DNA提取和常见问题
DNA和RNA提取方法及原理
材料准备
基因组DNA的提取
最好使用新鲜材料，低温保 存的样品材料不要反复冻融
提取血液基因组DNA时，要 选择有核细胞（白细胞）
组培细胞培养时间不能过长， 否则会造成DNA降解
含病毒的液体材料DNA含量较 少，提取前先富集
核酸溶解在适量缓冲液或水中材料准备材料准备最好使用新鲜材料低温保存的样品材料不要反复冻融提取血液基因组dna时要选择有核细胞白细胞组培细胞培养时间不能过长否则会造成dna降解含病毒的液体材料dna含量较少提取前先富集基因组dna的提取质粒dna的提取使用处于对数期的新鲜菌体老化菌体导致开环质粒增加培养时应加入筛选压力否则菌体易污染质粒易丢失尽量选择高拷贝的质粒如为低拷贝或大质粒则应加大菌体用量菌株不要频繁转接质粒丢失细胞裂解细胞裂解材料应适量过多会影响裂解导致dna量少纯度低针对不同材料选择适当的裂解预处理方式
基因组DNA－SDS法
SDS法流程图 （以动物组织为例）
动物组织
抽提
离心洗涤
组织匀浆
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
酒精沉淀
DNA溶液
基因组DNA－其它方法
根据细胞裂解方式的不同有：
物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法 化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法 生物方式：酶法
基因组DNA－其它方法
质粒DNA的提取
使用处于对数期的新鲜菌体 （老化菌体导致开环质粒增加）
培养时应加入筛选压力，否则 菌体易污染，质粒易丢失
尽量选择高拷贝的质粒，如为 低拷贝或大质粒，则应加大菌 体用量
菌株不要频繁转接（质粒丢失）
分子实验中核算DNA提取常见问题及分析
分子实验中核算DNA提取常见问题及分析一、基因组DNA提取常见问题分析1．样品材料老化或反复冻融导致DNA含量下降：应选择新鲜的材料样品，如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或细嫩的植物组织等，不能即时处理的样品应立即放入液氮或-70C低温保存，以免DNA 降解。
2．样品破壁或裂解不完全，DNA未充分释放：动、植物材料应在液氮中充分研磨匀浆，G +细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械方式协助破壁。
3．样品量过多导致细胞裂解不充分：加样量过多使裂解液和样品混合不均匀，细胞裂解不充分。
不同来源样品的加样量不同。
4．DNA吸附不充分：如在上吸附柱前未加无水乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇，则导致DNA 不能充分沉淀，与硅胶膜吸附不彻底，因此应在样品裂解后加适量无水乙醇，再上吸附柱使DNA与硅胶膜充分吸附。
5．DNA洗脱不适当：洗脱缓冲液pH值过低会阻碍DNA从硅胶膜上洗脱下来，应确保洗脱液pH 值在7.0-8.5之间。
洗脱体积过少，若小于30ul,不易完全浸透硅胶膜，使DNA不能全部洗脱下来，因此洗脱缓冲液应大于30ul。
同时如洗脱体积过大，超过200ul,则所得的DNA浓度会降低，但DNA总量不会减少。
洗脱时可将洗脱缓冲液在65-70℃水浴预热，加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率,加大DNA产量。
二、提取的基因组DNA有降解，如何解决?1．选取的材料不新鲜或反复冻融，采集材料后未及时处理或未低温保存：陈旧血液，老化菌液等不新鲜的材料中，细胞凋亡导致DNA降解，或低温保存的样品反复冻融导致细胞破裂，内源核酸酶降解DNA，因此应选择新鲜的材料样品，不能及时处理则低温保存，运输过程中亦应使用干冰。
2．未能有效抑制内源核酸酶作用：某些DNase含量较丰富的动、植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆，研磨过程中应随时补充液氮，并在样品未完全解冻前即加入含有抑制核酸酶作用的鳌合剂的裂解液。
DNA提取常见问题
DNA提取过程中各种试剂的作用及原理1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。
当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase 作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
2．溶液II－NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
3. 溶液III--3mol／L NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。
所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。
用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。
而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。
DNA测序技术的使用中常见问题
DNA测序技术的使用中常见问题DNA测序技术是一项重要的科学工具，被广泛应用于生物医学研究、进化学、司法科学等领域。
然而，在使用DNA测序技术的过程中，常常会遇到一些问题。
本文将介绍DNA测序技术使用中常见的问题，并提供相应的解决方案。
1. 样品质量问题在DNA测序之前，样品质量是至关重要的。
低质量的样品会导致测序结果的偏差和错误。
常见的样品质量问题包括样品的纯度不高、浓度不足或者样品受到了污染。
解决方案：- 提高样品纯化方法：使用恰当的纯化试剂和技术来提高样品的纯度，例如使用芳香族化合物或异维酮类物质。
- 检测样品浓度：使用光谱法或者比色法来测量样品中DNA的浓度，确保其符合测序要求。
- 避免样品污染：在样品处理过程中，严格遵守无菌操作规程，使用经过无菌过滤器过滤的试剂和器具。
2. 序列读取长度问题DNA测序技术可以产生从数十个碱基对到上百万个碱基对的序列。
然而，部分DNA测序技术的读取长度有限，这可能影响到某些研究或应用的结果。
解决方案：- 选择合适的测序方法：不同的测序方法具有不同的读取长度，选择适合自己研究目的的测序方法，以满足相关的研究需求。
- 使用测序技术的新发展：不断发展的测序技术，如第三代测序技术，具有较长的读取长度和更高的准确性，可以解决传统测序方法的限制。
3. 突变检测问题DNA测序技术不仅可以用于确定特定序列的顺序，还可以用于检测和鉴定突变。
然而，突变的检测可能受到多种因素的影响，如检测方法的灵敏度和特异性、突变类型的多样性等。
解决方案：- 选择合适的突变检测方法：不同的突变具有不同的检测方法，如SNP分析、插入和缺失突变的分析等。
选择合适的方法来检测特定类型的突变。
- 结合多种检测方法：结合使用不同的突变检测方法可以提高突变检测的准确性和可靠性。
- 验证突变结果：通过使用其他独立的测序技术或方法来验证突变结果，以确保结果的可靠性。
4. 数据分析问题DNA测序技术生成的数据量巨大，数据分析是一个复杂而耗时的过程。
如何克服基因工程技术在实验中的常见困难
如何克服基因工程技术在实验中的常见困难基因工程技术作为一种重要的生物技术手段，已经在医疗、农业和生物学研究等领域取得了显著的成就。
然而，在基因工程实验中常常面临各种困难与挑战。
本文将就常见困难进行深入探讨，并提供一些建议来克服这些困难。
一、难以获取所需DNA样本在进行基因工程实验时，获取所需的DNA或RNA样本是一个重要的第一步。
然而，由于某些物种的DNA提取困难或样本稀缺，科研人员常常面临这一挑战。
为了克服这个困难，可以尝试以下方法：1.1 合理设计实验方案：在实验设计时，要合理规划样本的来源，选择适当的物种和组织，并确保能够获取足够的DNA或RNA样本。
1.2 扩大样本采集范围：如果某种物种的样本难以获得，可以考虑从相关物种或亲缘物种中获取相似的基因序列以进行操作。
1.3 应用现代分子生物学技术：可以通过利用现代分子生物学技术的方法，例如PCR扩增、基因克隆等，扩增所需的DNA片段，以获得足够的样本。
二、选择适当的表达载体在基因工程实验中，合适的表达载体对于成功表达目标基因至关重要。
然而，在实验中常常会遇到表达效率低下、蛋白质积累不稳定等问题。
为了克服这些困难，可以采取以下措施：2.1 选择适当的宿主表达系统：根据实验需求和目标基因的特点，选择适当的宿主表达系统，如大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞等。
2.2 优化启动子和调控序列：启动子和调控序列对于基因的表达水平和稳定性起着重要作用。
通过合理设计启动子和调控序列，可以提高目标基因的表达水平和稳定性。
2.3 优化表达条件：调整培养基成分、温度、培养时间等条件，优化表达条件，以提高表达效率和蛋白质的稳定性。
三、克服基因编辑技术的难题基因编辑技术作为基因工程的一项重要技术手段，已经引起了广泛的关注。
然而，在实际应用中，常常会面临一些困扰和难题。
下面提供一些建议来克服这些问题：3.1 提高工具的特异性：为了避免非特异性的基因编辑，可以选择更加特异性的基因编辑工具，如CRISPR/Cas9技术中的高特异性锚型RNA。
DNA测序常见问题分析及解决办法总结
请提供详细资料我们会根据结果具体分析。
常见问题
具体情况
可能的原因
处理办法
备注
样品准备问题
菌培养不好或失败
抗性不对或菌已死
核对抗性，尽可能提供载体信息。
或菌培养条件特殊
重新提供菌液，或提供2ug纯化质粒。
质粒提不出
质粒拷贝数极低或
客户自己采取大量提取的方法提供2ug纯化质粒。
培养方式不当
质粒产量很低
低拷贝数质粒或
客户自己采取大量提取的方法提供2ug纯化质粒。
培养方式不当
自带质粒或已纯化PCR产物量极低
是否为电泳法定量，
质粒：电泳检测浓度大于100ng/ul，体积大于20ul。
测OD值法不可靠,电泳检测
总量是否足够
已纯化PCR产物：根据片段长度提供足够量的模板，一般要求是100ng/反应/Kb，进行多个反应的应相应增加量。
测序出现双峰或信号中断
双峰
重复序列，如polyT、polyA或几个碱基重复
质粒产量极低
客户自己提供2ug纯化好的质粒
PCR产物定量极低
重新电泳检测已纯化的PCR产物，确认有足够的量，或提供PCR原液由公司进行纯化
测序结果正常，与预期不符
找不到引物
质粒模板
检测是否为空载体，从其互补链上寻找，克隆位点离测序引物太近，长插入片段未测通。
PCR模板
不可能找到所用的测序引物，短片段可以从互补链上找到另一段的引物，长片段由于测不通，无法找到相应序列想得到全序列，短片段可以从两端进行测序，长片段需要经克隆后进行测序。
用反向引物中出现套峰
可能是样品非单克隆，挑其他克隆测序。
PCR产物测序中，某一点后序列变乱
DNA测序常见问题分析及解决办法总结
DNA测序常见问题分析及解决办法总结PCR类型测序模板注意事项PCR类型测序模板注意事项•总反应体积建议为50uL或100uL，扩增结束后取3ul用1%左右的琼脂糖电泳检测，应为单一的条带。
3ul样品总量不低于50ng(非常小的PCR产物可以酌情减小)，PCR产物产量过低说明PCR扩增结果不是很理想，应改进条件重新扩增。
•对于有杂带和扩增弥散的PCR产物，需经琼脂糖电泳将目的片段切下来并回收，建议将PCR 产物作克隆后进行测序。
有杂带的和扩增弥散的PCR产物即使通过琼脂糖电泳纯化，测序仍有可能出现双峰等异常结果。
•经上述检测合格的PCR产物，需经过琼脂糖电泳纯化去除未反应的引物，dNTP，引物二聚体等影响测序反应的组分。
有多种纯化方法可供选择，Promega，Qiagen和生工等公司都有相应的产品可供选择。
纯化后的PCR产物经电泳检测估计总量应不低于200ng/Kb(非常小的PCR产物可以酌情减小)。
•与质粒模板相比，PCR产物彼此间差异很大，因此，每个PCR模板应尽可能提供相应的PCR 退火温度和PCR产物的长度，以供测序时参考。
•PCR模板一般不应短于200bp，过短的PCR产物应经克隆后进行测序。
•纯化好的PCR产物应溶于双蒸水中，TE缓冲液会严重影响测序反应。
•若让公司对PCR产物进行纯化，PCR产物需满足∶总量不低于1ug/kb，片段长度不低于200bp •各种PCR测序模板均应提供相应的测序引物，并尽可能提供引物的全序列，并将引物浓度准确稀释到5pmole/ul 。
引物浓度的换算关系∶总ng数 = pmole x 分子量/1000由于PCR产物测序相对较难，为使您能拿到一个好的结果，请尽量满足上述要求。
DNA测序常见问题分析及解决办法总结测序常见问题分析序列中出现N值的常见原因：通常有以下几种情况将造成测序结果中N值较多：•PCR产物直接进行测序，在PCR产物长度以后将无反应信号，机器将产生许多N值。
DNA提取总结
(1)将小麦叶片（约0.1g）放入研钵中，加入液氮冷冻，快速研成粉末后倒入1.5mL离心管中；(2)每管加入600μL SDS DNA提取液（含2%的巯基乙醇），于65℃水浴30min，其间温和混匀几次；(3)取出离心管，加入60μL 5mol/L KAc，立即上下颠倒温柔混匀（5~6次），冰上放置20min；(4)于12,000 rpm离心10min；(5)将上清液（约600μL）转移至新的离心管中，加入4μL RNase，室温放置5min；(6)加入600μL酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）；(7)于12,000 rpm离心15min；(8)将上清液转移至新的离心管中，记下体积，加入0.6~0.7倍体积的异丙醇，于-20℃下沉淀10~30min；(9)于10,000 rpm离心5min，弃上清，将沉淀用75%乙醇洗2~3次；(10)挥发干净乙醇，加入50μL ddH2O，-20℃保存;(11)1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。
一、实验目的掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。
学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
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称取样品，液氮研磨，加入预热的(65℃ ) CTAB及β-巯基乙醇 称取样品，液氮研磨，加入预热的 ℃ 及 巯基乙醇
保温1h,期间不停的摇均 保温 期间不停的摇均 吸取上清液,移至新的离心管中 加入等体积氯仿 异戊醇（ ： ）， ），轻缓颠倒 吸取上清液 移至新的离心管中,加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻缓颠倒 移至新的离心管中 加入等体积氯仿： 混匀,10000rpm,10min 混匀 取上清液，移至新的离心管中,加等体积氯仿：异戊醇 颠倒混匀 加等体积氯仿： 颠倒混匀, 取上清液，移至新的离心管中 加等体积氯仿 异戊醇,颠倒混匀 10000rpm,10min
注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷 的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
CTAB法流程图 法流程图
植物材料 裂解液
异丙醇沉淀
液氮研磨
抽提
离心洗涤
DNA溶液 溶液
细胞裂解
Hale Waihona Puke 上层溶液干燥溶解CTAB中各个组分的作用 中
CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+离子或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使 酚容易去除。
取上清液，加入 的异丙醇（ ），后 取上清液，加入0.6-0.7V的异丙醇（预冷），后4 ℃ /-20 ℃保温沉淀 的异丙醇 预冷），
10000rpm,10min离心取沉淀，70%乙醇清洗两次，吹干 离心取沉淀， 乙醇清洗两次， 离心取沉淀 乙醇清洗两次 溶解DNA,然后低温保存 用TE溶解 溶解 然后低温保存
应注意的问题
DNA沉淀：用乙醇或异丙醇都可以。异丙醇沉淀的效率要高于无水乙 沉淀： 沉淀 醇，试验中只需要0.6倍体积的异丙醇沉淀；而需要2倍体 积的无水乙醇。但是异丙醇沉淀容易将盐成分一起沉淀， 且在DNA沉淀中异丙醇难以挥发除去 。
DNA干燥：晾干DNA，让乙醇充分挥发。 干燥： 干燥 DNA溶解：若长期储存建议使用TE缓冲液溶解。 溶解： 溶解
原 因
1. 2.
3. 4.
DNA中含有蛋白、多 DNA中含有蛋白、 中含有蛋白 糖、多酚类杂质 DNA在溶解前 在溶解前， DNA在溶解前，有酒 精残留， 精残留，酒精抑制 后续酶解反应 DNA中残留有金属离 DNA中残留有金属离 子 RNA的存留 有RNA的存留
•
对 策
• • •
重新纯化DNA， 重新纯化DNA，过吸附 DNA 柱去除蛋白、多糖、 柱去除蛋白、多糖、 多酚等杂质 重新沉淀DNA DNA， 重新沉淀DNA，让酒精 充分挥发 增加70 70％ 增加70％乙醇洗涤的 次数（ 次数（2-3次） 加入RNase降解RNA RNase降解 加入RNase降解RNA
DNA提取和常见问题 提取和常见问题 分析及对策
主讲人： 关锰
DNA简单介绍
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物 信息分子，是分子生物学研究的主要对象。 为了进行测序、杂交和基因的表达，获得高 分子量和高纯度的DNA是非常重要的前提。
DNA提取原则 DNA提取原则
保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染
DNA提取常见问题 DNA提取常见问题
问题二：DNA降解。 问题二：DNA降解。 降解
原 因
1.
1. 2. 3. 4. 5.
材料不新鲜或反复冻 融 未很好抑制内源核酸 对 酶的活性 策 提取过程操作过于剧 DNA被机械打断 烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融
2. 3.
4. 5.
尽量取新鲜材料， 尽量取新鲜材料，低温保存材料避 免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后， 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻 前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料 DNA时 的DNA时，可增加裂解液中螯合剂 的含量， 的含量，细胞裂解后的后续操作应 尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制， 所有试剂用无菌水配制，耗材经高 温灭菌 DNA分装保存于缓冲液中 分装保存于缓冲液中， 将DNA分装保存于缓冲液中，避免 反复冻融
植物要匀浆研磨充分 增加吸附的时间， 增加吸附的时间，或低 温沉淀
4.
小心操作
CTAB提取缓冲液的改进配方 提取缓冲液的改进配方
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚 形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少 DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效 去除多糖。
除蛋白质： 除蛋白质：
氯仿/异戊醇抽提（氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机
相的分离；异戊醇则有助于消除抽提过程 中出现的气泡）。
DNA提取的几种方法 DNA提取的几种方法
一、染色体DNA的提取 染色体 的提取
CTAB法 CTAB法 SDS法 法 其它
DNA提取的几种方法 DNA提取的几种方法
二、非染色体DNA的提取 非染色体 的提取 质粒DNA的提取 的提取 质粒
• 碱裂解法 • 煮沸法
线粒体、叶绿体 线粒体、叶绿体DNA的提取 的提取
基因组DNA的检测 基因组DNA的检测
高质量的基因组DNA带型 单一无拖尾现象 DNA浓度及纯度的检测 A260=1 约 50 µg/ mL 双链 DNA， A260/280 约为1.8
DNA提取常见问题 DNA提取常见问题
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。 问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。 样品不纯 PCR反应
DNA提取常见问题 DNA提取常见问题
问题三：DNA提取量少。 问题三：DNA提取量少。 提取量少 原 因
1. 2. 3. 4.
实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 吸附或沉淀不完全 洗涤时DNA丢失 洗涤时DNA丢失 DNA 对 策
1.
尽量选用新鲜（幼嫩） 尽量选用新鲜（幼嫩） 的材料
2. 3.
• 差速离心结合 差速离心结合SDS裂解法 裂解法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法） 法原理（植物 提取经典方法） 法原理 提取经典方法
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基 三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜， 并与核酸形成复合物。 该复合物在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通 过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙 醇或异丙醇沉淀即可使核酸分离出来。
应注意的问题
材料准备： 材料准备：
最好使用新鲜材料，低温保存的样品材料不要反复冻融。
液氮研磨： 液氮研磨：
研磨样品时要有液氮的保护，在整个过程中都不要让液氮 挥发干净。避免材料回温和反复冻融带来的降解。此外尽 量将样品研磨的很细，这样可以提高DNA产量。
细胞裂解： 细胞裂解：
材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量少，纯度低。 高温温浴时，定时轻柔振荡。
使用变性剂变性 高盐洗涤 蛋白酶处理
（SDS、异硫氰酸胍等）
除多糖： 除多糖：
高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积 的5M NaCl，高盐可溶解多糖。 用多糖水解酶将多糖降解。 在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以 与多糖的羟基作用，从而去除多糖
。
除酚类物质： 除酚类物质：
在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基 乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等 加入易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG(聚乙二 醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类 与DNA的结合
除盐离子： 除盐离子：
70％的乙醇洗涤
TE中成分的作用 中成分的作用
TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase pH值为8.0，可防止DNA发生酸解