养基的配方：
成分：
1. DMEM基础培养基（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）500ml
2. 热灭菌的胎牛血清（FBS）10%
3. L-谷氨酰胺（L-Glutamine）2mM
4. 热灭菌的青霉素-链霉素（Penicillin-Streptomycin）1%
制备：
1. 取出DMEM基础培养基，加入L-谷氨酰胺和青霉素-链霉素，混合均匀。
2. 加入10%的热灭菌的胎牛血清，混合均匀。
3. 过滤培养基，以去除可能存在的细菌和病毒。
使用：
高氏培养基可以用于各种细胞的培养和繁殖，存储温度为2℃至8℃。
注意事项：
1. 培养基应保存在无菌条件下。
2. 使用培养基前需检查是否有菌落或悬浮物。
3. 培养基应在规定时间内使用完毕，不得重复使用。
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PBMC的分离培养及处理步骤
刘凤君实验步骤1.采血：抽取初治(初始抗病毒治疗）之前CHB、CHC患者外周静脉血6ml，注入肝素抗凝管中，轻轻摇匀。
2.稀释：室温下加入等体积的PBS，轻轻吹打混匀。
3.加样：取50ml离心管，吸取6ml Ficoll（淋巴细胞分离液）于离心管中，（Ficoll与稀释前血液的体积比为1:1），管倾斜45°，将稀释后的血液在Ficoll液面上方约1cm处沿管壁缓慢加至Ficoll上面。
4.离心：18-20℃,2000rpm，30min，离心后从管底至液面分四层，依次为红细胞和粒细胞层、分层液层、单个核细胞层、血浆层。
5.回收：将移液管直接插入云雾层（或者先吸去上层的血浆），轻轻吸出云雾层，放入新的离心管中。
6.洗涤：加入至少于PBMC（外周血单个核细胞）体积3倍的PBS，18-20℃,2000rpm，10min，两次。
7.细胞计数：弃上清，加1ml RPMI-1640培养基(含10%胎牛血清），吹打混匀，制备成PBMC细胞悬液。
①专用仪器测定：吸取一定量的PBMC细胞悬液于EP管中，取等量2%台盼蓝，吹打混匀后吸取1滴进行细胞浓度测定。
②血细胞计数板：取一滴PBMC悬液与一滴2%台盼蓝染液混匀后加于血细胞计数板中，在显微镜下计数4大格内细胞总数。
细胞数/ml=4个大方格细胞总数/4×104×2（稀释倍数）8.细胞培养：细胞计数后调整细胞浓度为2×105/ml培养基，加于6孔板或24孔板中进行培养。
（我们通常是培养过夜后再进行下一步处理）。
9.干扰素处理：加入500IU/ml（培养基的终浓度）的α-IFN（干扰素），同时设对照组，时间为8小时。
（家族性乙肝、丙肝患者中不准备抗病毒治疗者省去干扰素处理的步骤。
10.细胞收集：将6孔板或24孔板中的培养基吸出弃掉，每孔加200ulTrizol，用移液枪将孔壁吹打数次后，将Trizol转入EP管中。
11.细胞冻存：将收集的细胞放入-80℃冰箱中保存。
牛血清白蛋白的制备方法[发明专利]
![牛血清白蛋白的制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/955192b6ed3a87c24028915f804d2b160b4e86c1.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011570120.7(22)申请日 2020.12.26(71)申请人 郑州伊美诺生物技术有限公司地址 450000 河南省郑州市经济技术开发区第六大街133号1号厂房(72)发明人 王萍 赵巧辉 吕庆生 包金芝 李桂林 付光宇 吴学炜 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限公司 11227代理人 温可睿(51)Int.Cl.C07K 14/765(2006.01)C07K 1/14(2006.01)C07K 1/34(2006.01)(54)发明名称牛血清白蛋白的制备方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，尤其涉及牛血清白蛋白的制备方法。
本发明提供的BSA的制备方法中，包括：血清稀释、第一步提取、第二步提取、洗滤浓缩几个步骤。
实验表明，采用本发明提供的方法在适宜的参数下，能够获得良好的提取效果，不仅收率较高，并且批间差异小，降低了化学残留，提高了抗干扰能力，所得产品作为检测试剂的关键辅料蛋白，能够显著降低检测试剂的非特异性吸附。
权利要求书2页 说明书9页 附图4页CN 112521488 A 2021.03.19C N 112521488A1.牛血清白蛋白的制备方法，其特征在于：包括：血清稀释：将牛血清或牛血浆稀释至蛋白浓度为40～45mg/ml；第一步提取：在稀释后的血清中加入辛酸钠至质量分数为3.5‰～4‰，边加入边搅拌，然后调节pH值至5.8～6.8，加热至65～70℃保温4h，冷却至室温放置12～16h，然后分离上清液A；第二步提取：在上清液A中加入辛酸钠至质量分数为2‰～2.5‰，边加入边搅拌；然后调节pH值至5.0～5.5，加热65～70℃保温2h，冷却至室温放置12～16h，然后分离上清液B；洗滤浓缩：调节上清液B的pH值至7.0～7.5，过滤、浓缩至蛋白浓度为150～180mg/ml 后，经冷冻干燥获得牛血清白蛋白。
胎牛血清制备
胎牛血清制备Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】胎牛血清制备一、目的:为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。
二、操作方法：（一）采血1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。
2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。
3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。
5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。
采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。
将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。
（二）离心将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。
（三）抽血清取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。
将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。
打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。
将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。
（四）血清过滤1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。
2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。
3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。
4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后，经过高压灭菌，在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装，并装上压力表。
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胎牛血清制备
Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
胎牛血清制备
一、目的:
为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。
二、操作方法：
（一）采血
1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。
2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。
3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。
5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。
采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。
将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。
（二）离心
将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。
（三）抽血清
取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。
将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。
打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。
将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。
（四）血清过滤
1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。
2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。
3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。
4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后，经过高压灭菌，在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装，并装上压力表。
把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。
5、用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。
6、将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后，即为精制胎牛血清，送-20℃冷库储存。
三、注意事项：
1、在操作过程中，要经常用75%的酒精对手部进行消毒，同时避免接触牛血或血
清，特别是有伤口的部位，以免感染。
2、在采血插管过程中，插管避免接触到未消毒的部位，尽量深入血管，使牛血能
快速流完为好，并固定好插管，避免脱离动脉血管。
3、在抽血清的过程中，控制好压缩机的压力大小，避免压力过大，抽到下层的沉
淀物。
4、在过滤过程中，控制好压力的大小，避免超过滤柱工作压力。