植物体内可溶性糖和淀粉的测定

可溶性总糖、蔗糖和淀粉测定

蔗糖、可溶性总糖和淀粉联合测定一、原理CH2O+蒽酮试剂——蓝绿色物质，在含糖5-80µg显色稳定，重现性好，在620nm下测定消光值。

稀碱与糖溶液共热时，可破坏还原糖，而蔗糖不被破坏；淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。

注意：硫酸含水量、反应温度、显色时间均影响显色度，测定时应严格控制反应条件，使显色温度和时间与做标准曲线时一致。

二、仪器与试剂仪器：分析天平（0.001g）、分光光度计、水浴锅、离心机（4000转/分）、离心管（10ml）、移液管（1、2、5、10ml）、容量瓶（50、100、1000ml）、试管试剂：（1）蒽酮试剂：84ml浓硫酸+16ml蒸馏水=88%硫酸；0.15g蒽酮溶于100ml 88％硫酸（现配现用，棕色瓶中冷藏室内可存3-5天）（2）30％KOH：称取30g KOH，溶解后定容至100ml（3）9.2N高氯酸：741ml 12.4N的高氯酸定容至1000ml（4）标准蔗糖、葡萄糖溶液（1mg/ml）：取分析纯0.1000g溶于蒸馏水定容至100ml三、测定步骤1、茎、叶、柄中的可溶性总糖和淀粉提取（1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加蒸馏水6-7ml，置沸水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。

（2）向沉淀中加水4ml，加入2ml 9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。

再向沉淀中加水5ml，加入1ml9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。

然后用水洗沉淀1-2次，全部转移于容量瓶中，并定容至刻度，摇匀（此为B液，供淀粉测定）。

2、块根中的可溶性总糖和淀粉提取（1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加乙醇（80%）5ml，置80℃水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。

淀粉的国标测定方法

淀粉的国标测定方法公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

2.适用范围，适用于所有含淀粉的食物。

3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。

（1）乙醚（3）碘溶液：称取 g碘化钾溶于20 ml水中，加入 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。

（4） 85 %乙醇。

（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。

然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。

加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。

（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。

（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量测定

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方式。

方式别离用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。

结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。

在作物的碳素营养中，作为营养物质主若是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用要紧有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸进程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各类合成进程和各类生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，因此是营养中最大体的物质，也是需要量最多的一类。

可溶性蛋白是植物体内氮素存在的要紧形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有紧密的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有专门大关系。

白菜是叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰硕，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。

芹菜属植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇定的功效。

菠菜一年生草本植物，菠菜含有丰硕的维他命A、维他命C及矿物质，它对各类贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助医治作用。

2 材料与方式植物体内可溶性糖含量的测定材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取—）试剂葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂仪器设备。

淀粉的国标测定方法

淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

2.适用范围GB5009.9-85，适用于所有含淀粉的食物。

3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。

（1）乙醚（2）0.5 % 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma公司，E.C3.2.1.1）0.5 g，加100ml水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。

（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。

）（3）碘溶液：称取3.6 g碘化钾溶于20 ml水中，加入1.3 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。

（4）85 %乙醇。

（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5.1 样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。

然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。

加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。

（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。

实验植物组织中可溶性糖含量的测定

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定

实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。

一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。

【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。

【试剂】1．90%苯酚溶液称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月；2．9%苯酚溶液取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3．浓硫酸（比重1.84）；4．1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5．100μg/ml蔗糖标准液精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。

【方法】1．标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。

表24-1 各试管加溶液和水的量然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。

然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

2．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

可溶性糖、淀粉、蛋白质

植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。

二、原理（一）分离提取原理在80~85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1．蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。

蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min后出现。

此法灵敏度高，糖含量达30μg即可测定。

2．茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有最大光吸收。

在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。

3．考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595nm，在一定范围内（0~1000μg/mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。

此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、实验用品（一）实验材料：植物样品。

（二）器皿：1.25mL刻度试管×8，15mL试管×20；2.10mL离心管×2；3.容量瓶：50mL×1，25mL×1；4.移液管：5mL×2；2mL×4，1mL×2，0.1mL×2；5.恒温水浴锅；6.离心机；7.电子天平；8.分光光度计。

实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。