酶联免疫技术的发展与进展

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免疫分析技术的发展历史
1896年，Herbert发明特异性凝集现象,Widal发明Widal试验诊断 伤寒; 1897年，Kmus发现鼠疫杆菌的培养滤液能与相应抗血清发生沉淀 反应； 1898年, Kraus 发明沉淀试验 1899年，Bordet发现免疫溶血反应 1900年，Landsteiner在特异血凝现象的基础上发现了人类ABO血 型，1930 年获得诺贝尔生理学和医学奖。 1902年，Ascoli 建立了环状沉淀试验 1905年，Bechhold 建立了明胶沉淀试验 1906年，Wassermann发明梅毒7
免疫分析技术的发展历史
1935年，Heidelberger，纯化抗体技术，定量沉淀反应 1942年，Coons建立了荧光素标记技术 1946年，Oudin建立了试管单向免疫扩散试验 1951年，Ouchterlony建立了双向平板法双向免疫扩散试验 1953年，Grabar建立了免疫电泳 1953年，Crabar与Williams建立补体结合技术 1959年，Singer首创免疫电镜技术 1960年，Yalow建立了放射免疫标记测定技术
克隆选择学说(clonal
selection hypothesis)的基本观点：
1.机体内存在有能识别多种抗原的细胞系（clone），其细 胞表面有识别抗原的特异性受体（recepter)。 2.抗原进入机体后，选择具有相应受体的免疫细胞与之结合 ，使该细胞系活化、增殖，并成为抗体产生细胞和记忆细胞。 3.若在胚胎期，某抗原选择相应克隆接触后，该细胞系就被 排除或失去活性，处于抑制状态，称此为禁忌克隆（forbidden clone），使机体失去针对该抗原的反应性，形成免疫耐受。解 释了天然免疫耐受现象。 4.某些克隆可发生突变，而与自身组织发生反应，形成自身 免疫应答。 1960年，Burnet和Medawar获诺贝尔奖。
二、免疫分析技术的种类
分为两大类别：细胞免疫测定技术和 体液免疫测定技术。 体液免疫技术又可分为体内法和体外 法。体外法即体外抗原抗体反应，包括抗 原、抗体、补体以及其他有关因素的定量、 半定量或定性测定方法，旧称血清学反应； 体内法则利用皮肤试验进行检测。 细胞免疫测定也可以分为体外法和体 内法两类。
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一、免疫分析的发展历史
免疫学发展简史
开创阶段：公元10～18世纪，天花痘痂预防开花。 兴起阶段：公元18世纪～20世纪中叶，牛痘苗预防天花，发 现细菌，建立感染免疫，细胞免疫和体液免疫学 说，变态反应，免疫化学。 飞跃阶段：从1908年埃利希提出侧链学说开始，对免记忆、 免疫识别，免疫耐受、自身免疫、免疫移植等。 现代阶段：从1957年开始，各种新型免疫分析技术、免疫学 说、理论、临床应用、疾病诊治等取得重大进展。

鸡法氏囊及哺乳动物胸腺的免疫功能的认识 淋巴细胞免疫功能的确认


巨噬细胞抗原提呈作用的揭示
细胞因子的研究 免疫网络学说 单克隆抗体制备技术的问世 免疫学技术的发展（单克隆抗体标记技术、免疫转印技术、 分子杂交技术、转基因技术、细胞融合技术等）。
20世纪获得诺贝尔医学生理学奖的免疫学家
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9、免疫组织化学
又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的 特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应 和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、 定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应 的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来， 借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的 显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各 种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病 原体以及受体等)。
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免疫分析技术的发展历史
1965年，Mancini建立了平板单向免疫扩散试验 1971年，Engvall 和 Perlmann，Van Weeman 和 Schuurs 建立了酶标记的固相免疫测定技术 （ELISA） 1971年，Rubenstein等建立了均相酶免疫测定技术 1975年，Koher和 Milstein，杂交瘤技术制备单克隆抗 体 1980年，Tonegawa，免疫球蛋白基因结构
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1、免疫沉淀技术
包括液体内沉淀试验、凝胶内沉淀试 验、免疫电泳、免疫比浊等。其中在经典 的免疫电泳技术基础上，又衍生出对流免 疫电泳、火箭免疫电泳、交叉免疫电泳、 免疫固定电泳等许多新技术和新方法出现。 免疫浊度法则可以分为免疫透射浊度、免 疫乳胶浊度和免疫速率浊度测定法等。
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免疫发展历史中的重要发现和发明及人物
根据所用的技术和方法，免疫学的发展历史可分 为三个时期：
一、免疫学的经验时期（17世纪-19世纪）
1.用人痘苗接种预防天花。（中国民间） 2.接种牛痘苗预防天花。 Jenner
二、经典免疫学时期（19世纪中叶-20世纪中叶）
三.近代免疫学和现代免疫学时期 （ 20 世纪中叶—现在）
特异性细胞的免疫功能、天然和获得性免疫耐受现象、抗 体生成克隆学说、细胞克隆选择学说（clonal selection） * Burnet（1957年）提出克隆选择学说； * 从器官、细胞和分子水平探讨免疫系统结构与功能。
MacFarlane Burnet（1899-1985）
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3、放射免疫技术
放射免疫测定法是以放射性同位素作为标记物的标记 免疫测定方法，一般可以分为三种类型： 1、以同位素标记抗原和受检测标本中的抗原与抗体 竞争结合的经典放射免疫测定法，RIA。 2、以同位素标记的抗体与受检标本中的抗原结合， 然后用固相抗原分离游离的标记抗体的免疫放射测定， IRMA。 3、以同位素标记的抗原或抗体及固相的抗原或抗体 作为试剂，按固相酶免疫疫测定相似的方式检测受检标本 中的抗原或抗体的固相放射测定，SPRIA。
酶联免疫技术的发展与进展
何 林
内 容
一、免疫分析的发展历史 二、免疫分析技术的种类 三、酶联免疫分析技术的发展历史 四、酶联免疫分析技术的应用 五、酶免疫分析技术的类型 六、酶联免疫分析技术的设备 七、酶联免疫分析技术的材料及物品 八、酶联免疫分析技术的未来发展 九、科乐士全自动酶免疫分析系统的特点 十、科乐士产品的市场推广视角与辩点
是以胶体金标记物标记抗原或抗体， 对样本中相应抗体或抗原进行检测。 检测方法包括组织细胞染色、层析、 斑点，均为非均相检测法。未来可能发展 均相检测法。
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7、补体结合试验
利用特异性抗体对红细胞的溶血作用需要 补体参与而建立起来的一类检测方法。主要包 括补体结合反应和细胞溶解反应。 这类检测参与的反应物质有5种成分：已 知抗原或抗体，待测抗体或抗原，溶血素、补 体、红细胞。其中后起3种成份又称为指示系 统。发生溶血反应为试验阴性，不发生溶血反 应为试验阳性。
Robert Koch (1843-1910)
Emil von Behring (1845-1917)
发现细胞吞 噬作用，提 出细胞免疫 理论
提出体液免 疫理论和抗 体生成的侧 链学说
Eli Metchnikoff (1845-1916)
Paul Ehrilich (1854-1915)
实际上，与此同时，人们也发现除了微生物之外的其 它物质也能引起免疫现象，过敏现象有了进一步认识，如 血型不符的输血、器官移植排斥反应、血清病等； Koch在发现了结核杆菌之后，试图用注射的方法使动物产 生免疫，但注射局部却出现了组织损伤和坏死。 以上事实揭示出两个问题： 第一, 免疫不一定仅仅由微生物引起; 第二, 免疫对机体不一定总是有利的， 也可以是有害 的。 至此，经典的免疫概念被动摇了，那么，免疫究竟是 机体防御微生物侵袭的特有成分？还是机体识别“自己” 和“非己”的普遍生物学现象？这个问题必须有一个明确 的答案。
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4、免疫荧光技术
分为免疫组织化学技术与免疫测定两大类。 免疫荧光测定分均相与非均相。非均相荧光免 疫测定与ELISA极为相似，差别仅为标记物和 测定方式不同。而均相荧光免疫测定则有其特 点，常用方式为时间分辨荧光法和均相荧光免 疫测定。 荧光免疫组织化学技术则与组织化学染色 技术相似，最后用荧光显微镜判断结果。
免疫学与微生物学互相促进、共同发展
* 多种病原菌被发现； * “病原菌致病”概念的提出； * 疫苗的发明； * 细胞吞噬作用的发现（细胞免疫）；
* 免疫血清具有抵御病原菌的作用（体液免疫）；
* 免疫化学研究取得重大进展； * 初步认识多种免疫学现象的本质。
发现结核杆 菌；提出病 原菌致病的 概念
发现抗毒素 并治愈一名 白喉患者
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8、中和试验
是用以测定抗体的中和能力的试验， 即中某种抗原或中和携带该抗原的微生物 的如病毒感染性或细菌毒素的生物学效应 能力的试验。其可以中和该抗原的生物学 效应之外，也可以用于疾病诊断或病毒鉴 定。 该试验检测的是中和指数，目前较少 应用。
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免疫技术发展的发展进程
自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性
半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了 反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
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2、免疫凝集技术
括血凝、胶凝、菌凝、碳凝等微粒技 术。其中磁性微粒(magnetic microspheres, MMS) 是80年代初，用高分子材料和金属离 子为原料，聚合而成的一种以金属离子为 核心，外层均匀地包裹高分子聚合体的固 相微粒。在液相中，受外加磁场的吸引作 用，MMS可快速沉降而自行分离，无需进 行离心沉淀。因此，将MMS应用于免疫检 测，可使操作过程大为简化。