蔗糖合成酶(SS)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC)试剂盒使用说明
土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase,S-SC）试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号：BC0240产品简介：S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3，5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
产品内容：试剂一：甲苯5mL×1瓶，4℃保存；（自备）试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入40mL蒸馏水充分溶解备用；试剂四：液体45mL×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×1支，4℃保存，含10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入1ml 蒸馏水溶解备用，4℃可保存1周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。
标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/ml。
操作步骤：试剂名称测定管对照管标准管风干土样（g）0.10.1-试剂一（μL）1515-振荡混匀，使土样全部湿润，37℃放置15min-试剂二（μL）250250-试剂三（μL）750--蒸馏水（μL）-750-混匀，放入37℃水浴培养24小时，10000g，4℃，离心5min，取上清液，同时准备标准品上清液或标准品（μL）200200200试剂四（μL）500500500充分混匀，放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀。
标准曲线的建立：540nm处蒸馏水调零，读标准管吸光值A。
以浓度（y）为纵坐标，吸光度A（x）为横坐标建立标准曲线。
蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)试剂盒说明书
货号：MS2508 规格：100管/96样蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基低聚糖。
此外，SP还能催化氢醌合成熊果苷，具有极强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用。
测定原理：SP能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。
测定340nm吸光度增加速率，即可计算SP活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1.5mL×1支，4℃保存。
试剂三：液体1mL×1支，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加1mL双蒸水溶解。
试剂五：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加1mL双蒸水溶解。
试剂六：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加2mL双蒸水溶解。
试剂七：粉剂×1支，-20℃避光保存，临用前加2mL双蒸水溶解。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC4310规格:50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入2.5mL试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1支，20mg果糖；4℃保存。
临用前加入1mL蒸馏水溶解，配成20mg/mL果糖溶液备用。
4℃保存一周。
产品简介：蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG与果糖，参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖与UDPG，果糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm处吸光值变化可计算得SS-I活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照质量（g）:提取液体积(mL)为1:5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，8000g，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将20mg/mL标准液用蒸馏水稀释为5、4、3、2、1mg/mL的标准溶液备用。
3、操作表：(在1.5mL离心管中操作)试剂名称（µL）对照管测定管标准管空白管样本2020--标准溶液--20-蒸馏水---20试剂一808080试剂二-80--混匀，30℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失）。
蔗糖合成酶的测定方法[方案]
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蔗糖合成酶的测定方法[方案]蔗糖合成酶的测定方法一、仪器设备冷冻离心机、恒温水浴、分光光度计二、试剂HEPES-NaOH(50mmol/L，pH7.5)缓冲液，包括50mmol/L MgCI;2mmol/LEDTA;20.2%(W/V)BSA;2%PVP;0.1%间苯二酚:称取0.1g溶解并定溶于100ml 95%乙醇中。
30%盐酸、2mol/L NaOH、100mmol/L UDPG、100mmol/L6-磷酸果糖、100mmol/L果糖三、操作方法1、粗酶液制备称取0.5g样品(植物叶片去掉主叶脉)，洗净剪碎，置于预冷的研钵中，加3ml Hepes-NaOH缓冲液，冰浴研磨，10000×g离心10min。
2、酶活性测定依次加入50μL粗酶液，50μLHepes-NaOH缓冲液pH7.5，20μL 50 mmol/LMgCI， 220μL 100mmol/L UDPG，20μL 100mmol/L6-磷酸果糖(20μL 100mmol/L果糖)， 30?中反应30min后，加入200μL 2mol/L NaOH终止反应，沸水煮10min，流水冷却，加入1.5ml 30%盐酸和0.5ml 0.1% 间苯二酚，摇匀后置于80?水浴保温10min，冷却后置于480nm 处，以提前杀死酶活性为空白比色测定蔗糖含量。
同时取50μL粗酶液，加入200μL 2mol/L NaOH，以下同上操作，测定蔗糖含量。
3、蔗糖标线制作:取0、40、80、120、160、200μg/ml的蔗糖溶液50μL，操作同上，然后以蔗糖浓度为纵坐标，以吸光值为横坐标，得方程。
4、计算,1,1样品中酶活性(μg?g?h)=式中 C—反应液催化产生的蔗糖总量(μg);V—提取酶液时加入的缓冲液体积(ml); 1V—酶反应时加入的粗酶液体积(ml) 2淀粉酶活性的测定1方法1.1试剂配制淀粉酶提取缓冲液:0.1mol/L-1柠檬酸溶液(pH 5.6);1%的淀粉溶液:用0.1mol/L-1的柠檬酸缓冲液(pH 5.6)配制;标准麦芽糖溶液(1mg/mL-1);3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS试剂):称取6.5 g 3,5-二硝基水杨酸溶于少量水中，移入1000 mL容量瓶中，加入325 mL 2mol?L-1 NaOH溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容到1000 mL。
分光光度法测定蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)酶活性
蔗糖是重要的光合产物，是植物体内运输的主要物质，优势碳水化合物的暂贮形式之一。
蔗糖合成酶（SS）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）是植物体内催化蔗糖合成的两种酶。
对这两种酶活性的测定，可以了解植物组织合成蔗糖能力的高低。
【实验原理】蔗糖合成酶催化游离果糖与葡萄糖工体UDPG反应生成蔗糖。
UDPG+果糖---蔗糖+UDP这是一个可逆反应，平衡常数为1.3-2.0。
该酶在分解方向的Km值相对较高（30-150mmol/L），细胞中高的蔗糖浓度有利于反应向分解方向进行。
蔗糖合成酶活性测定既可在合成方向进行测定（外加底物UDPG和果糖，测产物蔗糖的量表示酶活性），也可以在分解方向进行测定（外加蔗糖和UPD，测定果糖含量表示酶活性）。
蔗糖磷酸合成酶（SPS）催化UDPG与果糖-6-磷酸（F6P）结合形成磷酸蔗糖：UPDG+F6P---蔗糖-6-P+UDP+H+6-磷酸蔗糖可以经磷酸蔗糖酶（SPP）水解后形成蔗糖。
实际上最近有证据证明SPS 和SPP可以在体内形成一个复合体，因此使得SPS催化的反应基本上是不可逆的。
酶活性测定是外加UDPG和F6P，测定产物蔗糖的量表示酶活性。
一般把SPS-SPP系统看作是蔗糖合成的主要途径，而把蔗糖合成酶看作是催化蔗糖分解的。
果糖是酮糖，可与间苯二酚混合加热反应生成红色产物，在一定范围内糖的含量与反应液颜色成正比。
蔗糖在含有盐酸的间苯二酚中水解成葡萄糖和果糖，也能生成红色产物，在480nm处可比色测定。
【实验材料】植物茎【仪器设备及设备】冷冻离心机，恒温水浴，分光光度计，研钵一套，磁力搅拌器，天平（感量0.01mg），0.1、0.5、1、5ml移液管各1个，10ml具塞试管10支，5ml量瓶一个，冰箱【试剂药品】1.提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(PH7.0)缓冲液，内含5mmol/LMgCl 2,2mmol/LEDTA-Na 2,2%乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSP），2%PVP，5mmol/LDTT。
蔗糖酶测定-2
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2）抽提：
抽提（或叫萃取）是将已破碎细胞壁的材料 置于一定的条件及溶剂中，使被提取物释放出来 的过程。 抽提液可用水或有机溶剂。大部分酶蛋白能 溶于水、稀盐、稀碱或稀酸中。对于普通的酶多 采用缓冲液，有利于酶的稳定。而一些与脂质结 合较牢固的酶，常用有有机溶剂提取。 抽提时缓冲液的离子强度和pH值以及温度的 选择，应既有利于酶的提取又保证酶的稳定。
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3，5-二硝基水杨酸比色ห้องสมุดไป่ตู้糖法工作曲线的制作
试号 含糖量 （mg） 葡萄糖标准 液（ml） 去离子水 3，5-二硝基水 光吸收值 A540 （ml） 杨酸试剂（ml）
1
0
0
2.0
3.0
2
3 4 5 6
0.8
1.2 1.6 2.0 2.4
0.4
0.6 0.8 1.0 1.2
1.6
定。所以，可用DNS比色定糖法测定蔗糖酶的活力。
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3、蔗糖酶分离提取的原理
1）细胞破壁：就酶在生物体内的分布，可分 为胞内酶和胞外酶，蔗糖酶系胞内酶。提取胞内 酶时，要破碎组织和细胞，然后用一定的溶液提 取，得到的材料称为无细胞抽提液。材料不同， 破壁的方法也不同。 我们用的菌体（微生物）细胞破壁方法是： 自溶法，即将菌体放在适当的pH值和温度下，利 用组织细胞自身的酶系将细胞壁破坏，使细胞内 的物质释放出来。 自溶时需加少量防腐剂，以防外界细菌污染。 自溶法的缺点是时间较长。
1.4 1.2 1.0 0.8
3.0
3.0 3.0 3.0 3.0
7
2.8
1.4
0.6
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植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒说明书
植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒说明书试验原理：植物蔗糖合成酶(SS)试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。
内容及其配制自备材料1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1）避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
作注意事项1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
实验4蔗糖酶的活性和比活力测定
实验4 蔗糖酶的活性和比活力测定一、实验目的1、掌握酶活性测定的方法和原理2、掌握酶活力及酶比活力计算二、实验原理1、蔗糖＋蔗糖酶（水解酶）→D-果糖＋Ｄ－葡萄糖用测定生成还原糖（葡萄糖和果糖）的量来测定蔗糖水解的速度。
本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应５min,每产生１mg葡萄糖所需的酶量。
２、DNS试剂＋Ｄ－葡＋强碱液中＋沸水浴生成氨基化合物（棕红色），540nm比色。
三、实验器材1、试剂：葡萄糖0.1%、蔗糖0.2mol/L、1mol/LNaOH、DNS试剂：酒石酸钾钠18.2g,溶于50ml蒸馏水中，加热（不超过50℃），于热溶液中依次加入3，5-二硝基水杨酸0.63g，NaOH 21.0g，苯酚5.0g，无水亚硫酸钠5.0g，搅拌至溶解完全，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，贮存于棕色瓶中，室温保存。
2、仪器：分光光度计、水浴锅3、材料：实验2所得级分Ⅰ、Ⅱ的蔗糖酶四、实验方法1．工作曲线的制作取６只试管，按下表加入2.0mg∕ml葡萄糖标准液和蒸馏水管号葡标准液(ml) 蒸馏水（ml）葡含量(mg/ml)１０１０２ 0.2 0.8 0.43 0.4 0.6 0.84 0.6 0.4 1.25 0.8 0.2 1.66 1.0 0 2在上述试管中＋ＤＮＳ试剂２ml，沸水浴５min，流动水迅速冷却，各加蒸馏水９ml，摇匀，在540nm波长测光吸收值，以葡萄糖含量（mg∕ml）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2．酶液的稀释（级分Ⅰ、级分Ⅱ）各取0.2ml稀释10倍，得到2ml稀释液。
3．吸光度的测定取２ml稀释后的酶液＋２ml 0.2mol∕L蔗糖，立即摇匀开始计时，35℃水浴５min,立即加入１ml 1mol/LNaOH中止反应。
取1ml的反应液＋２ml DNS试剂，沸水浴５min，立即用流动的自来水冷却后，加入９ml蒸馏水，进行吸光度的测定。
五结果计算（1）计算酶的活力稀释后的酶活力→原始酶活力酶活力计算：在室温、pH4.5条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1个活力单位（U）（2）计算级分Ⅰ、级分Ⅱ的比活力比活力= 酶活力/1ml蛋白质的含量注意事项：水浴温度，时间要精确分光光度计的使用六实验思考1、什么是比活力？测定比活力的意义是什么？2、试分析级分Ⅰ、级分Ⅱ的比活力的高低和原因。
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蔗糖合成酶（SS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0580
规格:50T/24S
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体4mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：粉剂10mg×1支，4℃保存，临用前加1mL水，配制成10mg/mL蔗糖溶液，再将其用蒸馏水稀释为500μg/mL备用；
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。
SS（EC 2.4.1.13）催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
操作步骤：
一、测定样品提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定操作表：
1、可见分光光度计预热30min以上，波长调至480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：
试剂名称（μL）测定管对照管标准管空白管
样本3030
蒸馏水150150180
试剂一150
试剂二30
混匀，25℃准确水浴10min
试剂三50505050
沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
试剂四700700700700
试剂五200200200200
混匀，80℃水浴保温20min，冷却后，吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，在480nm下测定各管吸光值。
标准管和空白管各只要做一管。
每个测定管需要设定一个对照管。
计算△A测=A测定管-A对照管，△A标=A标准管-A空白管。
三、SS活力单位的计算：
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1µg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/mg prot)=（C标准管×V1×△A测÷△A标）÷(V1×Cpr)÷T=50×△A测÷△A标÷Cpr 2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1µg蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/g鲜重)=｛C标准管×V1×△A测÷△A标｝÷(W×V1÷V2)÷T=50×△A测÷△A标÷W C标准管：标准管浓度，500µg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；
V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g；T：反应时间，10min。
3、尽量在30min内完成测定。