局灶性脑缺血动物模型的制备
线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型的研究

用光化 学法 脑缺 血 模型 比较 了
Sp rague 2 Daw ley及 W ista r - Kyoto 两种大鼠的梗死情 况 。 SD 大鼠可见较恒定的顶颞皮质梗死灶 , 梗死体 积大于 W istar大鼠 , 变异较小 。周边可见不完全性坏 死区 ,即半暗带 ,占总梗死面积的 91 % 。W istar大鼠 梗死灶较小 ,但变异较大 , 不完全坏死区占总损伤区 的 30. 1 % 。考虑到不同大鼠品种的 MCAO 模型效果 有异 ,以 Fischer2344 大鼠的模型效果最为理想 ,主张 多选用 Fischer2344 大鼠进行模型制备 , 但因鼠源问 题 ,目前应用较少 。 SD 大鼠 MCAO 后 , 梗死体积较
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随着当今社会的老龄化 ,人类脑血管病的发病 率日益增加 ,我国每年新发脑卒中病例超过 200 万 , 每年死于脑卒中者约 150万 , 生存的脑卒中患者目前 多达 700 万。其中缺血性脑血管病占 80%以上 大脑中脉闭塞 (MCAO)占血管闭塞的 43%
[2] [1]
可能 ;成 本低 , 来源 有保 障 ; 能 够为 动 物保 护者 接 受 [2 ] 。因此 ,大鼠已经成为目前最常用的局灶性脑缺 血动物模型 。 在不同的大鼠品种之间 , Fische r2344大鼠的大脑 中动脉 (M CA )变异较小 ,MCAO 后形成的脑梗死体积 一致性好 ;而 W istar2Kyoto大鼠的脑梗死体积最小 ,变 异最大 ; Sprague 2 Dawley大鼠的模型效果居于二者之 间 。M arkgraf 等
3
大 ,较恒定 ,且较温和 , 生长快 , 价格便宜 ,故用正常大 鼠进行实验时一般常用 SD 大鼠
[ 6]
小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立与评价

小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立与评价目的建立小鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型并予以评价。
方法将昆明小鼠60只随机分为假手术组30只,I/R模型组30只。
改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(MCAO/R)模型。
通过神经行为学评分、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死比(%)、干湿重法测定脑含水量(%)及HE染色观察脑组织病理改变评价模型可靠性。
结果模型存活率为83.33%,造模总成功率为76.67%。
假手术组的小鼠神经行为学评分为0分,脑梗死比为0,脑含水量(77.29±0.45)%。
I/R模型组的小鼠神经行为学评分为(2.42±0.63)分,脑梗死比为(23.03±3.42)%,脑含水量(83.18±1.65)%,均较假手术组明显增高(P<0.01);病理检查出现典型脑梗死病理改变。
结论改良线栓法成功建立简便、可靠的小鼠局灶性I/R模型。
[Abstract] Objective To establish and evaluate the focal cerebral ischemia-reperfusion (I/R) model in mice. Methods Sixty Kunming mice were randomly divided into the sham group (n=30) and the I/R model group (n=30).The middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model was established by the improved intraluminal filament technique in mice.The reliability of the model was evaluated by the neurologic behavior score,cerebral infarction rate determined by triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining method,brain water content determined by dry-wet method,and brain histopathological change observed. Results The survival rate and total success rate of the model was 83.33% and 76.67%respectively.In the sham group,the neurologic behavior score was 0 point,the cerebral infarction rate was 0,and the brain water content was(77.29±0.45)%.In the I/R group,the neurologic behavior score was(2.42±0.53)points,the cerebral infarction rate was (23.03±3.42)%,and the brain water content was(83.18±2.35)%,and compared with the sham group,the above-mentioned indicators in the I/R model group were all markedly increased (P<0.01).At the same time,the typical pathological change of cerebral infarctionwas also observed in the I/R group. Conclusion The simple and reliable focal cerebral I/R model has been successfully established by improved intraluminal filament technique in mice.[Key words] Mice;Cerebral ischemia-reperfusion;Middle cerebral artery occlusion;Animal model缺血性脑血管病约占全部脑血管病的80%,具有高发病率、高患病率、高死亡率、高致残率、高复发率的特点,已成为严重危害人类健康的三大疾病之一[1]。
大鼠局灶性脑缺血模型的建立

缺 血 侧 , 侧 为 正 常 对 照 。 1 水 合 氯 醛 腹 腔 内 注 射 麻 醉 , 右 用 O 游 离左 侧 颈 总 动脉 ( A) 甲状 腺 上 动脉 及 其 细 小 分 支 , CC , 分
~ 1 者 , 水 肿 不 明 显 。光 镜 观 察 : 组 左 侧 大 脑 皮 层 可 见 分 脑 C
高 , 起 人 们 对 溶 栓 疗 法 的 重 新 认 识 。 目 前 适 用 于 溶 栓 研 有 不 足 之 处 。我 们 采 用 并 改 良 Ov r a r e g a d KⅢ 等 的 颈 内 动 脉 注 入 自体 血 凝 块 的 方 法 , 作 制
大 鼠 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 , 模 型 具 有 与 人 类 脑 缺 血 极 其 相 似 此
的特 点 , 适 用 于溶 栓研 究 , 报 道如 下 。 最 现
1 材 料 与 方 法
散 在 的 小 缺 血 灶 , 经 细 胞 轻 度 肿 胀 , 神 经 元 胞 核 及 胞 浆 神 但
分 为 C 、 C C 、 共 3组 ( : 指 长 度 为 2 m 的 血 栓 栓 子 制 注 C a r
隙 增 大 , 质 间 隙 略 增 大 。缺 血 2 h组 缺 血 区 淡 染 的 同 时 缺 白 4
血 局部 可 见 神经 元 变性 , 固性 坏 死 , 胞 周 围间 隙增 大 , 凝 细 胞 浆 均匀 呈 嗜伊 红 改变 , 核 结构 不清 , 色加 深 。 期 的缺血 胞 染 此 范围最 大 , 显 著 的 改变是 此 期 缺血 组 织 与正 常 组织 的 分界 最 最 清 晰可 辩 , 质疏 松 , 显淡 染 , 大 量空 泡形 成 。 血 4h 白 明 有 缺 8 组 缺 血 中 心 区 可 见 凝 固 性 坏 死 , 经 元 胞 浆 与 胞 核 结 构 不 神
缺血性脑卒中的动物模型完整版

缺血性脑卒中的动物模型HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】缺血性脑卒中研究中的动物模型想要进行一项基础研究,动物模型必不可少。
缺血性脑卒中研究如火如荼,动物模型也多种多样,有哪些常用的动物模型,以及它们各自的特点就成了研究人员在选择模型时十分关注的问题。
在缺血性卒中过程中,最终的梗死体积和神经功能预后受到多种因素的影响,例如缺血的持续时间、缺血的严重程度、侧枝循环、系统的血压以及梗死产生的原因和位置。
此外,年龄、性别和相对复杂的药物遗传背景也会对其产生影响。
因为卒中是如此复杂的一个疾病,因而动物模型也往往只能覆盖其中个别方面的特点。
虽然中风是一种复杂的疾病,但其存在一些共同的特点,这使得我们有机会用实验来模拟卒中的发生。
缺血性脑卒中的一个重要特点是进展,这也解释了缺血半暗带的存在。
当血流量降至基线值的15-20%以下时,只要几分钟就会产生不可逆的脑损伤核心,并且迅速相周围发展。
其周围的脑组织血流减少得相对较轻,所以此时神经功能缺失而组织结构却是完整的。
但如果脑血流不能恢复,那么这些所谓的半暗带组织就会被纳入梗死核心区。
最常用的一种模型是啮齿动物的线拴法大脑中动脉闭塞模型(MCA),方法是将普通的血管内缝线或特制的线拴放入大脑中动脉开口处,从而达到阻塞血管造成血流量减少的目的。
这种方法的优点是:不需要开颅的手术,并且通过拔出线拴的方法还可以达到在特定时间再通血管的目的,虽然瞬间的血管开通与人体一般的病理生理过程相去甚远,但与近来应用越来越广泛的机械取栓治疗的病理过程不谋而合。
因此,虽然在模型的制作上存在一些问题,但仍是目前最广受认可的一种脑卒中动物模型。
另一种常用的方法是用各种方式直接地闭塞血管,分为永久地闭塞血管(如凝断)和暂时闭塞血管(如结扎),但大多都需要开颅的手术操作。
使用内皮素-1(一种强血管收缩剂)可以诱导短暂的局灶性脑缺血,其产生的病灶可以分布于脑组织任何位置,常常被用于制作腔隙性梗死的模型制作。
脑卒中动物模型的建立与比较

Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, Aug. 2011, Vol. 26, No.8
物质对脑梗死的作用,也可以用于抑制血小板集聚及神经保 护药物的研究。还可用于缺血再灌注损伤的研究以及各种 脑保护药物防治效果的评价;Ⅳ型可用于多发性脑梗死及抗 血小板集聚药物的研究,但不利于长期脑缺血模型的研究。 目前应用于临床药物研究的主要是Ⅰ型和Ⅲ型。
光化学法脑缺血模型的优点有:①动物模型的成功率 高,在严格控制实验条件的情况下基本可达 100%,其中Ⅳ型 的死亡率较高;②无需开颅,损伤相对较小且死亡率较其他 模型低;③因损伤的程度与光照的强度程正相关,可通过控 制实验参数任意改变梗死灶的大小、位置和严重程度,且梗 死灶的重复性和稳定性较好;④通过对实验模型的选择,可 用于对缺血再灌注损伤、抗血小板药物及缺血半暗带等的研 究;⑤四种模型从不同方面模拟了人类的脑卒中,需根据实 验目的进行选择。此法适于研究抗血小板、抗血栓形成药物 和血管内皮细胞保护剂的疗效。这种模型无须开颅,动物存 活时间长适于慢性脑缺血研究而且皮质梗死部位可任意选 择,为皮质功能定位研究提供了条件。其缺点是:它与人类 常见的脑栓塞存在差异,而且是终末动脉永久性闭塞,妨碍 扩血管药的治疗观察。 1.4 微栓子栓塞法
780
2011 年,第 26 卷,第 8 期
脑出血模型已被广泛采用。将 SD 大鼠麻醉局部消毒后固定 于脑立体定位仪上,颅骨钻孔,定位右侧尾壳核,颅骨钻孔将 微量注射器针头垂直插入脑组织右侧尾壳核内,用微量注射 器缓注 0.5μl 胶原酶到尾壳核内[29—30]。适用于研究血肿及脑 水肿在脑出血中的作用及评价脑出血后神经功能的恢复状 况和药物的治疗效果。
该模型具有以下优点:①适于做长期的皮质及皮质下结 构的病理观察,同时该模型造成皮质缺血的部位、大小恒定;
非人灵长类动物局灶性脑缺血模型的制备及神经功能评价的研究

[中 图分 类 号 ] R7 3 3 [ 献 标 识 码 ] A [ 章 编 号 ] 1 0 — 7 1 2 0 ) 60 3 一 3 4.1 文 文 0 6 9 7 ( 0 8 O — 5 9O [ 文 著 录 格 式 ] 王 强 , 通 .非 人 灵 长 类 动 物 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 的 制 备 及 神 经 功 能 评 价 的 研 究 E ] 中 国 康 复 理 论 与 实 践 , 本 张 J. 8年 6月第 1 4卷第 6期 C i hblT er rc, u .2 0 ,Vo.1 ,No hnJRe a i h oyP at J n 0 8 1 4 .6
・ 539 ・
・
综述 ・
近 于 人 类 , 大 脑 的 构 筑 、 质 与 灰 质 的 比值 以及 微 血 管 网 络 其 白
的程 度 ( 级 ) 别 是 大 脑 中 动 脉 的 分 布 区 域 与 人 类 相 似 , 且 等 特 而
b lt to e cn ii i n M di i e,Be i n h r t S t l a i i g C a i v HO pia ,Ch n h b lt to sa c e tr,Be J n 0 0 8,C i a i a Re a ii i n Re e r h C n e a ii g 1 0 6 hn
非 人 灵 长 类 动 物 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 的 制 备 及 神 经 功 能 评 价 的 研 究
王 强 , 通 张
[ 要 ] 非 人 灵 长 类 动 物 的 神 经 机 能 和 脑 血 管 解 剖 与 人 类 非 常 相 似 , 用 非 人 灵 长 类 动 物 建 立 的 脑 缺 血 模 型 是 研 究 脑 血 管 疾 摘 利 病 损 伤 机 制 和 防治 措 施 常 用 的 工 具 。笔 者 就 非 人 灵 长 类 动 物 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 制 备 方 法 及 其 神 经 、 为 功 能 的 评 价 方 法 作 一 综 行
大鼠脑缺血模型制作

脑缺血模型分类及制备1.全脑缺血模型一般采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型。
也有人通过结扎双侧颈动脉闭塞配合低氧或放血降压使全脑缺血。
但是全脑缺血模型与人类通常的脑梗死(多为单一血管闭塞)情形不一致, 且不能进行健患侧自身对照所以全脑缺血的动物模型在脑缺血研究中用的较少。
2. 局灶性脑缺血模型2.1.线栓法:大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion,MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉(ECA)及其分支,且阻断翼腭动脉(PPA),以切断颅外来源的侧副循环血流。
从ECA插入尼龙线,经颈内动脉(ICA)到大脑前动脉(ACA),机械性阻断大脑中动脉(MCA)发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线,恢复血流,实现再灌注。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点,用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性,药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想,同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点,适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素,可避免实验结果的不稳定性。
1.0实验动物1.2 SPF级SD大鼠,健康,雄性,体重为250g-300g1.3.建模方法1.4 颈部正中切口,暴露右侧颈总动脉,颈内动脉和颈外动脉。
使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端,在颈外动脉穿入另一根6-0丝线,在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。
在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口,将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入,进入颈内动脉,并向内插入大脑中动脉,尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
4.缺血后90min拔掉线栓,用6-0丝线结扎外动脉近心端,用3-0丝线缝合颈部伤口,活力碘消毒伤口,将大鼠放在加热垫上,待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
局灶性脑缺血及脑缺血再灌注动物模型的制作

放血 处死 , 断头取 脑 。 缺血再 灌 注组 的操 作 是将 扎 活 脑 结 的线端 及栓 子 的另一 端 留置皮 肤外 , 逐层 缝 合切 口。 缺 血持 续 3 i 缓 慢 拔 出栓 子 , 紧 活线 结 , 0r n后 a 收 大脑 中动脉 供血 区即 可得 到前 交通动 脉 、后 交通动 脉 的血 供, 形成 大脑 中动 脉供 血 区的再灌 注状态 , 分别 于再 灌 注 2 , , 4h 2 3d时与 以上操 作相 同 , 处死 大 鼠取 材 。 假手 术组 除 将插 线栓 子插 进 游离 颈 内动 脉 内 1 I , 5I n处 停 n 留 3 i 拨 出 外 , 0r n再 a 其余 操 作 与 以上 相 同 , 个 时 间 每 点 处死 大 鼠 6只 , 中 1只作溴 化 2 3 5 氯 化三 苯 基 其 , ,一 四氮唑红染 色 , 5只作检测 标本 。手 术过 程中用戊 巴比 妥钠 将 动物始 终维 持在 浅麻 醉状 态 ,期 间 用 白炽 灯维 持大 鼠肛 温在 (70 0 ) C, 3 . . c 术后常 规饲 养。动 物清 醒  ̄ 5 后 出现 同侧霍 纳 征 和对 侧 以前 肢 为 主 的偏瘫 症 状 . 表 现 为 同侧 眼球 下 陷 , 泌物 增 多 , 睑闭 合 , 偏 分 眼 头 甸对
内动 脉栓 线 法制 作 的局 灶性 脑 缺 血模 型 , 模 拟 临 床 可 脑 卒 中患 者 的各 种症 状 而 备受 推 崇 , 为研 究 缺 血性 成 脑 损 伤 极 有 价 值 的 工 具 。本 文参 照 K i m 等 ” oz i u I 及 L n a等 『 供 的方 法 , 合本 实验 室 条 件 , 该模 型 og 2 】 提 结 对
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I N 17 一 9 6 C 1 1 7 . S 6 l 5 2 N 2 — 4 0 R S /
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2 动 物 种 类 的选 择
2 1 大 动 物 以 大 动 物 ( 猴 、 、 、 ) 模 型 研 究 脑 缺 . 如 猪 狗 猫 为 血 的优 点 : 虽 然 近 年 来 某 些 影 像 学 技 术 已可 用 于 啮 齿 类 小 ①
久 或 临 时 阻 断 大 脑 中动 脉 的 近端 或远 端 。
1 局灶 性脑 缺血 动物 模型 的 要求
国际 脑 血 管 病 委 员 会 于 1 8 9 4年 对 局 灶 性 脑 缺 血 动 物 模 型 提 出 明 确 要 求 _ , 手 术 方 式 的要 求 为 : 量 减 小 手 术 对 1对 ] 尽 脑 的 损 害 , 免 颅 内 组 织 暴 露 于 空 气 , 免 颅 内 环 境 稳 定 性 避 避 遭 到 破 坏 。对 模 型 设 计 的 要 求 为 : 根 血 管 可 反 复 阻 塞 ; 单 该 血 管 引起 的 改 变 可 从 血 流 改 变 等 方 面 进 行 观 察 ; 比 妥 类 药 巴 物 在 血 管 阻 塞 期 间 避 免 反 复 使 用 , 利 于 神 经 功 能 障 碍 的 观 以 察 ; 验 对 脑 实 质 造 成 的 病 变 应 与 人 类 病 理 改 变 相 似 ; 流 实 血 阻 断后 可 使 血 管 再 通 , 以恢 复 对 缺 血 区 的再 灌 注 。
神 经 损 伤 与 功 能重 建 ・ 0 0年 1 ・ 5卷 ・ 1期 21 月 第 第
53
●
[ DOI 1 . 8 0 ss c. 0 0 O . 1 ] 0 3 7 /jsj 2 1 . 1 0 5
・
综 述
・
局 灶 性 脑 缺 血 动 物模 型 的制备 *
马 宁 , 继福 , 卫 剑 # 蔡 姜
应 用 于 细 胞 损 伤 及 神 经 保 护 机 制 的 研 究 [,] 1l 。该 方 法 通 过 O1
向大 鼠颈 内动脉插 入一 段型 号为 40的 尼龙缝 线 至大脑 中 -
动 脉 远 端 , 断 大 脑 中 动 脉 ; 栓 的 插 入 长 度 一 般 为 从 颈 动 阻 线 脉 分叉 处 起 1 ~ 2 7 0 mm, 阻 断 来 自前 交 通 动 脉 的侧 支 循 以 环 ; 激 光 多 普 勒 流 速 探 头 置 于 预 定 梗 死 区 域 , 方 便 地 观 将 可
Байду номын сангаас31 线栓 法 .
线 栓 法 自上 世 纪 8 O年 代 后 期 即 开 始 被 广 泛
动 物 _ ]但 大 多 数 影 像 学 技 术 , 核 磁 共 振 、 能 影 像 检 测 2 , 。 如 功
等 更 易 用 于大 动 物 ; 对 大 动 物 更 易 进 行 复 杂 的 生 理 学 监 测 ② ( 如诱 发 电 位 监 测 、 电 图 监 测 、 脉 血 气 分 析 、 压 、 糖 、 脑 动 血 血 乳 酸 和 血 红 蛋 白测 定 ) 这 些 指 标 可 在 同一 动 物 多 点 同 时 测 , 量 , 可 与该 动物 的 神 经 系 统 表 现 、 经 生 化 、 经 病 理 学 表 并 神 神
3 常用局 灶性 脑缺 血 动物模 型
脑 缺 血模 型 分 为 全 脑 缺 血 与 局 灶 性 缺 血 , 脑 缺 血 指 全 全 部 或 大部 分脑 的 脑 血 流 量 降 低 , 局灶 性 缺 血 指 某 个 特 定 脑 区
的脑 血 流 量 降 低 。 常 用 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 制 作 方 法 有 线 栓 法 、 颅 机 械 闭 塞 法 、 化 学 诱 导 血 栓 形 成 法 、 凝 块 栓 塞 模 开 光 血 型 等 。大 多 数 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 都 是 阻 断 小 动 物 或 大 动 剞 物 [ ] 条 主 要 脑 血 管 , 大 脑 中 动 脉 闭 塞 ( d l crba 7某 如 mide ee rl
在 中国, 血管 病 的发病率 和病 死率 呈逐 年上升 趋势 , 脑
给患 者 、 庭 和 社 会 造 成 巨大 的负 担 。 临 床 上 脑 血 管 病 分 为 家 缺 血 性 脑 血 管 病 和 出血 性 脑 血 管 病 , 中 以缺 血 性 脑 血 管 病 其 多见 。选 择 合 适 的脑 血 管病 动 物 模 型 , 于 研 究 脑 血 管 病 发 对
有 神 经 损 伤 程 度 的 评 价 标 准 ; 小 动 物 脑 体 积 小 , 用 某 些 ④ 可 特 殊 的 固 定 技 术 对 其 进 行 固 定 。 以 小 动 物 为 模 型 研 究 脑 ] 缺 血 的 缺 点 : 动 物 缺 乏 脑 回 , 结 构 和 功 能 上 与 人 类 有 差 小 在 异 ; 以进 行 生 理 学 指 标 的 监 测 。 难
atr cls n MC reyo c i , A0) 型 。 大 脑 中 动 脉 阻 断 , 致 纹 状 uo 模 导
体 和 大 脑 皮 质 脑 血 流量 持 续 减 少 , 血 流 减 少 的程 度 和 分 布 但
与 阻 断 持 续 的时 间 、 断 部 位 及 大 脑 中 动 脉 供 血 区侧 支 血 流 阻 的 总 量 有 关 。 目前 广 泛 应 用 的 MC AO 模 型 有 数 种 , 是 永 多
病 机 制 、 理 生 理 、 断 及 防 治 等 有 重 要 意 义 。 本 文 对 局 灶 病 诊 性脑缺血动物模型综述 如下。
低; ②小 动物 ( 特别是 小 鼠) 在遗传 上 同质 , 通过 基因修 饰可
相 对 容 易 地 得 到 多 种 不 同 特 性 的 转 基 因 动 物 ; 大 、 鼠均 ③ 小
首都 医科 大学 附属 北 京天 坛 医院急诊 介入 科 , 京 1 0 5 北 0 00
【 键词】 局灶性脑缺血 ; 关 动物 模 型 ; 备 制
【 图分 类 号 】 R 4 ; 7 3 【 献 标 识 码 】 A 【 章 编 号 1 10 一 7 2 1 ) 10 5— 3 中 71R 4 文 文 0 1u x(0 0 0 —0 30