抗体筛选
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上海市血液中心 朱自严
与血型相关的天然抗体
• 在正常人群中，约有2％的人带有抗-Sda,抗-Vw和抗-Wra。 • 其它不太常见的抗体按其出现频率由大到小依次为抗-M,-
S,-N,-Ge,-K,-Lua,-Dia和-Xga。 • 用较为灵敏的酶技术检测时，在0.15％的Rh阴性献血个
体中可测到抗-D抗体， • 在Rh阳性献血者中可发现有大于0.1％的人有抗-E。 • 此外还有关于天然产生抗-C,抗-Cw和抗-Cx的报道。
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红细胞抗体的临床意义
• 溶血性输血反应 • ABO/Kidd Rh Duffy Kell Ss (PP1Pk Vel) • 胎儿和新生儿的溶血性疾病 • ABO溶血 Rh溶血 • 自身免疫性溶血性贫血 • 温型自身抗体在37℃时活性最强，通常是IgG类的抗体。
多数是直接针对Rh抗原，也有针对Wrb, Kell, Kidd, 和U • 冷反应性自身抗体具有抗-I活性。冷自身抗体与I,H,Pr,P的
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天然产生的抗体
在发育过程中所产生的天然抗体 • 如果一个个体未曾暴露于输血的外来抗原或妊娠便发现
其血清中存在抗体，这种抗体称为天然抗体。 • 天然抗体最有可能是对环境中异种凝集素所产生的应答，
而这种异种凝集素与RBC抗原有类似结构。 1. 鸡的抗B形成研究 2. 益生菌刺激抗B上升的实验
• 巨噬细胞通过其受体将循环中致敏有IgG的红细胞去除。
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgG
• IgG能固定补体，但不同IgG亚类固定补体的效率有差异： IgG3>IgG1>IgG2>IgG4。
• IgG是否能绑定补体，取决于其所结合的抗原在红细胞上 的密度和位置。
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• 有些抗A或抗B有IgA成份。 • 当RBC膜上抗原密度高时(像ABO或MN抗原)，IgG类的
抗原也可在盐水中直接凝集RBC。 • 除抗-A和抗-B以外，大多数天然抗体在正常体温条件下并
不具反应能力，因此认为这些抗体并不具有临床意义。 • 当发现它们在37℃有反应时，为了输血的谨慎，需提供交
叉配血相容的血液。
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天然产生的抗体
与血型相关的天然抗体
• 天然产生的同种抗体一般与糖基抗原相关，如 ABO,Lewis和P血型系统的抗原。抗A和抗B一般出现在 缺乏相应抗原的个体血液中，同样的还有H,PP1Pk和P抗 原，这些抗原缺失时也会产生相应的抗体。
• 糖基抗原特别是那些具有重复表位的糖基抗原，可在无辅 助性T细胞的情况下刺激B细胞而产生特异性抗体。
抗体筛选
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红细胞抗体的免疫学
• 同种抗体 天然抗体（无明确的免疫过程）和免疫产生（免疫刺激）
• 自身抗体
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgG
• IgG是免疫应答所产生的主要抗体，它占血清中免疫球蛋 白总量的80%。
• 当是针对红细胞抗原时，可结合或溶解所输入的抗原阳性 红细胞。
免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgG
• 多数IgG类血型抗体无法在盐水介质中凝集红细胞，这是 因为在红细胞上IgG分子太小，无法跨越两个相邻红细胞 之间的距离，例外（如：IgG的抗A，抗B，抗M和抗K）。
• 有些IgG抗D可直接凝集D—表型RBC。而大多数IgG抗体 在37℃时致敏RBC，并需有抗球蛋白试剂检出
1+0++0++0 / / / 0
2++++++00+0++
3++00+0+0 / +++
序
MNSs
Duffy Lewis
号 M N S s Mur Fya Fyb Lea Leb
1+0++00++0
2++0+++0++
3++0+0+00+
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抗体筛选的方法
• 经典试管法 • 改良试管法 • 微量板法 • 凝集柱法
能力。
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgM
• 虽然低亲和性的IgM抗体只有在37℃以下才会凝集RBC， 但在体内的末梢循环低温区，它们仍会将补体固定到 RBC上，然后再体内的中心区激活补体瀑布。由于这种 IgM抗体在温度高时会从RBC上解离，因此在测定这些反 应时用多特异性抗球蛋白试剂比用只含补体成分的试剂检 测留在RBC上的补体跟好
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经典试管法
• 准确性高 • 操作难度高，时间长 • 灵敏度较低 • 成本较低（国内劳动力成本低）
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微量板法
• 适用于大样本筛选 • 灵敏度太高 • 试剂不宜长期保存 • 成本较高
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柱凝集
• 灵敏度高 • 操作简便，时间较少 • 准确性较高 • 成本较高
反应相对较弱
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抗体筛选
• 用已知的，带有不同抗原组合的O型试剂红细胞来检测血 清中的“不规则”或“意外”抗体的试验称抗体筛选。
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抗体筛选
• 抗体筛选所用的方法需保证可检出具有临床意义的抗体。 • 通常，血清或血浆与筛选细胞在37℃条件下共同孵育，以
增加抗原抗体的反应，然后进行间接抗球蛋白试验。 • 任何步骤中的血凝和溶血皆是阳性反应，提示有天然抗体
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免疫性抗体的特性
• 免疫性抗体通常是IgG类的抗体,但有时也有IgA。 • 多数免疫性抗体在正常体温条件下有反应性，因此一般认
为免疫性抗体都具有临床意义 • 直接针对Bg,Kna,McCa,Sla,Yka,Csa,JMH抗原的抗体不
具临床意义 • 有些抗Yta和抗Lutwk.baidu.comeran抗原的也不具临床意义
或免疫性抗体，或自身抗体存在。
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筛选用的试剂红细胞
• 一般2-3个为一组 • 需考虑剂量效应 • 需考虑人群中抗体的出现频率 • 注意试剂的有效期 • 检测抗原活性的方法
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某公司国产抗体筛选细胞
序 号D
Rh-Hr CE c
Kidd
Kell
Diego P
e Jka Jkb K k Dia Dib P1
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与血型相关的天然抗体
• 有些天然抗体是以自身抗体的形式存在的(抗-H和抗-I)。 患有自身溶血性贫血的患者在无特殊刺激时，便可产生针 对低频抗原的许多抗体，其中有许多也是自身抗体
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天然产生的抗体
天然同种抗体的特性
• 多数天然抗体是IgM，但有一些其中含有IgG成份，很少 有IgG为主的天然抗体。
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgA
• IgA是机体分泌液中主要的免疫球蛋白，基本以二聚体的 形式存在。
• IgA不能通过胎盘和固定补体，但聚集的IgA可激活补体 旁路途径，IgA也可触发细胞介导的反应。
• 血清中多聚体的IgA具有溶血性，而血库中的这种多聚 IgA一般是抗A 和抗B
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgM
• IgM 5聚体，占所有血清Ig的4%。 • 胎儿首先产生的免疫球蛋白是IgM，而在初次免疫应答中
所产生的抗体主要也是IgM，但IgM无法穿越胎盘屏障。 • 由于其具有5聚体的结构，因此哪怕是亲和力较低的IgM
抗体也能凝集RBC和激活补体。 • 还原性试剂（如2-ME,DTT）破坏IgM分子的溶血和凝集
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由免疫应答而产生的免疫性抗体
• 初次免疫应答早期产生IgM，随后辅助性T细胞诱导B细胞 进行IgM到IgG的型别转换
• 回忆性应答，IgG可上升到很高的水平。刺激后十年还可 在体内测出。迟缓型溶血性输血反应的抗体(特别是Kidd 血型系抗体)在数月后消失
• 在多次输血的患者中发现免疫性抗体的机率比多次妊娠妇 女中发现免疫性抗体的机率要高
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• 抗体筛选是无法检测出血清中的所有抗体，比如抗体是针 对低频抗原的，而筛选细胞中并不含低频抗原
• 如果抗体在37℃或抗球蛋白介质中不反应，单用间接抗球 蛋白方法的抗体筛选也会漏检这些抗体。
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与血型相关的天然抗体
• 在正常人群中，约有2％的人带有抗-Sda,抗-Vw和抗-Wra。 • 其它不太常见的抗体按其出现频率由大到小依次为抗-M,-
S,-N,-Ge,-K,-Lua,-Dia和-Xga。 • 用较为灵敏的酶技术检测时，在0.15％的Rh阴性献血个
体中可测到抗-D抗体， • 在Rh阳性献血者中可发现有大于0.1％的人有抗-E。 • 此外还有关于天然产生抗-C,抗-Cw和抗-Cx的报道。
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红细胞抗体的临床意义
• 溶血性输血反应 • ABO/Kidd Rh Duffy Kell Ss (PP1Pk Vel) • 胎儿和新生儿的溶血性疾病 • ABO溶血 Rh溶血 • 自身免疫性溶血性贫血 • 温型自身抗体在37℃时活性最强，通常是IgG类的抗体。
多数是直接针对Rh抗原，也有针对Wrb, Kell, Kidd, 和U • 冷反应性自身抗体具有抗-I活性。冷自身抗体与I,H,Pr,P的
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天然产生的抗体
在发育过程中所产生的天然抗体 • 如果一个个体未曾暴露于输血的外来抗原或妊娠便发现
其血清中存在抗体，这种抗体称为天然抗体。 • 天然抗体最有可能是对环境中异种凝集素所产生的应答，
而这种异种凝集素与RBC抗原有类似结构。 1. 鸡的抗B形成研究 2. 益生菌刺激抗B上升的实验
• 巨噬细胞通过其受体将循环中致敏有IgG的红细胞去除。
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免疫球蛋白的类型与血型抗体的活性
IgG
• IgG能固定补体，但不同IgG亚类固定补体的效率有差异： IgG3>IgG1>IgG2>IgG4。
• IgG是否能绑定补体，取决于其所结合的抗原在红细胞上 的密度和位置。
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• 有些抗A或抗B有IgA成份。 • 当RBC膜上抗原密度高时(像ABO或MN抗原)，IgG类的
抗原也可在盐水中直接凝集RBC。 • 除抗-A和抗-B以外，大多数天然抗体在正常体温条件下并
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天然产生的抗体
与血型相关的天然抗体
• 天然产生的同种抗体一般与糖基抗原相关，如 ABO,Lewis和P血型系统的抗原。抗A和抗B一般出现在 缺乏相应抗原的个体血液中，同样的还有H,PP1Pk和P抗 原，这些抗原缺失时也会产生相应的抗体。
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• 同种抗体 天然抗体（无明确的免疫过程）和免疫产生（免疫刺激）
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• 多数IgG类血型抗体无法在盐水介质中凝集红细胞，这是 因为在红细胞上IgG分子太小，无法跨越两个相邻红细胞 之间的距离，例外（如：IgG的抗A，抗B，抗M和抗K）。
• 有些IgG抗D可直接凝集D—表型RBC。而大多数IgG抗体 在37℃时致敏RBC，并需有抗球蛋白试剂检出
1+0++0++0 / / / 0
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• IgA不能通过胎盘和固定补体，但聚集的IgA可激活补体 旁路途径，IgA也可触发细胞介导的反应。
• 血清中多聚体的IgA具有溶血性，而血库中的这种多聚 IgA一般是抗A 和抗B
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IgM
• IgM 5聚体，占所有血清Ig的4%。 • 胎儿首先产生的免疫球蛋白是IgM，而在初次免疫应答中
所产生的抗体主要也是IgM，但IgM无法穿越胎盘屏障。 • 由于其具有5聚体的结构，因此哪怕是亲和力较低的IgM
抗体也能凝集RBC和激活补体。 • 还原性试剂（如2-ME,DTT）破坏IgM分子的溶血和凝集
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• 初次免疫应答早期产生IgM，随后辅助性T细胞诱导B细胞 进行IgM到IgG的型别转换
• 回忆性应答，IgG可上升到很高的水平。刺激后十年还可 在体内测出。迟缓型溶血性输血反应的抗体(特别是Kidd 血型系抗体)在数月后消失
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