抑菌活性实验设计方案
药物抑菌实验报告
一、实验目的为了探究不同种类抗生素的抑菌效果，本研究采用体外抑菌实验方法，对青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素四种抗生素进行抑菌活性测试，为临床合理用药提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等常见革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
2. 实验试剂：青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素等抗生素粉末，琼脂、牛肉膏、蛋白胨、pH试纸、无菌生理盐水等。
3. 实验仪器：培养箱、恒温培养箱、电子天平、移液器、显微镜、培养皿、锥形瓶、滴管等。
三、实验方法1. 菌株活化：将保存的菌株在适宜的培养基上培养24小时，备用。
2. 制备菌悬液：用无菌生理盐水将菌株稀释至适宜浓度，备用。
3. 制备抗生素溶液：分别将青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素粉末用无菌生理盐水溶解，配制成一定浓度的抗生素溶液。
4. 制备琼脂平板：将牛肉膏、蛋白胨、琼脂和蒸馏水按比例混合，加热溶解，冷却至50℃左右，加入一定量的抗生素溶液，搅拌均匀，倒入培养皿中，待凝固。
5. 涂布菌悬液：用无菌棉签将菌悬液均匀涂布在琼脂平板表面。
6. 抑菌实验：将涂布好菌悬液的琼脂平板放入培养箱中，分别加入青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素纸片，培养24小时。
7. 观察结果：观察平板上的抑菌圈直径，记录数据。
四、实验结果1. 青霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：15mm、10mm和8mm。
2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：10mm、8mm和6mm。
3. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：12mm、9mm和7mm。
4. 氯霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌圈直径分别为：18mm、15mm和13mm。
五、实验结论1. 青霉素、氨苄西林、头孢克洛和氯霉素均具有较好的抑菌效果。
2. 氯霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肺炎克雷伯菌的抑菌效果最好，其次是青霉素、头孢克洛和氨苄西林。
抑菌实验实训报告
一、实验目的1. 了解抑菌实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用抑菌剂的抑菌效果。
3. 培养实验操作技能，提高对微生物学实验的实践能力。
二、实验原理抑菌实验是通过测定抑菌剂对微生物的生长抑制情况，来评价其抑菌效果的方法。
实验中，抑菌剂与微生物接触，通过干扰微生物的代谢过程或破坏其细胞结构，从而抑制其生长。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抑菌剂：苯酚、酒精、氯霉素等。
3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
4. 实验仪器：无菌培养皿、无菌移液器、无菌接种环、酒精灯等。
四、实验方法1. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时，制成菌悬液。
2. 取无菌培养皿若干，分别加入适量的牛肉膏蛋白胨培养基。
3. 在每个培养皿中央加入适量的抑菌剂，用无菌移液器均匀涂抹。
4. 将菌悬液用无菌接种环取适量，均匀涂布于每个培养皿的抑菌剂周围。
5. 将培养皿倒置，37℃培养24小时。
6. 观察并记录抑菌圈的大小。
五、实验结果1. 苯酚：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.5cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为2.0cm。
2. 酒精：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为1.0cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为1.5cm。
3. 氯霉素：金黄色葡萄球菌抑菌圈直径约为2.5cm，大肠杆菌抑菌圈直径约为3.0cm。
六、实验分析1. 苯酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用，但效果不如氯霉素。
2. 酒精对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱，而对大肠杆菌的抑制作用较好。
3. 氯霉素对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑制作用。
七、实验讨论1. 抑菌实验是微生物学实验中的重要内容，通过实验可以了解不同抑菌剂的抑菌效果，为临床用药和食品加工等提供参考。
2. 实验过程中，无菌操作至关重要，否则会导致实验结果不准确。
3. 本实验结果表明，氯霉素是一种高效的抑菌剂，在临床用药和食品加工等领域具有广泛的应用前景。
八、实验总结本次抑菌实验实训，使我对抑菌实验的基本原理和方法有了更深入的了解，提高了我的实验操作技能。
抑菌试验方案
利用吸附法测定壳聚糖无纺布抑菌性能试验方案一、实验原理：本实验参考了国标GB/T20944方法，根据我们的材料特性进行了微调。
即：选取革兰氏阴性菌（大肠杆菌（25922））和革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌（25923））两类代表性指示微生物。
将测试材料浸泡在活化好的菌悬液（浓度控制为107CFU/ml）中，设置不同处理时间，稀释涂布，平板单菌落计数，计算无纺布材料的抑菌性能。
二、实验方法：2.1试验菌种的活化1）冻干粉接种至大豆蛋白肉汤(TSB)培养基，37℃培养24h。
一部分用于抑菌试验，另一部分用于划线接种至斜面或平皿冷藏保藏（可保藏1个月）。
2）培养液稀释。
活化好的菌悬液用稀释液稀释20倍，取1ml培养液添加到19ml稀释液（应提前灭菌）中。
3）式样预处理。
大小合适的试样饱和吸水，灭菌处理。
（周教授负责）4）菌悬液洗涤。
将稀释好的菌悬液转移到试样中，分别震荡15min 和30min，为防止微生物传代，影响试验结果，立即放入冰箱冷藏。
5）洗涤液梯度稀释。
处理后的洗涤液立即梯度稀释到10-1, 10-2,10-3,10-4和10-5。
具体方法：取1ml洗涤原液加入9ml稀释液此时为10-1梯度；取1ml稀释后的10-1菌液加入到9ml稀释液，此时为10-2梯度；······。
6）涂布。
分别取10-3,10-4和10-5的稀释液200ul涂布到平板（计数培养基，简称EA），每个处理做2个平行，37℃，培养24-48h，计数。
7）抑菌效果评价。
参照GB/T20944。
三、试验简易流程注：如果活化后的菌液浓度较高，可取10-4、10-5和10-6梯度稀释液涂布。
四：所需准备耗材：1、大豆蛋白液体培养基（7.1，TSB）250ml培养瓶装100ml 3瓶，2瓶分别接种，1瓶备用；2、大豆蛋白固体培养基,（7.2，TSA）250ml培养瓶装100ml 1瓶，到平板后用于菌种保藏；3、稀释液（7.5）15或18ml试管装9ml 50支，42支稀释，8支备用；4、计数固体培养基（7.6，EA）250ml培养瓶装160ml 6瓶，准备50皿。
抑菌试验
5. 摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津 杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。
6.加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药 液或待检样品。
7. 孵育：加满后在37 ℃培养16~18 h。
8. 结果报告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参 考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介 （I）、耐药（R）报
一、实验原理
抗生素浓度越高，抑菌圈越大。 在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌
物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的 最低抑菌浓度（MIC） 。 抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
二、实验材料
培养基： 牛肉膏蛋白胨固体培养基 菌种：
注意事项
在超净工作台中或酒精灯旁操作 平板倒好，一定要平 牛津杯立直，才能保证杯内抑菌物质均匀
的向四周扩散 牛津杯均匀摆放于培养基上，位置安排适
中，防止出现抑制圈重叠，可在平皿中央 摆一个，外周等距离摆5－6个。
思考题
青霉素、头孢菌素类药物的抗菌机制如何？
药敏试验
抗菌药物敏感性试验，简称药敏试验，是 指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验， 测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制 作用，以指导选择治疗药物和了解区域内 常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治 疗选药
大肠杆菌（E.coli) 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus) 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) 药品：阿莫西林、黄芪多糖、 其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、 移液枪、 1mL、200uL 枪头、 恒温培养箱、 超净工 作台、接种环
体外抑菌实验方案
体外抑菌实验方案一、实验目的1.探究不同抑菌剂对特定细菌的抑制效果。
2.优化抑菌剂的配方，提高抑菌效率。
3.为临床应用提供理论依据。
二、实验材料1.实验菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等。
2.抑菌剂：酒精、碘伏、过氧化氢等。
3.实验器材：培养皿、移液器、酒精灯、生物安全柜等。
三、实验方法1.菌株活化：将实验菌株从冻存管中取出，接种至斜面培养基，37℃培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.抑菌剂配制：按照实验设计，配制不同浓度和配比的抑菌剂。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，置于37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
四、实验步骤1.活化菌株：从冰箱取出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等菌株，接种至斜面培养基，放入37℃培养箱培养24小时。
2.制备菌液：将活化后的菌株用无菌生理盐水洗涤，调整菌液浓度为10^6CFU/mL。
3.配制抑菌剂：按照实验设计，配制酒精、碘伏、过氧化氢等抑菌剂的不同浓度和配比。
4.抑菌实验：在生物安全柜中，将菌液均匀涂布于培养皿，加入不同抑菌剂，放入37℃培养箱培养24小时。
5.观察结果：观察各培养皿中细菌生长情况，记录抑菌效果。
6.数据处理：统计分析各抑菌剂的抑菌效果，计算抑菌率。
五、实验结果1.不同抑菌剂对金黄色葡萄球菌的抑制效果：酒精浓度为75%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；碘伏浓度为5%时，抑菌率为99.95%。
2.不同抑菌剂对大肠杆菌的抑制效果：过氧化氢浓度为3%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；酒精浓度为75%时，抑菌率为99.90%。
3.不同抑菌剂对白色念珠菌的抑制效果：碘伏浓度为5%时，抑菌效果最佳，抑菌率为99.99%；过氧化氢浓度为3%时，抑菌率为99.95%。
抑菌活性实验方案
八宝景天抑菌活性实验方案1 材料与仪器1.1 材料八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。
1.2 微生物真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。
番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。
1.3 试剂与仪器95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司马铃薯JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂超净工作台上海生物科技有限公司1.4 培养基的制备真菌都用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖20g琼脂20g水1000mL pH值自然培养基具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管或锥形瓶中。
抑菌实验方案
抑菌实验方案抑菌实验方案一、菌种大肠杆菌ATCC25922 金黄色葡萄球菌ATCC6538二、培养基LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠10g/L、琼脂15~20g，用10mol/LNaOH调pH，范围7.0~7.4倒平板（平板培养基）1.将培养皿洗净、干燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特制铁罐内，注明皿盖的方向。
高压灭菌或干燥灭菌后备用。
2.取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝，至瓶口刚好伸入。
三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。
有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。
为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。
一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用三、器械培养皿（90mm）、滤纸、三角耙、接种环、试管四、实验步骤（一）、抑菌圈的测定(滤纸片法)1、菌种接种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌反复转种2次，使菌种新鲜，置30℃恒温培养箱培养1d，备用。
2、菌悬液制备在超净台里将转接后生长良好的菌种试管斜面注入适量无菌水(约5mL)，接种环轻刮菌落，摇晃混匀。
3、涂布在超净台里用枪取0.1ml菌悬液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均匀，每种菌设置两个重复平板4、贴片在超净台里将平板平均分为6个区，对角设置平行组，同时用无菌水做对照组,硫酸链霉素(10U)作阳性对照。
每两张滤纸片(直径1.1cm或0.6cm)为一贴，用镊子夹着滤纸片在样品中轻轻蘸一下后，取出贴在平板的指定位置，轻摁一下使滤纸片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。
抑菌试验预习方案
抑菌试验1 定义抑菌试验，用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验抑菌活性的研究实验方案。
实验方法1. 纸片法（抑菌圈法）将测定菌株接种到培养基中，置37度条件下培养6-24小时，取出备用。
再用无菌吸管吸取上述培养液0.1ml，再用三角刮刀将菌液涂匀。
待培养基表面稍干后，用无菌小镊子分别取出所需的药敏纸片均匀地贴在培养基的表面，轻轻压平，各纸片间应有一定距离，并分别做上标记。
将培养皿置37度恒温箱内培养18-24小时后，测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。
2. 挖孔法（1）在平板上打孔，然后将药液滴入孔内，用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，依次划线，自至细菌均匀密布于平皿（将测定菌株接种到培养皿中，置37度条件下培养18-24小时，用灭菌的棉拭子将带将细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀）。
（2）以无菌操作将灭菌的不锈钢小管，（外径4mm，孔径与孔距均为3mm，管的两端要光滑，也可用玻璃管和瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（3）加样时，按不同药液加样，用无菌滴管将样品加至满而不溢为止。
3. 牛津杯法（1）双碟的制备方法：将灭菌培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。
吸取待测菌株的菌液1-5ml与100ml冷至45度的培养基混匀，然后分别每一平皿加入5ml。
并均匀摊布在具有底层培养基的平皿内。
（2）待培养基凝固后，在每碟中均匀立放小钢管（及牛津杯）4个，用陶瓦盖覆盖。
（3）将下列实验药液分别加入小钢管中，置37度培养18-24小时，量取抑菌圈大小，判定抗菌药物抑菌作用的强弱。
乳酸菌的抑菌实验1产抑菌活性物质乳酸菌的初筛采用纸片法。
将培养好的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌培养液 OD 600分别调整到 0.17、0.19、0.10，各取 100μL 接种于 LB 固体培养基，涂布均匀，固定1h。
抑菌性能考察实验方案
纳米材料抑菌性能实验方案纳米银和纳米金的抑菌作用是其环境效应表现的一部分。
本研究将对生物合成的银和金纳米颗粒进行详细的抑菌能力性能测试。
本实验拟采用革兰氏阴性菌大肠杆菌（Escherichia coli）和革兰氏阳性菌金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为模型菌进行抗菌实验。
实验采用通用的扩散法进行测定。
固体培养基组成（或LB培养基）：1L去离子水中加入蛋白胨5g，酵母提取物2g，氯化钠5g，牛肉膏1g，琼脂15g。
抑菌性能考察实验方案（1琼脂纸片扩散法，又称琼脂扩散法）取100µL细菌培养液（104cell/mL）平铺在固体培养基上，取新鲜合成的纳米颗粒50µL滴加在直径为5.5mm的圆形滤纸上，并放入固体培养基表面。
没有加入硝酸银进行纳米银合成的植物提取液作为空白样品同样进行抗菌实验。
样品最开始被放在4°C条件下进行扩散，然后在37°C条件下培养24h。
同时，采用广谱抗菌剂-庆大霉素或链霉素进行阳性实验对照。
根据抑菌圈的大小对抑菌效果进行评价。
图1 琼脂纸片扩散法抑菌性能考察实验方案（1琼脂井化扩散法，又称琼脂打孔扩散法）取1mL新鲜细菌培养液（细菌浓度为1×107 CFU）16-18h细菌培养液（刚过对数增长期）平铺在琼脂培养皿上。
自然干燥5min以后，使用无菌打孔器在琼脂板上开凿直径约5mm的孔，每个培养皿开凿4个孔，分别位于培养皿对称四个角上，如图所示。
然后用移液枪分别向各孔中滴加50µL不同浓度的提取液和生物合成纳米颗粒胶体溶液。
然后，将培养皿在37°C下培养24h。
在实验过程中，采用链霉素或庆大霉素作为阳性对照实验。
经过培养以后，细菌的生长抑制可以通过测定井化抑菌圈尺寸来进行考察。
实验需要平行三组样品。
图2 琼脂井化抑菌实验图3.6. Silver nanoparticle immobilization on cloth and disk diffusion studiesThe cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles did not show much difference in texture, wherea the cloth immobilized with PVDF containing silver nanoparticles turned slightly rigid. This change in texture is due to PVDF occupying the interface area of the fiber and forming a membrane-like structure upon drying. PVDF was selected based on its hydrophobic property, stability at wider range of temperatures and inertness to many chemicals. Fig. 5 shows the disk diffusion studies at various concentrations of silver nanoparticles. The cloth sprayed with sterile water and PVDF devoid of silver nanoparticles served as controls for respective plates. There was totally no inhibition by the cloth sprayed with only sterile water, whereas cloth sprayed with only PVDF showed mild inhibition of bacterial growth. From the Fig. 6, it was clear that increase in silver nanoparticle concentration increased the inhibition zone area on the plate, which directly represents the increase in toxicity. The cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles showed larger inhibition zone than cloth immobilized with PVDF. This may be attributed to the free availability of the silver nanoparticles in cloth immobilized with sterile water. In cloth immobilized with PVDF, a coat of the polymer might slightly inhibit the availability of the silver nanoparticles and thereby its toxicity. But the inhibition zone around the cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles decreased vastly in consecutive cyclesafter washing compared to cloth immobilized with PVDF (Fig. 6). The purpose of using PVDF in the present study is to bind the silver nanoparticles to the cotton cloth, which will decrease the loss of the silver nanoparticles in consecutive washing. Thus as expected the loss of silver nanoparticles was lesser in cloth immobilized with PVDF compared to cloth immobilized with sterile water. In case of the cloth immobilized with sterile water containing silver nanoparticles,Fig. 5. Image of Petri plates showing the growth inhibition of E. coli by (A) cloth immobilized with silver nanoparticles using sterile water and (B) cloth immobilized with silver nanoparticles using PVDF.Fig. 6. Growth inhibition of E. coli in consecutive cycles by (A) cloth immobilized with silver nanoparticles using sterile water and (B) clothimmobilized with silver nanoparticles using PVDF.。
抑菌试验方法
抑菌试验方法一、引言抑菌试验是一种常用的实验方法，用于评估不同物质对微生物生长的影响。
该试验可用于评估抗菌剂的效果、食品、药品和化妆品的微生物安全性，以及环境中抗菌材料的性能等。
本文将介绍抑菌试验的一般步骤和常用方法。
二、试验步骤1. 试验前准备在进行抑菌试验前，首先要准备好所需的试验材料和设备。
包括培养基、试验物质、细菌菌株、培养皿、试管、移液器等。
同时，要保持实验环境的清洁和无菌。
2. 菌种培养选择合适的细菌菌株，将其接种到含有适当培养基的试管中，并在37℃恒温培养箱中培养过夜，使其达到指定的细菌浓度。
3. 制备菌液将过夜培养的菌株转移到新的培养基中，通过菌液稀释法，制备出所需的菌液浓度。
菌液的浓度应根据试验要求进行调整。
4. 试验组装将试验物质分别添加到培养基或培养皿中，使其与菌液充分接触。
同时，设置对照组，用无抑菌物质的培养基或培养皿进行对照。
5. 培养条件将试验组和对照组置于适当的培养条件下，如温度、湿度等。
根据不同的试验要求，可选择不同的培养时间和培养条件。
6. 菌落计数在培养结束后，使用显微镜或肉眼观察试验组和对照组的菌落情况，并进行菌落计数。
菌落计数可通过平板计数法或滴定法进行。
7. 数据分析根据菌落计数结果，对试验组的抑菌效果进行评估。
常用的评估指标包括菌落形成率、抑菌率、最小抑菌浓度等。
三、常用方法1. 纸片扩散法该方法常用于评估固体试样的抑菌效果。
将试验物质涂布于纸片上，然后将纸片放置在含菌液的培养基表面上，通过观察菌落的生长情况来评估抑菌效果。
2. 悬浮液法该方法常用于评估液体试样的抑菌效果。
将试验物质与菌液混合，通过培养一定时间后，观察菌液的浑浊度或使用菌落计数法来评估抑菌效果。
3. 筛选法该方法常用于筛选具有抑菌活性的试验物质。
将试验物质与菌液混合后，通过培养一定时间后，观察菌落情况，筛选出对菌株有明显抑制作用的试验物质。
4. 斑点法该方法常用于评估试验物质对特定细菌菌株的抑菌效果。
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八宝景天抑菌活性实验方案
1 材料与仪器
1.1 材料
八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。
1.2 微生物
真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。
番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。
1.3 试剂与仪器
95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司
葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司
琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司
马铃薯
JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司
JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂
RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂
SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂
TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司
生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂
ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司
KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司
不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂
超净工作台上海生物科技有限公司
1.4 培养基的制备
真菌都用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)
马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖20g琼脂20g水1000mL pH值自然
培养基具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管或锥形瓶中。
分装后121℃灭菌20min。
2 试验方法
2.1植物提取液的制备
准确称取100 g的样品，于250 ml锥形瓶中，加入200 ml 95%的乙醇，室温下，超声提取45 min，连续提取3次，过滤粗提物，离心（3500 r/min,20 min），过滤除杂，滤液用旋转蒸发仪浓缩至干，4 ℃冰箱中保存备用。
2.2八宝景天（茎、叶、花）提取物抑菌活性的测定
抑菌试验样品的准备：称取一定量的提取物，用20%（体积分数）乙醇将植物提取物配制成质量浓度为10 g/ml的供试药液做抑菌试验用。
菌的活化培养：供试真菌从4 ℃冰箱取出，接种于具有马铃薯葡萄糖琼脂培养基的培养皿中，于28℃下活化培养，待菌丝长满整个培养皿的80%时备用。
菌悬液的制备：取一定量已活化的供试菌于装有50mL的液体PDA培养基的锥形瓶中，制成菌悬液于28℃下培养48h，用无菌的移液管取1.0mL培养好的菌悬液于试管中，加入9.0mL的无菌水依次梯度稀释，每稀释一个试管，浓度降低10-1，用稀释培养基测数法测菌体个数，调至浓度为6.8×106CFU/mL（指每毫升样品中含有的细菌群落总数）。
八宝景天（茎、叶、花）提取物抑菌活性的测定采用菌丝生长速率法、稀释培养基测数法。
2.2.1菌丝生长速率法
又称抑菌圈法或琼脂平板法。
生长速率是指将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来
判断药剂毒力大小的方法，以一定的时间内菌落直径的大小来表示。
菌丝生长速率法试验步骤：1）制备带毒培养基平面准确的吸取一定量的上述植物提取物加入到已融化的培养基中，混合均匀倒入已灭菌的培养皿内，冷却后即成带毒的培养基平面2）接种病原菌用无菌打空器将已活化的菌制成直径为6mm的菌饼，用无菌镊子将菌饼接入平板中央，每培养皿放置1 个菌饼，置于25 ℃~28 ℃的电热恒温培养箱黑暗培养。
3）结果采用十字交叉法测定菌落直径,按以下公式计算抑制率：
抑制率=[(CK菌落直径-0.6)-(处理菌落直径-0.6)]/(CK菌落直径-0.6)×100% 2.2.2稀释培养基测数法
根据微生物在高度稀释条件下，固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的技术方法，即一个菌落代表一个单细胞。
稀释培养基测数法试验步骤如下：1）稀释培养基测数法(最大或然数计数法Most probable number，MPN)测定每毫升原培养液含活菌数，根据MPN所得结果将原培养液稀释成约100CFU/mL；2）吸取20μL菌悬液于含提取物的固体培养基的平板中，用涂菌棒涂布均匀静置15 min，将培养基平板倒置(防止皿盖冷凝水下滴)于28℃生化培养箱培养24 h；3）数菌落数，对照组菌落数记为C0，涂布提取物平板菌落数记为C，按下式计算抑制率：
萌发率=萌发率= 孢子萌发数/ 检查孢子总数=C/C0×100%
抑制率(%)=(对照萌发率- 处理萌发率)/ 对照萌发率=(C0-C)/C0×100%
以上每种试验方法重复三次。