慢性NK细胞淋巴增殖性疾病13例免疫表型及临床特征分析重点
nk细胞表型质量标准
nk细胞表型质量标准NK细胞作为一种重要的免疫细胞，其表型质量标准对于评估其功能和效果具有重要意义。
本文将从细胞表面标记、功能分析以及质量控制等方面，对NK细胞的表型质量标准进行介绍。
一、细胞表面标记NK细胞的表面标记是评估其表型质量的重要指标之一。
常见的NK 细胞表面标记包括CD56、CD16、CD3等。
CD56是NK细胞的独特标记物，CD16是NK细胞的Fc受体，CD3是T细胞的标记物。
在评估NK细胞的表型质量时，需要确保细胞表面标记的准确性和一致性，以保证实验结果的可靠性。
二、功能分析NK细胞的功能分析是评估其表型质量的重要内容之一。
NK细胞具有杀伤肿瘤细胞、产生细胞因子等重要功能。
在功能分析中，可以通过测定NK细胞的细胞毒性活性、细胞因子产生等指标来评估其功能状态。
同时，还可以通过测定NK细胞的增殖能力、细胞凋亡等指标来评估其增殖和存活能力。
功能分析的结果可以直接反映NK细胞的活性和效果，因此在评估NK细胞的表型质量时具有重要意义。
三、质量控制为了保证评估NK细胞的表型质量的准确性和可靠性，需要进行质量控制。
质量控制包括细胞培养条件的控制、实验操作的规范以及数据分析的标准化等方面。
在细胞培养条件方面，需要确保培养基的配方准确、培养温度和CO2浓度的控制恰当，以保证细胞的正常生长和功能表达。
在实验操作方面，需要遵循操作规范，保证实验条件的一致性，减少误差的产生。
在数据分析方面，需要采用统一的标准和方法进行数据处理和结果分析，以保证结果的可比性和可重复性。
总结起来，NK细胞的表型质量标准是评估其功能和效果的重要指标。
通过对细胞表面标记、功能分析以及质量控制等方面的评估，可以全面了解NK细胞的表型质量。
这些评估结果对于研究NK细胞的功能机制、开发免疫治疗策略以及评估临床疗效具有重要意义。
因此，在进行NK细胞相关实验和研究时，应该重视对其表型质量进行评估和控制，以保证实验结果的准确性和可靠性。
成人EB病毒阳性TNK细胞淋巴组织增殖性疾病的临床病理特征、免疫表型和EBV感染特征分析
黑龙江医学第43卷2019年第2期101HEILONGJIANG MEDICAL JOURNAL Vol.43No.2Feb.2019·论著·成人EB病毒阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病的临床病理特征、免疫表型和EBV感染特征分析*徐海婵，张红宇，冯佳，庞丽萍北京大学深圳医院血液内科，广东深圳518035摘要：目的探究成人EB病毒阳性T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病（ASEBVT/NK-LDP）的临床病理特征、免疫表型和EBV感染特征。
方法选取2014年1月—2017年12月北京大学深圳医院收治的ASEBVT/NK-LDP患者30例作为研究对象，统计所有患者的临床资料，病理学改变、免疫组织表型及EBV感染情况。
结果临床症状主要为发热、淋巴结肿大及肝脾肿大，少数出现蚊虫叮咬超敏反应；实验室检测结果显示：患者肝功能异常、血沉加快。
30例患者中17例患者死亡，生存时间为（2.97±1.62）个月，中位生存年龄为2个月；患者出现淋巴结被膜增厚且伴纤维化，被膜中出现大量小淋巴细胞及不规则的淋巴细胞浸润；淋巴结中出现淋巴滤泡，淋巴结构破坏，且呈现出病理状弥散。
肝窦内及肝汇管区的淋巴细胞形状不规则且出现细胞浸润。
红髓结果出现显著扩张，而白髓结构不清，淋巴细胞浸润明显。
胃肠道黏膜出现糜烂、溃疡等情况。
造血细胞间出现不规则、含有小灶状的淋巴细胞。
CD4及CD8细胞比例有所增加，有10例患者T细胞以CD4阳性细胞为主，15例以CD8阳性细胞为主。
免疫组化对患者组织切片进行CD5及CD7染色，10例患者出现CD5丢失，5例出现CD5及CD7丢失。
EBV抗体检测结果显示，30例患者中21例出现阳性结果，7例出现多克隆性增生。
结论ASEBVT/NK-LDP 患者临床表现为发热及肝脾肿大，病灶处活检显示组织损伤，并出现一定的细胞浸润，EVB感染的T细胞入侵器官导致患者死亡，一旦出现相应症状应及时进行ERBR原位杂交确诊，并采取积极治疗措施。
WHO造血与淋巴组织肿瘤分类介绍-邓香萍
• 原发皮肤γT细胞淋巴瘤
原发皮肤CD8+侵袭性嗜表皮细胞毒性T细胞淋巴 瘤
原发皮肤CD4+小／中T细胞淋巴瘤
• 外周T细胞淋巴瘤，非特殊类型 • 血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤 • ALK阳性间变性大细胞淋巴瘤
ALK阴性间变性大细胞淋巴瘤
23
造血和淋巴组织肿瘤WHO分类 2008年版
病的LBCL
29
造血和淋巴组织肿瘤WHO分类 2008年版更新内容
4．间变性大细胞淋巴瘤(ALCL) • 明确区分出ALK阳性和ALK 阴性两类 • ALK阳性ALCL好发于儿童和青少年，男性明显多于
女性，累及淋巴结或结外，临床上具有侵袭行为，但 能治愈，预后好，遗传学上存在t(2；5)和变型，现 认为是一种明确的独立疾病
31
谢谢！
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4.骨髓增生异常综合征
• 难治性贫血伴原始细胞增多 • 骨髓增生异常综合征伴孤立5q丢失 • 骨髓增生异常综合征，无法分类 • 儿童骨髓异常增生综合征
儿童难治性全血细胞减少
12
造血和淋巴组织肿瘤W）和相关前驱细胞肿瘤
• 5.2 AML伴骨髓增生异常相关改变 • 5.3 治疗相关髓系肿瘤
27
造血和淋巴组织肿瘤WHO分类 2008年版更新内容
2．滤泡性淋巴瘤 • 分级，2008年依据中心母细胞(CB)数量仍将其分为
3级。将原来的1级和2级归在一起，为FL1—2=CB 少(“低级别”)；CB数量多(＞15／hpf)，仍存在中 心细胞(CC)，为FL3A；CB成片则为FL3B。
• 如果符合FL3而有弥漫大细胞区域 直接诊为DLBCL
WHO(2008)造血与淋巴组织 肿瘤分类介绍
最新：慢性B淋巴细胞增殖性疾病(B-CLPD)的鉴别诊断
最新：慢性B淋巴细胞增殖性疾病（B-CLPD）的鉴别诊断B-CLPD的概念慢性B淋巴细胞增殖性疾病（B-CLPD）是由成熟B淋巴细胞克隆性增殖所致的一组疾病，此处克隆性即指恶性增殖。
克隆性的确定可以根据slg轻链限制性，即κ与λ比值相差三倍以上可认为是克隆性的；也可以根据PCR或克隆性染色体异常。
成熟B淋巴细胞克隆性增殖反映了这类疾病为慢性的恶性疾病。
慢性BLPD主要疾病慢性BLPD主要分为以白血病形式表现的疾病以及惰性淋巴瘤白血病期的疾病。
以白血病形式表现的的B-CLPD包括CLL/SLL，B-PLL，HCL及较少见的HCLv；惰性淋巴瘤白血病期疾病包括FL，MZL，LPL/WM及MCL。
MZL可以分为黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤、淋巴结边缘区淋巴瘤（NMZL）和脾脏边缘区淋巴瘤（SMZL），其中MALT最常见，占60%左右，SMZL占30左右，NMZL占10%。
MALT 很少侵犯骨髓，而SMZL及NMZL较常侵犯骨髓。
严格来讲MCL为侵袭性疾病，但常以小淋巴细胞形式表现，因此通常需与CLL鉴别。
由于BLPD之间发病机制不同、预后不尽相同、治疗不全相同，因此需要鉴别。
如CLL中FCR疗效优于RCHOP，而FL中RCHOP疗效优于FCR；克拉屈滨对HCL有特效。
在新药靶向时代，靶向治疗对不同疾病类型效果完全不同。
如BTK抑制剂伊布替尼对不同B-NHL具有不同疗效，对CLL/SLL，MCL及WM效果较好，但对MZL/MALT，DLBCL效果不佳；但PI3Kδ抑制剂Idelalisib对FL疗效较好，对SLL、MCL等则疗效不佳。
因此新药的进展进一步提高了鉴别的必要性。
此外，我们逐渐意识到CLL并非BLPD中的绝对多数，仅占39%，因此在病种分布上有必要进一步鉴别。
BLPD鉴别手段BLPD的主要鉴别手段包括组织病理+免疫组化、免疫表型、细胞形态、分子细胞遗传学及综合判断。
组织病理+免疫组化有典型病理特点的iNHL包括FL, MCL及SLL- FL的典型病理变化为滤泡广泛弥漫的增生，甚至形成“背靠背”外观；免疫组化CD10+, CD20+, Bcl-2+, CD30-。
慢性T-NK淋巴增殖性疾病形态和流式诊断
慢性T-NK 淋巴细胞增殖性疾病的形态和流式细胞学诊断范磊徐卫李建勇江苏省人民医院血液科2015.10 徐州好运哦……B-NHL真倒霉……T/NK-NHL惰性T/NK 细胞疾病Mycosis fungoides Sezary syndromePrimary cutaneous CD30+ LPDSubcutaneous panniculitis-like T-cell lymphomaLLGL(T 细胞和NK 细胞) T-PLL （部分）EBV(+) T-LPD of childhood系统性原发皮肤南京医科大学第一附属医院血液科T/NK-NHL8%13%4%3%3%1%5%17%12%结外NK/T 细胞淋巴瘤，鼻型侵袭性NK 细胞淋巴瘤/白血病T 淋巴母细胞淋巴瘤间变性大细胞淋性巴瘤原发于皮肤T 细胞淋巴瘤皮下脂膜炎样T 细胞淋巴瘤肠道病相关性T 细胞淋巴瘤血管免疫母细胞性T 细胞淋巴瘤未分类初诊373例，2008-01-01至2014-10-01T/NK-CLPD 的诊断WHO 分型（临床+MICM 综合诊断）临床 细胞形态学 免疫表型 细胞遗传学 分子生物学大颗粒淋巴细胞白血病1985年LGL 白血病被首次描述,涉及血液、骨髓和脾脏的克隆性疾病 无论T 细胞或NK 细胞亚型临床上均可表现为惰性或侵袭性 LGL 白血病约占所有T/NK 细胞恶性疾病2%-5%2008 WHO LGL 白血病分类大颗粒淋巴细胞白血病（LGLL ）最常见亚型，西方国家中约占85%；中位诊断年龄为60岁，没有性别差异Swerdlow SH, Harris NL. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues (4th Ed); 2008incidence rate(T/NK 2-5%)T-LGLLATLGLLCLPDANKLLGLL 概况•LGLs(large granular lyphocytes)占正常人外周血单个核细胞10-15%，其中大部分（85%）来自于CD3（-）NK 细胞，小部分（15%）来自于CD3（+）T 细胞•T-LGLs 为胸腺后、抗原激活细胞毒性CD8（+）T 淋巴细胞•LGL 白血病分类:T 细胞LGL 白血病：占LGLL 的85%（T-LGL ）（T 细胞LGL 白血病中侵袭性亚型）侵袭性NK 细胞白血病慢性淋巴细胞增值性疾病NK 细胞型（CLPD-NK ）LGLL 的诊断25-30%患者循环LGL< 0.5*109/L大部分为淋巴细胞增多症：2-20*109/L共表达CD3+CD8+CD57+TCRαβ+,偶尔伴有少见免疫表型TCR 基因重排---PCR 、Southern blot TCRVβ克隆性表达—流式细胞术分子突变STAT3，STAT5b惰性进程、血细胞减少、脾大、类风关1.外周血大颗粒细胞持续扩张2.特征性免疫表型3.T 细胞克隆性4.临床表现典型细胞形态学LGL LGLLGL ：BM外周血涂片：大淋巴细胞，肾形或圆形细胞核，胞质丰富，含嗜天青颗粒不典型细胞形态学骨髓中形态不规则的大颗粒淋巴细胞聚集出现外周血中形态不规则的大颗粒淋巴细胞提示T 细胞肿瘤的免疫标志•CD4和CD8表达模式异常–共表达–均不表达–CD4/CD8比例变化•T 细胞标志不表达–CD2–CD5–CD7•异常表达：CD10•T 细胞标志表达强度变化Lefevre G,et al.Haematologica.2015.onlineCD3-CD4+T 淋巴细胞的典型免疫表型R1R2TCRV β限制性表达包含24种抗体，两种荧光素，识别70％Vβ亚家族TCRV β18TCRV βNK TKIR:monotypicTCRV β: monoclonalCD158a,b,e,i正常T 、NK 细胞表达NK 细胞相关抗原Morice WG,et al. Br J Haematol,2003,120:1026T-LGL 白血病患者免疫表型外周血流式细胞学：以FSC/SSC 设门，淋巴细胞占有核细胞56.1%，CD3+CD8+：84.8%，CD158i ：83.8%，CD158a ：0.2%，CD158b ：0.4%，CD158e ：2.1%，CD161：87.5%，CD94：2.9%，CD160：34%KIRMonotypic expressionCD158i慢性淋巴增殖性疾病NK 细胞型（CLPD-NK ）•CLPD-NK 占LGLL 异常的5%，通常也被认作是慢性NK 细胞淋巴细胞增多•WHO 恶性淋巴瘤分类中对其有讨论，然而，由于恶性NK 细胞的克隆起源难以确定，故仅将其列为临时分类•与EBV 无关临床表现•CLPD-NK 是一种惰性血液系统异常，预后良好•持续的循环中LGL 增多•无发热，肝脾肿大或淋巴结肿大等•可出现中性粒细胞减少及贫血,与惰性T-LGL 白血病相比，它们的发生率较低且严重程度也低•一般不合并自身免疫系统疾病诊断外周血NK 细胞持续（大于6月）增多并≥2X109/L 以前因为缺乏克隆标记，慢性NK 细胞白血病的诊断较为困难。
淋巴细胞各项免疫表型的临床意义
淋巴细胞各项免疫表型的临床意义通过流式细胞仪分析淋巴细胞免疫表型，对于了解淋巴细胞的分化、功能，鉴别新的淋巴细胞亚群有重要价值;更重要的是，通过研究大多数疾病的特异性淋巴细胞亚群或某些细胞表面标志的存在、缺乏、过度表达等，对一些疾病，如免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等诊断、治疗、免疫功能重建和器官移植监测等有重要的临床意义。
一(T细胞1. 总淋巴细胞数(1) 增多:见于百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。
(2) 减少:见于传染病急性期、放射病和细胞免疫缺陷等。
2. 总T细胞(CD3+细胞)(1) 增高:提示体内的T细胞免疫功能增强，见于临床某些自身免疫性疾病(如SLE)、重症肌无力、慢性活动性肝炎、甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、器官移植排斥反应、T细胞性白血病等。
降低:提示体内的T细胞免疫功能减弱，见于某些白血病、应用免疫抑(2) 制药、放疗过程中、先天性细胞免疫缺陷、艾滋病、多发性骨髓瘤、传染性单核细胞增多症，以及过劳等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况。
3. T4细胞(CD3+CD4+细胞)(1) 增高:提示体内存在细菌等病原微生物感染，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。
(2) 降低:提示体内存在病毒等病原微生物感染，主要见于临床各种病毒感染性疾病，以HIV感染时减少最为明显。
T4细胞减少也见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、严重创伤、大手术等。
4. T8细胞(CD3+CD8+细胞)(1) 增高:提示体内存在病毒或胞内寄生菌等病原微生物感染，主要见于HBV、CMV、EB等病毒及结核杆菌感染等。
(2) 降低:T8细胞减少见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、糖尿病等。
5. T4/ T8细胞比值(1) 增高:可以是T4淋巴细胞增高或T8淋巴细胞减少所致，见于某些自身免疫性疾病，如SLE、多发性硬化、器官移植排斥反应等。
EBV相关TNK细胞淋巴组织增殖性疾病的研究进展
网络出版时间：h04)-3-2517：/9网络出版地址：htt p s://ki.nePkcms/detWA34.1073.R.20414365.1453.00).htmlEBV相关T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病的研究进展杨欢,尹列芬摘要:EBV相关的T/NK细胞淋巴组织增殖性疾病(Epstein-Barr vins-cssociateX T//atural killer-cell lymphoxrolifera/ve diseases,EBV-T/NK-EPDs)是与EBV感染密切相关的一组罕见的谱系性淋巴细胞增殖性疾病。
EBV-E/NK-EPDs包括四种亚型:儿童系统性EBV+T细胞淋巴瘤、系统型T细胞和NK细胞型慢性活动性EBV感染、种痘水疱病样淋巴组织增生性疾病及严重蚊虫叮咬过敏症。
各亚型的临床症状、组织学和免疫表型上相互重叠,在临床过程中可能相互转变，明确诊断和精确分类都面临极大的困难。
目前,EBV-E/NK-LPDs的病因学及其发病机制尚不清楚，除造血干细胞移植外,暂无统一有效的根治方法。
该文就EBV-E/NK-EPDs的发病机制、分类、临床特征、组织学及免疫表型、预后及治疗等方面进行综述，旨在提高对不同亚型EBV-E/NK-EPDs的认识。
关键词：淋巴细胞增殖性疾病;EBV；T细胞;NK细胞;文献综述中图分类号:R733.4文献标志码:A文章编号：001-7369(2041)03-0317-05doi：14.13315/ki.cjcep.2041.03.014EBV相关的T/NK细胞淋巴组织增生性疾病(Epstein-Barr virns-associawf T//atural killer-cell lymphoxrolifera/ve diseases,EBV-T/NK-EPDs)指EBV感染T/NK细胞的一组具有谱系的淋巴组织疾病1］。
目前EBV-T/NK-EPDs的概念及精确分类尚未完全统一，其还有很多悬而未决的问题。
惰性TNK淋巴增殖性疾病
• TCR重排阳性
• 遗传学异常
– 细胞具有复杂核型； – 基因突变涉及TCR和IL2信号通路、Th2细胞分化基因、TGF beta介导的生长抑制、TNFRSF介导凋亡； – STAT3、CDKN2A、PTEN异常
• 治疗选择
– Skin-directed therapies
• 局限病变：局部激素、化疗药物、放疗（8-12Gy;24-30Gy）、 维A酸、光治疗、咪喹莫特 • 广泛病变：局部激素、化疗药物、光治疗、全皮肤电子线 （TSEBT，12-36Gy）
• TCR重排阳性； EBV• 遗传学改变
– 伴有凋亡异常； – MAPK、 PI3K/AKT、 NF-kappaB和JAK/STAT信号通路异常； – STAT3和STAT5B基因突变
• 治疗选择：环孢菌素、环磷酰胺、激素和小剂量甲氨蝶呤
– 部分病人可用喷他司汀治疗；靶向JAK/STAT信号通路的药物有 治疗前景
• 无特殊遗传学异常
• 手术切除和放疗是常见的治疗选择，避免过度治疗
原发皮肤CD4+小/中T细胞淋巴增殖性疾病
• 表现为斑块或结节孤立性皮肤病变，分布在面部、颈部和 上躯干，呈现良性疾病过程 • 特征表型：CD3+、CD4+、CD8-、CD30-、细胞毒蛋白 -；表达PD1、BCL6和CXCL13，提示滤泡辅助T细胞来源； Ki-67 5%-20%
• 临床病Байду номын сангаас长，有较好的生存
（四）消化道型
• Indolent T-cell lymphoproliferative disorder of the gastrointestinal tract
惰性胃肠道T细胞淋巴增殖性疾病
• 侵犯胃肠道粘膜的克隆性T细胞增殖性疾病
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ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ
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６
ｃａｓｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ
ｓｉｎｇｌｅ
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＮＫ—ＣＬＰＤ ｐｕｒｓｕｅｓ ｏｆ ＮＫ－ＣＬＰＤ ｉｓ ｓｔｉｌｌ ｂａｓｅｄ
失。４例患者强表达ＣＤ５６（ＣＤ５６岫），ＭＦＩ
４０５．５
（２２８～７６８），４例患者弱表达ＣＤ５６（ＣＤ５６曲＂），ＭＦＩ
万方数据
旦垒痘：鲞垦蕉垫！鱼生ｉ旦釜堑鲞蔓！塑地塑生丛№ｋ！塑堡壁妞Ｐ！塑：鳖垫！垒！！尘：！！：盟！：！
４２．７（２３．２～７８．２），４例患者不表达ＣＤ５６（ＣＤ５６一）， 中性粒细胞中位数及血红蛋白中位数在ＣＤ５６ａ油及 ＣＤ５６一组较ＣＤ５６埘，组明显减少（表２）。５例患者强
１．３
结肿大，１例外周血ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ阳性，１例 合并纯红细胞再生障碍性贫血，１例合并慢性淋巴细 胞性甲状腺炎；１３例患者中１０例检测了ＲＦ因子， １例阳性；９例检测ＡＮＡ抗体者皆阴性（表１）。所有 患者中位随访４２个月，全部生存。
２．２外周血细胞形态学分析
外周血形态学检查结果，白细胞总数正常或者升 高，淋巴细胞比例均增高，颗粒淋巴细胞占淋巴细胞 ２８％。９０％，成熟红细胞同髓片，血小板成簇可见。
ｏｎｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ＣＤ５６ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ５７，３
ｗａｓ
ｃａｓｅ
ａｎｄ
ｐａｔｉｅｎｔ ＷａＳ
ｃａｓｅｓ
ｎｏｔ
ａｖａｉｌａｂｌｅ．Ａｍｏｎｇ １２
ｃａｓｅｓ
ｒｅｃｅｉｖｅｄ
ｄｉｄ ｎｏｔ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ５７，ａｎｄ ９ ２ ｃａｓｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ
（８１４７０３２８，８１３７０６５７）；Ｓｉｘ
Ｔａｌｅｎｔ Ｐｅａｋｓ
Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２０１５一ＷＳＮ一０５０，２０１４－ＷＳＮ－００９）
万方数据
‘２８６‘
自查痘：鲞垦疸垫！！生ｉ旦筮堑鲞箜！塑』！！璺堂堂地！！坐ｉ！鱼！ｉ塑Ｐ！！坐墨丛型！Ｑ！亟！！！：堑：№：ｉ
ＳＴＡＴ３突变检测
２．３流式细胞术检测结果
患者外周血ＮＫ细胞占淋巴细胞比例增高，中位 值６６．１％（３４．７％一９２．９％），所有患者均不表达 ＣＤ３、ＣＤ５，全部表达ＣＤ２、ＣＤ７，其中１例ＣＤ７部分缺
１．３．１外周血基因组ＤＮＡ提取 采集患者外周血４ ＩＩｌｌ，２％ＥＤＴＡ抗凝，一２０℃冷 冻保存。用试剂盒提取基因组ＤＮＡ，具体方法参照说 明书。取适量ＤＮＡ原液用紫外分光光度计进行定量 和纯度检测，其余放一２０℃保存备用。
ｇ。ＰＣＲ反应条件：９５ ｏＣ预变性５ ｍｉｎ后，
９４℃变性３０ Ｓ，５８℃复性３０ Ｓ，７２℃延伸１ ｍｉｎ，共
３５个循环，７２℃后延伸５ ｍｉｎ。ＰＣＲ产物４℃保存，取 ５山ＰＣＲ产物进行１．５％琼脂糖凝胶电泳检测。
１．３．４
ＰＣＲ产物测序分析
ＰＲＩＳＭ
ＰＣＲ产物纯化后，用ＡＢＩ
３７３０ＸＬ自动测
自查瘟：鲞垦壅！Ｑ！垒堡ｉ旦箜箜鲞箜！塑地翌堂堂地！竺垫鱼妞Ｐ！！竺墨塑翌！Ｑ！垒！！生：箜：型竺！
・２８５・
・论著・
慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病１ ３例 免疫表型及临床特征分析
刘芸王曼邱志远缪讳孙倩吴雨洁 通信作者：李建勇，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｉａｎｙｏｎｇｌｍ＠１ ２６．ｃｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９９２１．２０１６．０５．００７
１４４
１．２流式细胞术检测
１．２．１试剂和仪器 抗体标记包括异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）、藻红蛋 白荧光素（ＰＥ）、叶绿素蛋白（ＰｅｒＣＰ）和别藻青蛋白 （ＡＰＣ）四类。四色抗体组合分别为ＣＤ３／ＣＤ４／ＣＤ４５／
ＣＤ８、ＣＤ２／ＣＤ７／ＣＤ４５／ＣＤ５、ＣＤ５７／ＣＤｌａ／ＣＤ４５／ ＣＤｌＯ、ＣＤｌ６／ＣＤ５６／ＣＤ４５／ＣＤ３、ＣＤｌ６／ＣＤｌ５８ａ／ ＣＤ３／ＣＤ５６、ＣＤｌ６／ＣＤｌ５８ｂ／ＣＤ３／ＣＤ５６、ＣＤｌ６／
序仪直接双向测序。用ｃｈｒｏｍａｓ软件与基因组序列进 行比对分析，查找突变位点。
２结果
２．１临床特征
１３例患者中，男性８例，女性５例，男女比例 １．６：１；中位年龄５４岁（５１～８６岁）。白细胞中位数 ７．７４×１０９／Ｌ［（２．６０～２３．３４）×１０９／Ｌ］，中性粒 细胞中位数１．２×１０９／Ｌ［（０．９～７．５９）×１０９／Ｌ］， 其中７例（５４％）患者伴有中性粒细胞减少（＜１．５× １０９／Ｌ），ＮＫ细胞绝对值中位数３．８×１０９／Ｌ［（０．８～ １２．１）×１０９／Ｌ］，血小板中位数１６９×１０９／Ｌ［（６６～ ２８４）×１０９／Ｌ］，血红蛋白中位数１０８ ｇ／Ｌ（４３～ ｇ／Ｌ）。初诊时４例患者伴有Ｂ症状，４例伴有乏 力，其中２例由贫血引起。在１３例患者中，４例淋巴
１．３．２引物的设计与合成 通过美国国家生物信息中心（ＮＣＢＩ）的基因库 检索到ＳＴＡＴ３基因序列，用Ｐｒｅｍｉｅｒ Ｐｒｉｍｅｒ ５软件设 计引物扩增包括编码序列与剪切位点序列。引物由上 海英俊生物技术服务有限公司合成。
１．３．３
慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病（ＮＫ．ＣＬＰＤ）是一 种成熟ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病，ＮＫ．ＣＬＰＤ临床极为 罕见，多呈惰性病程，常致漏诊或误诊。由于临床表现 及细胞形态与Ｔ．大颗粒淋巴细胞白血病（Ｔ．ＬＧＬＬ） 相似且缺乏克隆性证据，诊断上多依赖临床表现及免 疫表型。本研究通过多参数流式细胞术（ＭＦＣ）检测 １３例ＮＫ．ＣＬＰＤ患者的免疫表型并回顾性分析临床 资料，现报道如下。
【关键词】慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病；流式细胞术；免疫表型；临床特征；ＳＴＡＴ３突变
基金项目：国家自然科学基金青年基金（８１４７０３２８、８１３７０６５７）；江苏省“六大人才高峰”计划
（２０１５．ＷＳＮ．０５０、２０１４．ＷＳＮ－００９）
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ｏｆ ＮＫ ｃｅｉｌｓ Ｘｕ形ｅ丘Ｌｉ Ｊｉａｎｙｏｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｉｎｄｏｌｅｎｔ ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｏｗｈｏｌｏｇｙ，
ｃｏｕｒｓｅ
ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ
ｔＯ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｃｃｏｌａｙｓ 【Ｋｅｙ
ｍｏｒｅ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＮＫ—ＣＬＰＤ． Ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ； Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；
ｃａｓｅ ｗｅａｋｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ
ｗｉｔｈ ｄｉｍ ＣＤ５６
ＣＤ７．Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ４ ａｎｄ ５ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｂｒｉｇｈｔ ＣＤ５６ ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，４
ａｎｄ
ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，４ ａｎｄ ６
ｃａｓｅｓ
ａｎｄ
ａｎｄ
１
ｃａｓｅｓ
ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ＣＤ５６ ａｎｄ ＣＤｌ６ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｍｅａｎ ＣＤｌ６ ｏｆ ａｎｏｔｈｅｒ
ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＫＩＲ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗａ￥ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ａｌｌ ｔｈｅ
ｏｎｅ
ｐａｔｉｅｎｔｓ ｄｉｄ ｎｏｔ ｅｘｐｒｅｓｓ ＣＤ３ ａｎｄ ＣＤ５，ｂｕｔ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＣＤ２ ａｎｄ ＣＤ７ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
范磊王莉徐卫
李建勇
２１００２９南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科
【摘要】
目的探索慢性ＮＫ细胞淋巴增殖性疾病（ＮＫ．ＣＬＰＤ）的免疫表型及临床特征。方法回
顾性分析２０１２年２月至２０１５年７月间收治的１３例ＮＫ．ＣＬＰＤ患者的临床资料，流式细胞术分析ＣＤ２、 ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤｌ６、ＣＤ５６、ＣＤ５７及杀伤免疫球蛋白样受体（ＫＩＲ）的表达。结果患者外周血ＮＫ细胞 占淋巴细胞比例增高，中位值６６．１％。所有患者均不表达ＣＤ３、ＣＤ５，表达ＣＤ２、ＣＤ７，其中１例患者ＣＤ７ 部分缺失。ＣＤ５６强表达、弱表达及不表达各有４例；ＣＤｌ６强表达、弱表达及不表达分别有５例、６例、１ 例；１例患者ＣＤ５６、ＣＤｌ６荧光表达强度资料缺失。１２例患者检测了ＣＤ５７，其中３例不表达，９例部分表 达。６例患者检测了ＫＩＲ的表达，其中２例呈现单型表达。结论ＮＫ．ＣＬＰＤ临床多呈惰性过程，诊断仍以 形态学为主，流式细胞术免疫分型技术有可能成为ＮＫ．ＣＬＰＤ诊断的有力补充。
２１００２９，Ｃｈｉｎａ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏ印ｈｄ
Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉ
Ｊｉａｎｙｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｉａｎｙｏｎｇｌｍ＠１２６．ｃｏｍ
Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ］
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ
ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌｓ（ＣＬＰＤ—ＮＫ）．
Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ
ｆｅａｔｕｒｅｓ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ １３ ｃａｓｅｓ ｏｆ ＮＫ・ＣＬＰＤ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０１２ ａｎｄ Ｊｕｌｙ ２０１５．Ｆｌｏｗ ｅｙｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＣＤ２，ＣＤ３，ＣＤ５，ＣＤ７，ＣＤｌ６，ＣＤ５６，ＣＤ５７ ａｎｄ ｋｉｌｌｅｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ