实验八 环境样品中细菌总数的测定
细菌总数的测定
细菌总数的测定一、准备工作1.准备好培养基（一般为普通营养琼脂培养基），称取28克培养基粉末，放入1000ml锥形瓶中，量取800ml蒸馏水倒入，放入搅拌子在搅拌器上，将溶液搅拌均匀后，再取出搅拌子（用铁棒吸出），然后用报纸包扎锥形瓶口，待灭菌。
2.取洗净干燥的培养皿，根据水样准备培养皿数，一般原水样稀释三个倍数，处理后水样稀释两个倍数，每个做两个平行样。
每十个培养皿一组，用报纸包扎好待灭菌。
3.移液枪头的灭菌：洗干净后放入盒中排列整齐，盖上盒盖，在盒子外面包一层报纸，再用橡皮筋扎紧，待灭菌。
4.小试管：每次用完都要将小试管刷洗干净，洗净后倒放在试管架上备用，如当天需要做细菌实验则将所需数量的每根试管内各加入9ml蒸馏水，赛上橡皮塞，7支一捆用报纸将试管口扎好，待灭菌。
5.250ml采样瓶及锥形瓶（加有适量玻璃珠）需提前灭菌，方便采样人员随时取用，灭菌好的采样瓶可保存一周，灭菌时每个瓶口都要用报纸包扎好。
6.标签纸准备：事先将所需的数量准备好，写上编号，以备操作时取用。
二、灭菌1.高压蒸汽锅的使用：灭菌前应先检查国锅内水位，应保持在水位标示处，过多过少都不好，放入准备步骤中待灭菌的物品，盖上小盖，然后再盖外盖，对正后对角旋好各个旋钮，使其受力均匀不至于在灭菌的过程中跑气（压力上不去即为跑气），然后关上安全阀打开放气阀，打开高压蒸汽锅开关，调好灭菌时间（一般灭菌30min），待放气阀放气声很大后关上放气阀，蒸气锅即开始依据设计的时间灭菌，此时压力表指针在1.5左右，灭菌完毕后，关上开关，待压力表指针在0处，打开安全阀放气后，才能开盖。
蒸气锅底部水若变脏则需清洗并换水。
2.细菌实验所需玻璃器皿一般需要灭菌30min。
3.净化工作台的使用：先用75%酒精灯擦拭台面，紫外灯和照明灯隔一段时间擦拭一下，并用软布擦拭干净，然后关上门，打开紫外灯按钮，照明消毒30min后再打开送风按钮，一直到实验前才关闭紫外灯，打开照明灯。
实验八 水中细菌总数,大肠菌群数的测定
2011-11-23 一实验目的1．了解采取水样的方法2 学习水样的细菌总数的检测原理和方法3 学习水样的大肠菌群数的检测原理和方法二实验原理1 、水中细菌总数可说明被有机物污染的程度.细菌数越多,有机物质含量越大. 我国规定自来水1mL的总菌数不得超过１００个．2、本实验应用平板菌落计数技来测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下。
使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出未的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
3若水源被粪便污染，则有可能被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，不易检测．因此要找一个合适非病原的指示菌，来指示水被粪便污染的情况，从而知识水源被肠道病原菌的污染情况．最广泛应用的是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧，革兰氏阴性，无芽孢的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经３７℃２４－４８小时培养能产酸产气．我国规定每升自来水中的大肠菌群不超过３个．4、平板培养基一般使用远藤氏培养基或伊红美蓝琼脂，前者含有碱性复红染料，它可被培养基中的亚硫酸钠脱色，使培养基呈淡粉红色，大肠菌群发酵乳糖后产生的酸和乙醛即和复红反应，形成深红色的复合物，使大肠菌群菌落变为带金属光泽的深红色．伊红美蓝琼脂平板含有伊红与美蓝染料，作为指示剂．大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产生与远藤氏培养基上相似的，带核心的，有金属光泽的深紫色菌落。
三实验器材1 、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板，伊红美蓝琼脂培养基平板．２、无菌生理盐水，无菌吸头，涂布棒，酒精灯等．四实验方法１水样稀释液的制备用lmL移液器，吸取水样lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成10-１稀释液；再用lmL 移液器，吸取10-１稀释液lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，让菌液混合均匀，即成10-２稀释液；再换一支无菌吸头吸取10-２稀释液lmL，移入装有9mL无菌水的试管中，振荡，即成10-３稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5等一系列稀释菌液。
细菌总数的测定实验报告
细菌总数的测定实验报告细菌总数的测定实验报告引言：细菌是一类微小的单细胞生物，广泛存在于自然界的各个角落中。
它们在环境中的分布和数量对人类的生活和健康有着重要的影响。
因此，准确测定细菌总数对于环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
本实验旨在通过一系列方法，测定细菌总数，并探讨其应用前景。
材料与方法：1. 样品准备：从不同环境中采集样品，如水源、土壤、食品等。
2. 细菌培养基制备：根据不同的需求，选择适宜的培养基，如营养琼脂、大肠杆菌培养基等。
3. 细菌培养：将样品分别接种到不同的培养基上，通过恒温培养，促使细菌生长繁殖。
4. 细菌计数：采用平板计数法，将培养好的细菌涂布于琼脂平板上，以形成菌落。
通过计数菌落的数量，间接测定细菌总数。
结果与讨论：通过实验，我们成功测定了不同样品中的细菌总数。
结果显示，不同环境中的细菌总数存在显著差异。
例如，水源中的细菌总数相对较低，而土壤中的细菌总数较高。
这与细菌在不同环境中的适应能力有关。
水源中的细菌数量较少，可能是由于水中的氧气含量较低，限制了细菌的生长。
而土壤中的细菌数量较多，可能是由于土壤中丰富的有机物质提供了充足的营养。
此外，我们还发现食品样品中的细菌总数也较高。
这一结果提醒我们在食品加工和储存过程中要加强卫生管理，以避免细菌污染对人体健康的威胁。
同时，对于食品行业来说，测定食品中的细菌总数也是保证产品质量和安全的重要手段之一。
细菌总数的测定方法中，平板计数法是最常用的方法之一。
它的优点在于简单易行、结果直观可靠。
然而，平板计数法也存在一定的局限性。
首先，这种方法只能测定可生长的细菌数量，无法测定处于休眠状态或无法在特定培养基上生长的细菌。
其次，平板计数法需要较长的培养时间，通常需要24小时以上。
因此，在紧急情况下，需要快速测定细菌总数时，平板计数法可能不适用。
结论：细菌总数的测定是一项重要的实验工作，它对于环境监测、食品安全等领域具有重要意义。
通过实验，我们成功测定了不同样品中的细菌总数，并发现了不同环境中的细菌总数存在显著差异。
细菌总数测定方法
细菌总数测定方法细菌总数测定是一种用来确定给定样品中存在的细菌总数量的方法。
在微生物学和生化学领域中，细菌总数的准确测量对于研究微生物活动、食品安全、健康和环境健康等方面非常重要。
下面将详细介绍细菌总数测定方法的原理、步骤和常用技术。
1. 细菌总数测定的原理：细菌总数测定的原理基于细菌的生长和繁殖特性。
在适宜的培养条件下，细菌会通过二分裂等方式进行繁殖。
通过培养基的可见菌落计数或显微镜下的细胞计数，可以得出给定样品中的细菌总数。
2. 细菌总数测定的步骤：（1）制备培养基：根据需要培养的细菌类型选择适宜的培养基，如普通营养琼脂培养基（Nutrient Agar）、肉汤葡萄糖琼脂培养基（Tryptone Glucose Yeast Extract Agar）等。
制备过程中要注意无菌操作，以避免外源性细菌的污染。
（2）样品制备：将待测样品适当稀释，以使细菌总数在可计数范围内。
稀释液可以选择生理盐水、磷酸盐缓冲液等。
（3）接种培养：将稀释好的样品分别接种在含有适宜培养基的琼脂平板上。
通过平板接种法或涂布法使细菌均匀分布于琼脂表面。
（4）培养条件控制：将接种好的琼脂平板放入恒温培养箱中，在适宜的温度和湿度下培养。
常见的培养温度为37，培养时间根据细菌类型和繁殖速度确定，通常为18-24小时。
（5）细菌计数：培养一段时间后，通过可见菌落计数或显微镜下的细胞计数确定细菌总数。
对于可见菌落计数，需要计算样品中每个可区分的菌落单元数。
对于显微镜下的细胞计数，可以使用像计数室或显微镜装置来准确计数细菌。
3. 常用细菌总数测定技术：（1）可见菌落计数法（plate count method）: 将稀释好的样品通过平板接种法均匀播种在琼脂平板上，通过培养后可见菌落数来确定细菌总数。
这是一种简单、常用的方法，适用于可培养的细菌。
（2）显微镜计数法(microscopic count method)：通过显微镜下观察直接计数细菌细胞数来确定细菌浓度。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法可真是太重要啦！它能让我们清楚地了解环境或样本中细菌的数量情况。
那具体是怎么操作的呢？首先要准备好培养基，比如常用的营养琼脂培养基。
然后就是采样啦，这可不能马虎，一定要保证采样的代表性和准确性。
接下来把样品进行适当稀释，这一步要细心哦，不然可就不准确啦！再把稀释后的样品接种到培养基上，要均匀分布哟！最后就是培养啦，在适宜的温度下培养一段时间。
这里要注意的是，操作过程一定要严格无菌，避免污染，不然结果就不准确咯！而且稀释度的选择也很关键呢，要根据实际情况合理选择。
在这个过程中，安全性那是相当重要的呀！毕竟是和细菌打交道嘛。
所有的操作都要在无菌环境下进行，保证操作人员不会受到细菌的侵害。
稳定性也不容忽视呢，只有保证每次操作的一致性，才能得到可靠的结果呀。
那细菌总数的测定方法都有哪些应用场景和优势呢？哇塞，那可多了去啦！在食品行业，可以检测食品的卫生状况，保障我们的食品安全，这难道不是超级重要的吗？在医疗卫生领域，可以监测环境的细菌污染情况，为疾病防控提供依据呢。
它的优势就在于简单易行、成本较低，而且能快速得到结果呀。
就拿食品生产企业来说吧，通过定期检测生产环境中的细菌总数，可以及时发现问题，采取措施改进生产工艺和卫生条件，从而避免食品安全问题的发生。
这不是实实在在的效果吗？
细菌总数的测定方法真的是非常实用且重要的呀！它能帮助我们更好地了解和控制细菌的存在，保障我们的生活和健康呢！。
实验八 环境样品中细菌总数的测定
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀 释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之 间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍 数进行报告。
（2）选择平均菌落数在50～200之间稀释度的平 板。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围 时，则以该平均菌落数乘以稀释倍数，作为该水
样的细菌总数进行报告。
（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之 间，则按两个稀释度菌落总数的比值来决定取数。 如比值小于2，应取两者的平均数；如比值大于2， 则取其中较小的菌落总数进行报告。
标准方法规定在样品制备的30min内进行倾注或涂步,以防 止细菌的自溶。大多数的细菌20min一代，但是在处理样 品中的微生物是受到应激的，生长力并不是很强 （但是我 们也不能排除这种可能）
实验报告
报告样品中细菌总数 分析实验结果（成功或失败，可能的问题） 比较不同环境样品中细菌种类和数量的差
一、实验目的
1．学习环境样品（水样、泥样）采取方法和
细1菌．总学数习的环测境定样方品法（。水样、泥样）采取方 2．了法解平和板细菌菌落总计数数的的测原定则方法。 3. 比2较．不了同解环平境板中菌细落菌计种数类的、原数则量的差异
二、基本原理
本实验应用平板菌落计数技术来测定环境样品中的 细菌总数。
异
计算菌落总数方法举例
平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要， 一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的 平均菌落数在50个左右为最好。
（7）菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数 报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有 效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩 短数字后面的零数也可用10的指数来表示。在所需 报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释 倍数。
细菌总数测定
菌落总数测定（一）实验材料1. 仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2. 培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、平板计数琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0 ±.23. 待检样：利乐包装鲜牛奶250mL（二）实验方法与步骤1. 检验程序菌落总数检验程序：检样一做成几个适当倍数的稀释液一选择3个适宜稀释度各以1mL之量分别入灭菌平皿内—每皿内加入46°C 15-20mL营养琼脂—置36± °C恒温箱内培养（48i2）h取出—菌落数—报告2. 检样稀释及培养（1 ）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25mL 鲜牛奶，放于含有225mL 灭菌生理盐水的500mL 灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1:10 的均匀稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1:100的稀释液。
（3）另取1mL 的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支1mL 灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46C营养琼脂培养基注入平皿15mL~20mL, 并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1mL 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±C恒温箱内培养（48±0 h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
细菌总数测定实验报告
细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。
细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。
本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。
实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。
通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。
2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。
稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。
3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。
我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。
4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。
然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。
培养时间为24小时。
5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。
根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。
实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。
结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。
此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。
讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。
通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。
自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。
空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。
餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。
稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。
过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。
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2.细菌总数的测定
菌液逐级稀释过程示意图
(1)水样吸取及水样稀释
选择平均菌落数在50～200之间稀释度的平板为适宜。当只 有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落 数乘以稀释倍数，作为该样的细菌总数进行报告。若细菌数 多到无法计数时需要继续稀释，使其稀释培养后平板上的菌 落数在30-300个之间。
或多个3细7胞℃。2因4-此48，h计培数养结后果所比生实际长细的胞菌数落低数，。CFU(菌落形成单
位） 绝对菌落数来表示样品中活菌含量的原因。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某
些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污
染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常
（5）计数
(一)菌落计算原则 对那些看来相似，并且长得相当接近，但并不相触的菌落，只
要它们之间的距离至少相当于最小菌落的直径，便应该—一予 以计数。 对链状菌落．看来似乎是由于一团细菌在琼脂培养基和水样的 混合中被崩解所致，应把这样的一条链当做一个菌落来计数， 不可去数链上各个单—的菌链。 若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采 用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。 若片状菌落少于平皿的一半时，而另—半中菌落分布又均匀， 则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后， 应算出同一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
一、实验目的
1．学习环境样品（水样、泥样）采取方法和
细1菌．总学数习的环测境定样方品法（。水样、泥样）采取方 2．了法解平和板细菌菌落总计数数的的测原定则方法。 3. 比2较．不了同解环平境板中菌细落菌计种数类的、原数则量的差异
二、基本原理
本实验应用平板菌落计数技术来测定环境样品中的 细菌总数。
（二）计数方法 培养48h后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的 菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数 ×稀释倍数×5（每次取样均是0.2ml）
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 。 同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。如相差 较大，表示试验不精确。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应 按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数进行。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则按稀 释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之 间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍 数进行报告。
注意事项：
稀释操作时，要尽量减少样品稀释误差，而且每个稀释度 的菌液应各用一支枪头。
充分混匀。震荡是多角度震荡，每个部位都振，混匀很重 要的 （有些细菌比较黏稠，要打散成单细胞）
倒平板时要注意控制培养基的温度，一方面防止琼脂过热 （手背皮肤有针刺感）和凝固（会影响后期的结果）
为使菌落能在平板上均匀分布，样品液加入平皿后，应尽 快倾注培养基并旋转混匀。
计算菌落总数方法举例
平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要， 一般以三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的 平均菌落数在50个左右为最好。
（7）菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数 报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有 效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩 短数字后面的零数也可用10的指数来表示。在所需 报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释 倍数。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液
接种本到试培验养采皿中用，标使准其平均皿匀法分布对于水平样皿中中细的菌培养作基计内数，，经这培是养后，
由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品
中的含测菌定数。水中好氧和兼性厌氧异养细菌密度的方法。 待测细样菌品总不易数分是散指成1单m细L胞水，样平在板营上每养个琼菌脂落培有可养能基来中自，2个
标准方法规定在样品制备的30min内进行倾注或涂步,以防 止细菌的自溶。大多数的细菌20min一代，但是在处理样 品中的微生物是受到应激的，生长力并不是很强 （但是我 们也不能排除这种可能）
实验报告
报告样品中Байду номын сангаас菌总数 分析实验结果（成功或失败，可能的问题） 比较不同环境样品中细菌种类和数量的差
（2）选择平均菌落数在50～200之间稀释度的平 板。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围 时，则以该平均菌落数乘以稀释倍数，作为该水
样的细菌总数进行报告。
（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之 间，则按两个稀释度菌落总数的比值来决定取数。 如比值小于2，应取两者的平均数；如比值大于2， 则取其中较小的菌落总数进行报告。
实验九 环境样品中细菌总数的 测定
------ 平板菌落计数法
微生物生长量的测定
（一）稀释平板菌落计数法 是一种最常用的活菌计数法。
（二）血球计数板法（P53） 这种方法的特点是测定简便、直接、快速，但测定的对象有一定
的局限性，只适合于个体较大的微生物种类，如酵母菌、霉菌的孢 子等；此外测定结果是微生物个体的总数（活菌和死菌） （三）称干重（一般干重为湿重的10-20%） 这种方法较适合于丝状微生物的生长量的测定，对于细菌来说，一 般在实验室或生产实践中较少使用。 （四）比浊法 (浊度计）
受各种因素的影响。
三、材料与器皿
(—) 固体培养基 1、牛肉膏蛋白胨培养基（用于淡水、土壤 样） 2．2216E培养基(用于海水、海泥样)
（二）材料： 移液器、灭菌水、无菌平皿、盛有 4. 5 ml无菌水的试管、试管架和记号笔等。 （在空试管中加入无菌水及待测样品混匀）
四、实验操作
1. 水样采集-----湖水和海水
异
由于水/泥样中细菌种类繁多，它们对营养和其它 生长条件的要求差异很大，不可能找到一种培养基 在同一条件下，使所有的细菌均能生长繁殖，因此， 以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来 的水中 总细菌总数仅是近似值。目前，一般是采 用营养丰富的牛肉膏蛋白胨培养基---淡水、土壤 中细菌，2216E---海洋细菌的生长繁殖，出现肉 眼可见的菌落来计数。
（在本实验中，预先了解环境样品中可能的细菌数量，设计稀释梯 度；如未知环境样品，应该做多个试验梯度及3个以上平行梯度）
(2)吸取稀释后水样（0.2ml）加入平板
(3)于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中， 倒入溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基 (15～20mL)
(4)置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后， 倒置于37℃温室中培养。