细胞培养全过程
细胞培养的四个步骤
细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
细胞培养的一般过程
细胞培养的一般过程一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。
准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。
二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。
如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。
机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。
取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。
取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。
取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。
三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。
如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。
如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。
细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。
过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。
细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养的操作步骤
细胞培养的操作步骤细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的方法，广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。
下面是细胞培养的操作步骤，包括细胞的收获、传代和检测。
1.材料准备：- 细胞培养基：选择适合细胞类型和培养要求的培养基，常用的包括DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）和RPMI（Roswell Park Memorial Institute）等。
-细胞：选择合适的细胞系，如人类胚胎肺成纤维细胞（HELF）和小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）等。
-细胞培养器具：包括培养皿、细胞培养瓶、细胞离心管等。
2.细胞收获：-细胞培养器具消毒：用70%乙醇或其他消毒剂将培养器具进行消毒。
-细胞培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞培养皿涂覆：将培养皿或瓶子内壁涂覆一层细胞黏附物，如明胶或聚-卵氨酸等，以增加细胞附着。
3.细胞传代：-培养基预热：将所需的培养基预先加热至37摄氏度。
-细胞收获：将细胞培养瓶中的培养基倒掉，用生理盐水等缓冲液洗涤细胞。
- 细胞分离：使用胰酶（Trypsin）或胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）将细胞从细胞培养瓶上析离下来。
-细胞计数：使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
-细胞培养：将细胞培养在新的细胞培养瓶中，加入适量的预热培养基。
4.细胞检测：-细胞形态观察：使用倒置显微镜或显微摄像系统观察细胞的形态变化和增殖情况。
- 细胞活力检测：使用细胞活力检测试剂，如MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）或CCK-8（Cell Counting Kit-8）等，评估细胞的存活率和代谢活力。
- 细胞凋亡检测：使用凋亡检测试剂盒，如Annexin V-FITC和PI （Propidium Iodide）等，评估细胞凋亡的程度。
细胞培养—传代—冻存—western blot等实验相关步骤
围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结实验一：细胞传代培养材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10%FBS 的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10%FBS的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。
3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。
4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。
5、弃上清液，加入少量10%FBS的1640培养基使成细胞悬液。
6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。
倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆形，细胞间隙等距），标记。
7、放入CO2培养箱中培养，第二天观察生长状况。
总结：1、在用离心机时，看清楚是RCF还是RPM；调节Temp.以及Time。
2、在用移液枪吸出trypsin充分消化后的细胞后，须知用少量培养液清洗一下培养瓶，并将清洗液移入离心管中。
3、每取用一个容器，拧开或者拧上盖子时，注意在酒精灯上旋转一圈。
另外，记住用酒精棉球经常擦拭台面。
4、在用移液枪或者吸管混匀细胞悬液过程中，动作轻柔，避免产生气泡等。
实验二：细胞冻存材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、冻存管、RPMI —1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、FBS、PBS、trypsin、DMSO等步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（OVCAR-3）1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；FBS、RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
细胞培养全过程范文
细胞培养全过程范文细胞培养是一种常用的实验技术，用于研究细胞的生物学特性和功能。
它可以通过在合适的营养基质中提供适当的生长条件，使细胞在体外持续增殖和生存。
下面是细胞培养的全过程：1.细胞株的选择和获取：选择合适的细胞株是细胞培养的第一步。
常用的细胞株有动物细胞株、植物细胞株和微生物细胞株等。
可以通过购买商业化的细胞株、从其他实验室获取、或者通过原代细胞培养得到。
2.细胞传代：细胞传代是指将细胞从一个培养皿转移至新的培养皿，以使细胞得以继续生长和扩增。
传代时需要将细胞从原始培养皿中用消化酶或离心等方法分散单个细胞，然后将细胞转移到新的培养皿中并提供适当的营养物质。
3.培养基的制备和配制：培养基是细胞培养的关键元素之一，它提供细胞所需的营养物质、酸碱平衡和生长因子等。
培养基的制备需要精确称量和配比各种成分，并在高温下进行灭菌处理，以避免细菌、真菌等污染。
4.细胞种植和接种：将传代后的细胞从上一步中得到的新培养皿中收集，然后用适当的浓度和体积将细胞悬浮液接种到新的培养皿中。
接种后需要适当调整培养皿中的培养基和环境条件以促进细胞的黏附和增殖。
5.细胞培养条件的控制：细胞培养条件十分重要，包括温度、气体成分、pH值和湿度等。
一般情况下，细胞培养需要在恒定的温度下进行，通常为37°C。
细胞所需的气体成分和pH值则需要根据不同细胞株的特性进行调整。
6.细胞的观察和监测：在细胞培养过程中，需要定期观察和监测细胞的生长和状态。
可以使用显微镜观察细胞的形态和增殖情况，也可以通过细胞计数仪等设备来定量测量细胞数量和活力。
7.细胞分离和提取：如果需要获取纯净的细胞种群或者分离不同种类的细胞，可以使用细胞分离技术。
常用的细胞分离方法包括胶原酶消化、离心、筛网过滤、细胞排序等。
8.细胞冻存和复苏：为了长期保存和保护细胞株，可以将其冻存。
冻存前需要将细胞进行处理以增加细胞的耐冻性，并在低温条件下将其快速冷冻保存。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。
细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。
(2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。
(4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。
(5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。
基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
transwell细胞培养步骤
transwell细胞培养步骤嘿，朋友们！今天咱就来讲讲 transwell 细胞培养那些事儿。
先来说说准备工作吧，就像要出门得先把鞋穿好一样重要。
你得把各种材料啊、试剂啊都准备齐全咯。
细胞得是状态良好的，不然就像运动员没吃饱饭一样，哪有力气好好表现呀。
还有那培养板，得干净得像刚洗过澡的娃娃脸。
然后呢，就是接种细胞啦。
这可得小心点，别把细胞弄伤了。
就好像给小宝贝穿衣服，得轻手轻脚的。
把适量的细胞慢慢地加到小室里，让它们舒舒服服地待着。
接下来就是培养啦。
这时候你就得像个细心的保姆一样，时刻关注着细胞的情况。
温度要合适，环境要稳定。
这细胞啊，也跟人似的，得在一个舒服的环境里才能茁壮成长。
等培养了一段时间后，你就得看看细胞们有没有好好干活啦。
观察观察它们有没有按照你的期望发展，有没有乖乖地穿过那个小室。
这就好比你种了棵小树苗，你得看看它有没有好好长个儿呀。
哎呀，这 transwell 细胞培养可不简单呢！就跟你学骑自行车似的，一开始可能会摔倒，但多练习几次就会啦。
这里面的细节可多着呢，每一步都不能马虎。
你想想，要是哪一步没做好，那不就像盖房子没打好地基一样，最后房子能结实吗？细胞培养也是这个道理呀。
培养的过程中还得有耐心，不能着急。
就像等一朵花开，你得慢慢等，不能催它呀。
总之呢，transwell 细胞培养是个需要细心和耐心的活儿。
只有认真对待每一个步骤，才能让细胞们茁壮成长，给你带来惊喜的结果呀！大家加油哦！。
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我是细胞培养的新手，在开始养细胞前看到篇文章（老师给的）很实用，希望对大家有帮助。
细胞培养室实验操作规范一、细胞培养室的环境1. 细胞生长要求严格的无毒无污染环境，因此必须注意培养室的清洁卫生，保持操作空间的无菌条件：1) 培养室应为独立、封闭的空间。
培养室及缓冲间都应保持整洁，不要随意出入；2) 保持超净工作台的无菌环境，每次使用前打开紫外灯照射消毒15—30分钟；每次使用后将废弃物清理干净，各用具规放整齐，用70%酒精擦净台面，再打开紫外灯照射30分钟以上；3) 定期擦洗桌面、地板、清洁培养室，并用0.1%的新洁尔灭溶液消毒；定期打开培养室的大紫外灯，将整个房间进行照射消毒；4) 每次打开培养箱前，或手伸入超净工作台进行操作之前，均应用70%酒精擦手。
5) 定期清理冰箱。
将药品试剂分类摆放，过期的试剂应及时清除；6) 培养箱要定期清洁。
隔板及内壁等用0.1%的新洁尔灭溶液清洗，再用70%酒精擦净；并要注意底层水箱的水位，及时补充水份；7) 注意监测CO2的气压，及时补充。
8) 注意监测液氮罐中液氮的挥发情况，及时补充，液面不能低于最高一层细胞冻存盒的位置。
2. 实验器具的清洗、消毒灭菌：1) 反复使用的器皿应严格清洗干净，其清洗程序为：清水浸泡——去污剂刷洗——清水冲洗——超声波洗涤——洗液浸泡（过夜）——充分冲洗（务必冲洗干净，不能残留洗液）——蒸馏水漂洗——烘干；若为新的玻璃器皿，要在刷洗后用5%的稀盐酸浸泡过夜。
*洗液：浓硫酸+重铬酸钾2) 胶塞的清洗：清水浸泡——2%NaOH煮沸10—20分钟——冲洗——1%稀盐酸浸泡30分钟——充分冲洗——蒸馏水漂洗——烘干3) 玻璃器皿，如玻璃吸管、离心管、玻璃培养瓶、套管等等以及胶塞，清洗后均可用高压蒸气灭菌，15磅灭菌30分钟。
4) 不能高压灭菌而又需反复使用的器具，如加样枪、多道枪的加样槽、塑料吸头等，应事先用70%的酒精擦洗，置于超净工作台中用紫外线照射2小时以上。
二、细胞培养用水、用液：1. 胞培养必须使用玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水，二次蒸馏水或外购的金属蒸馏器制备的蒸馏水只能用来清洗器皿；2. 平衡盐溶液（BSS）严格按照配方配制，含Ca++、Mg++离子的要避免其沉淀。
可过滤灭菌或高压灭菌。
采用高压灭菌时如含有葡萄糖等成份，应避免高压过度，一般8磅10分钟及即可。
灭菌后的BSS于4℃冰箱中保存，如出现浑浊或沉淀时，应废弃，重新配制。
3. 培养液的配制，以配制1000ml RPMI1640为例：1) 将RPMI1640干粉倒入约800ml三蒸水中，搅拌使其溶解；2) 加入5.94g HEPES，在磁力搅拌器上搅拌约半小时；3) 加入2g NaHCO3，继续搅拌约2小时；4) 定容至1000ml；必要时用1N NaOH凋至PH7.05) 过滤除菌。
滤纸由上到下为：普通定性滤纸、0.4μm滤膜、0.22μm滤膜；6) 加入抗生素液至每毫升100单位青霉素+100μg链霉素；7) 按需要加入一定比例的血清使用。
常用10%胎牛血清。
8) 密封置于4℃冰箱保存。
超过一个月需补加谷胺酰胺（Gln）。
4. 消化液的配制：实验室采用0.125%胰蛋白酶溶液+0.01%EDTA1) 按0.25%的浓度计算所需的胰蛋白酶量，将称好的胰蛋白酶粉末置于烧杯中，用少许消毒的PBS液（或D-Hank液）调成糊状，再补足盐溶液；2) 搅拌均匀，置于4℃冰箱中一到两天，并不时搅拌振荡；3) 过滤除菌，分装成小瓶，置于-20℃冰箱；4) 按0.02%的浓度计算并称量EDTA，溶解；5) 高压蒸气灭菌，分装成小瓶；4℃冰箱保存；6) 使用时将胰蛋白溶液与EDTA溶液按1:1混合，混合液也可分装成小瓶，保存于-20℃。
5. 冻存液的配制：FBS+10%DMSO，可于4℃冰箱保存。
6. 抗生素液的配制：将青霉素及链霉素用三蒸水溶解，分别配成20万单位/ml及20万μg/ml，再按1：1混合，即为10万单位/ml青霉素+10万μg/ml链霉素。
可于-20℃保存。
使用时按1ml培养基加入1μl抗生素液的比例使用。
三、细胞培养实验基本操作1. 细胞的复苏非原代培养的细胞一般冻存于液氮之中，需要培养时要先从液氮中取出使之复苏：1) 实验准备：将水浴箱温度调至37℃，并将含10%FBS的培养液置于其中预热；2) 在记录本上查到所要复苏的细胞存于液氮罐中的位置；3) 从液氮罐中取出所要细胞，立即置于37℃水浴箱中，使其快速解冻；4) 将冻存管及培养液瓶的外表面用70%酒精擦拭后，入放入超净台；5) 将细胞悬液移到离心管中，并加入2-3ml培养基，用吸管轻轻吹打；6) 1000～1500rpm离心3分钟；7) 吸去上清液，加入2-3ml培养液，吹打均匀，使细胞悬浮；8) 将细胞悬液移到50ml培养瓶中，补加约5-8ml培养液；置于二氧化碳培养箱中培养（拧松培养瓶盖）。
2. 细胞的传代培养的细胞生长至一定密度之后，由于培养液中营养逐渐消耗、代谢物逐步积累（可见到培养液变黄），而且细胞的生长空间也受到限制，就会影响到细胞的继续生存。
这时就需要分离出一部分细胞和更新培养液，这一过程就叫做传代。
1) 悬浮细胞的传代悬浮细胞可以直接将培养瓶中的液体吸掉，只留下少量，然后加入新鲜培养液即可。
当细胞悬液中碎片或颗粒物较多，感觉到比较脏时，可以将悬液移到离心管内，1000～1500rpm离心3分钟，弃上清，加入约2ml培养液，吹打至均匀，滴加2-3滴至已加入新鲜培养液的培养瓶中。
然后置于二氧化碳培养箱中培养（拧松培养瓶盖）。
2) 贴壁细胞的传代(1) 将消化液从冰箱中拿出，37℃解冻、预热；(2) 吸出全部培养液，沿壁缓缓加入消化液，将培养瓶有细胞面向下，加入消化液的量至刚好可以覆盖为止，轻轻摇晃；(3) 置于37℃消化2-5分钟，其间在显微镜下观察，消化至细胞收缩变圆、部分脱落即可停止消化，以防消化过度；(4) 加入两到三吸管含血清的培养液，终止消化；用吸管轻轻吹洗培养瓶有细胞的一面，以使细胞脱落干净；(5) 细胞悬液转移至离心管内，1000～1500rpm离心3分钟；弃上清，加入约2ml培养液，吹打至均匀，滴加2-3滴至已加入新鲜培养液的培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。
3. 细胞的冻存细胞冻存的原则是要逐步缓慢降温，以避免细胞内部形成冰晶对细胞造成伤害。
1) 贴壁细胞经消化、离心收集，悬浮细胞经离心收集；2) 大约106个细胞加入1ml冻存液，用吸管吹打，使细胞分散成单细胞悬液；3) 加入到冻存管中。
如用1.8ml的冻存管，每管最好不要加入超过1.5ml的细胞悬液；4) 在冻存管上标明细胞名称及冻存日期；5) 用厚布或卫生纸包裹冻存管，置于4℃半小时，然后置于-20℃两小时，再置于-40℃两小时，然后置于液氮上方过夜；第二天将细胞置于液氮中；6) 记下冻存管存放的位置，作好冻存记录。
4. MTT法测药物的IC501) 将细胞接种于96孔板上，密度为大约105个/ml，每孔接种100μl；2) 培养至对数生长期加入待测样品；3) 作用48小时之后，加入三蒸水配制的5μg/ml的MTT溶液，每孔20μl；4) 37℃温育4小时；5) 取出培养板，小心吸去上清，注意不要吸掉底部的蓝紫色沉淀；如果是悬浮细胞则用板离心机离心后除去上清；6) 每孔加入100μl的DMSO，振荡5分钟以使沉淀溶解；7) 用酶联免疫检测仪在490nm处测出OD值；8) 求出各药物浓度下的OD值占对照OD值的百分比，用此百分比对药物浓度作图；在所得的曲线上，百分比值为50时所对应的浓度就是IC50值。
四、贵重仪器的使用说明1. 倒置荧光显微镜1) 普通光下，可作为相差显微镜使用；2) 在使用紫外光源时，可对发荧光的物质，或荧光染色的物质进行观察；3) 目镜为10×，物镜配有20×和40×两种，因此最大放大倍数为400倍；4) 配有三个滤光镜，波长分别为340-380nm，450-490nm，515-560nm，可按需要选择所需的激发光波长；5) 配备自动摄影系统；6) 使用时注意清洁，要严格防止样品触到镜头，防止样品中的液体沾到放样台及镜头上；7) 调焦时勿用力过猛，先粗调，后微调；8) 若使用时间很长，则应中间适当关闭休息。
若内部过热，光源会自动关闭，此时应耐心等待；9) 勿用手触摸镜头及滤光镜的玻璃面，发现镜头或滤光镜上有污点应用镜头纸擦拭。
2. 酶联免疫检测仪1) 打开电源，接好打印机；2) 在主菜单中选DEFINE项，进行检测程序的设置；3) 选择METHOD项，设置被检的板的大小（可在6孔、24孔及96孔板上检测），及检测用的光波长（配有五个滤光镜，波长分别为：405nm，450nm，490nm，570nm及630nm）；4) 再选择MAP项，按需要设置样品数量、重复数、对照等；5) 回到主菜单，选择READ项，进行检测。
超净工作台的使用超净工作台是细胞培养不可缺少的无菌操作装置。
净化台（超净工作台）的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。
净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。
风速为0.32米/秒，处理40分钟，工作台内即可形成高洁净的工作环境。
工作台侧面配有紫外线杀菌灯，可杀死操作区台面的微生物。
超净台按气流方向的不同大致有2种类型：1. 侧流式：净化的气流从左侧或右侧通过工作台面，流向对侧，也有从上往下或从下往上流向对侧流动，它们都能形成气流屏障面保持台面无菌，它的缺点是：在净化气流和外边气体交界处，可因气流的流动出现负压，使少量的未净化气体混入，而造成污染。
2. 外流式：气流是面向操作人员的方向流动，从而保证外面的气体不能混入。
它的缺点是：在进行有害物质实验时，对操作人员不利，但可采用有机玻璃把上半部遮挡起来，使气流经下方流出。
l 净化台使用注意事项：1. 净化台宜安置在清洁房间（无菌室）内，尘土过多易致滤器阴塞，降低其净化作用，并影响高效滤器寿命。
2. 根据净化台周围环境的洁净程度，定期（2-3个月）将粗涤纶滤布清洗或更换。
3. 定期（一般1周）对环境进行清扫和灭菌工作。
经常用沾有酒精或丙酮等有机溶剂的纱布擦拭紫外线杀菌灯表面，保持其表面清洁，否则影响杀菌效果。
4. 净化台工作时，平均风速保持在0.32-0.48米/秒之间，电压调在100V处。
风速出厂前已调节好，不要随意转动调压器旋钮。
若酒精灯火焰不动，说明风速未达到要求，加大电压后风速达不到0.32米/秒时，必须更换高效过滤器。
5. 使用前，超净台开紫外杀菌灯照射15-20min，可把操作过程中所需要使用的一些器材放进去一同照紫外。