细胞毒性实验总结

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实验讨论与总结

实验讨论与总结

实验讨论与总结实验讨论与总结本次实验的目的是研究某种药物在不同浓度下对细胞的影响,进一步了解该药物的毒性与疗效。

本实验采用细胞培养的方法进行,通过测量细胞存活率来评估药物对细胞的影响。

实验过程分为药物处理组与对照组,分别在不同浓度下处理细胞,最终测量细胞的存活率。

在实验中,我们选择了四个不同浓度的药物,分别为A、B、C、D。

对照组为未添加药物的细胞培养基。

我们首先在细胞培养基中加入不同浓度的药物,并将细胞进行培养。

随后,我们使用显微镜观察细胞形态的变化,以了解药物对细胞的影响。

最后,我们采用MTT实验测量细胞的存活率,并进行数据统计与分析。

通过观察实验结果,我们发现药物A在高浓度下对细胞有明显的毒性,细胞形态发生改变,存活率显著降低。

而低浓度下,细胞形态变化不明显,存活率几乎与对照组相同,表明药物A 在低浓度下对细胞没有明显的影响。

药物B在实验中显示出与药物A类似的效果,高浓度下对细胞有明显的毒性,而低浓度下对细胞没有明显影响。

然而,与药物A相比,药物B的毒性相对较弱。

细胞形态变化较轻微,存活率略高于药物A。

药物C在实验中显示出一种不同的效果。

无论是高浓度还是低浓度下,药物C均对细胞有明显的毒性。

细胞形态明显改变,存活率显著降低。

可以推测药物C对细胞的影响与药物A、B不同,可能具有潜在的抗癌活性,需进一步研究。

药物D在实验中显示出完全不同的效果。

无论是高浓度还是低浓度下,药物D对细胞没有明显的毒性,细胞形态无明显变化,存活率与对照组基本相同。

可以推测药物D对细胞没有明显的影响,可能不适用于治疗该细胞系。

综上所述,本实验结果表明药物A、B、C的毒性与疗效各不相同,应根据不同的研究目的进行选用。

药物A、B在高浓度下对细胞有明显的毒性,可能不适用于治疗。

而药物C可能具有潜在的抗癌活性,值得进一步深入研究。

药物D对细胞没有明显的影响,可能不适用于该细胞系。

实验中我们也发现,在低浓度下药物对细胞没有明显影响的情况下,细胞存活率几乎与对照组相同,说明低浓度下可能不会对细胞产生明显的副作用,可能是一种更安全的治疗方案。

tdcc,t细胞杀伤实验原理

tdcc,t细胞杀伤实验原理

T细胞杀伤实验,也称为细胞毒性实验,是一种用于评估T细胞免疫反应的实验。

这种实验的原理是评估T细胞对目标细胞的毒性或杀伤作用,通常在研究和诊断免疫相关疾病、肿瘤疫苗研发和药物筛选等领域中使用。

细胞毒性T细胞(CTL)是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一,一般指CD8+T细胞,可特异而高效地杀伤靶细胞,参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫和移植排斥反应。

它对靶细胞的杀伤首先基于对靶细胞表面特异性抗原的识别,CTL可以通过其TCR识别靶细胞表面的抗原肽-MHC复合物,其中抗原肽可来自肿瘤抗原、病毒抗原或自身抗原。

识别后,CTL通过脱颗粒和直接接触杀伤靶细胞,外周血淋巴细胞包含针对不同抗原的特异性CTL克隆,在体外经某一特定(或同种异体细胞)抗原刺激后,能识别该抗原的T细胞克隆被选择性激活、增殖,而其他T细胞克隆则逐渐死亡;经3-4次刺激后,存活的细胞为识别MHC-特异性抗原肽复合物的细胞即抗原特异性CTL。

细胞毒性T细胞对靶细胞杀伤的机制是通过释放的穿孔素-颗粒酶系统介导的溶靶细胞作用或通过Fas/FasL系统介导的细胞凋亡作用。

肝细胞毒性实验报告单

肝细胞毒性实验报告单

肝细胞毒性实验报告单肝细胞毒性实验报告一、实验目的:探究不同浓度的某种药物对肝细胞的毒性作用,分析其对肝细胞的影响。

二、实验原理:肝细胞毒性实验是一种常见的药物安全性评估方法,可以通过观察药物对肝细胞的形态变化、细胞活力等指标来评估药物的毒性。

三、实验方法:1. 培养肝细胞:将肝细胞分散培养于含有适当培养基的细胞培养板中,放置于37℃恒温培养箱中孵育至细胞密集度达到需求。

2. 制备不同浓度药物溶液:根据实验需要,制备不同浓度的某种药物溶液。

3. 测定细胞活力:将培养好的肝细胞转移到96孔板中,每孔400μL,留出一行作为空白对照组,其它行分别加入不同浓度的药物溶液,每组设4个平行孔。

孵育一定时间后,加入MTT溶液,继续孵育一段时间,然后加入维生素C溶液终止反应,用微孔板酶标仪读吸光度值。

4. 观察细胞形态:将培养好的肝细胞转移到相应的玻片上,通过显微镜观察肝细胞的形态变化。

四、实验结果:通过测定细胞活力和观察细胞形态两个方面,我们可以对药物的毒性进行评估和比较。

五、实验结论:根据实验结果可得出某种药物对肝细胞有一定的毒性作用,其毒性作用随药物浓度的增加而增强。

六、实验分析:根据实验结果可以得知,某种药物对肝细胞具有毒性作用,其对细胞的毒性与药物浓度呈正相关关系。

这一结果与之前的研究结论一致,表明该药物存在一定程度的肝细胞毒性。

原因可能与该药物的化学成分有关,需要进一步深入研究。

七、实验改进:1. 增加实验重复次数,提高数据可靠性。

2. 比较多种药物的毒性作用,进一步研究其中的差异和影响因素。

综上所述,通过肝细胞毒性实验,我们可以评估药物对肝细胞的毒性作用,为药物安全性评估提供依据。

细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结

细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结

细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结实验原理:Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。

生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。

因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

一、用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

二、优点:1.使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;K-8法能快速检测;K-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;K-8法的重复性优于MTT 法,MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的,需要使用DMSO 等有机溶剂溶解;5.而本方法产生的formazan 是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差;K-8法对细胞毒性小,可以多次测定选取最佳测定时间,与MTT 方法相比线性范围更宽,灵敏度更高;K-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。

三、所需设备及仪器:1. 10ul,100-200ul及多通道移液器2. 酶标仪(带有450nm滤光片)3. 96孔培养板4. 二氧化碳培养箱四、方法及步骤:实验一:细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数。

2、接种到96孔板中:根据合适的铺板细胞数(约1-2×104),每孔约100ul细胞悬液,同样的样本可做4-6个重复。

3、37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约需要培养4小时,如果不需要贴壁,这步可以省去。

4、加入10ul CCK8:由于每孔加入CCK8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议将枪头浸入培养液中加入且在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。

细胞毒性实验

细胞毒性实验

细胞毒性实验
细胞毒性实验是一种常用的实验方法,用于评估不同物质对细胞的毒性程度。

在药物研发、化学品评估、环境监测等领域中,细胞毒性实验起着至关重要的作用。

本文将介绍细胞毒性实验的原理、方法和应用。

原理
细胞毒性实验通过将待测物质暴露于不同类型的细胞培养物中,通过观察细胞
生长、代谢活性、细胞形态等指标的变化来评估毒性。

细胞毒性主要分为急性毒性和慢性毒性两种类型,分别用于评估物质对细胞的直接杀伤作用和潜在的长期影响。

方法
1. 细胞培养
首先需要选择适当的细胞系进行实验,常用的细胞系包括HEK293、HeLa、RAW264.7等。

细胞需在灭菌条件下培养,并保持在适宜的培养基中。

2. 暴露实验
将不同浓度的待测物质加入到细胞培养物中,设立对照组和实验组。

根据实验
需要,可以选择不同时间点进行观察。

3. 细胞存活率检测
通过MTT法、CCK-8法等方法检测细胞的存活率,进而评估毒性程度。

此外,也可以观察细胞形态的变化,如细胞凋亡、坏死等。

4. 数据统计分析
将实验结果进行统计分析,绘制图表,评估不同浓度下待测物质的毒性效应。

应用
细胞毒性实验广泛应用于药物筛选、化学品评估、环境毒性检测等领域,为评
估物质对细胞的毒性提供重要依据。

通过细胞毒性实验,可以及时发现有毒物质,减少对人类健康和环境的危害。

综上所述,细胞毒性实验是一种重要的实验方法,具有广泛的应用前景。

加强
对细胞毒性实验的研究和应用,对于促进科学研究和保护人类健康具有积极意义。

细胞毒理实验技巧与注意事项

细胞毒理实验技巧与注意事项

细胞毒理实验技巧与注意事项细胞毒理实验是研究物质对细胞的毒害程度和机理的重要手段之一。

进行细胞毒理实验需要掌握一系列实验技巧和注意事项,以确保实验的准确性和可靠性。

本文将介绍细胞毒理实验的常用技巧,并提供实验中需要注意的事项。

一、细胞培养技巧1. 细胞培养基的选择:选择适合细胞生长和发育的培养基,如DMEM、RPMI-1640等。

根据具体需要,可以添加适量的血清、培养液和抗生素。

2. 细胞传代的控制:定期进行细胞传代,避免细胞密度过高或过低。

细胞密度过高容易导致细胞凋亡,密度过低则会影响细胞生长。

3. 细胞的培养环境:确保培养箱内的温度、湿度和二氧化碳浓度稳定,以提供恒定的培养环境。

二、细胞毒性实验技巧1. 细胞暴露:根据实验需要,将待测试物质添加到细胞培养基中,使细胞与物质发生接触。

通常使用不同浓度的待测物质进行处理。

2. 细胞存活测定:细胞毒性实验的重要指标之一是细胞存活率。

常用方法包括MTT(3-(4,5-二甲基-2-噻唑啉基)-2,5-二苯基四唑盐)法、细胞计数法和荧光染色法等。

3. 細胞凋亡检测:细胞毒性实验中,往往需要检测细胞凋亡情况。

常用的检测方法有DNA凝胶电泳、细胞周期分析和Annexin V-FITC/PI染色等。

三、细胞毒性实验注意事项1. 控制实验组:在进行细胞毒性实验时,除了待测物质组外,还应设立阴性对照组和阳性对照组。

阴性对照组即细胞培养基组,阳性对照组则是已知对细胞有毒的物质组,以用于对比分析。

2. 重复实验:为了确保实验的可靠性,通常需要至少重复3次以上,以获得平均值和标准差。

同时,每次实验的重复次数也要保持一致。

3. 外源污染的避免:细胞培养实验中,外源污染的出现会严重影响实验结果。

因此,要确保实验条件干净、无菌,并采取相应的防护措施。

4. 合理的数据分析:对实验结果进行适当的统计学分析,使用合适的图表和数据处理工具,以得出准确的结论。

综上所述,细胞毒理实验是一项复杂而重要的实验工作。

细胞毒性实验

细胞毒性实验

细胞毒性实验细胞毒性实验是评价化学物质对细胞生长的毒性的一种常用方法。

该实验通常运用化学物质的浓度或暴露时间,评估细胞的代谢活性、细胞增殖或细胞死亡等指标来判断其毒性程度。

该实验可以通过直接在细胞培养物中加入一定浓度的化学物质,或将化学物质预处理后再加入培养物中等方式进行。

不同的实验方法,评价的指标也有所区别,例如:MTT法、WST法、细胞计数法、流式细胞术等,均可用于评价细胞毒性。

MTT法是一种基于细胞色素体代谢的细胞毒性评估方法。

该方法主要基于细胞色素氧化酶还原MTT后产生的紫色产物的数量作为评估指标。

实验中通常将化学物质加入至细胞培养物中,培养一定时间后,加入MTT试剂,并通过光学密度检测方法测定样品OD值。

在实验过程中,所测得的OD值通常可以反映出样品中细胞活力和细胞增殖的变化情况。

当化学物质的浓度或暴露时间超过一定阈值时,MTT实验结果将显示出细胞毒性效应。

细胞计数法是一种直接测定细胞数量的方法。

该方法主要基于通过细胞计数仪或显微镜直接计数样品中的细胞数量来评估毒性。

在实验中,一般需要先将细胞培养物制成单细胞悬液,再通过细胞计数仪或显微镜等工具直接观察计数。

该方法的优点是操作简单,结果直接。

但是,由于人为操作的不确定性,对实验人员的技能水平要求较高。

流式细胞术是一种结合光学和电子学技术的先进工具,可同时评估多种参数的细胞毒性评估方法。

该方法主要基于细胞表面和内部成分的特异性标记,通过激光扫描和电子检测等检测方式来捕捉和分析细胞不同部位标记物的强度和分布情况。

通过分析不同实验组的流式细胞术数据及其之间的差异,可以评价化学物质的毒性效应。

总之,细胞毒性实验是一种常用的毒性/生物活性测试方法,是评价化学物质对细胞的毒性作用非常重要的实验方法之一。

相对于动物体内实验,细胞毒性实验具有快速、简单、可重复性高、成本低等优点,并且具有高度预测性,往往可以作为快速筛选化学物质毒性的重要工具。

但是,需要注意的是,细胞毒性实验仅能反映化学物质对细胞的毒性作用,不能完全代表其在整个生物体系中的毒性效应。

细胞毒性实验报告

细胞毒性实验报告

细胞毒性实验报告细胞毒性实验报告细胞毒性实验是一种常见的科学实验方法,用于评估化合物对细胞的毒性作用。

本实验旨在研究不同浓度的化学物质对细胞的影响,并探讨其可能的毒性机制。

实验材料与方法:1. 细胞系:本实验选择了人类肺癌细胞系A549作为研究对象。

这是一种常用的细胞系,具有较高的增殖活性和易于培养的特点。

2. 化学物质:选择了化学品A、B和C作为实验物质,分别为已知对细胞具有不同程度毒性的化合物。

3. 细胞培养:将A549细胞系培养在含有适宜营养物质和生长因子的培养基中,保持在37摄氏度、5%二氧化碳的恒温培养箱中。

4. 细胞处理:将A549细胞分成不同组,每组细胞分别加入不同浓度的化学物质A、B和C,同时设置一个对照组,不加入任何化学物质。

5. 细胞存活率检测:使用MTT法检测细胞的存活率。

MTT是一种黄色的化学试剂,它能够被活细胞内的线粒体酶还原为紫色的产物。

通过测量产物的光密度,可以反映细胞的存活率。

实验结果与讨论:经过一定时间的培养和处理后,我们观察到不同浓度的化学物质对A549细胞的影响。

通过MTT法测定细胞存活率,我们得到了以下结果:在化学物质A的处理下,细胞存活率呈现浓度依赖性的下降趋势。

随着化学物质A浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。

这表明化学物质A对A549细胞具有明显的毒性作用。

进一步的研究发现,化学物质A可能通过抑制细胞的DNA合成和蛋白质合成来导致细胞死亡。

与化学物质A相比,化学物质B对A549细胞的毒性作用较弱。

在较低浓度下,细胞存活率相对较高,但随着浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。

这可能是因为化学物质B对细胞的毒性作用与其浓度成正相关。

进一步的研究发现,化学物质B可能通过干扰细胞的氧化还原平衡和细胞膜的完整性来导致细胞死亡。

化学物质C对A549细胞的毒性作用相对较弱。

在较低浓度下,细胞存活率接近对照组水平,但随着浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。

进一步的研究发现,化学物质C可能通过干扰细胞的代谢过程和细胞凋亡通路来导致细胞死亡。

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细胞毒性实验总结一、抗HBV药物细胞毒性实验背景知识 (1)二、细胞毒性实验方案的确立 (3)三、细胞毒性实验方法稳定后的部分数据 (4)四、细胞毒性实验质量评价指标 (5)五、细胞毒性实验SOP (6)(一)目的 (6)(二)适用范围 (6)(三)责任人 (6)(四)规程 (6)1. 试验准备 (7)2. 试验操作 (8)3.数据处理和分析 (8)六、总结 (9)一、抗HBV药物细胞毒性实验背景知识细胞毒性是化学物质(药物)作用于细胞基本结构和/或生理过程,如细胞膜或细胞骨架结构,细胞的新陈代谢过程,细胞组分或产物的合成、降解或释放,离子调控及细胞分裂等过程,导致细胞存活、增殖和/或功能的紊乱,所引发的不良反应。

按作用机制可分3种类型:①基本细胞毒性,涉及一种或多种上述结构或功能的改变,作用于所有类型的细胞;②选择细胞毒性,存在于某些分化细胞上,主要通过化学物质的生物转化,与特殊受体结合或特殊的摄入机制所引发;③细胞特殊功能毒性,对细胞结构和功能损伤轻微,但对整个机体损伤非常严重。

类似毒性作用可通过细胞因子、激素和递质的合成、释放、结合和降解影响细胞与细胞间的交流或特殊的转运过程而实现。

毒性作用也可能来自化学物质对细胞外过程的干扰,任何一种非动物检测系统对多种因素都应加以考虑。

1983年Ekwall提出“基本细胞功能”的概念,即多数化学物质毒性作用是对细胞功能的非特异性损伤,却可引起器官功能的特异性改变甚至机体死亡。

有研究显示化学物质体外细胞毒性与其引起的动物死亡率及人体死亡的血药浓度之间都存在良好的相关性。

化学物质产生的损伤和死亡,最终可表现为细胞水平上的改变,由此推测体外细胞毒性可以预测体内急性毒性。

体外方法有助于预测化学物质急性暴露引发的全身和局部影响,并评估体内毒性浓度。

目前较为理想的抗HBV药物有拉米夫定(3TC)、恩替卡韦(ETV)等。

3TC是核苷左旋对呋体,早期用于艾滋病的治疗。

拉米夫定体外能抑制艾滋病毒1、2型及乙型肝炎病毒逆转录酶,在人淋巴细胞和单核细胞内抑制艾滋病毒逆转录酶活性,在HBV-DNA转染的人肝癌细胞内有抑制HBV-DNA复制,在HBV感染黑猩猩体内有抑制病毒作用。

拉米夫定作用原理是药物进入细胞器,为细胞脱氧胞嘧啶激酶和细胞激酶磷酸化为活性5-三磷酸拉米夫定,竞争性抑制依赖于病毒DNA和RNA逆转录酶。

恩替卡韦(ETV)为环氧羟碳脱氧鸟苷,具有较强的抗HBV作用,也可抑制拉米夫定引起的YMDD变异病毒株感染。

在体外应用HBV DNA转染的HepG2 细胞作药敏试验,结果该药抗HBV作用最强。

恩替卡韦、拉米夫定、泛昔洛韦抑制HBV 的半数有效浓度(EC50)分别为0.00375 μmol/L、0.116 μmol/L(文献报道多在几nM到几个μM,范围较宽)、≥100 μmol/L。

在土拨鼠肝炎病毒(WHV)感染的土拨鼠动物模型,口服恩替卡韦0.1 mg/kg.d共12周,血清WHV转阴。

以后,每周口服0.1 mg/kg,血清WHV仍维持阴性。

因此3TC和ETV常被用作抗HBV药物筛选时的阳性对照药,用来评价筛选系统的正常与否。

3TC ETV通常的做法是:将不同浓度的3TC加入到培养的细胞中,作用一定时间后检测药物对细胞的毒性。

检测方法有MTT法、XTT法、荧光检测法等。

其中MTT法和XTT法原理相同,由于其方法简单快速,不需特殊的仪器设备,因此得到了广泛应用。

MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的测试方法,目前已被广泛用于药物体外筛选实验。

MTT法是一种检测细胞活性的方法。

与以往细胞水平研究中检测细胞活性的两种常规方法--细胞计数法和同位素掺入法相比,MTT法具有操作简便、快速、准确、廉价及不使用同位素等优点,已广泛应用于生物医学的诸多领域。

同时,MTT法也是FDA及我国药品审批部门推荐的检测方法之一。

其基本原理如下:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够还原黄色的溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenylterazolium bromide,MTT]为蓝紫色的不溶于水的甲臜(formazan),甲臜的生成量在通常情况下与活细胞数成正比。

由于甲臜的多少可通过酶标仪测定其在570nm处的吸光度(OD值)而得知,因此可根据OD值推测出活细胞的数目,从而了解药物抑制或杀伤细胞的能力。

目前已有MTT的升级替代产品,如XTT、MTS、WST-8等,三种方法的比较见下表。

尽管CCK-8方法简便、准确、灵敏度高,但比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT 法用的多。

三种方法的比较二、细胞毒性实验方案的确立在确定MTT法作为细胞毒性实验的方法之后,我们对实验中可能涉及的各个参数进行了摸索和优化。

最初,由于一切都是未知,因此常常几个参数一起调整,使得各个参数对结果的影响不是很清楚,走了一些弯路。

后期逐渐摸清了参数对结果影响的权重,实验方案逐步确立。

考虑的实验参数有:细胞批次、细胞密度、孵育时间、加药次数、MTT量、MTT孵育时间、DMSO溶解时间(振荡时间)等。

经过实验,最终将实验参数确定如下:seeding time 1dincubation time 7dFBS 2%volume 180μl其中,孵育时间采用7天,主要是希望缩短筛选周期,10天也取得了较好的结果。

培养基体积对结果影响不大。

采用180μl主要是和DNA增殖抑制实验保持一致。

三、细胞毒性实验方法稳定后的部分数据在细胞毒性实验方案稳定之后,在各孔吸光度的标准差、变异系数和各孔抑制率的标准差都可以控制在很低的水平,表明该实验方案是稳定的,具有良好的重现性。

典型ETV的CC50实验数据Date:09/07/07 Conc.(uM) value1 value2 value3 Mean STDEV %CV % Viability %STDEV compound: ETV 200 2 0.215 0.017 8.019 11.641 0.160 cell density:5x103 100 0.369 0.021 5.736 20.011 0.493 incubation time: 7 50 0.858 0.025 2.911 46.529 2.720 drug adding:2 times 25 1.227 0.135 10.967 66.540 9.949 2%FBS 1.480 0.067 4.504 80.278 0.320 180ul 1.620 0.068 4.179 87.834 0.051 1# plate 1.740 0.052 2.989 94.342 0.057 CC50= 40.4uM 0 1.844 0.042 2.251 100.000 0.000典型3TC的CC50实验数据Date:09/07/07 Conc.(uM) value1 value2 value3 Mean STDEV %CV % Viability %STDEV compound: 3TC 8000 0.209 0.039 18.815 11.796 1.902 cell density:5x103 4000 72 0.019 3.238 32.335 1.739 incubation time: 7 2000 0.842 0.050 5.994 47.598 4.990 drug adding:2 times 1000 1.307 0.015 1.111 73.884 3.056 2%FBS 500 1.588 0.034 2.166 89.768 4.966 180ul 250 1.648 0.009 0.529 93.160 2.795 2#plate 125 1.710 0.061 3.571 96.646 0.241 CC50= 2130uM 0 1.769 0.017 0.934 100.000 0.000四、细胞毒性实验质量评价指标对细胞毒性进行质量评价的指标初步定为以下7个:1.OD平均值:反映复孔间OD值的平均水平,OD值越大,细胞数越多。

2.复孔OD值间的标准差(STDEV):反映各复孔OD值之间的离散情况。

标准差越大,说明复孔间不平行性越大,操作误差越大。

3.复孔OD值间的变异系数(CV):也是反映复孔间OD值离散情况的指标。

由于OD值间的标准差(STDEV)的单位和OD的单位是一致的,不能体现离散的权重,因此引入变异系数(CV)。

这一指标以百分比的形式表现OD值的离散情况,形象、直观。

4.存活率(%Viability):计算各药物浓度下细胞的存活率可以反映细胞存活情况,该值越大,说明药物的细胞毒性作用越小。

5.存活率的标准差(%STDEV):该值反映如以每个复孔均作为单独的实验,则同批的复孔可以看作数批实验,此时存活率的分布情况。

该指标越大,说明复孔间越不平行。

6.存活率的变异系数(%CV):该指标反映各复孔间存活率的离散情况,该值越大,说明说明每一列细胞孔(即一系列稀释单孔)间不平行性越大。

7.半数致细胞毒性浓度(concentration of cytotoxicity 50%,CC50):指对半数细胞产生毒性作用所需浓度。

该指标可用来反映实验系统是否正常工作及评价未知药物对细胞的毒性。

五、细胞毒性实验SOP化合物抗HBV活性细胞毒性实验标准操作规程(MTT法)(一)目的使实验操作标准化,保证正常工作的进行。

(二)适用范围本标准适用于MTT法检测抗HBV药物细胞毒性的操作及计算CC50。

(三)责任人分子生物学组操作人员对本规程负责。

(四)规程术语:CC50(concentration of cytotoxicity 50%):半数细胞毒性浓度,指对半数细胞产生毒性作用所需浓度。

在本实验中,指致50%细胞死亡所需的药物浓度。

本实验旨在通过MTT法检测未知化合物对转染了HBV基因组的细胞系HepG的细胞毒性。

背景知识:MTT法是二十世纪八十年代发展起来的一种快速、简便的测试方法,目前已被广泛用于药物体外筛选实验。

其基本原理如下:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够还原黄色的溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenylterazolium bromide, MTT]为蓝紫色的不溶于水的甲臜(formazan),甲臜的生成量在通常情况下与活细胞数成正比。

由于甲臜的多少可通过酶标仪测定其在570nm处的吸光度(OD值)而得知,因此可根据OD值推测出活细胞的数目,了解药物抑制或杀伤细胞的能力。

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