氰化高铁法
常用生理生话指标测量与应用2
一.名词解释1.心率：每分钟心脏跳动的次数.2.基础心率：清晨空腹没有任何运动时测定的心脏跳动的次数.3.血压：指血管内血液对单位面积血管壁的侧压力.4.收缩压：心室收缩射血时，动脉血压急剧升高，在心室收缩中期达到最大.反映了心脏每搏输出量的大小.5.舒张压：心室舒张时，动脉压下降，在心舒末期降至最低.反映了外周阻力的大小.6.肺活量：最大吸气后，尽力所能呼出的最大气量.7.时间肺活量：指在最大吸气后，以最快速度进行最大呼气，记录在一定时间内所呼出的量.8.最大通气量：以适宜的呼吸频率和呼吸深度进行呼吸时所测得的每分通气量.9．用力肺活量(FVC):用最快速度所做的呼气肺活量.正常人FVC≈VC,男性为3900ml,女性2700ml,eg.FVC<VC,则气道阻塞.10.第一秒呼出率(FEV1.0):指用力肺活量中,第1s内用力呼出的气量.男性为3200ml,女性2300ml,eg.FVC1.0<1200ml,则有气道阻塞现象.11.第一秒时间肺活量(FEV1.0/FVC%):用力肺活量曲线上可计算出1秒,2秒,3秒时所呼出气量及其占FVC的百分比.正常值为83%,96%,99%.12.最大呼气中期流速(MMF):是将用力呼气曲线FVC的总量均分4等份,去中间部(FVC25%-75%)的呼气量和这部分呼气量所需要的时间,两者的比值即为MMF(l/s).男性3.37l/s,女性为2.89l/s.eg.MMF值降低反映中等气道阻塞.当FVC正常,MMF降低,则小气有阻塞性障碍.13.最大呼气量--容积曲线(MEFV):MEFV曲线主要用于检查小气道功能.主要指标为5%肺量最大呼气流量(V50)及25%肺活量呼气流量(V25)及25%肺活量最大呼气量(V25).当实测值/正常预计值≤80%时认为异常,有小气道功能障碍.14.最大摄氧量:人体在从事递增运动负荷时,组织细胞每分钟所能消耗O2的值.15.皮肤空间阈:人体能够感觉到皮肤上最小的两点间的距离.16:闪光频率融合:用闪光刺激人眼时,当光源频率比较低,眼前产生一闪一闪的光感,当频率逐渐提高到超过一定界限后,则人眼会产生连续的光感,此时,闪光的频率称为闪光融合率.正常值为32-38hz.17.反应时:指人体的感受器官接受刺激通过传导引起肌肉收缩过程.反应时越短,机体对刺激的反应越迅速,灵活性就越高.18.运动型疲劳:有机体生理过程功能不能维持其机能在特定水平上或不能维持预定的运动强度的现象.19.乳酸阈:人体在递增运动强度运动时,血乳酸上升到4mmol/l所对应的强度.二.原理,方法1.心率的测试方法:a指触法,b心音听诊法,c心率遥测法2.血压的测定原理:用压脉带在上臂给肱动脉加压,当外加压力超过动脉的收缩压时,动脉血流完全被阻断,此时用听诊器在肱动脉处听不到任何声音.如外加压力低于动脉的收缩压而高于舒张压时,当心脏收缩时,动脉内有血流通过,舒张时则无.血液断续的通过受压血管狭窄处,形成涡流而发出声音,如果外加压力等于或小于舒张压时,则血管内的血液连续通过,所发出的声音会突然变调或消失.(故恰好可以完全阻断血流所必需的最小管外压力,相当于收缩压.在心舒张时也有少许血流通过的最大管外压力,相当于舒张压).3.正常人安静时血压正常值：收缩压100-120mmhg，舒张压60-80mmhg。
一、网织红细胞(Ret)计数
【临床意义】
（1） 评价骨髓造血功能： ① RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺
盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血 可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑ ；缺 铁和巨贫RET正常或轻度↑ 。
② RET↓表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再
血红蛋白测定
血红蛋白组成 珠蛋白肽链（4条）,每条折叠的珠蛋白肽链结合1个 亚铁血红素，分子量64458（不带O2）。 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素
原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+
血 红 蛋 白
3 1
A
控制Ret计数CV=10% (ICSH推荐)需镜检的RBC数
Ret（%） １～２ ３～５ ６～10 11～25 窥盘小方格内镜检RBC数 1000 500 200 100 相当镜检RBC总数 9000 4500 1800 900
【正常参考值】
方 法 年龄组 相对值（%）
显微镜 计数
成人、儿童 新生儿
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
生物材料溶血性标准化评价方法比较_溶血率法和氰化高铁血红蛋白法
生物材料溶血性标准化评价方法比较:溶血率法和氰化高铁血红蛋白法张伶俐 朱蔚精 谭言飞 屈树新 张兴栋△(四川大学分析测试中心生物学评价实验室,生物材料工程研究中心,成都 610064) 摘要 采用游离血红蛋白直接测定法即溶血率测定法(根据ISO TR7405)和氰化高铁血红蛋白法(根据ISO 1099324)测定了羟基磷灰石(陶瓷)和胶原(高分子材料)的溶血性能,结果提示这两种方法的结论是一致的,且氰化高铁血红蛋白法较血红蛋白直接测定法有灵敏、稳定、可比性好等优点,值得推广应用。
但它存在着一些标准中尚未明确规定的问题。
作者在大量试验和不违背标准原则的基础上提出了一些改进意见,使它更具有可操作性,以便于标准化评价生物材料的溶血性能。
关键词 生物学评价 血液相容性 溶血试验Com par ison between Hem olysis Percen tage M ea surem en t and Hem iglob i ncyan ide M ea surem en t for Standard iz i ng the Eva lua tion ofHem olytic Properties of B ioma ter i a lsZhang L i ngl i Zhu W e ij i ng Tan Yanfe i Qu Shux i n Zhang X i ngdong∃(B iolog ica l E va lua tion L aborota ry,A na ly sis and T esting Cen ter,E ng ineering R eseach Cen ter in B io m a teria ls,S ichuan U n iversity,Cheng d u 610064,Ch ina) Abstract In th is study,tw o m ethods——the supernatant hemoglobin spectropho tom etry,i.e.hemo lysis percentage m easurem ent(acco rding to ISO TR7405)and the hem iglobincyanide m easurem ent(acco rding to ISO 1099324)——w ere used to assay the hemo lytic p roperties of hydroxyapatite(bi oceram ics)and co llagen(po lym er).T he results show ed that the conclusi ons draw n from using the tw o m ethods w ere basically consistent,and the lat2 ter w as mo re sensitive,stable and comparable.How ever,som e of the p rocedures in the hem iglobincyanide m ethod w ere no t defined in details.So based on our experi m ents w e have offered som e suggesti ons and i m p rovem ents, w h ich do no t deviate from ISO and A STM standards,fo r h iher p racticability of usig it in standardizing the evalua2 ti on of the hemo lytic p roperties of bi om aterials.H em iglobincyanide m easurem ent is w o rthy of w ider app licati on.Key words B i o logical evaluati on H emocompatibility H emo lysis test1 引 言与血液直接或间接接触的生物材料必须评价它的血液相容性。
氰化高铁血红蛋白测定法讲解
计算公式
血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458/44000 ×251
=测定管吸光度×367.6
式中：64458为目前国际公认的血红蛋白平均分子量 44000为1965年国际血液学标准化委员会公布的 血红蛋白摩尔吸光系数。 251为稀释倍数
生物参考区间
成年男性 成年女性 新生儿 婴儿 儿童
131-172 g/L 113-151 g/L 180-190 g/L 110-120 g/L 120-140 g/L
警告值(危机值) Hb＜50 g/L 或 ＞ 250 g/L
贫血程度划分
轻度 Hb 正常下限 —91 g/L 症状轻微； 中度 Hb 90-60 g/L 体力劳动时心慌气短； 重度 Hb 60-31 g/L 休息时感觉心慌气短； 极重度 Hb ≤ 30 g/L 常合并贫血性心脏病。
0.200g 0.140g 0.5-1.0ml
上述成分分别溶于蒸馏水中混合，再加蒸馏水至1000ml混匀，试 剂为淡黄色透明溶液，PH值在7.0-7.4。血红蛋白应在5min内完 全转化为高铁血红蛋白。
▼贴标签：写明试剂名称、配制时间、有效期、贮存法。
检测步骤
制备标准曲线
将市售氰化高铁血红蛋白(HiCN)参考 液稀释为四种浓度(200g/L、100g/L、 50g/L、25g/L)，然后以HiCN试剂调零，分 别测定各自在540nm处的吸光度，以血红 蛋白浓度(g/L)为横坐标、绘制标准曲线。
氰化高铁血红蛋白测定法 方法学评价
是国际血液学标准化委员会推荐的参 考方法，该法操作简单、显色快、结果稳 定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。 其致命的弱点是氰化钾试剂中剧毒，使用 管理不当会造成公害。
试剂
血红蛋白测定方法
6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。
１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。
１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。
10微升量吸管。
１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。
贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。
１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。
１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。
计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。
D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。
HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。
１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。
1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。
参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。
氰化高铁血红蛋白测定法试剂
氰化高铁血红蛋白测定法试剂氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生化实验方法，用于分析和测定血液中的血红蛋白含量。
本文将全面介绍该测定法的原理、操作步骤及实验结果的解读，以及实验中需要注意的事项。
氰化高铁血红蛋白测定法的原理是利用氰化高铁与血红蛋白形成氰合血红蛋白，通过测定其最大吸收波长处的吸光度来确定血红蛋白的浓度。
这个测定法在实验室应用广泛，特别适用于快速分析大量样本。
操作步骤如下：1. 准备试剂：将氰化高铁溶液定容至10ml，并使用洗瓶洗净可塑性吸光管。
2. 取1ml待测血清，加入两滴牛磺酸溶液，充分混合。
3. 加入2ml的氰化高铁溶液，尽量避免溶液溢出或产生气泡。
4. 轻轻倾斜吸光管，充分混合后，放置在室温下孵育5分钟。
5. 将孵育后的吸光管置于1cm光程比色皿中，切不可触摸吸光池。
6. 使用5% NaOH溶液分别置于两个比色皿中，作为空白对照。
7. 使用比色计在最大吸收波长（540nm）测定各组的吸光度值。
8. 计算血红蛋白浓度。
根据标定曲线和吸光度值的关系，描绘标定曲线并用所测吸光度值参照标定曲线，查得相应血红蛋白浓度。
实验结果的解读需要注意以下几个方面：1. 血红蛋白浓度的计算：在标定曲线上查找所测吸光度值对应的血红蛋白浓度，可得到最终结果。
2. 结果的参考范围：血红蛋白浓度的正常范围在男性为130～175g/L，女性为115～155g/L。
3. 实验误差的排除：实验过程中，应严格控制各实验条件的一致性，避免外界因素对实验结果的影响。
同时，在同一天内重复检测样本可以提高实验结果的可靠性。
需要注意的事项：1. 操作安全：氰化高铁溶液有毒，操作时应佩戴手套和护目镜，并避免接触皮肤和吸入气体。
2. 实验条件：实验室应具备较好的通风条件，同时实验过程中，避免光线、震动和干扰。
3. 校准和质控：每天开始实验前进行仪器校准，并使用已知浓度的标准品进行质控，以确保实验结果的准确性和可靠性。
综上所述，氰化高铁血红蛋白测定法是一种简便、快速、准确的血红蛋白测定方法。
03[1].红细胞计数、血红蛋白定量
![03[1].红细胞计数、血红蛋白定量](https://img.taocdn.com/s3/m/805ad324af45b307e871973d.png)
计数误差
技术误差 固有误差：仪器误差 计数域误差
质量控制
1避免技术误差，纠正仪器偏差 2缩小计数域误差 3排除异常标本的干扰 4室内、室间质量评价
（Hemoglobin，Hb或HGB） Hemoglobin，Hb或HGB） （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、 亚铁血红素 （原卟啉、Fe2+） 原卟啉、 亚铁血红素
相对缺氧， 三. 剧烈体力运动和劳动 相对缺氧，↑ 妊娠中、 血液稀释， 五. 妊娠中、后期 血液稀释，↓
一. 相对性增多 血液浓缩 二. 绝对性增多 1. 原发性红细胞增多 常见于真性红细胞增多症等 2. 继发性红细胞增多 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 常见于：心血管疾病、肺部疾病、 异常血红蛋白病等
红细胞检验的意义
贫血的诊断和形态学分类 骨髓造血功能评价与疗效观察 动态观察疾病的变化 治疗监测与安全防护
( red blood cell count, RBC )
一. 原理 等渗稀释液将血液稀释一定倍数 将血液稀释一定倍数， 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充 入计数池中， 入计数池中，于显微镜下计数一定体积 内的红细胞数， 内的红细胞数，经过换算求得每升血液 中的红细胞数量。 中的红细胞数量。 二. 器材 1.显微镜 2.微量吸管 1.显微镜 2.微量吸管 3.计数板 改良Neubauer 计数板： Neubauer计数板 3.计数板：改良Neubauer计数板
1.红细胞手工显微镜计数法： 1.红细胞手工显微镜计数法： 红细胞手工显微镜计数法 原理、改良Neubauer计数板的结构、 Neubauer计数板的结构 原理、改良Neubauer计数板的结构、 操作方法、结果计算及注意事项。 操作方法、结果计算及注意事项。 2.血红蛋白测定 血红蛋白测定： 2.血红蛋白测定： 氰化高铁血红蛋白(HiCN) (HiCN)测定法 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考 值及临床意义。 值及临床意义。
诊断学实验报告
实验诊断学实验报告红细胞计数试验实验目的：通过红细胞计数实验1、掌握红细胞计数方原理、方法及注意事项。
2、掌握血细胞计数板的结构试验器材：血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、血红蛋白吸管、生理盐水实验原理：一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。
操作步骤： 1、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。
2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。
6、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
红细胞计数的区域：中心大方格中的5个中方格(正中一个和四角各一个)。
计数原则：数上不数下，数左不数右的计数原则即凡压在中方格边线(双线)上的红细胞，只计上侧与左侧线上的细胞，而压在下侧与右侧线上者不计入。
计算：红细胞数/l=5个中方格内红细胞数×5×10×201×106 或红细胞数/l=5个中方格内红细胞数÷100×1012 式中×5 5个中方格换算成1个大方格×10 1个大方格容积为0.1ul，换算成1.0 ul。
×201 血液的稀释倍数×106 由u1换算成l数据处理： rbc: ×l0/l12参考值男:(4～5.5)×10/l 12 女：（3.5～5）×10/l12 新生儿：（6～7）×10/l 12 答案不唯一，言之有理即可注意事项： 1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血。
2充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。
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原理:血红蛋白在高铁氰化钾和氰化钾的作用下,生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白(红色) ,其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。
氰化高铁血红蛋白在540 nm 波长下,毫克分子消光系数为44 ,据此,用分光光度法测其吸光度,运用消光系数作血红蛋白的定量测定,其化学反应式如下:
血红蛋白——铁氰化钾——高铁血红蛋白——氰化钾——氰化高铁血红蛋白(红色)
试剂: 碳酸氢钠(NaHCO3 ) 140 mg ,铁氰化钾[ K3 Fe(CN) 6 ]200 mg ,氰化钾( KCN) 50 mg ,均为分析纯。
用水溶解并稀释到1 000 mg ,贮存于棕色试剂瓶内,在暗处或冰箱(4 ℃) 保存,至少可稳定数月到1 年。
操作步骤: ①取试剂2.5 mL 于5 mL 带盖试管中加入10μL 血液,混匀后,放置15 min。
②选用0.5 cm 光径比色杯,于540 mm 波长下,以试剂调零点,将所得样品管之吸光度乘以73.6 ,即为血红蛋白之浓度。
计算公式如下:
Ct = (D540HiCN ×251/ 44 ×0.5) ×64 458/ 10 000 = 73.6 ×吸光度。
Ct 为待测的血红蛋白浓度。
D540HiCN为氰化高铁血红蛋白在540 mm 波长下测出的吸光度。
251 为测定时血液的稀释倍数(10μL 血加入215 mL 试剂中) 。
44 为氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数。
0.5 为比色杯的光径。
64 458 为血红蛋白的相对分子质量。