7种中药对蛋白质非酶糖基化反应的抑制作用_杨虹

中图分类号： R285. 5
文献标志码： B
文章编号： 1001-1528（ 2013） 08-1764-03
doi： 10. 3969 / j． issn． 1001-1528． 2013． 08． 042
晚期糖基化终末产物 （ advanced glycation endproducts， 简称 AGEs） 是在非酶条件下，蛋白质、氨基酸、脂类或核 酸等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合、重 排、裂解、氧化修饰后产生一组稳定的终末产物。大量研 究表明，AGEs 在糖尿病及其 并 发 症、尿 毒 症、Alzheimer （ 阿尔次海默） 病、白内障、脊髓侧索硬化症等疾病和衰 老的发生发展过程中具有重要作用，尤其是在糖尿病中的 发生过程中起着重要作用。AGEs 分子之间可以通过交联形 成大分子物质，沉积在包括脑在内的各种组织器官，从而
1. 2. 1 样品制备 7 种中药提取物均由本实验室分别按表
1 进行提取，制备。
表1
7 种中药提取物的制备
中文名
玉米须 罗布麻 葛根 决明子 杜仲叶 百里香 山茱萸
拉丁学名
Zea mays Apocynum venetum
Pueraria lobata Cassia obtusifolia Eucommia ulmoides Thymus valgaris Cornus officinalis
收稿日期： 2012-08-10 作者简介： 杨 虹 （ 1971—） ，女，副研究员，天然产物化学方向。Tel： 13162653838，Email： hongyang@ cn. nuskin. com
1764
2013 年 8 月 第 35 卷 第 8 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
溶剂
80% 乙醇 H2 O
95% 乙醇 95% 乙醇 50% 乙醇 95% 乙醇 70% 乙醇
提取物 得率 /%
7. 0 27. 1 24. 6 0. 18 29. 0 16. 0 51. 3
1. 2. 2 蛋白质糖基化反应体系的建立 参照 Fari 等［15］和 Vinson 等［16］方法，将 D-葡萄糖，D-果糖和 BSA 按一定比例 混合，溶于 0. 1 mol / L 的 PBS （ pH7. 4） 中，使其终质量浓 度为 BSA 14 mg / mL，过滤除菌，密封闭光，制成蛋白质糖 基化反应液。样品分别用水，1% Tween 80 或 DMSO 配制 成一定质量浓度，备用。 1. 2. 3 方法重复性考察 取一定量含 BSA 14 mg / mL 的反 应液，共设 12 个平行管，分别向试管中加入终质量浓度为 40 mg / mL 的盐酸氨基胍溶液，并设对照组 （ 加同样体积 PBS） 和空白组 （ 不含葡萄糖 / 果糖） 。置 37℃ 培养箱中孵 育 7 d。糖基化产物孵育结束后，在 430 nm 处检测荧 光 强度。 1. 2. 4 样品对 AGEs 形成的作用 同上，取一定量含 BSA 14 mg / mL 的反应液，每组设 2 个平行管，分别向各剂量组 中加入终质量浓度为 0. 005 mg / mL 的样品溶液，并设对照 组 （ 加同样体积 PBS） 和空白组 （ 不含葡萄糖 / 果糖） 。置 37 ℃ 培养箱中孵育 7 d。糖基化产物孵育结束后，在 430 nm 处检测荧光强度。
7 种中药对蛋白质非酶糖基化反应的抑制作用
杨 虹1 ， 项 英1 ， 庄庆祺1 ， 孙 浩2 （ 1． 如新 （ 中国） 抗衰老研究中心，上海 201203； 2． 如新抗衰老研究中心，普罗沃，犹他州 84601 美国）
摘要： 目的 观察葛根、决明子等几种中药提取物对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响。方法 将牛血清白蛋白和果
随着人们对糖尿病慢性并发症发病机制的深入研究， 非酶糖基化在糖尿病慢性并发症的发生发展中的作用正越 来越引起人们的广泛关注。AGEs 的沉积使大分子物质发生 交联而导致功能障碍，因此抑制 AGEs 的产生对治疗糖尿 病有极其重要的意义。
蛋白质非酶糖基化即还原糖与游离氨基之间发生的非 酶促反应，反应产物呈棕色，具有自发荧光，可用荧光分 光光度计测定荧光值来反应 AGEs 水平，该法是检测 AGEs 较经典的方法，灵敏度和重复性都较好。因此采用此方法， 在 430 nm 处测定荧光，以盐酸氨基胍作为阳性对照。盐酸 氨基胍为 （ AG） 公认的非酶糖基化反应试剂，抑制剂，抑 制 AGEs 生成及交联，能够减少组织的 AGEs 沉积，阻断或 延缓糖尿病相关的器官损害过程。
根据所测数据计算抑制率： 抑制率 （ % ） = （ 1 － F提取物 / F对照组 ） × 100% 空白组荧光强度调为 0； F提取物 = F样品实测值 － F样品空白 2 结果 2. 1 方法重复性结果 40 mg / mL 的盐酸氨基胍对 AGEs 的抑制率分别为 57. 6% 、57. 5% 、57. 7% 、57. 6% 、58. 0% 、 58. 3% 、 59. 4% 、 60. 1% 、 59. 8% 、 61. 0% 、 61. 3% 、 61. 3% 。根据所测数据计算平均值和 RSD。Xaver = 59. 13% ，
参考文献：
［1 ］ 钱 华，王树朋，邓 新． 晚期糖基化终末产物的研究进 展［J］． 中国实用医药，2010，5（ 10） ： 247-248．
糖 / 葡萄糖在体外共同孵育建立体外蛋白非酶糖基化反应体系，并将反应液分成空白组，对照组和药物组，在 37 ℃ 孵
厢中孵育 7 d，检测波长 430 nm 测定各组荧光值。结果 葛根、决明子等明显抑制晚期糖基化终末产物的形成。结论
葛根、决明子等具有抑制蛋白质的非酶糖基化的作用。
关键词： 非酶糖基化； 晚期糖基化终末产物 （ AGEs） ； 葛根； 决明子； 百里香； 罗布麻； 杜仲； 玉米； 山茱萸
葛根、决 明 子、百 里 香、罗 布 麻、杜 仲 为 常 用 中 药， 对体外孵育 AGEs 的形成也有明显的抑制作用，其抑制率 分别为 89. 1% ，90. 6% ，86. 4% ，77. 0% 和 70. 8% 。其中 葛根、决明子、百里香的抑制作用最强。因此进一步对这 些中药中具有抑制蛋白质非酶糖基化的有效成分进行研究， 对于糖尿病的防治有着重要意义。
2013 年 8 月 第 35 卷 第 8 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
August 2013 Vol． 35 No． 8
［9 ］ ［10］ ［11］ ［12］ ［13］
［14］
［15］
［16］
nutritional profile of obese adolescents with nonalcoholic fatty liver disease［J］． J Pediatr Gastroenterol Nutr，2007，44 （ 4） ： 446-452． McCullough，Arthur J． Update on nonalcoholic fatty liver disease ［J］． J Clin Gastroenterol，2002，34（ 3） ： 255-262． 严述常． 猪苓多糖治疗慢性病毒性肝炎的临床和实验研究 ［J］． 中西医结合杂志，1988，8（ 3） ： 14． 黄浩新，何声溥． 葫芦素片 + 猪苓多糖治疗肝炎肝硬化的 疗效观察［J］． 广东医学院学报，1997，15（ 1） ： 54-55． 梁诗飔，黄金城． 猪苓多糖的临床应用［J］． 中国医院药 学杂志，1999，19（ 3） ： 167-169 顾国妹，杨栓平，邱夏地，等． 大鼠实验性脂肪肝模型血 浆和肝脏 脂 质 含 量 变 化 比 较［J］． 肝 脏，2002，7 （ 3 ） ： 181-182 郑素洁，程薇莉，丁茗敏． 酒精性脂肪肝患者血清酶与血 脂水平 变 化 的 临 床 分 析［J］． 实 用 医 学 杂 志，2005，22 （ 5） ： 421 顾国妹，杨栓平，邱夏地，等． 大鼠高脂饮食性和酒精性 脂肪肝超微结构比较［J］． 山西医科大学学报，2001，32 （ 1） ： 1-2 扈国杰，李佃贵，栗世方，等． 酒精性脂肪肝大鼠模型的
RSD 为 2. 6% ，结果说明该方法重复性好。
2. 2 7 种中药提取物对 AGEs 形成的抑制作用 见表 2。
表 2 7 种中药提取物对 AGEs 形成的影响 （ x ± s，n = 2）
样品名称 玉米提取物 罗布麻提取物 葛根提取物 决明子提取物 杜仲叶提取物 百里香提取物 山茱萸提取物
质量浓度 / （ mg·mL － 1 ） 102. 8 102. 5 100. 8 100. 1 100. 2 102. 2 112. 6
［17］
［18］ ［19］ ［20］
［21］
［22］ ［23］
建立及新清肝饮 煎 剂的 防治作 用［J］． 中西 医结 合学报， 2004，2（ 2） ： 123-125 王晓红，曹琦，李 俊，等． 改良法大鼠酒精性脂肪肝模 型的 建 立 ［J］． 安 徽 医 科 大 学 学 报， 2007， 42 （ 4 ） ： 420-423 古 赛，蒋小黎，何 琳，等． 大鼠慢性酒精性脂肪肝模 型的建立［J］． 重庆医科大学学报，2006，31（ 1） ： 81-84 关光玉，曾家慧，张术斌，等． 酒精性脂肪肝小鼠模型的 建立［J］． 宁夏医学杂志，2007，29（ 11） ： 971-972 王海霞，贾柳萍，陈其奎，等． 酒精性脂肪肝患者血脂水 平与肝组织病理改变相关性的实验研究［J］． 国际消化病 杂志，2006，26（ 3） ： 211-213 唐桂蓉，杨尔成，廖福双，等． 饮酒对血清高密度脂蛋白 -胆固醇水平影响的对照研究［J］． 心肺血管学报，1989，8 （ 8） ： 138-140 李清华． 酒 精 对 血 清 高 密 度 脂 蛋 白-胆 固 醇 水 平 的 影 响 ［J］． 中华心血管杂志，1986，14： 178 Brousseau M E，Schaefer E J，Wolfe M L，et al． Effects of an inhibitor of cholesteryl ester transfer protein in HDL cholesterol ［J］． N Engl J Med，2004，350（ 15） ： 1505．