免疫抑制模型
钙调磷酸酶类免疫抑制剂大鼠模型尿液中尿酸、肌酐及葡萄糖的变化
钙 调 磷 酸 酶 类免 疫 抑 制剂 大 鼠模 型 尿 液 中 尿酸、 肌 酐及 葡 萄 糖 的变 化
何绿茵 ， 陈林强 ， 陈业辉 ， 仉 智 ， 林华欣 ， 李淼沅 ， 徐邦牢
（ １ ．广州 市第 一人 民 医院检验 科 广东省 临床 分子 医学及 分子 诊断 重点 实验室 ， 广东 广州 ５ １ ０ １ ８ ０ ，
２ ０ ０ ９ ， ３ ２ （ ６ ） ： ６ ０ ９ － ６ １ １ ．
价值 的尿有形成分分析仪 ， 在一定程度上可取代
显 微镜观 察 ， 但 仍 不 能完 全 替 代人 工 镜 检 。应 将 沉渣 法结 果 、 化 学 法 检 测 结 果 联 合 应 用 Ｊ ， 并 结
王延 群 ， 公衍文． Ｕ Ｆ 一 １ ０ ０ ０ ｉ 尿液有 形成分分析仪 、 干
２ ．广州市第一人民医院泌尿外科 ， 广东 广州 ５ １ ０ １ ８ ０ ）
摘要 ： 目的 观察尿量及尿液尿酸（ Ｕ Ａ） 、 肌酐 （ Ｃ ｒ ） 、 葡萄糖 （ Ｇ ｌ ｕ ） 含量在 肾移植术后 首剂治疗 剂量钙调磷 将ｓ Ｄ大 鼠 ２ ４只随机分 为对照组 、 环孢素 Ａ（ Ｃ ｓ Ａ） 组、 他克 莫司
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２ ４ ０・
检验 医学 ２ ０ １ ３年 ３月第 ２ ８卷第 ３期
Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙＭ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｍａ ｒ ｃ ｈ ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ ｌ ２ ８ ．Ｎ ｏ ３
非 晶型盐 类 、 细菌 和类 细菌微 粒 附着 在 黏液丝 、 菌 丝等 物质 上 时 ， 仪 器 易 误 判 为病 理 性 管 型 。 由 于 仪器无 法 辨 别 病 理 管 型 类 型 ， 所以必须对 Ｕ Ｆ 一 ５ ０ ０ ｉ 提 示有 病理 管型 的标本 做镜 检确认 。 Ｕ Ｆ 一 ５ ０ ０ ｉ 在 检测 尿 液 中酵 母 样 菌 和结 晶 的特 异 性较 高 ， 分别 为 ９ ７ ． ４ ％和 ９ ６ ． ５ ％ ， 但 假 阴性 率 也较高 （ ２ ５ ． ４ ％、 ２ ０ ． ６ ％） ， 提示存 在 漏诊 现象。
免疫缺陷动物模型
裸小鼠的发现及其意义
●20世纪60年代后期，裸小鼠作为“活试管”，在肿瘤学、免疫学等 方面很快成为广为关注的研究领域. ●20世纪70年代以来，国际上先后召开了很多届“免疫功能缺陷动物 实验”国际讨论会，以裸小鼠为代表的各类免疫功能缺陷动物引起了 生命科学领域的广泛关注，至今方兴未艾。 ●目前国际上发现和培育了以B细胞功能缺陷为特征，来源于CBA/N小 鼠的Xid小鼠，自然杀伤（NK）细胞功能缺陷的Beige小鼠、巨噬细胞 机能异常的P/J小鼠等各类免疫缺陷动物模型。 免疫缺陷 ●借助生物遗传工程的研究手段，应用基因导入等育种技术，将不同 动物分类 类型的基因异常整合在同一动物体上，人工建立了许多联合免疫功能 联合免疫缺陷动物 缺陷动物（Combined Immunodeficiency Model）。
蛋白 质异 常
慢性肾脏疾病、急慢性消化道疾病， 大面积烧或烫伤时，体内蛋白质可大 量丧失；慢性消耗性疾病时蛋白质消 耗会增加；机体内的蛋白质合成不足。
后天继发性免疫缺陷病
长期 使用 药物
长期使用免疫抑制剂、细胞毒药 物和某些抗生素。
医源性 免疫缺 陷
放射 线损 伤
放射线治疗是一种有效手段，大多数 淋巴细胞对γ射线十分敏感，大剂量放 射性损伤可造成机体永久性免疫缺陷。
非特异 性免疫 缺陷
补体 系统 缺陷
机体内补体成分的组分或它的调控蛋 白发生遗传性缺陷所引起的疾病。
后天继发性免疫缺陷病
许多病毒、细菌、真菌及原虫感 染常可引起机体免疫功能低下。
感染
继发性 免疫缺 陷
恶性 肿瘤
患恶性肿瘤特别是淋巴组织的恶性肿 瘤时，常可进行性抑制患者的免疫功 能。广泛转移的癌症患者中常可出现 明显的细胞免疫与体液免疫功能低下。
实验小鼠针灸实验报告
一、实验背景针灸作为一种传统的中医疗法，在治疗多种疾病方面具有显著疗效。
近年来，随着科学研究的深入，针灸在实验动物模型中的应用逐渐受到关注。
本实验旨在探讨针灸对实验小鼠的免疫调节作用，以期为临床应用提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康昆明种小鼠32只，体重（20±2）g，随机分为空白对照组、模型组、针灸组。
2. 实验仪器：电针治疗仪、电子显微镜、酶标仪等。
3. 实验方法：（1）建立模型：采用环磷酰胺（CTX）诱导小鼠免疫抑制模型。
（2）针灸治疗：对针灸组小鼠进行电针治疗，选取“足三里”、“肾俞”、“肺俞”等穴位，每次治疗30分钟，每日1次，连续治疗7天。
（3）免疫指标检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。
（4）细胞因子检测：采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值。
（5）组织学观察：采用苏木精-伊红（HE）染色法观察小鼠脾脏组织形态学变化。
三、实验结果1. 免疫指标：与空白对照组相比，模型组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著降低（P<0.05）；与模型组相比，针灸组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著升高（P<0.05）。
2. 细胞因子：与空白对照组相比，模型组小鼠脾脏中CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+比值显著降低（P<0.05）；与模型组相比，针灸组小鼠脾脏中CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+比值显著升高（P<0.05）。
3. 组织学观察：与空白对照组相比，模型组小鼠脾脏组织出现淋巴细胞减少、组织结构紊乱等病理变化；与模型组相比，针灸组小鼠脾脏组织病理变化明显减轻。
四、讨论本实验结果表明，针灸可以显著提高实验小鼠的免疫功能，其作用机制可能与以下方面有关：1. 调节细胞因子水平：针灸可上调小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平，这些细胞因子在免疫调节中发挥重要作用，可增强机体免疫功能。
免疫抑制小鼠乳腺癌骨转移模型的构建和评价
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１ ８ ４・
广东 医学
２ ０ １ ４年 １月 第 ３ ５卷第 ２期
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免疫 抑 制 小 鼠乳 腺 癌 骨转 移 模 型 的构 建 和评 价 术
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免疫抑制小鼠侵袭性肺曲霉病动物模型的建立
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这些肿瘤免疫小鼠模型,别说你不知道
这些肿瘤免疫小鼠模型，别说你不知道订阅号APExBIO要说当今社会哪种癌症治疗手段最火热，癌症免疫疗法（Cancer Immunotherapy）当之无愧。
科学家们热衷于从免疫系统着手消灭肿瘤细胞。
自美国詹姆斯·艾利森（James P. Allison）和日本免疫学家本庶佑（Tasuku Honjo）因其开创性的癌症治疗方法获得2018年诺贝尔医学奖后，更是为癌症的免疫治疗增添了热度。
虽说免疫检查点抑制剂、癌症疫苗和细胞治疗等方面取得的成就为患者带来了希望，然而建立可以模拟人类疾病的免疫活性小鼠模型仍是一个重大挑战。
免疫疗法的临床前研究需要具有完整功能免疫系统的体内模型。
当前的临床前免疫治疗小鼠模型包括同源肿瘤模型、基因工程小鼠模型和人源化肿瘤模型，本文将浅谈这几种模型。
一、同源肿瘤模型▲同源肿瘤模型（Syngeneic tumor models）。
利用在体外生长和扩增的鼠肿瘤细胞系，将其注射（通常皮下或原位）到免疫活性（Immune-competent）宿主中。
这是最早出现和最常使用的临床前模型。
同源肿瘤模型是将永生化的小鼠肿瘤细胞系接种到近交品系小鼠中形成的同种移植模型。
肿瘤细胞系可以是自发性的、致癌物诱导的或转基因的。
受体小鼠拥有完整的鼠源免疫系统，具有完全的免疫活性（immuno-competent），且该免疫系统与同种移植肿瘤组织相容。
▲常见的同源肿瘤小鼠模型整理（包括鼠肿瘤细胞系、癌症类型、鼠宿主和使用的药物）同源模型易于建立，且有良好的免疫应答。
可以用免疫检查点抑制剂（例如抗PDL-1，抗PD-1，抗-CTLA-4）等药物来评估荷瘤小鼠中肿瘤免疫疗法的效果。
同源细胞系可以在实验室中轻松培养和大量扩增，这种模型价格低廉，操作起来相当简单且重复性强。
同系模型的另一个优点是宿主的免疫系统是正常的，这可能最大化模拟肿瘤微环境的真实生活情况。
缺点是移植的小鼠组织可能无法完全代表临床情况下人类肿瘤的复杂性。
免疫抑制小鼠肺白念珠菌感染模型的建立
天，给予 各 免 疫 抑 制 组 小 鼠 腹 腔 内 一 次 性 注 射 环 磷 酰 胺 200 mg / kg〔5〕，正常对照组注射同等量的生理盐水，常规饲养。 在免疫抑制前和抑制后的第 2 和第 3 天对小鼠尾静脉采血，瑞姬氏复合染色液染色后，于显微镜下白细胞计数。免疫抑制的 第 4 天开始，鼻滴组接种时，先用 0. 3% 戊巴比妥钠 80 mg / kg 腹腔注射麻醉小鼠后，使其保持直立位，用枪头吸取制备的菌 悬液40 μl缓慢交替滴入小鼠两侧鼻孔，至菌液完全吸收； 雾化 吸入组小鼠则置于自制的密闭雾化箱中，将制备的菌液 20 ml 倒入雾化杯中，调整雾化量，连续雾化吸入至雾化液无残留； 免 疫抑制组和正常对照组不予处理。 1. 2. 4 小鼠一般状态的观察 每日观察小鼠的活动、毛发、状 态及进食情况。 1. 2. 5 肺组织培养及病理学检查 免疫抑制鼻滴组及雾化吸 入组小鼠于连续染菌 8 d 后颈椎脱臼法处死，超净台中取出肺 组织，观察肺脏形态，无菌生理盐水冲洗，取一部分肺组织中加 入无菌生理盐水 200 μl 后匀浆，混匀吸取 30 μl 至沙氏培养基 上涂布培养 48 h 后观察； 剩余肺组织用 10% 甲醛溶液固定，石 蜡包埋切片，HE 染色，行病理学检查。 1. 3 统计学处理 计量数据以 x ± s 表示，用 SPSS19. 0 数据 统计软件进行 t 检验。
·2112·
中国老年学杂志 2012 年 5 月第 32 卷
鼻滴组小鼠接种白念珠菌后活动减少，体重逐渐下降。见图 1。 2. 3 肺组织匀浆培养结果 免疫抑制鼻滴组小鼠肺组织匀浆 在沙氏培养基上可见数十个乳白色、奶油状、边缘整齐的光滑
表 1 环磷酰胺对小鼠白细胞的影响（ × 109 / L，x ± s，n = 10）
环磷酰胺构建动物免疫抑制模型的研究进展
Chinese Journal of Veterinary Medicine中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期环磷酰胺构建动物免疫抑制模型的研究进展伍维高,钟金凤(湖南环境生物职业技术学院,湖南衡阳421005)中图分类号:O571.21+1㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀㊀㊀文章编号:05296005(2019)02008703收稿日期:20180528基金项目:湖南省教育厅项目(16C0563);湖南省科技厅项目(2017JJ5026)作者简介:伍维高(1979-),男,畜牧师,硕士,研究方向为动物繁殖与生产,E-mail:30942422@通讯作者:钟金凤,E-mail:498379002@㊀㊀近几年来,动物疫病肆意流行,免疫接种成为预防传染病的有效措施之一,而免疫反应过程相当复杂,诸多因素会影响接种效果,如免疫抑制性疾病㊁不良的饲养环境㊁微量元素和蛋白质的缺乏等,常导致免疫接种失败,给生产带来不可挽回的重大损失㊂为提高机体抗病力,增强动物免疫力,免疫增强剂得以广泛运用㊂为了进一步研究此类制剂,人为构建免疫抑制模型的研究手段得到了诸多研究者的青睐㊂而环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX),以其诱导动物产生免疫抑制作用效果显著,且成本低廉,越来越广泛地运用到制备动物免疫抑制模型中㊂为此,本文对环磷酰胺构建免疫抑制模型进行综述㊂1㊀环磷酰胺的药理作用经口服或静脉注射的环磷酰胺主要在肝脏进行代谢,生成低毒性的4-羟基环磷酰胺和醛磷酰胺,分布全身,进一步降解为磷酰氮芥㊁丙烯醛和去甲氮芥,结合于快速生长细胞的DNA 上,产生强烈的细胞毒性㊂极少部分可进一步氧化成4-酮环磷酰胺和羧基环磷酰胺,无毒性,随尿排出[1]㊂2㊀CTX 免疫抑制机理2.1㊀环磷酰胺对免疫基因的影响2.1.1㊀抑制抗菌蛋白基因表达㊀内源性抗菌蛋白是天然免疫的重要组成部分,其中杀菌/渗透增强蛋白(Bactericidal /permeability increasing protein,BPI)㊁防御素(Defensins,DF)以及血小板型磷脂酶A 2(Phospholipase A 2,PLA 2)备受关注[2]㊂大鼠连续5d 腹腔注射环磷酰胺40mg /kg㊃bw,对照组注射等体积生理盐水,结果显示,对照组大鼠的睾丸㊁附睾㊁胸腺㊁肝㊁小肠㊁大肠6种器官均表达BPI㊁β-DF-1㊁血小板型PLA 2;而环磷酰胺组胸腺㊁肝无BPI 表达,睾丸㊁胸腺㊁肝无β-DF-1表达,睾丸㊁胸腺无血小板型PLA 2表达,其他有表达的组织中其含量比对照组低[3],试验提示,环磷酰胺可抑制体内抗菌蛋白基因表达㊂2.1.2㊀影响免疫相关基因的表达㊀环磷酰胺对免疫相关基因有一定影响㊂经环磷酰胺处理的荷瘤鼠脾脏㊁骨髓和血浆相关多种免疫调节因子基因上调,包括危险信号㊁模式识别受体㊁炎症介质㊁生长因子㊁细胞因子㊁趋化因子和趋化因子受体[4]㊂通过基因芯片技术检测环磷酰胺干预的胚胎干细胞发现:自体免疫激活和移植排斥相关基因如CD 3㊁CD 28㊁CTLA 4㊁MHC II ㊁PRF 1㊁GZMB 和IL-2R 基因下调,而免疫相关受体基因如IL 1R 2㊁IL 18R 1和FLT 3上调[5]㊂2.2㊀环磷酰胺对动物转录水平的影响2.2.1㊀抑制骨髓细胞相关mRNA 表达㊀环磷酰胺诱导骨髓抑制,造成骨髓细胞(BM)降低㊂雄性昆明种小鼠连续3d 腹腔注射150mg /kg㊃d 环磷酰胺,7d 后采骨髓细胞通过Real time PCR 检测发现,试验组BM 细胞钙敏感受体(Calcium-sensing recep-tor,CaSR)和丝裂素活化蛋白激酶(Mitogen-activa-ted protein kinase,MAPK)mRNA 水平极显著高于对照组(P <0.01),引起BM 造血干细胞㊁间充质干细胞和内皮祖细胞增殖㊁分化和动员产生明显障碍[6]㊂2.2.2㊀调节细胞凋亡相关mRNA 表达㊀环磷酰胺对细胞凋亡的影响主要体现在两方面:增加促凋亡基因mRNA 表达而抑制抗凋亡基因mRNA 表达,从而诱导细胞凋亡㊂SPF 级NIH 雄性小鼠于试验期第9㊁11㊁13天腹腔注射环磷酰胺10mg /kg,于14d㊁28d 取脾脏采用半定量RT-PCR 检测促凋亡基因-Caspase-9mRNA 和抗凋亡基因-B 淋巴细胞基因2(B-cell lymphonma gene 2,BCL-2)的表达,两次结果均显示,模型组Caspase-9mRNA 表达较对照组显著升高而BCL-2mRNA 表达显著降低[7]㊂8~12周远78中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期Chinese Journal of Veterinary Medicine交系昆明种小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,1次/d,连续3d,第10天取小鼠脾脏测定凋亡相关基因,结果显示,BAX(Bcl-2associated X protein)mR-NA表达水平明显上升,而BCL-2mRNA表达明显下降[8]㊂2.2.3㊀降低免疫相关受体mRNA表达㊀环磷酰胺可降低免疫相关受体mRNA的表达㊂树突状细胞相关C-型凝集素-1(Dectin-1)和Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)主要表达在免疫细胞上,为免疫相关受体,与免疫状态有关[9]㊂给予150mg/kg环磷酰胺的BALB/c小鼠与第4㊁7㊁9天取肺组织测定Dectin-1mRNA,结果显示,在第4㊁7天肺组织Dec-tin-1mRNA表达较对照组明显下降(P<0.05)[10]㊂24只昆明种小鼠(雌性)腹腔注射环磷酰胺150 mg/kg,4h后肺泡巨噬细胞TLR2mRNA表达与对照组相比极显著下降(P<0.01);8h后TLR4mR-NA表达极显著降低(P<0.01)[11]㊂2.2.4㊀影响免疫因子mRNA表达㊀环磷酰胺对Th1㊁Th2类细胞因子mRNA表达均有不同程度影响㊂汪祯等[12]用SPF级昆明种小鼠按50mg/kg㊃bw剂量隔日腹腔注射环磷酰胺,共7次,14d后,无菌取脾脏测定IL-2mRNA㊁IL-10mRNA,结果显示, IL-2mRNA㊁IL-10mRNA表达水平与对照组相比显著下降;易有金等[13]腹腔注射40mg/kg㊃d环磷酰胺,结果显示,脾脏和胸腺中IL-2㊁IL-10㊁IL-12㊁IL-4㊁TNF-α和IFN-γmRNA的表达量降低,以上试验提示,环磷酰胺对Th1㊁Th2类细胞因子表达均呈现下调现象[14]㊂2.3㊀环磷酰胺对动物蛋白水平的影响2.3.1㊀抑制细胞周期相关蛋白表达㊀环磷酰胺降低着丝粒蛋白B(Centromere Protein,CenpB),Cen-pB是染色体着丝粒/动粒复合体上一种最重要的功能蛋白,其特异性结合位点位于着丝粒α1-卫星DNA上17bp的CenpB盒,参与着丝粒异染色质的形成,环磷酰胺可致CenpB蛋白含量异常,致细胞无法正常分裂㊂昆明种小鼠连续7d腹腔注射50 mg/kg㊃bw环磷酰胺,5d后取血通过Western Blot-ting方法检测CenpB蛋白,其含量显著低于对照组[15]㊂2.3.2㊀增加细胞凋亡相关蛋白表达㊀环磷酰胺可通过增加细胞凋亡蛋白的表达影响Fas/Fas L系统介导的凋亡蛋白㊂SPF级ICR纯种雄性小鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg㊃bw,用流式细胞术检测Fas 抗原(CD95)介导细胞凋亡的蛋白,其表达量与对照组相比显著升高[16]㊂人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat加入环磷酰胺3mg/L,于12㊁24㊁48h收取细胞,Western Blot检测FasL(Fas ligand,fas配体)和FADD(Floationg Point Addition,胞浆死亡信号衔接蛋白)表达,结果表明,未处理的细胞无FasL和FADD表达,而环磷酰胺处理组表达FasL和FADD,且表达水平随环磷酰胺刺激时间延长而增加[17]㊂除此,环磷酰胺能显著诱导Fas/Fas L下游蛋白Caspases产生[18],使凋亡不可逆进行㊂3 环磷酰胺在动物上的应用因环磷酰胺主要作用于快速生长细胞的DNA,并能从基因转录㊁翻译和蛋白表达等多方面产生细胞毒性㊂免疫细胞属于快速生长细胞,因此,环磷酰胺对免疫系统影响甚大,故可用环磷酰胺作为免疫抑制剂构建免疫抑制模型,这是环磷酰胺在动物上的主要用途㊂3.1㊀环磷酰胺抑制动物免疫器官㊀在环磷酰胺作用下鸡表现出形态退行性改变,包括腔上囊囊泡不发达,即腔上囊初级滤泡严重萎缩,皮质和髓质间隔不明显且滤泡间结缔组织严重增值[19]㊂Marsh J 研究发现,脾脏内正常椭球相关细胞在环磷酰胺作用后1周变为空泡[20]㊂3.2㊀环磷酰胺降低动物免疫细胞数量㊀连续3d 给7~8周龄雌性尼古拉斯火鸡注射环磷酰胺(0~ 100mg/kg㊃bw),测定血液学指标发现,环磷酰胺在初始注射后24~72h引起明显的白细胞减少㊁淋巴细胞减少㊁血小板减少和白细胞减少㊂但对单核细胞循环数㊁细胞体积㊁血浆蛋白无明显影响㊂同时,无法确定对嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的变化,因为它们在机体内的数量微量[21]㊂3.3㊀环磷酰胺减少免疫分子产生㊀研究表明,环磷酰胺可减少免疫分子产生:用80mg/kg㊃bw环磷酰胺腹腔注射小鼠,同位素标记法显示24h和48h其肠道蛋白损失显著高于对照组,连续2d注射环磷酰胺(50mg/kg㊃bw),可造成肠黏膜SIgA损伤,肠道固有层IgA表达量减少[22]㊂环磷酰胺(10mg/ kg㊃bw)与单剂量长春新碱(0.025mg/kg㊃bw,静脉注射)和单剂量的L-天冬酰胺酶(400IU/kg㊃88Chinese Journal of Veterinary Medicine中国兽医杂志㊀2019年(第55卷)第2期bw,静脉注射)同时注射狗,3d后抗体反应受抑制[23]㊂环磷酰胺在抑制免疫系统的同时,其他新陈代谢旺盛的组织如胃肠㊁毛发等亦会受影响,因此,用环磷酰胺造模的同时,动物可出现采食量降低㊁生长性能受阻㊁毛发脱落等现象[24-25]㊂4 小结环磷酰胺主要作用快速生长细胞DNA,并从基因水平㊁转录水平和蛋白水平影响免疫系统,它可下调抗菌蛋白基因㊁免疫相关基因的表达,增加促凋亡基因mRNA和抑制抗凋亡基因mR-NA转录,降低着丝粒蛋白B含量,抑制细胞正常分裂;诱导促凋亡蛋白Caspases产生,促使凋亡不可逆进行,从而广泛引起细胞周期改变㊁诱导细胞凋亡发生,最终表现出免疫器官㊁免疫细胞和免疫分子的现象,可广泛应用在动物免疫抑制模型上㊂参考文献:[1]㊀钟金凤,方热军.环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用[J].中国免疫学杂志,2016,10(32):15411546. [2]㊀Calafat J,Janssen H,Tool A,et al.The bactericidal/permeabili-ty increasing protein(BPI)is present in specific guanules of hu-man eosinophilsl[J].Blood,1998,91(12):44704475. [3]㊀王昕昕,梁宁生,张炜炜,等.环磷酰胺对抗菌蛋白的影响[J].黑龙江科技信息,2014(30):45.[4]㊀Moschella F,Valentini M,AricòE.et al.Unraveling cancer che-moimmunotherapy mechanisms by gene and protein expression pro-filing of responses to cyclophosphamide[J].Cancer Res,2011, 71(10):35283539.[5]㊀El-Serafi I,Abedi-Valugerdi M,PotácováZ,et al.Cyclophosphamidealters the gene expression profile in patients treated with high doses prior to stem cell transplantation[J].PLoS One,2014,9(1):111.[6]㊀徐尚福.人参皂苷Rg1对环磷酰胺诱导骨髓抑制小鼠骨髓功能的改善及机制研究[D].遵义:遵义医学院,2009. 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（immunity）
“Immune”是从拉丁字“immunis”衍生而来，其原意是免除服役 或免除课税之意。 免疫：指机体接触“抗原性异物”或“异己成分”的一种特异性 生理反映，其作用是识别和排除抗原性异物，以此维持机体的生 理平衡。这些维持机体稳定性的反应，通常对机体是有利的；但 在某些条件下也可以是有害的。所以免疫的现代概念可以概括的 指机体识别和排除抗原性异物的功能。
1997年Thomas A. Fey等人再次对该模型进行了优化
实验动物：受体鼠（Balb/c）(10±2)周、体重(20±2)g 、雄性 供心鼠（C57BL/6J ）48小时内 性别不限
手术器械：眼科剪、刀片、缝针、缝线 镊子、培养皿、纱布、棉签
注射器（1ml） 试剂： 10%乌拉坦
1%新洁尔灭酊
Hank’s液 仪器：生理记录仪或心电图机或体显微镜
1、受体鼠经10%乌拉坦(10毫克/10克体重)腹腔注射麻醉
2、1%新洁尔灭酊耳廓局部消毒，剃毛 3、持眼科剪于耳廓背侧中线之前1/3处作一与耳廓中线垂直
处作一3-4毫米长的切口，勿损伤耳廓静脉
4、持镊子向耳尖方向钝性分离皮下组织，使 之成一管腔(见图1)
• BAlb/c小鼠腹腔注射硫代乙醇酸钠 溶液1.5ml，四小时后断颈处死，浸 于75酒精溶液中消毒。向腹腔内注 射消毒Hank’s液约8ml，轻揉小鼠 腹部，剪开小鼠腹部外层皮肤，用
注射器将腹腔液抽出，置于消毒离
心管中。收集的腹腔液经离心 (2000r/min，5min)沉淀后，用 Hank‘s液洗两次，用含10%小牛血 清的RPMI1640培养液重悬制成细 胞悬液 (2 x 106细胞/ml) 。
加100μl细胞悬液于96孔板中（每孔 含5×105个 ）。每孔加25 μl ConA或 LPS （ ConA 浓度 5μg/mlLPS浓度
10 μg/ml）,每孔加10 μl药物（3个 复孔）37℃，5%CO2培养48小时。
结束培养前4小时每孔加5mg/ml MTT 10μl ，1000r/min离心30分钟，弃上清 每空加入DMSO200μl 溶解，振荡， Biorad酶标仪在波长570nm处测OD值。
抑制率：
ConA或LPS对照平均OD 给药组平均OD C o n A 或 L P S 对 照平 均 O D
动物：BAlb/c小鼠
仪器：注射器、96孔板、Biorad酶标仪、表面皿 试剂：Hank’s液、RPMI-1640培养液、3%硫代乙醇酸钠
溶液(1.5ml) 0.1%中性红、细胞溶解液（乙醇：乙酸=1：1）
1、移植术后当天给药，每日给药
2、术后第六日起每天记录移植心肌组织的心电信号
3、测试异位心电图时，正负电极分别置于移 植心脏两侧，接地极连接在小鼠后肢(图2)
动物：小鼠 药品：ConA或LPS MTT 仪器：200目钢网、注射器芯、96孔板、Biorad酶标仪、表面皿 试剂：Hank’s液、RPMI-1640培养液、DMSO、红细胞裂解液
4、将新生供鼠置于碎冰中一分钟后用75%酒精皮肤消毒， 剖胸摘取心脏。将心脏置于无菌Hank’s液内搏动1-2次以 排空心腔余血。
5、移植时，用刀片把供心纵向剖成为基本等大二半，肌纤 维成一斜面。将心肌组织移植填入受体鼠耳腔内，将皮肤 切口缝合一针。（心肌组织的离体时间不超过2分钟）
6、用手指轻按局部，使移植物与受鼠之周围组织贴紧。
免疫抑制剂？
对NK细胞无明显抑制作用，但可间接 通过干扰IFN-γ的产生而影响NK细胞 的活力
——小鼠耳后心肌组织移植模型
——脾淋巴细胞对丝裂原的增殖反应 ——巨噬细胞吞噬试验
1963年Fulmer等人就已经开始研究心肌组织的移植，并对其 进行了深入的研究
1971年Judd和Trentin两人又对模型进行了精处死后，将小鼠全身浸入75％乙醇中浸泡2－ 3分钟消毒，无菌条件下取出脾脏，用注射器芯经200目无 菌不锈钢筛网研磨，过尼龙膜使之成单细胞悬液， Hank‘s 液冲洗，收集分离的脾细胞悬液，1000r/min离心5分钟， 弃上清；加红细胞裂解液10ml，混匀脾细胞，静止4-5分钟， 待红细胞完全破碎，1000r/min离心5分钟，弃上清去除红 细胞，Hank’s液洗2-3遍，用RPMI1640培养液重悬细胞， 计数调整细胞浓度为3×106个/ml。
• 每孔加100μl细胞悬液于96孔板中，每孔加10μl待侧药物（5 个复孔）， 37℃，5%CO2培养24小时，弃去上清液，每空 加入0.1%中性红0.1ml，37 ℃培养30min,弃去中性红，并用 Hank’s液冲洗三次，以除去未被吞噬的中性红。每孔加入细 胞溶解液（乙醇：乙酸=1：1） 100μl ，静置过夜，轻度震 荡后，用Biorad酶标仪在波长540nm处测OD值。
免疫系统中的免疫细胞和免疫分子之间，以及与其它系 统如神经内分泌系统之间的相互作用，使得免疫应答以最恰当 的形式维持在最适当的水平。
免 疫
免疫增强剂
调
节
剂 免疫抑制剂
选择性抑制T细胞，作用于T细胞活化的早期，对B细胞抑制 作用较弱
抑制巨噬细胞产生IL-1
抑制抗原或有丝分裂素激活淋巴细胞 表达IL-2受体
抑制率：细胞悬液对照平均OD 给药组平均OD 细胞悬液对照平均OD