微囊藻毒素检测方法的研究进展

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微囊藻毒素研究进展

微囊藻毒素研究进展

淡 水 藻类 通 常 以蓝 藻 、绿 藻 、硅藻 、甲藻 、 隐 藻 、裸 藻 、金 藻 、黄 藻 等 8 门为主 。蓝 藻 门是 已 个
知的产生毒素最多的门类 ,这些毒素主要 以微囊藻 毒素和节 球 藻 毒 素 为代 表。微 囊 藻毒 紊 ( io mc - r csn)简 写 ( Y T ,是 蓝藻 的微 囊 藻屑 、鱼 腥 yts i MC S )
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微 囊藻毒素研 究进展
刘桂 明
微 囊 藻毒 素研 究进 展
刘桂 明 ,邓 义敏 ,李 怡
(. 1 昆明市卫生防疫站 ,云南 昆明 603 ;2 昆明市 自来水总公司 ,云南 昆明 605 ) 504 . 50 1 摘 要 :蓝藻水华使水的感官性状恶化 ,水体 自净能力降低 ,其 中的蓝绿藻会产生对健康有潜在威胁
的微囊藻毒素,是淡水水体 中危害最大的一类。就 国内外近年来对微囊藻毒素的毒理、危害和流行病学等 方 面的研 究作 一综 述 。 关键词 :水华;蓝藻 ;微 囊藻毒素 中 图分 类号 :) 2 文献标 识码 :A (4 5
文 章编 号 :10 —97 (02 2一OO —0 06 4X 20 )0 O7 3
多个国家都 曾报道了其湖泊 、水库 中有毒水华 的形 成 ,并分离出有毒藻株【 。我 国的东湖、巢湖 、太 3 ]
湖 、滇池 、淀山湖、黄浦江等饮用水水源及各种湖
泊在夏秋季节藻类水华严重 ,每年长达 7 8 — 个月 , 而天然水体蓝藻水华 8 %是产毒 的[ 。从加拿大、 0 引
日 、芬兰、美国、中国等地对湖水、河水 、水库 本 水、井水及 自来水等水样 的检测结果看 ,有的水体 中微囊藻毒 素检 出率高达 6 % 一8 %,源水 中微 0 7

水质微囊藻毒素的测定

水质微囊藻毒素的测定

水质微囊藻毒素的测定水质微囊藻毒素的测定1. 引言水是生命之源,但当水质受到微囊藻毒素的污染时,会对人类健康和生态环境带来严重威胁。

对水中微囊藻毒素进行准确、快速的测定成为了保障水环境健康的重要手段。

本文将探讨水质微囊藻毒素的测定方法、应用和前景,并分享个人观点和理解。

2. 微囊藻毒素的生态影响微囊藻是一类常见的浮游藻类,它们在水体中繁殖迅速,形成大量的藻华。

某些微囊藻会释放出毒素,称为微囊藻毒素。

微囊藻毒素的存在对水生生物和生态系统造成了巨大的威胁,可以引起鱼类和其他水生动物中毒,造成养殖业和渔业的经济损失。

3. 水质微囊藻毒素的测定方法目前,常用的水质微囊藻毒素测定方法主要包括生物学法、物化法和分子生物学法。

3.1 生物学法:生物学法是通过动物或昆虫对水样进行毒性试验,测定微囊藻毒素的毒性。

这种方法比较简单,但时间成本较高,并且涉及动物使用,不符合伦理要求。

3.2 物化法:物化法是利用化学方法对水样中的微囊藻毒素进行检测。

主要包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱法(GC-MS)和光谱法等。

这些方法具有灵敏度高、准确度高和操作简单等优点,但需要专业设备和技术支持。

3.3 分子生物学法:分子生物学法是通过检测水样中微囊藻毒素基因或毒素合成相关基因的存在和表达来测定微囊藻毒素含量。

这种方法具有非常高的灵敏度和特异性,能够快速准确地测定微囊藻毒素含量。

4. 水质微囊藻毒素测定的应用和前景水质微囊藻毒素的测定方法已广泛应用于水环境监测、饮用水源地保护和水产养殖等领域。

对微囊藻毒素的准确测定可以及时预警和控制水质污染,保护环境和人类健康。

随着技术的不断进步,水质微囊藻毒素的测定方法将越来越简便、快速和准确,为水环境保护提供更高效的手段。

5. 我对水质微囊藻毒素测定的个人观点和理解我认为水质微囊藻毒素的测定是一项非常重要的工作,它关系到人类健康和生态环境的可持续发展。

通过准确测定水质中微囊藻毒素的含量,可以及时采取措施防止和解决水质污染问题。

微囊藻毒素(MCs)的研究进展

微囊藻毒素(MCs)的研究进展

微囊藻毒素(MCs)的研究进展作者:欧小蕾来源:《中国科技博览》2018年第19期[摘要]微囊藻毒素(MCs)是一类由蓝藻水华产生的一类具有环状结构和间隔双键的七肽单环肝毒素。

其具有毒性大、分布广、结构稳定,是危害人体健康的重要生物毒素之一。

本文主要对微囊藻毒素的来源、分布、化学结构、毒性、毒理效应、分离检测及脱除技术等进行综述。

中图分类号:X52 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2018)19-0350-02随着我国经济的快速发展,工业废水、生活污水的不断增加和不合理排放,导致我国水体的富营养化程度逐渐加剧,由水体富营养化导致的蓝藻水华和赤潮的发生日趋普遍,已成为一个亟待解决的环境污染问题。

其中最为常见的次生代谢产物--微囊藻毒素(microcystins,MCs)是一类分布最为广泛的肝毒素,其能造成家畜、家禽、野生动物等的中毒死亡,人类饮用含有微囊藻毒素的水体也会导致人体肝脏器官的损伤或者诱发肝癌的高发。

因此,MCs对水体环境的污染和对人群健康的危害已成为全球关注的重大环境问题之一。

为保障人类对饮用水的食用安全,我国相关管理部门规定了对饮用水体中MCs含量的实时监测,同时对MCs的来源、分布、化学结构、理化性质、毒理毒性、检测及降解脱除技术的改进等,也将成为研究热点。

1.MCs的来源、分布MCs在蓝藻水华中出现的频率最高、产毒量最大,严重威胁人和动物的生命安全。

MCs 属于一种藻细胞内毒素,其主要在蓝藻活细胞内产生合成,当细胞衰老、死亡、溶解或破裂后,毒素就会被释放到水体中。

MCs有毒株(toxic strains)和无毒株(nontoxic strains)之分,它的毒性均由遗传基因决定。

MCs的产生同时还受到环境因素的影响,如光照、温度、pH值、营养盐浓度[1]等,其中光照是毒素产生的一个最重要制约因子[2],其次是温度。

MCs的分布主要分为区域差异分布和季节差异分布。

目前,就我国的MCs的地域分布情况来看,华东、华南、华中以及西南地区的水体中都已检测出MCs,部分水体中MCs的浓度已超出国家生活饮用水卫生标准限值1μg/L,其中以华东地区尤为突出。

微囊藻毒素生物合成基因及其功能研究进展

微囊藻毒素生物合成基因及其功能研究进展

微囊藻毒素生物合成基因及其功能研究进展摘要:水体富营养化加剧,导致了蓝藻水华在世界范围内频发。

蓝藻产生的微裳藻毒素是最常见的一种藻毒素,对人类和动物造成了很大的危害甚至导致死亡。

微囊藻毒素经非核糖体合成途径由多肽合成酶合成。

对微囊藻毒素的结构与性质、微囊藻毒素合成基因的功能及其生物合成、微囊藻毒素的分子生物学检测技术进行了评述,对未来的研究方向进行了展望。

关键词:微囊藻毒素;蓝藻:基因;检测随着社会的发展,生活及工农业生产中大量含氮、磷的废污水未经有效处理被排入水体中,导致水体富营养化,蓝藻等藻类成为水体中的优势种群,大量繁殖形成水华,蓝藻水华暴发带来的微囊藻毒素(microcystin,MC)污染已经成为全球关注的环境问题。

微囊藻毒素造成了众多中毒事件,对人类和动物的健康造成了很大的威胁。

深入认识微囊藻毒素,了解微囊藻毒素的结构、编码基因及其合成,有助于对微囊藻毒素进行有效的监测,对微囊藻毒素的合成进行干预,从而在监测、控制和消除等方面有效解决微囊藻毒素的危害问题,对水体环境的保护具有重要的现实意义。

1微囊藻毒素的结构与性质微囊藻毒素是一种单环七肽肝毒素,一般结构为环(D-Ala-X-D-MeASp/D-Asp-Z-Adda—D-Glu-Mdha)(图1)。

分子结构1位上是D-丙氨酸(D-Ala);2、4位上的X和Z分别代表不同的氨基酸;3位上是D-赤-β-甲基天冬氨酸(MeAsp);5 位上是(2S,3S,8S,9S)-3-氨基—9—甲氧基一2,6,8-3甲基-10-苯基-4,6-_烯酸(Adda);6位上是D一谷氨酸(D-Glu);7位上是N一甲基脱氢丙氨酸(Mdha)。

其中.Adda是一种特殊氨基酸,是毒素活性表达所必需的基团,其结构改变会导致毒性减弱或丧失。

因为结构中存在可变氨基酸,所以微囊藻毒素有多种异构体,目前发现的已经超过90种。

其中最普遍、毒性较大的是MC-LR、RR和YR(L、R、Y分别代表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸)。

水产品及螺旋藻片中微囊藻毒素检测方法研究

水产品及螺旋藻片中微囊藻毒素检测方法研究

L E I Y u n , D A I Mi n g ’ , Z HO U P e n g 。 , Z H E N G X i a o — y a n , L I N Q i n , O U Y A N G L i - q u n ( 1 . D e p a r t m e n t o f P h a r m a c e u t i c a l A n a l y s i s , F a c u l t y o f P h a r m a c y , F u j i a n Me d i c a l U n i v e r s i t y , F u z h o u 3 5 0 0 0 4 , F u j i a n , C h i n a ; 2 . C h i n a N a t i o n a l Q u a l i t y S u p e r v i s i o n a n d T e s t i n g C e n t e r f o r P r o c e s s e d F o o d , F u j i a n I n s p e c t i o n a n d R e s e a r c h I n s t i t u t e f o r P r o d u c t Q u a l i t y , F u z h o u 3 5 0 0 0 2 , F u j i a n , C h i n a )
检 测分 析
DO I : 1 0 . 3 9 6 9 / j 。 i s s n . 1 0 0 5 - 6 5 2 1 . 2 0 1 3 . 1 3 . 0 2 4
食品研究与并发
F o o d Re s e a r c h An d De v e i o o me n t

微囊藻毒素研究的当前进展和未来方向

微囊藻毒素研究的当前进展和未来方向

第35卷 第3期水生生物学报Vol. 35, No.3 2011年5月ACTA HYDROBIOLOGICASINICAMay, 2 0 1 1收稿日期: 2010-10-04; 修订日期: 2011-02-23基金项目: 国家自然科学基金项目(30771827, 20777067); 国家科技重大专项(2008ZX07421-001)资助作者简介: 王昊(1987—), 男, 江苏宜兴人; 硕士研究生; 研究方向为分子毒理学。

E-mail: whyx2009@ 通讯作者: 徐立红, E-mail: xulihong@DOI: 10.3724/SP.J.1035.2011.00504微囊藻毒素研究的当前进展和未来方向王 昊 徐立红(浙江大学医学院生物化学与遗传学系, 杭州 310058)THE CURRENT DEVELOPMENTS AND FUTURE DIRECTIONS IN MICROCYSTINSSTUDYWANG Hao and XU Li-Hong(Department of Biochemistry and Genetics , School of Medicine , Zhejiang University , Hangzhou 310058, China )关键词: 微囊藻毒素; OATP; 关键被攻击分子; 氧化损伤, 内质网应激; 抗肿瘤药物Key words: Microcystin; OATP; Key attacked molecular; Oxidative damage, ER-Stress; Antineoplastic 中图分类号: X171.5 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2011)03-0504-12蓝藻是一种广泛分布于全世界水体中的光能自养型微生物, 其特点之一是所产生的特殊次级代谢产物藻毒素对于许多物种都有毒性作用。

在正常生态环境中, 水体中蓝藻数量维持在正常范围。

微囊藻毒素(MC-LR)ELISA检测方法的改进及误差分析

微囊藻毒素(MC-LR)ELISA检测方法的改进及误差分析
这 种误差 影 响 。
最 新 网上 公布 的《 活饮 用水 卫生标 准 》 G 54 20 ) 生 ( B 79— 05 征求稿 中 已将 微囊 藻毒素 一 R 的标 准 值列 入 , 照 WH L 参 O
标准 , 定为 0 0 1 g L .0 m / 。 酶联 免疫 吸附分 析法 已广泛 应用 于食 品 、 料 、 料 、 饲 饮
目前 尚没有强 制性 的饮水 中藻毒素 含量 卫生 标 准 , 各
国 已有 饮水 中的藻毒 素含 量标 准 一 般 都 为微 囊 藻毒 素 一
L Mi oyt R( c csn—L MC—L 的 含 量 。世 界 卫 生 组 织 r i R, R)
酶 标板 的方 法可加 快免 疫反应 。
(J ns s t eo irb lg o , t、24 6 ; et r i aePee tna dC nrl f x Ct 24 0 ) 1i guI tu f coi oyC . Ld 10 3 2C ne f s s rvni n ot i i 10 1 a n it M o ro D e o o o Wu y
尽 管 E I 以其 突出 的优 点 如 灵 敏度 高 、 LS A 操作 简 便 、 成 本低廉 、 全 性 好 等 日渐 被 广 大 水 质 监 测 工 作 者 所 接 安
受 , 由于不 同地 域 水 质 、 但 污染 性 质 、 污染 程 度 不 同 , 各地 水 源水 中成 分 复 杂 多 样 , 些 成 分 会 对 测 定 结 果 造 成 影 有
蔡 正森 孙蔚榕 钮伟 民 张敬平 陆茂林 蔡建荣 赵 晓联h
( 江苏省微生物研究所有限公司 , 1 江苏无锡 2 4 6 ; 无锡市疾病预防控制 中心 , 10 3 2 江苏无锡 2 40 ) 10 1

微囊藻毒素的检测及其治理研究进展

微囊藻毒素的检测及其治理研究进展

微囊藻毒素的检测及其治理研究进展微囊藻毒素是水体富营养化发生后产生的最大危险物质之一,对人体健康有极大的危害。

文章主要从藻毒素的危害、致毒机理、分析检测方法及其去除方法等方面,对近年来对藻毒素的研究进展进行介绍。

标签:微囊藻毒素;检测;去除方法微囊藻毒素(MC)是由微囊藻(Microcystis)、浮游蓝丝藻(Plankt othrix)、鱼腥藻(Anabaena)和颤藻(Oscillat oria)等淡水藻类产生的环七肽肝毒素[1]。

微囊藻毒素是”水华”产生的最大危险物质之一。

它不仅直接污染饮用水源,还可以在水生生物中富集,通过食物链而进入高等级生物体内,直接威胁人类的健康和生存。

1 微囊藻毒素的致毒机理根据藻毒素对生理系统、器官和细胞等主要器官的不同影响,一般分为肝毒素、神经毒素和接触、肠胃刺激性毒素。

有报告指出藻毒素可能促进肿瘤的发生[2]。

微囊藻毒素可以促进机体内脂类物质过氧化反应,破坏机体氧自由基的产生与清除的平衡,而体内自由基和许多疾病和外源性损伤的病理过程都有关联[3]。

2 微囊藻毒素的检测方法水环境中MC的分析检测是研究其在水环境中分布和迁移规律以及去除方法的基础。

目前MC的检测方法可以简单分为:生物检测法、免疫检测法、蛋白磷酸酶抑制法、色谱分析法和聚合酶链反应(PCR)分析。

2.1 生物检测法生物检测法分为动物实验和细胞学实验。

动物实验是通过研究藻毒素对动物的急性毒性作用来验证其毒理效应。

但其缺点是不能进行定性分析,且检测灵敏度不高。

细胞学实验是利用原代肝细胞来检测藻毒素,可大大减少受试动物的使用量,同时受试细胞的同质性还可避免在动物实验各出现的个体差异,缺点是对操作者要求较高,要求操作人员掌握一定细胞培养技术。

2.2 色谱分析法分析MC的色谱技术包括高效液相色谱(HPLC),液相色谱-质谱联用分析((LC-MS),毛细管电泳技术(CE)等。

高效液相色谱(HPLC)是环境监测不可或缺的技术支撑,对藻类毒素及其同系物可做到定性和定量分析,是了解藻类毒素化学性质和结构的重要手段。

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微囊藻毒素检测方法的研究进展湖泊、水库和河流中接纳过多的氮和磷等营养物质,使水体的生态结构和功能发生变化,导致藻类特别是蓝藻(Cyanobacteria)的异常繁殖生长而出现的蓝藻水华现象。

随着水体富营养化的加剧而引起有害藻类水华(HAB,harmful algal bloom)的频繁发生已成为国内外普遍关注的环境问题。

当蓝藻水华严重时,水面形成厚厚的蓝绿色湖靛,散发出难闻的气味。

不仅影响人的感官,破坏了健康平衡的水生生态系统,而且因藻细胞破裂后释放出多种藻毒素而对人和动物的饮用水安全构成了严重的威胁。

世界上25%~70%的蓝藻水华污染可产生藻毒素,在已发现的各种不同藻毒素中,微囊藻毒(Microcystins,MC)是目前已知的一种在蓝藻水华污染中出现频率最高、产生量最大和造成危害最严重的藻毒素种类。

在20世纪80年代对全国范围内的水源水质进行过全面的调查,结果表明34个湖泊中有一半以上的湖泊面积处于富营养状态。

进入20世纪90年代,全国淡水水体富营养化日益严重,涉及范围不断扩大。

通过对各大饮用水水源及各种湖泊的监测表明,在夏秋季节藻类水华严重,每年长达7~8个月,而天然水体蓝藻水华80%是产生毒素的。

从加拿大、日本、芬兰、美国、中国等地对湖水、河水、水库水、井水及自来水等水样的检测结果看,有的水体中微囊藻毒素检出率高达60%~87%,源水中微囊藻毒素浓度从130ng/ml~2μg/ml,经加氯处理后的浓度也在0.09~0.6μg/L之间。

淡水水源受到微囊藻毒素的检测方法的研究日益深入,需要建立一种简单、快速、准确的系统的检测方法。

1 微囊藻毒素简介1.1 微囊藻毒素淡水藻类通常以蓝藻、绿藻、硅藻、甲藻、隐藻、裸藻、金藻、黄藻等8个门为主。

蓝藻门是已知的产生毒素最多的门类,这些毒藻可产生具有明显肝毒性的肽类物质,称为微囊藻毒素(Microcystins,MC)。

它是一种肝毒素,是肝癌的强烈致癌剂。

1.2 微囊藻毒素的结构Louw认为,微囊藻毒素是一种具有强烈慢性肝脏中毒特征的生物碱。

Hughes等人在1958年发现并分离得到铜绿微囊藻NRC-1有毒品系。

1959年Bishop等人对铜绿微囊藻NRC-1有毒品系的毒性做全面研究,发现这种微囊藻毒素是由7种氨基酸组成的小分子环状多肽,为单环结构:D-丙氨酸-L-X-赤-β-甲基-D-谷氨酸-Mdha。

其中Mdha是一种特殊的氨基酸;Adda为3-氨基-9-甲氧基-2,6,8-三甲基-10-苯-4,6-二烯酸;X和Y为两种可变L氨基酸。

目前已鉴定的约有65个微囊藻毒素变式,其中多数毒性较高,如MC-LR,MC-RR和MC-YR等。

1.3 微囊毒素的产生MC是细胞内毒素,它在细胞内合成,细胞破裂后释放出来并表现出毒性。

由于它有很小的体积(分子量1000左右)、环状结构及其氨基酸的特殊结构,一般认为它不在核糖体内合成,而是由肽合成酶复合体合成的生物活性小肽,类似于在一些杆菌和真菌中小肽的合成。

这些小肽大多是抗生素、免疫抑制物和一些对动物和植物有毒的物质。

关于微囊藻毒素产生的机理有很多假设,但目前为止尚无令人满意的结果,现在常提到的有环境因素和遗传因素。

微囊藻毒素受光照、温度、营养盐等多种环境因素影响,其中光照可起到非常重要的作用。

但遗传论者认为微囊藻毒素的合成是由毒素肽合成酶基因多基因控制的,并由肽合成酶复合体合成(非核糖体合成的多肽)。

1.4 微囊藻毒素对生物的影响因为MC主要以肝脏为靶器官,当动物被灌喂或腹腔注射后,破坏细胞内的蛋白磷酸化平衡,改变多种酶活性,引起肝脏病变,造成一系列的生理紊乱。

中毒症状主要表现为虚弱、呼吸沉重、皮肤变白、呕吐、腹泻、毛立和嗜睡等。

如猴子的中毒症状为昏迷、肌肉痉挛、呼吸急促、腹泻等,在数小时内或几天内死亡。

1987年Brook WP用HC标记的MC-LR腹腔注射染毒小鼠,1分钟后肝脏内出现总标记的70%,3小时后肝脏内积聚的MC-LR占总量的90%,表明肝脏是MC-LR分布的主要器官。

它不仅对动物有影响,而且对植物也有一定的影响。

Mcelhiney等发现MC-LR的存在可对茄属植物的生长和豆类植物根的发育产生不良影响。

Singh等研究了MC对藻类、微生物和真菌生长的效应,发现在初始50mg/L的MC可完全抑制灰色念珠藻和鱼腥藻的生长并使藻细胞溶解。

观察到了MC对二氧化碳的吸收和光合作用的不良影响,同时推断出铜绿微囊藻通过MC的杀藻作用是在自然条件下保持其优势藻种的重要原因。

微囊藻对人体的健康也会造成很严重的危害,据报道,巴西曾发生一起126个做肾透析的病人出现神经系统中毒症状,造成60人死亡事件。

生化检验结果表明,中毒病人血清中MC浓度为2.4~31ng/ml,渗透液用水经HPLC检测,其中含有MC-LR、RR、AR,证实这起医疗事故是因MC进入血循环引起急性肝损伤而导致病人死亡。

2 微囊藻毒素的检测方法正是因为MC来源于藻且对人和水生动植物具有很高的毒性及潜在危害,目前的环境检测已经把其列为其中的一个指标,但是如何既能准确又能迅速地定性定量地检出也是科学界普遍关注的问题。

因此对于藻毒素分析检测的研究对于维护环境安全和人类健康具有重要意义,世界卫生组织规定饮用水中的MC浓度不得高于1.0μg/L(MC-LR)。

目前普遍采用的方法可以归纳为生物毒理学法、化学分析法、免疫检测法。

2.1 生物毒理学法2.1.1 生物测试法采取对小鼠进行灌喂或腹腔注射来鉴定藻毒素的毒性。

此方法经Medcof和chantz修改完善后于1985年被分析化学家协会确定为标准方法沿用至今。

它的优点是简便直观,能较为粗略地判断提取物是否有毒性。

具有操作简单,结果直观、快速等优点,但需要消耗较多的毒素,灵敏度和专一性不高;无法准确定量,也不能辨别毒素的异构体类型;小鼠的维持费用高、工作量大。

因此,生物测试通常只作为毒性检测的最初筛选方法,并且正日益被其他方法所取代。

2.1.2 细胞毒性的检测技术细胞毒性检测技术是利用毒素对细胞的毒性作用来检测毒素的一种技术,不仅可以判断毒素是否存在,还可以对毒素进行精确的定量。

Fladmark等人利用藻毒素诱导沙门氏菌和大鼠的原发性肝细胞死亡的能力为参数检测MC-LR,表明悬浮培养液中的沙门氏菌肝细胞为检测较广范围的肝毒素提供了迅速灵敏的系统。

Fladmark等建立了一种根据MC导致鲑鱼或大鼠肝细胞凋亡的程度来确定MC的方法。

他们将分离的鲑鱼或大鼠的肝细胞悬浮培养,然后加入MC,根据细胞凋亡的程度即可求出MC的含量,检测限度为10~20ng;并根据动物细胞凋亡的第一信号是发生凋亡的细胞与临近的细胞分离这一特征还建立了用MC导致悬浮培养的鲑鱼或鼠肝细胞解聚的程度来检测毒素的方法,所得结果比用判断细胞凋亡的程度所得结果灵敏5~10倍。

2.2 化学分析法包括高效液相色谱(HPLC)、薄层色谱(TLC)、高效液相色谱和质谱(HPLC-MS)、气相色谱和质谱(GC-MS)联用、毛细管电泳(CE)等方法。

在化学检测方法中使用较多的是HPLC,其次是GC-MS 联用,单独用GC和TLC的情况不多。

HPLC技术一般采用正相或反相色谱对毒素进行分离,然后进行紫外(UV)、荧光(FL)或化学发光(CL)检测,可广泛用于MC分离、鉴定和定量检测,HPLC普遍应用的紫外检测器。

2.2.1 高效液相色谱(HPLC)目前,高效液相色谱(HPLC)法是WHO、美英等发达国家和我国权威机构推荐的MC检测方法。

该方法具有准确、灵敏、重现性好,能同时分析出不同的MC异构体等优点,目前关于HPLC测定MC的研究报道比较多,都集中在对色谱分析条件、样品的前处理、洗脱液、SPE柱、淋洗剂、浓缩定容过程的优化处理上,找到最适条件统一检测程序,才能在数据上有可比性。

闫海等在岛津液相色谱(LCIOA)上用二级管紫外检测器测定,发现MC-LR和RR毒素都在238nm波长下有最大吸收峰。

因为HPLC对MC检测限为1mg/L左右,而天然水体中的MC含量仅为μg/L水平,故水样一般要通过富集柱进行浓缩并洗脱后再进行HPLC测定。

被测毒素进行鉴定时,将被测毒素与标准毒素的峰面积进行比较可对其进行精确定量。

Lee等发展了一种新的柱转换高效液相色谱方法在线检测水样中的MC-LR、MC-RR及MC-YR,此方法不需要对水样进行预净化。

过滤后的水样以3ml/min的流速流经ZorbaxCN预置柱进行在线的浓缩;经过阀转换后,浓缩的被分析物经反相洗脱并在LunaC18柱上进行分离,此种方法表现出很好的准确性、精确度及分析速度,整个分析方法过程需时90分钟,较采用离线固相萃取的分析方法用时短。

目前采用HPLC-UV法对MC进行检测,检测限一般为ng级。

Murata等于1995年设计了一种用HPLC-CL监测MC的方法,他们将粗提的MC与半胱氨酸(Cys)反应生成Cys-MC,然后与荧光剂丹磺酰氯(Dns-CL)反应得到具有荧光发色团的Dns- Cys – MC。

经HPLC后,再用TDPO和过氧化氢进行衍生,使之产生过氧草酸-化学发光(peroxyoxalate-Chemilumine-scence,PO-CL),最后用化学发光检测器进行检测。

这种方法的检测限小于15pg/L。

HPLC监测技术往往需要标准毒素,而目前已发现60多种MC,多数缺乏标准毒素,这限制了HPLC 的进一步应用。

HPLC-MS技术很好地解决了这一问题,即使没有标准毒素,只要知道这种毒素的分子量,就可对其进行定性,而且LMS技术亦可对毒素进行精确定量。

快速原子轰击质谱(FABMS)和液相次级离子质谱(LSIMS)是确定毒素分子量的有效手段。

虞锐鹏等采用HPLC-ESI-MS法,以乙腈-水-甲酸作为流动相,对水中的藻毒素进行测定;该法检出限为0.01μg/L,线性定量范围为0.02~20μg/L;该法具有灵敏度高,专属性强等特点。

通过准确的分子量及结构信息,确定毒素类型,这种实验开发的方法实用性强,可为水质检测领域藻毒素风险评价和监测水处理脱毒效能,提供痕量、快速、灵敏、准确的分析方法。

但HPLC方法技术含量高,价格昂贵,各实验室的检测程序和条件差别较大,极大地影响了相关资料间的对比分析,因而另外必须备有标准毒素或某毒素在相同实验条件下的保留值。

由于当前世界在塑料制品中塑料添加剂可干扰HPLC对MC-LR、MC-YR的检测。

2.2.2 气相色谱法(GC-MS)GC和GC-MS可用于MC总量的测定。

单独用GC测定MC的情况不多,主要是GC-MS连用法。

GC-MS 测定MC的前处理和HPLC法一样。

将被测毒素进行鉴定,将被测毒素与标准毒素的峰面积进行比较可对其进行精确定量。

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