附录4常用的消毒灭菌操作方法.doc
附录4 常用的消毒灭菌操作方法
常用的消毒灭菌操作方法附录4一、干热灭菌的操作方法1.装入待灭菌的物品将待灭菌的物品，如塞上棉塞的试管、锥形瓶、培养皿、吸管等玻璃仪器，用牛皮纸或干净的报纸包裹严密后，放人干热灭菌箱。
注意，物品不要摆得太挤，以免妨碍热空气流通。
同时，灭菌物品也不要与干热灭菌箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火。
2.灭菌关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温调节器，设定温度为160~170℃。
当温度升到150℃左右时，保持此温度3~4h。
由于干热灭菌温度较高，操作时要注意防止烫伤。
3.降温关掉电源，自然降温。
4.开箱取物等温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。
注意温度未降到70℃以前，切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。
二、高压灭菌的操作方法1.首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架平齐。
2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
锥形瓶与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。
3.加盖，并将盖上的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内。
拧紧固定盖子的螺栓，注意要同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，不漏气。
4.加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气。
等冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时间，维持压力。
5.到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲出容器，造成污染。
三、紫外线灭菌的操作方法紫外线只适用于表面灭菌和空气灭菌。
以面积为10 m2的普通小型接种室为例，在工作台上方距地面2m处悬挂1~2只30 W紫外灯，每次开灯照射30 min，就能达到室内空气灭菌的目的。
照射前，适量喷洒石炭酸等化学抑菌剂，可以加强灭菌效果。
医疗机构常用消毒灭菌技术及规范
3 术语和定义
3.1 清洁cleaning 去除物体表面有机物、无机物和可见污染物的过程 。 3.2 清洗 washing 去除诊疗器械、器具和物品上污物的全过程，流程 包括冲洗、洗涤、漂洗和终末漂洗。 3.3 清洁剂 detergent 洗涤过程中帮助去除被处理物品上有机物、无机物 和微生物的制剂。
3.19 低水平消毒 low level disinfection 能杀灭细菌繁殖体（分枝杆菌除外）和亲脂病毒的 化学消毒方法以及通风换气、冲洗等机械除菌法如 采用季铵盐类消毒剂（苯扎溴铵等）、双胍类消毒 剂（氯已定）等，在规定的条件下，以合适的浓度 和有效的作用时间进行消毒的方法。 3.20 有效氯 available chlorine 与含氯消毒剂氧化能力相当的氯量，其含量用mg/L 或%(g/100ml)浓度表示。
4.3 医疗机构使用的诊疗器械、器具与物品，应符 合以下要求： a）进入人体无菌组织、器官、腔隙，或接触人体 破损皮肤、破损黏膜、组织的诊疗器械、器具和物 品应进行灭菌； b) 接触完整皮肤、完整黏膜的诊疗器械、器具和物 品应进行消毒。 4.4 医疗机构使用的消毒产品应符合国家有关规定 ，并应对消毒产品的相关证明进行审核，存档备案 。
3.18 中水平消毒 middle level disinfection 杀灭除细菌芽孢以外的各种病原微生物包括分枝杆 菌。达到中水平消毒常用的方法包括采用碘类消毒 剂（碘伏、氯已定碘等）、醇类和氯已定的复方、 醇类和季铵盐类化合物的复方、酚类等消毒剂，在 规定条件下，以合适的浓度和有效的作用时间进行 消毒的方法。
3.4 消毒 disinfection 清除或杀灭传播媒介上病原微生物，使其达到无害 化的处理。 3.5 消毒剂 disinfectant 能杀灭传播媒介上的微生物并达到消毒要求的制剂 。 3.6 高效消毒剂 high-efficacy disinfectant 能杀灭一切细菌繁殖体（所括分枝杆菌）、病毒、 真菌及其孢子等，对细菌芽osure time 消毒或灭菌物品接触消毒或灭菌因子的作用时间。 3.25 存活时间 survival time.ST 在进行生物指示物抗力鉴定时，受试指示物样本经 杀菌因子作用不同时间，全部样本培养均有菌生长 的最长作用时间（min）. 3.26 杀灭时间 killing time. KT 在进行生物指示物抗力鉴定时，受试指示物样本经 杀菌因子作用不同时间，全部样本培养均无菌生长 的最短作用时间 (min)。
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测
微生物实验常用的灭菌、消毒方法及效果监测因为微生物广泛存在于环境中，从预防交错污染的角度动身，微生物试验必需遵循无菌操作的原则，采纳多种物理、化学或是生物的办法，确保全部的物品和工作环境符合用法要求。
常用以下术语表示杀灭微生物的程度。
消毒：杀灭或(和)清除致病微生物，使其数量削减到不再能引起人发病。
用于消毒的化学药品称为消毒剂。
灭菌：将全部微生物所有杀灭或(和)清除掉，包括细菌芽孢和非致病微生物。
灭菌比消毒更彻底。
无菌：不含活菌，是灭菌的结果。
防止细菌进入人体或其他物品的操作技术称为无菌操作。
(一)常用的灭菌、消毒办法常用的灭菌或消毒办法分为4类：热力灭菌法、化学消毒法、辐射法和过滤除菌法。
普通按照物品的种类和污染后的危害程度来挑选消毒、灭菌办法。
消毒首选物理办法，不能用物理办法消毒的方可选化学办法。
1.热力灭菌法高温对微生物具有显然的杀伤作用，这是因为热能可变性蛋白质、核酸及破坏细胞膜等。
热力灭菌法按照有无水蒸气的参加分为干热灭菌法和湿热灭菌法两种。
热力灭菌法的种类及用法范围详见表4-4。
表4-4 热力灭菌法的种类及用法范围 2.化学消毒法无数化学药物能够影响微生物的物理结构和生理活动，从而达到消毒的作用。
化学消毒剂普通都对人体组织有害，因此，只能外用或用于环境的消毒，常用化学消毒剂的种类、作用机理及用法范围见表4-5。
表4-5 化学消毒剂及用法范围 3.辐射法辐射法中紫外线杀菌最为常用。
紫外线的穿透能力很弱，简单被固形物汲取，不能透过一般玻璃，因此，它只适用于空气、水及物体表面的杀菌。
无菌室、超净工作台、生物平安柜内都装有紫外灯，用来举行空气消毒，消毒时光普通为30min。
应用紫外线杀菌时，必需防止紫外线对人体的挺直照耀，以免损害眼睛和灼伤皮肤。
4.过滤除菌法指将含菌的液体或气体通过一个称作细菌滤器的装置，使细菌受到机械的阻力而留在滤器或滤板上，从而达到除菌的目的。
此法常用于不宜加热灭菌的液体物质，如培养基添加剂、抗生素、血清等。
中国药典版灭菌方法
一、湿热灭菌法本法系指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
该法灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。
药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品，均可采用本法灭菌。
流通蒸汽不能完全杀灭细菌孢子，一般可作为不耐热无菌产品的辅助灭菌手段。
湿热灭菌条件通常采用121℃*15min、121℃*30min、或116℃*40min的程序，也可采用其他温度和时间参数，但必须保证物品灭菌后的SAL《10-6。
对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，其SAL应《10-12。
热稳定性较差产品的标准灭菌时间F0［指灭菌温度为121℃，生物指示菌的耐热参数D值为1分，灭菌温度系数Z值为10.0℃时的标准灭菌时间（121℃下计算的微生物等效灭活率）］一般不低于8min。
如产品的热稳定性很差时，可允许湿热灭菌的F0低于8，此情况下，应在生产全过程中，对产品中污染的微生物严加监控，并采取各种措施降低微生物污染水平，确保被灭菌产品达到无菌保证要求。
采用湿热灭菌时，被灭菌物品有适当的装载方式，不能排列过密，以保证灭菌的有效性和均一性。
湿热灭菌法应确认灭菌柜在不同装载时可能存在的冷点。
当用生物指示剂进一步确认灭菌效果时，应将其置于冷点处。
本法生物指示剂为嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（spores of Bacillus stearothermophilus）。
二、干热灭菌法本法系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。
适用于耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品灭菌，如玻璃器具、金属材质容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等均可采用本法灭菌。
干热灭菌条件一般为160~170℃*120min以上、170~180℃*60min以上或250℃*45min以上，也可采用其他温度和时间参数。
应保证物品灭菌后的SAL《10-6。
科室中常用用物的消毒灭菌方法
一、概述在医疗机构的临床科室中，常用物品消毒灭菌是保障患者安全的重要环节。
科学、规范的消毒灭菌工作能有效预防医院感染，减少交叉感染的发生，保障医疗质量和患者安全。
本文将围绕科室中常用物品的消毒灭菌方法进行详细介绍，以期为临床工作者提供参考和借鉴。
二、常用消毒灭菌方法1. 高温高压灭菌高温高压灭菌是指利用高压蒸汽对物品进行灭菌处理的方法。
它是目前医疗机构最常用的物品灭菌方法之一。
此方法操作简便，灭菌效果好，可以有效杀灭细菌、真菌、病毒等病原体。
常见的高温高压灭菌设备有压力蒸汽灭菌器、高温高压灭菌器等。
2. 化学灭菌化学灭菌是利用化学药剂对物品进行消毒灭菌的方法。
常见的化学灭菌药剂有过氧化氢、乙醛等。
化学灭菌可以对一些不耐高温、高压的物品进行灭菌处理，灭菌效果可靠。
不过，需要严格控制浓度和时间，避免残留物对患者造成不良影响。
3. 紫外线消毒紫外线消毒是利用紫外线对物品进行杀菌消毒的方法。
它适用于对一些较为平整、不易受潮湿污染的物品进行消毒。
但紫外线只能杀灭空气和物体表面的病原体，对于物件内部的细菌和病毒杀灭效果较差。
4. 过滤灭菌过滤灭菌是将含有微生物的液体通过灭菌滤器进行过滤，以达到杀灭微生物的目的。
该方法适用于一些对高温、高压敏感的溶液或液体药剂等的消毒处理。
5. 辐射灭菌辐射灭菌是利用辐射对物品进行灭菌处理的方法，其常见的辐射源有γ射线、X射线等。
这种方法适用于对一些耐受辐射的医疗器械和物品进行灭菌处理。
三、消毒灭菌注意事项1. 选择合适的消毒灭菌方法在选择消毒灭菌方法时，应根据物品的特性、形态和材质进行选择，合理灭菌处理，确保消毒效果。
2. 严格控制消毒时间和浓度无论是高温高压灭菌、化学灭菌还是其他方法，都需要严格控制消毒时间和浓度，避免消毒不彻底或药剂残留。
3. 确保设备设施的运行状态对于高温高压灭菌设备、紫外线消毒设备等，需要定期进行维护和检测，确保设备设施的运行状态良好。
4. 对不同材质物品采用不同消毒方法不同材质的医疗器械和物品，应根据其耐受性差异，选择不同的消毒灭菌方法。
实验室13种常用消毒灭菌的方法汇总
实验室13种常用消毒灭菌的方法汇总1、热力消毒灭菌高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固（结构改变导致功能丧失），新陈代谢受到障碍而死亡，从而达到消毒与灭菌的目的。
在消毒中，热可分为湿热与干热两大类。
2、干热消毒灭菌干热是指相对湿度在20％以下的高热。
干热消毒灭菌是由空气导热，传热效果较慢。
一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞需160－170℃经2小时方可杀死。
燃烧法：是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法，因对物品的破坏性大，故应用范围有限。
烧灼法：一些耐高温的器械（金属、搪瓷类），在急用或无条件用其他方法消毒时可采用此法。
将器械放在火焰上烧灼1－2分钟。
若为搪瓷容器，可倒少量95％乙醇，慢慢转动容器，使乙醇分布均匀，点火燃烧至熄灭约1－2分钟。
采集作细菌培养的标本时，在留取标本前后（即启盖后，闭盖前）都应将试管（瓶）口和盖子置于火焰上烧灼，来回旋转2－3次。
燃烧时要注意安全，须远离易燃易爆物品，如氧气、汽油、乙醚等。
燃烧过程不得添加乙醇，以免引起火焰上窜而致灼伤或火灾。
锐利刀剪为保护刀锋，不宜用燃烧灭菌法。
焚烧某些特殊感染，如破伤风、气性坏疽、绿脓杆菌感染的敷料，以及其它已污染且无保留价值的物品，如污纸、垃圾等，应放入焚烧炉内焚烧，使之炭化。
3、电热培养箱利用培养箱的热空气消毒灭菌。
培养箱通电加热后的空气在一定空间不断对流，产生均一效应的热空气直接穿透物体。
一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞、病毒需160－170℃经2小时方可杀死。
热空气消毒灭菌法适用于玻璃器皿、瓷器以及明胶海棉、液体石腊、各种粉剂等。
灭菌后待箱内温度降至50－40℃以下才能开启柜门，以防炸裂。
4、微波消毒微波是一种高频电磁波，其杀菌的作用原理，一为热效应，所及之处产生分子内部剧烈运动，使物体里外湿度迅速升高；一为综合效应，诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。
目前已广泛应用于食品、药品的消毒，用微波灭菌手术器械包、微生物实验室用品等亦有报告。
消毒灭菌标准操作程序
消毒灭菌标准操作程序一、消毒、灭菌基本原则1、基本要求（1）重复使用的诊疗器械、器具和物品，使用后应先清洁，再进行消毒或灭菌。
（2）被朊病毒、气性坏疽及突发不明原因的传染病病原体污染的诊疗器械、器具和物品，应执行本规范第11章的规定。
（3）耐热、耐湿的手术器械，应首选压力蒸汽灭菌，不应采用化学消毒剂浸泡灭菌。
（4）环境与物体表面，一般情况下先清洁，再消毒；当受到患者的血液、体液等污染时，先去除污染物，再清洁与消毒。
（5）医疗机构消毒工作中使用的消毒产品应经卫生行政部门批准或符合相应标准技术规范，并应遵循批准使用的范围、方法和注意事项。
二、消毒、灭菌方法的选择原则1、根据物品污染后导致感染风险高低选择相应的消毒或灭菌方法：（1）高度危险性物品，应采用灭菌方法处理；（2）中度危险性物品，应采用达到中水平消毒以上效果的消毒方法；（3）低度危险性物品，宜采用低水平消毒方法，或做清洁处理；遇有病原微生物污染时，针对所污染病原微生物的种类选择有效的消毒方法。
2、根据物品上污染微生物的种类、数量选择消毒或灭菌方法：（1）对受到致病菌芽孢、真菌孢子、分枝杆菌和经血传播病原体（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等）污染的物品，应采用高水平消毒或灭菌；（2）对受到真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体等病原微生物污染的物品，应采用中水平以上的消毒方法；（3）对受到一般细菌和亲脂病毒等污染的物品，应采用达到中水平或低水平的消毒方法；（4）杀灭被有机物保护的微生物时，应加大消毒剂的使用剂量和（或）延长消毒时间。
3、根据消毒物品的性质选择消毒或灭菌方法：（1）耐热、耐湿的诊疗器械、器具和物品，应道选压力蒸汽灭菌；耐热的油剂类和干粉类等应采用干热灭菌；（2）不耐热、不耐湿的物品，宜采用低温灭菌方法如环氧乙烷灭菌、过氧化氢低温等离子体灭菌或低温甲醛蒸汽灭菌等；（3）物体表面消毒，宜考虑表面性质，光滑表面宜选择合适的消毒剂擦试或紫外线消毒器近距离照射；多孔材料表面宜采用浸泡或喷雾消毒法4、职业防护（1）应根据不同的消毒与灭菌方法，采取适宜的职业防护措施。
常用的基本操作技术一消毒和灭菌技术
常用的基本操作技术（一）消毒和灭菌技术消毒（disinfection）与灭菌（sterilization）两者的意义有所不同。
消毒一般是指利用物理或化学方法消灭病原菌或有害微生物的营养体，而灭菌则是指利用强烈的物理或化学方法杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。
但日常生活中两者常常通用。
灭菌的方法很多，一般可分为物理灭菌和化学灭菌两大类。
1. 物理灭菌物理灭菌是最常用的灭菌方法。
主要包括热力学灭菌、过滤除菌和紫外线灭菌等。
（1）热力学灭菌又可分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。
①干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质的凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快；含水量越小，凝固减慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度更高（160~170℃），时间更长（1~2h）。
进行干热灭菌时最高温度不能超过180℃，否则，包扎器皿的纸或棉塞就会被烤焦，甚至引起燃烧。
通常所说的干热灭菌是指利用干燥箱（或称烘箱）进行灭菌，主要用于玻璃器皿如培养皿、移液管和接种工具等的灭菌。
灭菌时将被灭菌的物体用双层报纸包好或装入特制的灭菌筒内，装入箱中，不要摆的太挤，以免妨碍热空气流通。
逐渐加温，使温度上升至160～170℃后保持2h。
灭菌结束后，切断电源，自然降温，待箱内温度降至70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。
注意在温度降至70℃以前切勿打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。
另外，灼烧灭菌也属于干热灭菌。
在进行无菌操作时，接种工具如接种环、接种钩、接种铲、镊子等要在酒精灯火焰上充分灼烧，试管口、菌种瓶口在火焰上作短暂灼烧灭菌等。
②湿热灭菌a.高压蒸汽灭菌此法是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性达到灭菌的目的。
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常用的消毒灭菌操作方法附录 4
一、干热灭菌的操作方法
1.装入待灭菌的物品
将待灭菌的物品，如塞上棉塞的试管、锥形瓶、培养皿、吸管等玻璃仪器，用牛皮纸或干净的报纸
包裹严密后，放人干热灭菌箱。
注意，物品不要摆得太挤，以免妨碍热空气流通。
同时，灭菌物品也不
要与干热灭菌箱内壁的铁板接触，以防包装纸烤焦起火。
2.灭菌
关好干热灭菌箱的箱门，旋动恒温调节器，设定温度为160~170℃。
当温度升到150℃左右时，保持
此温度3~4h。
由于干热灭菌温度较高，操作时要注意防止烫伤。
3.降温
关掉电源，自然降温。
4.开箱取物
等温度降到70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。
注意温度未降到70℃以前，切勿打开箱门，以
免玻璃器皿炸裂。
二、高压灭菌的操作方法
1.首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架平齐。
2.放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。
注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
锥形瓶
与试管口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包裹瓶口的纸而透入棉塞。
3.加盖，并将盖上的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内。
拧紧固定盖子的螺栓，注意要同时旋紧相
对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，不漏气。
4.加热灭菌锅，打开排气阀，使水沸腾，排除锅内的冷空气。
等冷空气完全排尽后，关上排气阀，让
锅内的温度随蒸汽压力增加而逐步上升。
当锅内压力升到所需压力时，控制热源，按照灭菌所要求的时
间，维持压力。
5.到灭菌时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开排气阀，旋
松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
如果提前打开排气阀，锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体会冲
出容器，造成污染。
三、紫外线灭菌的操作方法
紫外线只适用于表面灭菌和空气灭菌。
以面积为10 m2的普通小型接种室为例，在工作台上方距地面
2m 处悬挂1~2 只30 W 紫外灯，每次开灯照射30 min ，就能达到室内空气灭菌的目的。
照射前，适量喷
洒石炭酸等化学抑菌剂，可以加强灭菌效果。