基因工程期末复习题
基因工程期末考试试题.docx
基因工程试卷B名词解释（每个2分，共20分）1、转化：2、质粒转移性：3、DNA文库：4、RACE:5、选择标记基因:6、降落PCR7、载体：8、感受态细胞：9CaMV35s:10、ORF:二、选择题（每题1分，共15分）2(）限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A修复自身的遗传缺陷C强化自身的核酸代谢）生物工程的下游技术是基因工程及分离工程促进自身的基因重组提局自身的防御能力蛋白质工程及发酵工程D分离工程及蛋白质工程1(3）基因工程操作常用的酶是:（1内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶A.I + IIB. I + III + IVC. II + III + IVD. I +11 + IV + III4 ()限制性内切核酸酶的星活性是指：A在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。
B活性大大提高C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5()下列五个DNA片段中含有回文结构的是A.GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ()关于cDNA的不正确的提法是：A同mRNA互补的单链RNAB同mRNA互补的含有内含子的DNAC以mRNA为模板合成的双链RNAD以上都不正确7()下列有关连接反应的叙述，错误的是A,连接反应的最佳温度为37 °CB,连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C,连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于ImMD,连接酶通常应过量2-5倍8( )T4 -DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A. 2' -OH 和5' —PB. 2' -OH 和3'-PC. 3'-OH 和5' —PD. 5'-OH 和3' -P9()载体的功能是A.外源基因进入受体的搭载工具B.不能为外源基因提供整合能力C.不能提供复制能力D.不能为外源基因提供表达能力10()黏性末端连接法，不仅操作方便，而且A产生新切点B易于回收外源片段C载体不易环化D影响外源基因的表达11()下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)D X噬菌体12()考斯质粒(cosmid)是一种A.容量最大一种载体B,由X-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C.是一种单链DNA环状载体D,不能在受体细胞内复制，但可以表达13()某一重组DNA 的载体部分有两个BamHI酶切位点。
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中，限制性内切酶用于切割DNA分子，产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物，通过对生物基因进行改造，使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具，可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗，通过修复或替换异常基因，治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术，可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题（每题10分，共30分）1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中，然后转化到宿主细胞中，使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术，通过在DNA复制过程中加入特定引物，使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物？请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造，将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的遗传性状的生物。
例如，将耐旱基因导入水稻，使其具有抗旱能力；将Bt毒素基因导入棉花，使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用？举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如，利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因，治疗遗传性疾病。
另外，基因工程也可以用于疫苗研发，通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞，产生病原体的抗原蛋白，从而刺激免疫系统产生抗体，用于预防传染病。
《基因工程原理与应用》期末考试试卷附答案
《基因工程原理与应用》期末考试试卷附答案一、名词解释(共5小题，每小题4分，共20分)1、基因工程：2、星活性：3、插入型载体：4、反转录PCR：5、感受态：二、填空题(共10空，每空2分，共20分)1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是。
2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为和。
3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入Lytic growth 也可以进入Lysogenic state 。
如果其基因组DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入。
；它也可以选择进入，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。
4、ddNTP 与普通的dNTP 的不同之处在于ddNTP ，它们可以在DNA 聚合酶的作用下，通过其掺入到正在增长的DNA 链中，导致链延伸反应终止。
5、Klenow DNA 聚合酶是经蛋白酶裂解而从全酶中除去活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。
三、选择题(共10题，每小题2分，共20分)1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）。
A、特定的三联密码；B、双链DNA 的特定碱基对；C、双链DNA 的特定碱基序列；D、单链DNA 的特定碱基序列。
2、在切口平移方法标记DNA 探针时只能使用（）。
A、Klenow 酶；B、DNA 聚合酶Ⅰ；C、DNA聚合酶Ⅱ；D、DNA聚合酶Ⅲ。
3、在下列进行DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（）。
A、反应体积；B、酶反应温度；C、反应时间；D、酶量。
4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（）。
A、退火温度过低；B、退火温度过高；C、dNTP 浓度过高；D、循环次数过多。
5、以下不属于PCR 的应用的为（）。
A、随机扩增多态性DNA（RAPD）；B、扩增片段长度多态性（AFLP）；C、RACE；D、S1 酶作图。
6、pUC18 与pUC19 的区别在于（）。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案：B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶？A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案：C3. 基因枪技术主要用于：A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案：A二、填空题1. 基因工程中，常用的载体有________、________和________。
答案：质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中，________是基因表达的调控元件。
答案：启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案：基因工程的基本步骤包括：目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些？答案：基因工程在医学领域的应用包括：生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案：基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面：提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案：基因工程在环境保护中的应用主要包括：开发生物修复技术，用于污染土壤和水体的净化；利用基因工程改造微生物，用于处理工业废水和废气；通过基因工程改良植物，用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉，该抗虫棉能够减少农药的使用，降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案：该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量，减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本，提高作物产量，增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染，保护生态平衡，促进农业的可持续发展。
基因工程复习题及参考答案
基因工程复习题及参考答案1、什么是移动基因？移动基因又叫转位因子（transposable elements），它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置，甚至在不同的染色体之间跃迁，也有称跳跃基因。
（或控制因子、结合解离因子）2、什么是断裂基因？在编码序列中间插入无编码作用的碱基序列，从而使一个基因被分隔成不连续的若干区段的基因，这类基因被称为间隔或断裂基因。
3、什么是假基因？是一种核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同，但却不能合成出功能蛋白质的失活基因。
在真核生物中是很普遍存在，它形成的主要原因是小的碱基对缺失或插入以致不能正常编码。
4、什么是重复基因？即在基因组中有多个拷贝的基因。
在真核生物基因组中发现这种现象，真核生物中的重复基因可以达到30%。
重复基因主要是为了满足生物体快速发育的需要。
5、什么是重叠基因？即多个基因共用碱基对的基因。
重叠方式有完全重合叠，也有部分重叠。
6、什么是基因工程？对DNA的遗传基因进行体外操作，把不同来源的基因按照单元设计的蓝图，重新构成新的基因组合，再把它引入细胞中，构成具有新的遗传特性的生物。
7、基因工程的主要研究内容？（1）从复杂的生物有机体基因组中分离出带有目的基因的DNA片段。
（2）体外连接重组DNA分子。
（3）重组DNA分子转移到适当的受体细胞并增殖。
（4）从大量的细胞群体中筛选获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。
（5）从受体细胞克隆提取目的基因。
（6）将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，产生出人类所需要的物质。
8、核酸的凝胶电泳基本原理在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。
在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。
F＝QE。
（1）核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子化状态的，——DNA和RNA的多核苷酸链可叫多聚阴离子。
（2）当核酸分子放置在电场中时，它就会向正电极的方向迁移。
基因工程复习题及答案
基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案：B2. 基因工程中常用的载体是：A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案：D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞？A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案：C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是：A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案：B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的________、________、检测与表达。
答案：提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。
答案：基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中，________技术可以用于快速繁殖转基因植物。
答案：组织培养9. 基因工程中，________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。
答案：农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。
答案：抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。
答案：基因工程在环境保护方面的应用主要包括：- 利用基因工程改造微生物，以降解环境中的有毒物质，如石油污染物。
- 通过基因工程改良植物，使其能够耐受重金属污染，从而净化土壤。
- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水，减少水体污染。
12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。
答案：基因工程在生物制药领域的主要应用包括：- 生产重组蛋白质药物，如胰岛素、干扰素等。
- 利用转基因动物生产药物，如转基因羊产生的抗凝血酶。
- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。
- 开发基因治疗药物，用于治疗遗传性疾病。
基因工程期末考试题及答案
基因工程期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案：B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案：D3. 基因枪法是一种：A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案：A4. 重组DNA技术中，通常使用哪种质粒作为载体？A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案：A5. 基因工程中，目的基因的表达通常需要：A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案：D二、填空题（每空2分，共20分）1. 基因工程是指按照人们的意愿，将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子，然后导入到活细胞和生物体内，以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。
2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。
答案：哺乳动物细胞3. 基因工程中，________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。
答案：DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。
答案：启动子；终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。
答案：重组蛋白；单克隆抗体三、简答题（每题10分，共30分）1. 请简述基因工程在农业中的应用。
答案：基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。
例如，通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用，提高棉花的产量和质量。
2. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。
例如，利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病，单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。
3. 请解释什么是转基因生物，并简述其潜在的风险。
基因工程概论期末考试
一、名词解释(20’)引物、克隆、探针、转化率、重组率、基因工程、分子克隆技术、限制性核酸内切酶1、基因工程基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
2、基因表达是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子3、限制性核酸内切酶能特异性识别双链DNA某段特殊序列，并切割DNA双链的酶，主要存在于原核细菌中，主要作用是保护自身DNA不受限制，及破坏外源DNA使之迅速降解4、重组率：重组率= 含有外源DNA的重组分子数/ 载体分子总数在常规实验条件下，重组率一般为25-75%；重组率是衡量连接反应效率的重要指标，较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作5、探针一小段单链DNA或RNA片段，用于检测与其互补的核酸序列，双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素(P-32常用)、荧光燃料或酶标记成为探针1 U DNA连接酶的酶活性在最佳反应条件下15 ℃反应1h，完全连接 1 mg l-DNA（Hind III片段）所需的酶量二、选择题1、重组乙肝疫苗是由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。
前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗2、基因工程用于药物筛选模型的战略3、控制质粒拷贝数的意义是使外源蛋白在细胞内更稳定4、酵母作为受体，比大肠杆菌的优势在于大肠：原核酵母：真核，具有多种细胞器，在用于生产需加工分泌的蛋白质时比大肠杆菌有优势5、分子杂交的化学本质是形成氢键6、PCR定点突变DNA的方法是碱基的添加、删除、点突变7、双链DNA切开后，两链末端基团是5'-磷酸基和3'-羟基的末端『五菱三枪』8、限制性核酸内切酶缓冲液中，DTT的功能是还原，抗氧化。
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2012级基因工程复习题名词解释1.限制酶：是由细菌产生的一类能特异识别双链DNA中的特定碱基序列，并在识别位点切割磷酸二酯键的核酸内切酶。
2.同尾酶：来源不同、识别序列不同，但切割后能产生相同黏性末端的限制性核酸内切酶。
3.外切核酸酶：一类从多核苷酸的末端开始逐个降解核苷酸的酶。
4.同切点酶：一类来源于不同微生物、能识别相同序列的限制性核酸内切酶。
5.反转录酶：是依赖于RNA的DNA聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之一。
6.新裂酶：识别序列相同、但切割位点与原型酶不同的酶。
7.星号活性：是指当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性的现象。
8.质粒：存在于多种宿主细胞、独立于染色体外的可以自主复制闭合环状的DNA分子。
9.松弛型质粒：其复制宿主不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝数的质粒。
10.隐蔽质粒：不赋予寄主细胞任何表型或者究竟赋予寄主细胞何种表型，迄今仍未清楚，因此特称这类质粒为隐蔽质粒。
（自己搜的，正确性不明确）11.人工染色体载体：染色体具有复制功能，利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体。
12.表达载体：可携带外源DNA片段进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体，即用于在宿主细胞中高水平表达外源蛋白质的载体。
13.克隆载体: 克隆和运载目的基因并转移到宿主细胞中进行复制和扩增的载体。
14.平末端：限制性核酸内切酶在识别序列的对称轴上切割形成的片段末端。
15.黏性末端：是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来。
16.反向PCR：由已知的一段DNA序列向两端扩增未知核苷酸序列并能快速获得未知序列的PCR操作。
17.PCR平台效应：PCR反应经过一定数量的循环后，随着产物的对数积累趋于饱和，DNA 片段不再呈指数积累，而进入线性增长期或静止期的过程。
18.简并序列：同一种氨基酸具有两个或更多个密码子对应，即一段氨基酸序列可以有多个可能的编码序列。
19.终止子：是为转录提供终止信号的一段DNA序列。
20.目的基因：基因工程中克隆的目标DNA分子。
21.基因表达：遗传信息从DNA转到mRNA，再到蛋白质的过程。
22.RNAi：双链RNA对基因表达的阻断作用称为RNA干扰。
23.感受态细胞：处于能吸收外源DNA分子的生理状态的细胞。
24.简并引物：用来编码一段短肽不同碱基序列的混合物。
25.增强子：是远距离调节启动子并提高转录效率的一段DNA序列。
26.启动子：是RNA聚合酶识别、结合并起始转录的一段DNA序列。
27.沉默子：是远距离调节启动子并降低转录效率的一段DNA序列。
28.盒式诱变：是一种定点突变技术，将靶基因的一段DNA删掉，并用人工化学合成所具有的突变核苷酸的双链寡核苷酸片段取代的技术。
29.基因治疗：指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。
30.cDNA 文库：利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称cDNA文库。
31.转化：细菌获得外源质粒DNA，产生新的遗传性状的过程。
32.基因漂移：指转基因生物中的目的基因在生物个体、种群甚至物种间自发移动是过程。
33.实质等同原则：是安全评价的起点，是指以有安全食用历史的传统食品为基础，要求转基因食品和它所替代的传统食品至少要同样安全。
34.切口：两个相邻核苷酸之间缺少一个磷酸二酯键35.裂口：缺少一个或几个核苷酸36.MCS:多克隆位点37.YAC:酵母人工染色体38.MAC:哺乳动物人工染色体39.TAC:可转移人工载体填空题1.基因工程常用的DNA连接酶有两种：一个是（大肠杆菌）DNA连接酶，由NAD+供能，另一个是（ T4 ）DNA连接酶，由ATP供能。
2.在DNA保存液中，常加一滴氯仿，主要是起（有效防止细菌和核酸的污染）的作用。
3.对于双链DNA分子，在一条链上失去了一个磷酸二酯键称为（切口），失去一段单链称为（缺口）。
4.限制性内切核酸酶的命名原则，第一个大写字母取自（微生物属名）的第一个字母，第二、三个字母取自（种名）的前2个字母，第四个字母用株名表示。
5.在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显（白）色，为（阳性）克隆，未插入基因的克隆显（蓝）色，为（阴）性克隆。
6.基因序列经碱基替代、缺失或插入后，可使遗传信息产生三种不同的后果，分别是（同义突变）、（错义突变）、和无义突变。
7.在分离DNA时，要戴手套操作，原因是手上有（核酸酶）。
8.乙醇沉淀DNA的原理是（乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，是理想的沉淀剂。
）9.依据质粒自身传递的性质可以分为（结合型）质粒和非结合型质粒，依据可否引起宿主细胞出现新性状分为显性质粒和（隐性质粒），根据质粒的复制性可分为严紧型质粒和（松弛型质粒）。
10.抽提含pBR322系列质粒的细菌前，需在培养基中加入一定浓度的氯霉素，此氯霉素的作用是（抑制蛋白质合成，阻止细菌染色体复制）。
11.基因工程众多的工具酶可粗略分为（限制酶）、（连接酶）、（聚合酶）、（修饰酶）4类。
12.核酸探针可分为2类：DNA探针和RNA探针。
其中DNA探针又分为（单链DNA探针）和（双链DNA探针）13.E.coli感受态出现的生理时期是（对数生长期）14.在质粒pBR322的抗四环素基因插入一个外源DNA，转化细菌后，就不可以再用四环素筛选出这种细菌了，这种现象称为（插入失活）。
15.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，电泳时迁移率也不同，SC DNA的泳动速度最（快），OC DNA泳动速度最（慢），L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。
16.PCR是（聚合酶链式反应）的简称，PCR反应体系的基本要素有（缓冲液）、（模板）、(dNTP ）、（引物）等。
17.pBR322的构建元件来源于三个亲本质粒：①pSE2124：提供Ampr基因；②pMB1：提供Colel松弛型(复制子)(Ori)；③pSC101：提供(Tetr)基因。
简答题、论述题1.基因工程技术流程有哪些？答：基因工程：在体外将外源基因进行切割并与一定的载体连接，构成重组DNA分子并导入相应受体细胞，使外源基因在受体细胞中进行复制、表达，使目的基因大量扩增或得到相应基因的表达产物或进行定向改造生物性状的过程。
技术流程环节：①目的基因的克隆②载体的准备③目的基因与载体的连接④重组DNA转化/转染/转导⑤重组体的筛选与鉴定⑥重组体的大量培养，外源基因表达效应的分析与开发应用2.构建克隆载体应满足的条件是什么？答：（1）具有对受体细胞的可转移性，能携带外源基因进入宿主细胞；（2）能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖；（3）具有由单一限制性内切酶识别位点组成的多克隆位点，可供外源基因插入；（4）具有合适的选择性标记，用于含有重组质粒的宿主细胞筛选。
3.PCR原理、反应体系和基本过程：答：聚合酶链式反应（PCR）：是Kary Mullis于1985年发明的核酸体外扩增技术。
1)PCR技术原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
即在体外适合的条件下，在引物、模板、dNTP、Mg2+存在的情况下，由DNA聚合酶催化dNTP 合成DNA的反应。
2)PCR反应体系：①缓冲液②模板③dNTP ④耐热的DNA聚合酶⑤引物⑥最佳反应条件PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
4.影响限制酶活性的因素有哪些？答：（1）DNA样品的纯度（2）DNA样品的甲基化程度（3）缓冲液性质（4）酶切反应的温度（5）酶的纯度（6）DNA分子的构型（7）酶的星号活性5.核酸的分子杂交有哪些类型？论述在什么情况下使用这些方法？答：①Southern杂交：是将DNA片段从琼脂糖转移到滤膜上。
检测特点DNA②Northern杂交：检测某一特定RNA分子的方法，可用于RNA定性和定量分析。
③菌落杂交：挑选出含有插入序列的菌落或噬菌斑。
用于重组噬菌斑克隆筛选。
④斑点印迹杂交和狭线印迹杂交：主要用于基因组中特定基因及其表达情况的定性或定量研究。
⑤Western杂交：检测可知被检生物细胞内目的蛋白的表达与否，表达量及分子质量等。
⑥液相杂交：核酸酶S1保护分析法、引物延伸分析法和抑制性消减杂交等。
6.基因克隆会用到连接反应，其影响因素有哪些？答：连接反应：在DNA连接酶的作用下，将外源基因DNA片段和线性质粒DNA连接起来构成重组质粒的过程。
影响因素：①反应温度②连接酶浓度③ATP浓度④DNA片段末端⑤插入片段与载体的浓度比例7.大肠杆菌作为受体系统，其优缺点是什么？答：优点：①遗传背景清楚②培养周期短③目标基因表达水平高④抗污染能力强⑤代谢途径和基因表达调控机制比较清楚⑥有大量可供选择利用的表达载体缺点：①缺少真核基因产物的加工系统，目标蛋白无特定空间构象②内源蛋白质会降解表达产生的目标蛋白，造成目标蛋白不稳定。
8.以λ噬菌体为例叙述基因文库构建的步骤：答：①目的基因的获得；②基因文库第一条链的合成；③基因文库第二条链的合成，即双链的合成；④λ噬菌体载体的构建，与目的基因相互连接，形成重组子；⑤导入宿主细胞中（如大肠杆菌）进行整合、扩增、克隆重组子⑥重组子的筛选与鉴定9.基因文库构建的步骤：答：（1）基因组DNA的分离制备（2）基因组DNA的片段化（3）载体制备（4）重组连接（5）噬菌体离体包装（6）重组噬菌体感染大肠杆菌10.cDNA基因文库构建的步骤：答：（1）细胞总RNA的提取和mRNA的分离（2）第一条cDNA合成（RnaseH的作用）（3）第二条cDNA合成（4）双链cDNA克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖11.目前利用基因差异表达获得目的基因的技术主要有哪些？技术原理是什么？它们各有什么优点和缺点?答：⑴差异显示PCR：根据绝大多数真核细胞mRNA3'端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）结构，可用含oligo（dT）的寡聚核苷酸为引物将不同的mRNA反转录成cDNA优点：速度快，操作简单，灵敏度高而且样品需要量少，一定程度上克服了差减杂交和扣除杂技技术的不足。