实验三 植物冰冻切片制作及显微观察
植物切片相关实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解植物切片的制作过程及注意事项。
2. 掌握植物组织切片技术在植物学研究中的应用。
3. 通过观察植物切片，了解植物组织的结构特征。
二、实验原理植物切片技术是一种重要的植物学研究方法，通过将植物组织制成薄片，便于在显微镜下观察其结构特征。
本实验采用石蜡切片法，将植物组织固定、脱水、透明、包埋、切片、染色，最后进行封片。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、马铃薯块茎、胡萝卜根等。
2. 仪器设备：切片机、显微镜、显微镜载物台、显微镜镜头、载玻片、盖玻片、酒精灯、酒精、二甲苯、甲醛、石蜡、刀片、剪刀、镊子、滴管、烧杯、滤纸等。
四、实验步骤1. 固定：将植物材料放入装有甲醛的烧杯中，浸泡24小时。
2. 脱水：将固定后的植物材料依次放入50%、70%、90%、95%、无水酒精中，每级酒精浸泡30分钟。
3. 透明：将植物材料放入二甲苯中，室温下浸泡，使组织透明。
4. 包埋：将透明后的植物材料放入熔化的石蜡中，使其成为石蜡块。
5. 切片：将石蜡块放入切片机中，切取5-10微米的薄片。
6. 染色：将切片放入染液中，如苏木精-伊红染色液，室温下染色30分钟。
7. 水洗：将染色后的切片用蒸馏水冲洗，去除多余的染液。
8. 封片：将冲洗后的切片用中性树胶封片，制成植物切片。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶切片观察：- 表皮细胞：细胞呈长方形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大，染色较深。
- 保卫细胞：位于表皮层，呈肾形，细胞壁较薄，细胞核较小。
- 保卫细胞间隙：保卫细胞之间形成的空隙，有利于气体交换。
- 气孔：保卫细胞之间形成的开口，是气体交换的主要通道。
2. 马铃薯块茎切片观察：- 表皮细胞：细胞呈多边形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大。
- 薄壁组织：位于表皮下方，细胞较大，细胞壁较薄，含有丰富的营养物质。
- 维管束：由韧皮部和木质部组成，负责水分和养分的运输。
3. 胡萝卜根切片观察：- 表皮细胞：细胞呈长方形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大。
切片观察实验实验报告
一、实验目的1. 掌握切片制作的基本步骤和技巧。
2. 学习显微镜的使用方法，观察植物细胞的结构。
3. 通过观察切片，加深对植物细胞结构特点的理解。
二、实验原理切片观察实验是生物学研究的一种基本方法，通过将生物材料制成薄片，在显微镜下观察其细胞结构。
本实验主要观察植物细胞的结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、水、碘液、刀片、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器：显微镜、解剖镜、剪刀、镊子、烧杯、酒精灯、酒精、盐酸等。
四、实验步骤1. 制备洋葱鳞片叶切片（1）将洋葱鳞片叶洗净，用剪刀剪成薄片。
（2）将薄片放入装有水的烧杯中，用解剖针轻轻搅动，使薄片分散。
（3）用镊子夹取一片洋葱鳞片叶，平铺在载玻片上。
（4）用刀片轻轻刮取洋葱鳞片叶的表皮细胞，使其均匀分布在载玻片上。
（5）用盖玻片覆盖在载玻片上，用镊子轻轻按压，使切片与盖玻片紧密结合。
2. 观察洋葱鳞片叶切片（1）将载玻片放在显微镜载物台上，调整显微镜的焦距，使洋葱鳞片叶切片清晰可见。
（2）观察洋葱鳞片叶切片的细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等结构。
（3）用碘液染色，观察细胞核、叶绿体等结构的变化。
3. 实验记录（1）观察洋葱鳞片叶切片的细胞结构，记录观察结果。
（2）分析实验结果，总结植物细胞结构特点。
五、实验结果与分析1. 观察洋葱鳞片叶切片的细胞结构，发现细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等结构。
2. 在碘液染色后，细胞核和叶绿体更加清晰可见。
3. 分析实验结果，得出以下结论：（1）植物细胞具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等基本结构。
（2）细胞壁具有保护和支持细胞的作用。
（3）细胞膜具有控制物质进出的作用。
（4）细胞核是细胞的遗传中心，含有遗传物质DNA。
（5）叶绿体是植物细胞进行光合作用的场所。
六、实验总结本次实验通过切片观察，掌握了切片制作的基本步骤和技巧，学会了显微镜的使用方法，观察了洋葱鳞片叶细胞的结构，加深了对植物细胞结构特点的理解。
植物实验切片观察
实验三 植物组织的观察
实验三 植物组织的观察
• 四、方法与步骤
1.绿豆芽徒手切片→载玻片→番红染色→盖片→观 察薄壁组织的观察 2.芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察 厚角组织的观察 3.梨石细胞→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4.洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、 气孔器 六、作业 绘出所观察的四种组织的显微结构图，标出结构名 称。
2、卷柏属的观察
• （1）观察卷柏属植物的孢子体（新鲜材料或腊叶标本） • 分清根、茎、叶三部分，注意根托与不定根的区别。 • 用小镊子和刀片从茎上取下一片叶置于载玻片上，加水观察其结构， 并与裸子植物、被子植物叶进行区别。（可以染色尝试） • 取卷柏属植物的茎作徒手横切，观察茎的横切结构，注意中柱类型、 横桥细胞的观察。
（4）叶肉：叶肉细胞的细胞壁具无数的皱壁向内腔伸展， 细胞内具叶绿体，在叶肉中有分泌细胞围成的树脂 道，注意树脂道的数目。 （5）内皮层：细胞排列整齐成为一圈，凯氏带也明显可见。
（6）叶脉：在内皮层之内，有两个维管束，维管束的木质
部靠近茎表面的一面，维管束的韧皮部，靠近叶表面 凸的一面。
（7）传输组织：内皮层与叶脉之间的细胞为传输组织。
裸子植物叶的结构（松针叶）
玉米叶的构造 ——单子叶植物的叶
取玉米叶的横切片置显微镜下观察
（1）上下表皮，表皮细胞排列较规则，切面稍近方形，细 胞的外壁有加厚的角质层，上下表皮上均有气孔分布，每 一气孔的内方，有一较大的细胞间隙叫做气室，在上表皮 细胞之中有一些特别大的细胞，其外壁无角质层，这便是 运动细胞。
蚕豆根横切
实验三 植物组织的观察
一、实验目的: 1.了解植物组织在植物体内的分布、类型；2.掌握不同组织的特 点和徒手切片技术。 二、实验材料：1. 9种永久切片 ；2.芹菜叶柄、豆芽、梨和酸模叶。 三、实验内容 1.分生组织：洋葱根尖纵切片观察分生组织 2.保护组织：蚕豆表皮装片 酸浆叶表皮装片 观察表皮细胞排列和气孔器 3.薄壁组织：双子叶植物茎横切片观察薄壁细胞 柿胚乳细胞切片观察薄壁细胞和胞间连丝 4.输导组织：南瓜纵切片观察导管、筛管 5.机械组织：大丽花叶柄、南瓜茎横切片 观察厚角组织 芹菜叶柄徒手切片 梨石细胞永久片和装片观察厚壁细胞 6.分泌结构：柑橘果皮切片观察分泌腔。 四、方法与步骤 1. 绿豆芽徒手横切片→载玻片→番红染色→盖片→观察薄壁组织的观察 2. 芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察厚角组织的观察 3. 取少许梨果肉→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4. 洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、气孔器 六、作业 绘出所观察的四种组织的显微结构图，标出结构名称。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
植物实验切片观察讲解
玉米茎横切
小麦茎横切
小麦成熟花药 横切
洋葱鳞片叶内表皮细胞
玉米叶切片
棉花叶横切
松针叶切片
胞 间 连 丝 切 片
南 瓜 茎 横 切
百合花药切片
百合子房切片
地 衣 切 片
轮藻短枝装片 （注：实验装片颜色为绿色）
念珠藻装片
水 绵 结 合 生 殖 装 片
团藻装片
衣藻装片
地钱胞芽杯纵切
茎的生长与结构
茎的顶端分生组织衍生出的细胞经过分裂、延长生长和分化，
形成由表皮、皮层和维管柱3部分组成的茎的初生结构。
双子叶植物：维管束 环状，环的内部为髓， 外 部 为 皮 层 ， 在 维 管 表皮
表皮 皮层 维管柱
束 间 为 细 的 髓 射 线 。 形成层
每 一 个 维 管 束 中 ， 木 维管柱 质部通常面向髓排列 髓 在内侧，而韧皮部通
柿胚乳细胞切片观察薄壁细胞和胞间连丝
4.输导组织：南瓜纵切片观察导管、筛管 5.机械组织：大丽花叶柄、南瓜茎横切片
芹菜叶柄徒手切片
观察厚角组织
梨石细胞永久片和装片观察厚壁细胞
6.分泌结构：柑橘果皮切片观察分泌腔。 四、方法与步骤
1. 绿豆芽徒手横切片→载玻片→番红染色→盖片→观察薄壁组织的观察 2. 芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察厚角组织的观察 3. 取少许梨果肉→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4. 洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、气孔器 六、作业
蚕豆根横切
实验三 植物组织的观察
一、实验目的: 1.了解植物组织在植物体内的分布、类型；2.掌握不同组织的特 点和徒手切片技术。
二、实验材料：1. 9种永久切片 ；2.芹菜叶柄、豆芽、梨和酸模叶。 三、实验内容
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冰冻切片免疫荧光实验步骤
冰冻切片免疫荧光实验步骤1. 前言嘿，朋友们！今天我们来聊聊一个科学实验的酷炫玩法——冰冻切片免疫荧光实验。
你可能会想，这听起来有点高深，其实没那么复杂，咱们用轻松的方式来搞定它！这个实验就像是给细胞穿上五光十色的衣服，让它们在显微镜下闪闪发光。
是不是听起来有点像魔法？不过，魔法背后可是需要一系列精细的步骤哦，接下来就让我们一起踏上这趟科学之旅吧！2. 材料准备2.1 器材首先，咱们得准备好一些“武器”。
你需要的工具有：冷冻切片机、显微镜、抗体、荧光染料、冰块、以及小瓶子。
别担心，这些东西在实验室里一般都能找到。
好比去超市购物，准备齐全才能大干一场嘛！2.2 样本收集然后，咱们得搞定样本。
可以用小动物的组织，比如小鼠的肝脏或脑组织，当然也可以是细胞培养。
像选菜一样，找个健康的样本，才能做出美味的实验结果。
记得小心翼翼哦，样本可是你实验的“主角”！3. 冰冻切片3.1 制作切片接下来就是最重要的环节了！将收集到的样本放进冷冻机，设置好温度，通常是在20°C到80°C之间，具体要看你使用的试剂。
等样本冰冻得像冰棍一样，取出来，用冷冻切片机将它切成薄薄的片，厚度大约在510微米之间。
要知道，切片越薄，观察的时候越清晰，就像看电影的时候画面越高清，效果自然越棒！3.2 贴片固定切好的薄片就像鲜花一样，需要“小心翼翼”地处理。
将切片放到载玻片上，记得用一些固定液，比如丙酮或者甲醇，给它们来个“定妆”！这样能让你的切片在后续步骤中更加稳固。
让我们给这些切片点个赞，做得不错哦！4. 免疫染色4.1 抗体孵育好了，接下来的步骤就像给细胞化妆一样。
把固定好的切片放进抗体溶液里，让它们充分“泡澡”。
通常来说，先用一抗（即特异性抗体）孵育，时间可以在1小时到过夜之间，视情况而定。
这个时候，你可以想象细胞们正开心地吸收着抗体，准备好接下来的“盛宴”！4.2 荧光染料待一抗充分结合后，咱们再来一剂“荧光染料”！同样把切片浸泡在二抗（荧光标记抗体）里，接着再静置一会儿。
植物学实验3 植物组织的观察
南瓜茎纵切，示木质部导管、形成层、韧皮部
筛管 伴胞
导管
精品课件
5.分泌结构的观察 • 松针叶横切永久切片（示树脂道） • 橘皮徒手切片（示分泌腔）
精品课件
树脂道
100倍
精品课件
精品课件
分泌腔
精品课件
油滴
五、实验作业
思考题：
1. 在光学显微镜下如何识别导管和筛管？ 2. 2. 做好根尖压片的关键是什么？
4）保存 •75%酒精
精品课件
5）解离
（1）用酶或盐酸处理固定后的材料，使正在分裂的细胞分离，便于压片。 （2）方法：固定的材料蒸馏水冲洗2遍，放入预热的60℃的1mol/L盐酸中， 恒温处理5分钟左右，用蒸馏水冲洗3遍，将材料浸泡在蒸馏水中2小时，将 材料中酸洗净（也可用流水冲洗几分钟）。 （3）注意：掌握好解离时间。
绘图题：
1. 绘南瓜茎纵切中的导管、筛管和伴胞，并注明各部分名称。
2. 绘犁果肉内石细胞。
3. 绘松针叶内树脂道。
4. 绘洋葱根尖细胞有丝分裂各期细胞简图。
预习：藻类观察
精品课件
（1）间期 （2）前期 （3）中期 （4）后期 （5）末期
精品课件
前期 后期
精品课件
间期 后期
精品课件
2.薄壁组织的观察
• 南瓜茎横切永久封片
3.机械组织的观察
• 南瓜茎横切永久封片（示厚角组织、厚壁组织） • 芹菜叶柄横切水封片（徒手切片，示厚角组织） • 梨果肉细胞水封片（徒手切片，盐酸-间苯三酚染色，
• 永久封片：南瓜茎横切、南瓜茎纵切、松针叶横 切、洋葱根尖纵切
精品课件
三、实验用具和试剂
• 光学显微镜、载玻片、盖玻片、解剖用具等 • 盐酸间苯三酚溶液、蒸馏水、醋酸洋红
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植物冰冻切片制作及显微观察
一实验原理
冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片
的一种方法，因其不需经过脱水和透明等步骤，具有快速、简便、易操作等特点，而且能比较好地保存组织的酶活性，较完好地保存组织抗原的免疫活性，是原位杂交、酶组织化学和免疫组织化学等实验中常用的方法。
冰冻切片的种类较多，常用的切片机主要分为两大类：开放式冰冻切片机和恒温冰冻切片机。
前者主要包括半导体制冷切片机、醇制冷切片机及老式CO2、氯乙烷等切片机等，开放式冰冻切片机由于暴露于空气中，温度不易控制，技术难度大，现多已淘汰。
后者主要是低温恒冷箱冰冻切片法，是目前应用最为广泛的方法。
冰冻切片在动物和人体的研究中已被广泛应用，但在植物上的应用相对较少。
原因是植物组织中存在液泡结构，而且由于细胞壁的存在细胞之间有较大间隙，细胞含水量远大于相同体积的动物细胞，更容易在低温冷冻过程中形成冰晶，损伤植物细胞的细微结构且比较容易破碎，难以切片和保持植物组织结构的完整性，也使得准备植物组织的冰冻切片存在一定的困难。
因此，在植物材料进行冷冻切片时常使用冷冻保护剂进行处理。
冷冻保护剂的作用就是能与组织细胞中的水分结合，降低细胞内溶液的冰点，使形成冰晶或较大冰晶的机会减小，从而减轻细胞内冰晶的损伤。
常用的的冷冻保护剂有蔗糖和甘油等，不同植物组织细胞结构不同，因此选择适合的保护剂的浓度非常重要。
另外，影响植物冰冻切片的主要因素还有包埋剂和切片厚度等，冰冻切片常用的包埋剂有水、普通胶水和OCT，用水做包埋剂，较难切出完整的切片；OCT包埋剂与普通胶水效果基本相同，都能切出完整的切片，如果在冰冻前将材料浸没在OCT或胶水中，让OCT或胶水充分渗透进组织中，切片效果更好。
切片不可过厚，否则细胞重叠不易观察；切片也不可过薄，否则切片容易破碎，需根据不同实验材料和实验目的进行优化。
二实验材料
拟南芥茎段
三主要仪器和试剂
l eica冰冻切片机、光学显微镜
OCT、TBO、
四实验方法
1.取新鲜烟草茎段，切成0.5 cm左右的小段
2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻
台上，冰冻。
3.将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转
动旋钮，将组织修平。
4.调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄
切，纤维多细胞稀的可稍为厚切。
5.调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要
求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。
6.在干净的载波片上滴上一滴水，用预冷的解剖针将切好的材料挑
起，迅速置于载波片上的水中展片。
7.吸去多余水分，用1% TBO滴染展开的切片材料5s，迅速用水洗去
染料。
8.用80% 甘油封片。
9.显微镜拍照。
五冰冻切片时的注意事项：
1.防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑
除切片残余和用柔软的纸张擦。
有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。
因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
2.当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取
出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大
拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。
另者，调高冰冻点。
3.用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。
因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。
如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。