冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片的制作方法 Microsoft Word 文档
冰冻切片的制作方法一、概述所谓冰冻法（Freezing method），就是先将组织块进行冰冻，水分成为包埋介质，组织块在一定温度和时间内变硬，然后使用切片机进行薄片切割的一种方法。
(一) 冰冻切片法分类一般冰冻切片机：用Co2气、液氮等，通过制冷的气体或液体冰冻组织块与切片刀，因受周围环境的影响，夏季不易操作。
半导体制冷切片机，通过半导体材料的制冷原理，使组织块和刀冷冻，并需要循环水降除半导体材料的高热，夏季不易操作。
恒冷箱式切片机，不受外界温度的影响，不需要循环水，四季都能切成非薄的切片，操作方便用时间短，用途广泛是目前最为理想的切片机。
（二）恒冷箱式切片机及切片法机器构造：（1）制冷室：有轮转式切片机，切片机的手轮在室的右外侧壁；组织托台放组织托用；速冰冷锤，是铸铁圆块，能迅速吸取组织中热量，起速冻作用。
（2）开关：电源开关；温度设定调节键；时钟键；除霜时间设定键；半导体速冻键；（按此健在十分钟里提高温度-4摄氏度）。
（3）切片机调节系统：有快慢进或退键，修整组织块时可快或慢进退机头。
组织接近刀刃时要慢进键，并不停的旋转手轮，组织修平后，松开进机头键开始切片。
恒冷箱式切片机最大的优点不受外界温度变化的影响，操作很方便，5¡ª10分钟内可切出满意的薄片，是外科病理快速诊断；酶化学的新鲜组织切片；组织化学脂质染色；免疫组化，特别是免疫荧光等技术开展必备的仪器。
（三）冷冻切片需要温度及时间在零下15——20摄氏度之间，大部分组织均能切出良好的切片。
各器官组织切片的最适温度及时间见下表：各器官组织冷冻切片的最适温度及时间表组织温度时间新鲜固定后皮肤及脂肪-26摄氏度-28摄氏度3~5min 5~8min胃肠、食管、膀胱-18摄氏度-20摄氏度3~5min 5~6min子宫、卵巢-20摄氏度-22摄氏度3~4min 4~5min腮腺、肌肉-17摄氏度-19摄氏度3~4min 4~5min脾、淋巴结、甲状腺-16摄氏度-18摄氏度2~3min 4~5min脑组织-15摄氏度-17摄氏度2~3min 4~5min注：表中温度及时间指组织厚度0.3-0.4 cm（四）冷冻温度及时间的关系制冷温度数越大对组织冰硬的时间越短，但往往是欲速越不达，组织冻过切片呈碎屑状，得不到完整切片；并出现冰晶，改变组织应有的形态，细胞呈现脂肪样细胞状态，特别是脑组织肾透明细胞癌组织最明显。
冰冻切片步骤很全面
冰冻切片步骤很全面冰冻切片是一种常用的实验技术，在生物学、医学研究、组织学观察等领域有着广泛应用。
以下是一份详细的冰冻切片步骤，旨在提供全面的指导。
注意，不同的实验目的可能会有一些差异，因此请根据实际需求调整步骤。
1.準备1.1获取你所需的样本。
这个样本可以是活体动物的组织，也可以是固定处理后的组织。
1.2准备冷冻介质。
通常使用的冷冻介质包括液氮、干冰和冷冻套。
液氮是一种非常冷的液体，可以迅速冻结样本。
干冰是固态二氧化碳，可以提供较低的温度。
冷冻套是一种装置，可以通过循环冷却剂来维持全套工具的较低温度。
1.3准备工具和设备。
这些工具和设备通常包括切片机、切片模具、刀片、显微镜片和刷子。
1.4调整工作环境。
确保实验室温度适宜、空气流通，并消毒工作台和其他工具。
2.样本取样和固定2.1根据实验目的，选择合适的样本区域。
例如，在动物研究中，你可能需要选择大脑的特定区域。
2.2切下样本。
使用手术器械，例如手术剪刀和手术刀，在样本区域周围切下足够大小的组织块。
2.3快速固定样本。
使用适当的固定液将样本固定。
常用的固定液包括10%缓冲福尔马林和4%聚乙二醇。
将样本完全浸没在固定液中，确保完全固定，避免其损伤。
3.冷冻3.1冷冻样本。
将固定的样本迅速置于冷冻介质中。
如果使用液氮，直接将样本放入液氮中。
如果使用干冰，将样本放入常温下事先准备好的干冰盒中，并立即放入冷冻套中。
3.2冷冻条件。
根据样本的性质和实验要求，选择适当的冷冻条件。
通常情况下，液氮的温度低于-150°C，而干冰的温度大约为-78°C。
3.3冷冻时间。
样本的冷冻时间取决于其大小和固定液的穿透性。
通常情况下，较小的样本需要较短的冷冻时间，而较大的组织块需要较长的冷冻时间。
一般而言，冷冻时间为几个小时到几天。
4.切片4.1为切片做准备。
在切片之前，将切片模具放在切片机上，并冷却至所需的温度。
同时，将刀片插入切片机。
4.2取出样本。
冰冻切片实验技术
实验技术：组织切片的制备点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润仅供参考，谢绝转载，否则责任自负组织切片的制备二）切片方法-细节注意1 切片方法的选择光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。
1.1 冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。
冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。
冰晶小而多，对组织结构损害大。
因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。
具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。
用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。
此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。
②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
冰冻切片一般用恒冷切片机。
切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。
【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冷冻切片注意事项
冷冻切片注意事项冷冻切片是一项很有趣但也需要特别小心的工作呢。
一、切片前的准备。
1. 样本的处理可不能马虎。
拿到样本的时候，要像对待宝贝一样。
如果是组织样本，要确保它的新鲜度，就像你去市场买新鲜水果一样，新鲜的样本才能切出好片子。
如果样本在运输或者保存过程中有什么磕磕碰碰，或者被污染了，那可就麻烦啦，就像做饭的时候食材坏掉了，后面再怎么努力也很难做出美味佳肴。
2. 冷冻机的状态要调整好。
要把冷冻机当成自己的小宠物一样去照顾，温度要设置准确。
温度太高，样本冻不好，切的时候就会软趴趴的；温度太低呢，样本又会变得像冰块一样硬邦邦的，容易碎掉。
这就好比你穿衣服，穿多了热得难受，穿少了又冷得发抖。
3. 刀具的选择和检查也很重要。
刀具就像是战士的武器，要选一把锋利又合适的。
如果刀具钝了，那切出来的片子就会坑坑洼洼的，就像用钝刀切面包一样，切得乱七八糟。
而且在切片之前，一定要仔细检查刀具有没有损坏或者脏东西，不然这些都会影响切片的质量。
二、切片过程中的要点。
1. 操作的时候要稳。
这就像走钢丝一样，手不能抖。
一旦手抖了，切出来的片子厚度就不均匀了，可能这边厚那边薄，就像一边是小山丘，一边是小山谷。
而且在切的时候，要保持一个合适的速度，不能太快也不能太慢。
太快了容易切歪或者切坏样本，太慢了样本可能会因为局部温度升高而变形。
2. 要注意样本的摆放。
样本在切片台上要放得端端正正的，就像小朋友在课堂上坐得笔直一样。
如果样本放歪了，切出来的片子形状就会不规则，就像歪着切蛋糕，切出来的蛋糕块奇形怪状的。
3. 切片的厚度要控制好。
不同的实验或者观察需求，对切片厚度有不同的要求。
这就像做菜放盐一样，放多放少都不行。
如果切片太厚，可能会影响观察的清晰度，就像隔着一层厚玻璃看东西模模糊糊的；如果切片太薄，又可能会把样本切坏或者在后续处理过程中容易丢失。
三、切片后的注意事项。
1. 切片后的保存要得当。
切好的片子就像你精心制作的小手工一样，要好好保护。
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~冰冻切片定义冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在冰冻切片机上进行切片的一种方法。
冰冻切片特点：操作简单，耗时短，对组织抗原损伤小，对环境污染小。
冰冻切片流程（10-15min内即可完成）：取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）1、取材（1）新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；（2）取材的工具也要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；（3）取材组织大小要合适，厚度尽量在3mm，最多不要超过5mm（组织过大切片时阻力加大，易产生刀痕和褶皱）。
2、包埋（1）包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；（2）包埋时要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向，例如管腔、皮肤、囊壁等要竖立包埋；（3）包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。
3、冰冻温度与时间（1）冰冻温度与时间是冰冻切片的关键步骤，要根据组织的类型和大小来调节；（2）冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片；（3）不同组织冰冻切片适宜温度：4、切片（1）在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；（2）切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度控制在5um左右，左手持毛笔在切片形成时轻按住组织边缘，使其不发生卷曲；（3）将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。
5、染色流程：固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片6、注意事项（1）纤维及结缔丰富的组织，应顺着纤维纹理切片，否则容易崩裂；（2）较硬较脆的组织应尽量切的薄一些；（3）选择合适的固定液（95%乙醇、甲醛、甲醇、丙酮），且固定液要保持新鲜，及时更换固定液；（4）组织尽量快速冷冻，组织间隙的自由水易冷冻凝结形成冰晶，组织冷冻越缓慢，冰晶形成的数量越多，体积越大。
冰冻切片制作及质量控制
冰冻切片制作及质量控制冰冻切片是一种在生物组织学研究中广泛应用的技术，它可以制备出细胞和组织的高质量切片，用于后续的染色、免疫组化和显微镜观察等研究。
为了获得高质量的冰冻切片，制作过程中需要严格控制各个环节，包括样本取材、固定、冻结和切片等步骤。
同时，质量控制也是制作高质量冰冻切片的重要环节之一、下面将详细介绍冰冻切片制作及质量控制的相关内容。
1.样本取材样本取材是制作高质量冰冻切片的第一步，样本的选择和处理对后续切片的质量有重要影响。
通常情况下，应选择代表性的组织，样本必须新鲜，不宜暴露在空气中过长时间，以避免氧化和细胞坏死的发生。
此外，为了使切片更容易涂抹和切割，样本应具有一定的硬度，可以根据需要使用组织固定剂、切片缓冲液等进行处理。
2.组织固定组织固定是为了保持组织的形态结构和细胞的生物学特性，同时防止样本在切片过程中的损伤和变形。
常用的固定方法包括冷醇固定、中性缓冲福尔马林固定等。
固定时间和温度的选择需要根据不同的样本和研究要求进行优化。
3.冻结冻结是制作冰冻切片的关键步骤，它能够快速、有效地固定组织并保持组织的形态。
冻结样本时应使用冷冻剂，如液氮、干冰-酒精混合物等。
在冻结过程中，要避免组织在冻结过程中受到机械或化学损伤，因此可以使用特制的冷冻模具和刀片。
4.切片5.质量控制质量控制是确保冰冻切片质量的关键环节之一、常用的质量控制指标有切片厚度、切片完整性、目标细胞或结构的保存等。
切片厚度的一致性对于后续的显微镜观察和数据分析具有重要影响，可以使用显微镜或数字软件测量切片厚度。
切片完整性是指组织切片的连续性和无碎片断裂等情况，可以通过显微镜观察和染色评估。
目标细胞或结构的保存是评价冰冻切片质量的重要指标，可以通过免疫组化染色、细胞核染色等方法进行评估。
综上所述，制作高质量的冰冻切片需要控制好样本取材、组织固定、冻结和切片等环节，并通过质量控制手段来评估切片质量。
只有在每个环节都进行精细操作和严格控制的情况下，才能制备出适合后续研究的高质量冰冻切片。
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冰冻切片制作方法与注意事项
一、固定：
固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】
1. 固定要及时。
2. 组织块的大小要合适。
3. 应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4. 固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5. 要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，
适当提高温度也可缩短固定时间。
6. 选择合适的固定液。
7. 一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水
脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
脱水时间视组织块大小、性质和类型而定。
【注意事项】
1. 脱水必须彻底，组织块只有脱水充分才能在透明剂中有良好的透明，也有利于染色。
脱水须在
有盖子的瓶中进行，高浓度乙醇易吸收空气中的水分。
2. 脱水剂的用量不能太少，应为组织块的5~10 倍以上，并及时更换。
三、透明
在切片制作过程中有两次透明，第一次是脱水以后组织块的透明，第二次是染色以后切片的透明。
二甲苯是最常用的透明剂。
它是一种无色透明的液体，容易挥发，透其明能力强，但易使组织收缩变脆，所以组织块在二甲苯中不宜久留。
【注意事项】
1. 透明剂的用量不能太少，应为组织块的5~10 倍以上。
2. 透明过程中用的器材如镊子必须干燥，不得将水滴入二甲苯中。
3. 二甲苯是一种易挥发的有毒气体，长期接触对呼吸道粘膜等有刺激作用，所以在使用时应在盛
二甲苯的容器上加盖盖子。
四、组织切片（冰冻切片法）
操作程序：
1. 切片前先安装好刀片，调整好切片厚度及切片角度。
根据标本的组织类型，确定最佳切片温度。
2. 将待切的组织块平放在软塑瓶盖或特质小盆内，直接或涂敷包埋剂后马上放到冷冻台上冷冻。
3. 将冻好的组织块安装到组织块夹持器上，调整好刀片与组织块之间的角度和距离，调整好防卷板的
位置和角度。
4. 准备好后，转动切片机旋转轮的手柄进行切片。
将切好的切片黏附在载玻片上，室温下自然晾干
1-2 小时后可根据不同的需要进行固定、染色等制片步骤，也可用锡纸包好后封存于-20C 摄氏度冰箱中待用。
【注意事项】
1. 切片时恒冷箱内的适宜温度是-20—-15 摄氏度。
2. 为防止组织中形成冰晶而影响细胞的形态，甚至破坏细胞的结构，在组织冰冻时要采用速冻的方
法。
3. 组织块在冰冻时，应根据组织的形状和结构来放，切片也是如此。
4. 切片时，若发现冰冻过度，可将冰冻组织块取出在室温下放置片刻再切片。
五、染色（HE 染色）
（一）染色试剂配制
1.苏木精染液苏木精染液是常用的一种燃料，主要用于对细胞核的染色。
苏木精本身与组织的亲
和力很弱，HE 染色实际是通过苏木精的氧化物—苏木红对组织细胞进行染色。
苏木精可通
过自然和化学方法两种方式氧化成苏木红。
自然方法是将苏木精溶液爆率在阳光下或空气
中。
化学方法是将化学氧化剂加入苏木精溶液。
Harris苏木精配方：A液（苏木精1g,无水乙醇10ml）, B液（钾明矶20g,蒸馏水
200ml）,氧化汞0.5g，冰醋酸8ml。
配制方法：想将A液搅拌溶解，再将B液煮沸融化去火。
将A液缓缓加入B液，
混合后煮沸约1 分钟。
离火后在该混合液中加入氯化汞, 用玻璃棒充分搅拌至染液变为紫红
色,冷却后加入冰醋酸混匀,过滤后即可使用。
2.伊红染液伊红是一种煤焦油染料,是细胞质较为想的染色剂。
常用的是1%伊红
醇溶液。
其配方是在95%乙醇100ml中加入1g伊红，玻璃棒搅拌均匀。
3.1%盐酸酒精分化液36%-38%的盐酸1ml 加入75%乙醇99ml 中混匀即可。
）染色过程
1．切片进入苏木精染液5-30min （根据不同需要和颜色情况决定染色时间）。
2．自来水洗去浮色。
3．1%盐酸酒精分化数秒。
4．自来水冲洗半小时以上, 是切片蓝化。
5．蒸馏水洗。
6．如伊红染液复染1-10分钟,使细胞质染成红色。
7．按顺序经95%乙醇?、仲脱水兼分化伊红颜色各1min。
8．入无水乙醇中彻底脱水4-5min （?、/各两分钟左右）。
9．
1/2 二甲苯（无水乙醇：二甲苯=1:1 ) 1min 。
10. 二甲苯？、/透明，每次各约2-3min。
11. 封固切片
（三）染色结果
细胞核被苏木精染成鲜艳的蓝色，细胞质、结缔组织和嗜酸性颗粒等被伊红染成不同程度的红色，红蓝相应色彩鲜明，对比明显。
【注意事项】
1. 掌握好染色时间和分化时间。
2. 自来水冲洗过程中应注意不要用水直接冲自组织。
3. 切片染色后用乙醇脱水应从低浓度到高浓度进行。