提高乳腺冷冻切片制作质量的体会
提高乳腺组织术中快速冰冻切片质量的技术探讨
提高乳腺组织术中快速冰冻切片质量的技术探讨摘要：在当前时代里，乳腺疾病患者的比例大幅上升，临床乳腺疾病手术量日趋增长，使得临床送检术中快速冰冻切片的病例数量也不断增长。
切片的质量和速度都是影响患者治疗质量的重要因素，因此在术中冰冻制片过程中掌控好所需的制片技术显得尤为重要。
本文总结了我院在临床治疗过程对快速冰冻切片制作的相关经验和具体操作。
关键词：快速冰冻；切片质量；乳腺组织1 所需材料和操作方法1.1所需材料（1）组织样本：从我院临床送检病理标本中选取187余例新鲜乳腺组织；（2）试剂：OCT包理剂（高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体，骤冷时固化，其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近）；切片固定液（5%含量的冰醋酸；95%含量的乙醇），改良Harris HE染色液、1%的盐酸乙醇、、梯度乙醇溶液和环保型TO透明剂、中性树胶。
Thermo Cryotome FSE型恒冷冰冻切片机。
1.2操作方法（1）取材当在标本中选取所需的组织切面后，利用常规取材的方式将组织样本取出，并用适量的OCT包理剂将其封存固定。
在放入温度在－26℃～－35℃范围之间进行冷冻约2～5min后即可切片（2）关于切片与固定等到组织被冻结到整个组织的80%时，就可以进行切片处理了。
将所用切片器材的厚度设定在所需的范围之内，切片厚度一般6至8微米左右。
先进行测试，待切面被调整好之后在对组织样本进行冰冻切片，同弃用前面的2 ～ 3片，并将获取到的组织切片粘贴在载玻片上后放进固定液中及时固定，时长超过半分钟使其固定。
（3）固定、染色、透明用流动自来水冲洗先前固定好的组织冰冻切片，时长在10s钟左右即可，再放入苏木素染液中对其进行染色操作，1～3min左右（也可以加热染色，以便缩短染色时间），再用1%盐酸酒精分化5～10s，经自来水冲洗20s后再放入伊红染色液中时长20s～1min，经自来水冲洗10s，最后对其用逐级梯度酒精进行脱水，利用透明剂让组织透明，中性树胶进行封片。
乳腺组织快速冰冻制片经验浅析
乳腺组织快速冰冻制片经验浅析摘要】目的：乳腺组织中因含较多脂肪，在冰冻制片过程中极易脱片，本文重点就乳腺组织冰冻制片的经验进行浅析总结。
方法：以乳腺组织的取材包埋、切片、固定及染色等过程为要点，对每个环节的影响因素进行浅析，并重点总结应对措施。
结果及结论：按本文之经验方法制作的乳腺快速冰冻切片，能够最大程度降低脱片概率，并能保持乳腺组织结构的完整性，胞核胞浆等染色清晰、对比度良好，同时切片平整、无组织重叠等，能较好的满足临床病理诊断的要求。
【关键词】冰冻切片；乳腺组织；病理诊断【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）11-0391-02外科疾病，尤其是肿瘤的分型诊断与外科手术方案紧密相关。
然而仅仅依靠CT、B超等常规辅助检查手段往往不能确切区分肿瘤性疾病的病理类型，因此许多外科疾病通常需要依靠术中快速冰冻诊断来明确，并进一步指导手术方案的确定。
所谓冰冻制片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
近年来，随着外科手术的发展，需要依靠冰冻诊断的病例有日益增多的趋势。
不仅如此，在科研实践中，由于常规病理制片耗时较长、步骤繁琐，因此快捷、简便的冰冻制片在动物疾病诊断中的应用也日趋增多。
在本科近万例的冰冻制片中，我们发现各组织因结构组成不同，适宜的切片条件也不尽相同。
其中乳腺冰冻因脂肪组织较多，有时伴坏死和或钙化，极易引起切片碎裂、脱片，有时还会出现染色后组织结构不清等诸多问题。
针对这些问题，本文将重点就乳腺组织冰冻制片的经验进行浅析总结。
1.材料Thermo Cryotome FSE型冷冻切片机，LEICA冰冻切片刀，Thermo冰冻切片包埋剂（OCT，opti-mum cutting temperature compound）；苏木素染液、乙醇、伊红、二甲苯等为国产试剂。
2.方法浅析2.1 制片准备为了确保工作时段冷冻切片机能够正常有效运转，日常的维护保养工作必不可少，如及时补充制冷剂、确保刀片锐利等。
如何提高冰冻病理切片技术探讨
如何提高冰冻病理切片技术探讨目的：探讨如何提高冷冻切片技术的常见问题及处理方法。
方法：按切片完整性、平整度、染色等指标进行冷冻切片观察并评价。
结果：切片存在不完整，染色差，切片脱落，切片卷缩等问题。
结论：预防冷冻切片中各种常见问题的出现，提高冷冻切片水平，可更好地发挥冷冻切片技术在病理诊断中的作用。
标签：冰冻病理切片；质量；处理方法[文献标识码1 B[文章编号]1674-4721(2009)04(b)-073-02冷冻切片是一项特殊的病理制片技术，冷冻切片的质量直接关系到手术中能否迅速作出正确的病理诊断。
采用SHANDON.As620型冷冻机。
它的速冻装置可以在几分钟之内下降至-50～-60℃之间，不仅缩短了制作时间，而且可以有效地保证良好的切片质量，从而提高了病理诊断的准确率。
笔者从数千例的恒冷切片制作中.总结了一些影响冷冻切片质量的因素及处理方法。
现介绍如下：1操作方法1.1取材组织必须新鲜，尽可能不经水洗。
取材时应避免组织挤压，防止人为假象，给诊断造成困难甚至误诊。
组织块厚度应为 2.5～3.5mm，并除去周围多余组织或脂肪，避开骨组织、钙化组织与线头，以免给切片造成困难，影响切片质量。
不同的组织取材厚薄不一。
如致密结缔组织和脂肪组织等要取薄一些；如较脆的组织，如肝、脑、淋巴结、肾、脾等要适当取厚一点。
将取好的组织置于冷冻头上迅速放入-25℃冷冻机内的冷冻台上。
1.2温度设定一般调至-18～-22℃。
根据组织性质不同，冷冻温度的选择各异：脂肪组织或含有脂肪组织、乳腺肿块组织则以-25～-30℃为宜；实质性肿块组织温度适中-18～-22℃：淋巴结、肝、脑、肾、脾等组织温度要偏高，一般-16～-20℃。
组织速冻时间一般以2～3min为宜。
1.3切片冷冻切片与常规切片一样，刀角度的调节与防卷板的正确调整，是切制优良的冷冻切片最重要的因素，它直接影响切片的质量。
SHANDON.As620型冷冻切片机刀座调整倾斜度范围小，主要是靠样品头方位变化来选择角度，调至所需角度后固定，不要轻易改变，否则影响切片速度和质量。
提高乳腺癌前哨淋巴结冷冻切片制作质量的体会
［2］沈吟芳，郭凌川，康苏娅，等．组织化学技术中4种封边方法的比较［J ］．诊断病理学杂志，2013，20（9）：586．［3］张海丛，何春年，徐明堂，等．多种封边法在免疫组化染色中应用的比较［J ］．临床与实验病理学杂志，2012，28（3）：343－344．网络出版时间：2019－3－2014：04网络出版地址：http ：//kns．cnki．net /kcms /detail /34．1073．Ｒ．20190320．1403．033．html提高乳腺癌前哨淋巴结冷冻切片制作质量的体会陈世梁，符志龙，吴文川关键词：冷冻切片；前哨淋巴结；病理技术中图分类号：Ｒ329-33文献标志码：B文章编号：1001－7399（2019）03－0361－02doi ：10．13315/j．cnki．cjcep．2019．03．033前哨淋巴结指区域淋巴组织中引流原发肿瘤的第一站淋巴结，是最有可能发生肿瘤转移的淋巴结。
早期乳腺癌患者术中行前哨淋巴结快速冷冻切片检查，能较准确地评估其腋窝淋巴结状况，决定是否进行腋窝淋巴结清扫，因此冷冻切片制作质量的好坏直接影响病理诊断的准确率和手术方案的选择。
早期乳腺癌腋窝淋巴结转移率低，其前哨淋巴结富含脂肪和淋巴成分，这两种最佳冷冻切片温度截然不同的组织成分混杂在一起，给冷冻制片带来一定的困难。
本文就如何提高乳腺癌前哨淋巴结冷冻切片制片质量的一些体会，介绍如下。
1材料与方法1．1材料选取海南省人民医院2017年9 12月乳腺外科送检的乳腺癌前哨淋巴结标本103例（所有标本均为术中新鲜切除并立即送检制作冷冻切片）。
德国LEICA CMl900恒温冷冻切片机；日本FEATHEＲＲ35型一次性刀片；普通胶水；95%乙醇固定液；常规HE 染色试剂及中性树胶。
1．2方法将冷冻切片机机箱温度和冷冻头温度设定为－20ħ，尽量剥净前哨淋巴结周围脂肪并剖开淋巴结，2 3mm 厚取材，普通胶水包埋，直接速冻，4μm 厚切片，立即置于95%乙醇固定20 30s ，用水冲洗后，常规HE 染色：改良Lillie-Mayer 苏木精液1min ；流水冲洗5s ；1%盐酸乙醇分化2s ；2%碳酸锂水溶液5s ；流水冲洗5s ；80%乙醇1s ；0.5%醇溶伊红液5s ；80%乙醇2s ；95%乙醇2s ；无水乙醇5s ；二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液各1s ，中性树胶固封。
乳腺病变2818例冷冻切片诊断体会
研 究 证 明 ， 洛酮 能 增 加 呼 吸频 率 ， 善通 气 障 碍 ， 低 二 氧 纳 改 降 化 碳 分 压 和缓 解 低 氧 性 呼 吸 衰 竭 ， 明显 改 善 脑 血 流 ， 加 能 增
脑 灌 注 压 ， 缺 氧后 的脑 血 流重 新 分 布 ， 证 脑 干 等 重 要 部 使 保
山西 医 药 杂 志 ２ １ ０ ０年 ３月 第 ３ ９卷 第 ３期 下半 月 Ｓ ａ ｘ Ｍｅ ， ｒ ｈ２ １ ， １３ ， ． ｈ ｅ ｏ ｄ ｈ ｎ ｉ ｄ Ｊ Ｍａ ｃ ０ ０ Ｖｏ． ９ Ｎｏ ３ｔ ｅｓｃ ｎ
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２ ・ ２５
２ 预 后 比较 ： 表 ２ 组 见 。治 疗 组 预后 不 良 ５例 ， 中癫 痫 其 ２ ， 瘫 ２ ， 力低下 １ ； 照组 预后不 良 １ 例 ， 中 例 脑 例 智 例 对 ３ 其 死亡 ３ ， 痫 ２ ， 瘫 ４例 ， 力低 下 ４例 。治疗 组 预 后 例 癫 例 脑 智 优 于对 照 组 ， 异有 统 计 学 意 义 （ 一６ ２ ６ Ｐ ｄ０ ０ ） 差 ．１， ．５ 。
参 考 文 献
１ 金 汉 珍 ．实 用新 生 儿 学 ． ２版． 京 ： 民出版 社 ， ９ ９ 北 人 １９ ．
血液 供 应 。 随着 缺 氧 时 间 延 长 ， 偿 机 制 丧失 ， 血 流 最 终 代 脑 因心 功 能受 损 ， 身 血 压 下 降 而 锐减 ， 现 第 ２次 血 流 重 新 全 出
分配 ， 脑 半球 血 流 减 少 以保 证 代谢 最 旺 盛 的 部 位 ， 基 底 大 如
神经 节 、 干 、 脑及 小 脑 的 血 供 。 大 脑 皮 层 矢 状 旁 区 及 其 脑 丘
下部的白质（ 大脑 前 、 、 动 脉 的边 缘 带 ） 易 受 损 。如 缺 中 后 最
制作冰冻切片的体会
制作冰冻切片的体会无论是在组织胚胎学等医学基础课中，还是在临床检验工作中，冰冻切片都有着举足轻重的作用，冰冻切片被广泛的运用在科研、教学和临床诊断中。
所谓冰冻切片就是组织在低温状态下在很短的时间内变硬并进行切片。
在临床外科手术中常常需要进行快速病理诊断，而冰冻切片就是一个很好的方法。
标签：冰冻切片；制作；体会冰冻切片是一种在低温的条件下使组织快速冷冻到一定的硬度然后进行切片的方法。
其制作过程简单方便快捷，在手术中快速进行病理诊断从而为手术在中快速确定组织性质，对医生的手术方案具有指导意义。
冰冻切片的组织在送检前不需要进行处理，其组织没有发生变化，使得原来的生活形态得以保持，特别是在免疫组织化学染色中，组织中的糖、酶、抗原、脂类等成分由于没有受到干扰而存在，组织中的细胞抗原的免疫性也得到了保存，对于需要检测糖、酶、抗原、脂类的不会受到影响。
但是，冰冻切片的制作过程要比普通的蜡切片难度大、要求高，而且组织冰冻的程度不好把握，在切片的过程中组织较易破碎，很难切成符合要求的薄片，在染色的过程中很容易脱片，所有以上这些因素都会影响到切片的质量，从而影响到了检测结果。
对于如何能有效快速高质量的制作符合要求的冰冻切片一直使我们面对的问题。
1材料和方法1.1 材料：恒冷切片机，切片刀，固定液，胶水，实验用用的新鲜组织如肝、肾、脾、皮肤、食管、胃、淋巴结、心肌、脑、卵巢、小肠等组织。
1.2 方法：采用新鲜的实验用的新鲜组织，取一块大小为1.5cm×1.5cm×3cm 的新鲜实验用组织，去除组织中的脂肪组织，在取组织的时候要注意保持干燥以免引起组织细胞发生变性和变化，把组织放在低温液氮中快速冷冻放置于冰冻台上。
在切片机内快速冰冻2分钟之后待切。
如果组织的体积较大冰冻时间相应延长，如果所取组织体积较小则相应的缩短冰冻时间，切片刀的温度控制在零下25℃-零下30℃之间。
在开始切片之前要对切片刀和防卷板之间的角度进行调整以防切出来的组织薄片卷曲。
不同组织的冰冻切片体会
不同组织的冰冻切片体会来源：第三军医大学大坪医院病理科作者：毛成毅，杜娟，肖华亮，李增鹏冰冻切片原理：组织被冷冻时，组织中的水变成冰，而在这种状态中，组织变坚硬的。
冰冻块的硬度可通过改变组织温度来改变。
降温会使组织块更加坚硬，提高温度使组织变软。
大多数非脂肪不固定组织的切片最好在-20到-25℃制作。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片的制作过程中，常有许多因素影响其质量，并进一步影响结果的观察和分析，甚至会影响诊断，造成无法挽救的后果，对此我们经过比较及总结得出如下经验。
冰冻温度及组织冰冻的时间对冰冻切片质量的影响是至关重要的。
冰冻温度对细胞的影响：温度太低，细胞容易收缩，温度太高，细胞容易膨胀，结构不清，模糊，影响冰冻诊断。
充分利用冷冻台、冰锤及速冻头的功能。
将放有新鲜组织的冻托放在冻台上然后压上压板，等组织冻住后，轻敲压板，冻有组织的冻托就会下来，然后进行切片。
在实际工作中，一般冰冻机温度设定如下：冻台温度：-18℃；工作温度：-18℃；冻头温度：-20℃。
（一）乳腺组织的冰冻切片乳腺组织（纤维腺瘤，间质胶原化）含纤维组织较多，冰冻切片染色时容易脱片。
1、使用免疫组化防脱载玻片进行贴片，冰冻切片脱片率明显下降。
2、乳腺含脂肪组织比较丰富，在冰冻切片时不容易成片或展片。
3、乳腺组织在取材时，取材医生应尽量将病变周围的脂肪组织剔除。
4、当遇到脂肪组织较多，又无法剔除时，建议使用液氮。
5、充分利用冰冻切片机（速冻台）的功能。
（二）子宫肌瘤的冰冻切片1、温度的控制：冷冻温度是冰冻切片的关键；冷冻室温度设定-17~-22度；控制肌瘤组织冷冻时间，4/5组织冻好就可以；冷冻过头时拿出冷冻室解冻软化一下。
2、包埋剂(OCT)的使用：冻头中心滴好OCT粘好组织块，再在周围加固一圈；虽然有可能加长了冷冻时间，但可以将组织牢牢固定住；修片时不能太厚，要用慢进；防止修片和切片时产生的抖动。
浅析冷冻切片常见的质量问题及处理方法
大密度投影（ Ｍ Ｉ Ｐ ） 图像上 画线 ， 重组 出单体素的曲面图像 。 曲面
重组的优点是可 以将弯 曲的肋 骨重组在一个断面 图像显示 ， 不 受周围组织的干扰［ ４ １ 。Ｖ Ｒ利用了容积 内的全部信息 ， 将扫描容 积 内投影线通过容积数据 的全 部像 素总投影 ， 以不 同灰 阶显示
浅 析冷 冻切 片 常见 的质 量 问题 及 处 理 方 法
杨 国霞
（ 中信机电制造公司总医院 ， 山西 运城 ０ ４ ３ ８ ０ １ ）
冷冻切 片是 指借助低温 条件对 尚未 固定 的手术切 除标本
组织块 快速冷冻 ， 达到一定 的硬度 之后 ， 进行切 片 的一 种制片
织块过大或偏位等 四种状况。
【 ３ ］ 姚 以刚． ６ ４ 层容积 ｃ Ｔ 对肋 骨骨折 的诊断价值 们． 中国 ｃ Ｔ和 Ｍ Ｒ Ｉ
杂志 ， ２ ０ ０ ９， ７ （ ４ ） ： ３ ９ — ４ １ ．
组３ ２ 例， 发现不完全 Ｉ 生骨折 ５ 处、 无移位的完全型骨折 ４处。 总之 。 ｌ ６层螺 旋 Ｃ Ｔ对肋 骨骨折 的诊 断价值 明显优 于 Ｄ Ｒ 胸片， 图像后处理发挥 了其优越性 。其 中 Ｖ Ｒ图像直观 ， 近似解 剖位置 ， 对肋骨 骨折 的位 置 、 数量 和移位 情况显示清楚 ， 但 对微 细骨折确诊需结合原始 薄层图像及 Ｃ Ｐ Ｒ重建 图像 ， 可检 出 Ｄ Ｒ 平片不易发现的骨折 ， 确 定骨折的部位 、 范围 、 类 型及 与周围组
参考文献
结构 ， 但Ｖ Ｒ图像对 肋骨骨皮质微 细裂 折不能确诊 。曲面重组
成像在显示肋骨骨质内在结构及微细骨皮质裂折方面有独特价 值目 ， 可多次重复重组 图像 ， 直至骨 折线显示最佳 。本组病例 均 行冠状位 和矢状位平 面重组 ， 再行 Ｖ Ｒ重组 ， 作出基本诊 断 ； 对