分子基本操作技术
DNA的基本分子生物学操作汇总
Sanger测序法利用DNA聚合酶和四种不同脱氧核糖核苷酸（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）的特异性，通过分 别标记四种脱氧核糖核苷酸并在不同反应管中分别添加不同的荧光标记，实现DNA序列的逐一合成和检测。该方 法具有高准确性和高分辨率的特点，但测序长度有限制。
下一代测序技术
总结词
DNA的基本分子生物学 操作汇总
• DNA的提取 • DNA的限制性酶切 • DNA的连接 • DNA的转化 • DNA的克隆与表达 • DNA的测序与分析
01
DNA的提取
细胞裂解
机械法
通过机械方式破碎细胞壁，常用的方法有超声波 破碎和玻璃珠研磨等。
化学法
使用化学试剂如盐酸、氢氧化钠等改变细胞膜通 透性，使细胞内容物释放。
离心分离
利用离心机分离酶切产物。
纯化试剂盒
使用纯化试剂盒进行酶切 产物的纯化。
03
DNA的连接
连接酶的种类与特性
EcoRI
T7 DNA Ligase
识别GAATTC序列，切割后产生5'-突 出的粘性末端。
在DNA的5'到3'方向上催化DNA的连 接。
T4 DNA Ligase
能够连接两个DNA片段，形成磷酸二 酯键。
注意事项
感受态细胞的制备需要在无菌条件下进行，避免污染。
DNA的转化过程
转化过程
将制备好的感受态细胞与外源 DNA混合，通过离心、洗涤
和再悬浮等步骤，使外源 DNA进入感受态细胞。
转化效率
转化效率的高低与感受态细胞 的状态、外源DNA的浓度和
纯度等因素有关。
影响因素
转化条件如温度、pH、离子 浓度等也会影响转化效率。
分子生物学基本操作
琼脂糖凝胶电泳 和凝胶成像实验步骤
一、琼脂糖凝胶电泳
凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技术。 根据制备凝胶的材料:
琼脂糖电泳 凝胶 电泳
聚丙烯酰胺电泳
琼脂糖的孔径大，可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断； 聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片断（5-50bp）的核酸。
1、实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成 具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂 糖的浓度。
0.1-10 ul Sterilized Micro-filter Tips
加样-使用合适的枪与枪头
比如加含有甘油的试剂，酶等最好用clear Tips Fra bibliotek 不会有残留；
如果甘油含量高，或特别浓稠的试剂最好用Clear, Non-Beveled Tips（或将一般枪头去尖头）；
与RNA操作有关的枪头最好为Sterilized Micro-filter Tips，或者至少为用DEPC水处理的枪头；
加样酶（冰上）时，应注意体积准确，及 外壁不带，内壁吹打干净，注意用枪头从 反应体系的管底吸上，反复吹打
多通道枪
混匀----所有试剂在使用前都要充分混匀; 多数
分子操作在加样后、反应前都要充分混匀
一、枪混匀
二、旋涡混匀器
0.2ml管,0.5ml管15% 体积以下
分子生物学基本实验操作
分子生物学基本实验操作1.DNA提取：DNA提取是分子生物学中的基础实验操作，目的是从生物组织或细胞中提取出纯净的DNA样品。
常用的DNA提取方法包括酚氯仿法、盐法和商业化提取试剂盒。
该实验操作通常包括细胞破碎、蛋白质去除、DNA沉淀和洗涤等步骤。
2.PCR：聚合酶链反应（PCR）是分子生物学中常用的方法，用于扩增特定的DNA片段。
PCR通过加入DNA模板、引物、碱基和聚合酶，利用循环反应的方式在体外合成特定序列的DNA。
PCR通常包括三个步骤：变性、退火和延伸。
3.凝胶电泳：凝胶电泳是一种分离和分析DNA、RNA和蛋白质的常用方法。
通过将待测样品加载到凝胶中，然后通过电场使DNA、RNA或蛋白质在凝胶中迁移，可以根据迁移速度和分子大小进行分离和定性。
4. Western blot：Western blot是一种用于检测特定蛋白质的方法。
该方法通过将待测样品进行电泳分离，然后将蛋白质转移到膜上，并用特异性抗体与目标蛋白质结合，最后再用染色剂或化学发光来检测目标蛋白质的存在。
5.DNA克隆：DNA克隆是将DNA片段插入到载体DNA中的过程，用于研究和重组DNA。
常用的DNA克隆方法包括限制性内切酶切割、连接酶反应和转化。
通过将DNA片段插入载体中并转化至宿主细胞，可以大量复制目标DNA并随后进行研究。
6.基因测序：基因测序是确定DNA或RNA序列的方法，用于分析基因组、转录组和序列变异。
常用的基因测序方法包括链终止法（Sanger测序）和下一代测序（NGS）。
通过测序，可以获取DNA或RNA的序列信息，并进一步研究基因功能和变异。
7.基因表达分析：基因表达分析通过检测RNA水平来研究基因的表达情况。
常用的方法包括实时定量PCR、Northern blot和转录组测序。
这些方法可以定性和定量地研究基因的表达水平，并帮助解析基因调控和信号通路。
这些是分子生物学的一些基本实验操作。
当然，随着技术和方法的不断发展，分子生物学领域中还有许多其他的实验操作，用于研究生物分子结构和功能。
生物大分子分离提取操作的基本流程
生物大分子分离提取操作的基本流程1.生物大分子分离提取操作是生物化学领域中的一项重要实验技术。
Biological macromolecule separation and extraction is an important experimental technique in the field of biochemistry.2.首先，需要将生物样品进行破碎和细胞裂解。
First, the biological sample needs to be broken and the cells need to be lysed.3.破碎和裂解的方法可以是超声波破碎、高速离心或化学裂解。
Methods for breaking and lysing can include ultrasonic disruption, high-speed centrifugation, or chemical lysis.4.接着，利用差速离心或超速离心将混合物进行沉淀分离。
Then, the mixture is separated by differential centrifugation or ultra-speed centrifugation to precipitate.5.沉淀后的物质可以通过离心、过滤或柱层析进一步分离提取。
The precipitated material can be further separated and extracted through centrifugation, filtration, or column chromatography.6.不同的分子大小和性质可以采用不同的分离技术。
Different separation techniques can be used for molecules of different sizes and properties.7.一些生物大分子需要进行蛋白质酶消化或聚合酶链式反应后再进行分离提取。
分子生物学操作手册
分子生物学操作手册一、引言分子生物学是研究生物体分子结构、功能和相互作用的一门学科。
操作手册旨在提供分子生物学实验的详细步骤，并帮助读者准确、高效地进行实验操作。
本文将介绍PCR扩增、DNA电泳、亚克隆和蛋白质表达等实验步骤，并提供一些常用操作的技巧和注意事项。
二、PCR扩增PCR扩增是分子生物学实验中常用的技术，用于扩增特定区域的DNA片段。
以下是PCR扩增的基本步骤：1. 准备PCR反应体系：根据实验需要，配置PCR反应液，包括DNA模板、引物、酶、缓冲液和dNTPs等。
2. 设定PCR程序：根据模板序列的长度和引物的特性，设定合适的PCR程序，包括变性、退火和延伸等步骤。
3. PCR反应：将PCR反应体系置于热循环仪中，按照设定的程序进行PCR反应。
4. 结果分析：利用DNA电泳等技术，分析PCR反应产物的大小和纯度。
三、DNA电泳DNA电泳是一种常用的DNA分析技术，用于确定DNA片段的大小和纯度。
以下是DNA电泳的基本步骤：1. 制备琼脂糖凝胶：根据需要，配制适当浓度的琼脂糖凝胶，并倒入凝胶槽中，形成凝胶床。
2. 加载样品：将PCR扩增产物或其他DNA样品与DNA标记物混合，加入琼脂糖凝胶孔中。
3. 进行电泳：将凝胶槽放入电泳仪中，进行电泳操作，根据需要设置适当的电压和时间。
4. 结果分析：利用紫外线透射仪观察凝胶上DNA迁移的情况，测量DNA片段的大小。
四、亚克隆亚克隆是将DNA片段插入到载体DNA中的过程，通常用于构建重组DNA或进行基因克隆。
以下是亚克隆的基本步骤：1. 准备载体和DNA片段：准备含有目标基因的DNA片段和经酶切的载体DNA。
2. 消化与连接：将DNA片段与载体DNA进行连接反应，通常使用DNA连接酶。
3. 转化：将亚克隆反应产物转化到适当的宿主细胞中，如大肠杆菌。
4. 筛选与鉴定：通过筛选培养基和PCR等技术，鉴定含有目标基因的克隆。
五、蛋白质表达蛋白质表达是将目标蛋白质在细胞内大量合成的过程，利用该技术可以生产重组蛋白以供研究和应用。
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项一、酶与载体的分装酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl 或20 μl；连接酶（solutionΙ）按5 μl分装；dNTP（10 mM）分装成50 μl；无菌水分装成1 ml；注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。
每人负责六个月。
其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。
由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置以氨苄青霉素为例：1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。
2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。
在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。
6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/mlIPTG 1 M 0.05-0.6 mM五、基因扩增1．引物与合成：设计引物序列，发至生工公司进行合成（jinan@）。
分子生物学实验指导（精）
分⼦⽣物学实验指导（精）分⼦⽣物学实验指导⽣物技术教学室编宁夏⼤学⽣命科学学院2008年8⽉实验⼀分⼦⽣物学实验技术多媒体演⽰[⽬的要求]通过多媒体试验录像进⼀步掌握分⼦⽣物学基本操作技术。
[教学⽅式]多媒体光盘演⽰。
[实验内容]基本的分⼦⽣物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术；质粒提取；转化；重组体的筛选；PCR技术等。
实验⼆琼脂糖凝胶电泳检测DNA[⽬的要求]通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的⽅法和技术[实验原理]琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA⽚段的常⽤⽅法。
DNA分⼦在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分⼦筛效应，DNA分⼦在⾼于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于糖磷酸⾻架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA⼏乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极⽅向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp⾄50 kb的DNA⽚段。
在琼脂糖溶液中加⼊低浓度的溴化⼄锭（Ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。
琼脂糖凝胶有如下特点：(1) DNA的分⼦⼤⼩在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数⽬的常⽤对数值成反⽐，分⼦越⼤迁移得越慢。
(2) 琼脂糖浓度⼀个特定⼤⼩的线形DNA分⼦,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。
(3) 电压低电压时，线状DNA⽚段迁移速率与所加电压成正⽐。
但是随着电场强度的增加，不同分⼦量DNA⽚段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩⼩。
要使⼤于2kb的DNA⽚段的分辨率达到最⼤，所加电压不得超过5v/cm。
(4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳⾏为受电泳时的温度影响不明显，不同⼤⼩的DNA⽚段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发⽣明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。
DNA操作技术
个切割位点。如Bgl II只有6个，BamHI只
有5个，而SalI只有2个，意味着λDNA中
GC含量少于50%。
这种方法只能粗略的估计，只有实验能子（溶液）
酶
缓冲液（一般pH值7.4, 含Mg2+, NaCl, 还原剂如dithiothreitol稳定酶阻止 活）
1.1 核酸酶
作用：降解 磷酸二酯键 分为： 外切酶 内切酶
1.1 核酸酶
Bal 31(来自于细菌Alteromonas espejiana) 单链特异的核酸内切酶活性，
双链特异的内切酶活性。 依赖于Ca2+ 用途： 构建限制酶图谱 产生末端缺失突变 DNA超螺旋线性化
1.1 核酸酶
E. coli外切酶III
识别GATC。也有一些酶识别兼并序
列，如HinfI来自于Haemophilus influenzae品系Rf，识别GANTC，N
代表A, G, T, C。
2.4 限制性内切酶产物
钝端（平端） 粘性末端
粘性末端；是交错切割，结果形成两条单链末 端，这种末端的核苷酸顺序是互补的，可形成 氢键，所以称为粘性末端。
1.1 核酸酶
RNase H（E. coli）
–降解RNA:DNA杂交分子中 的RNA。
1.2 连接酶
广泛存在于各种生物中，连接3‘端羟基 和5’端磷酸形成磷酸二酯键。在DNA复 制、修复、以及 体外重组
过程中起
重要作用。
1.2 连接酶
T4-DNA连接酶 –连接粘性末端、平端 –修复双链DNA或RNA-DNA杂交
2.2 限制性内切酶分类
限制性核酸内切酶可分为三大类：
– I类 –II类* –III类
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在紫外线的照射下结合溴化乙锭的 DNA分子发出荧光
10
第三节 聚合酶链式反应
Polymerase Chain Reaction
聚合酶链式反应，即 PCR 技术，是一种在体外快速扩 增特定基因或DNA序列的方法。它可以快速将极微量 的目的基因或某一特定的 DNA片段扩增数十万乃至千 百万倍。
• 一、PCR技术原理 • 二、PCR技术主要类型 • 三、PCR技术主要应用
4
DNA加样孔 阴极 阳极
大分子量的DNA 移动的慢
小分子量的DNA 移动的快
电泳缓冲液
在生理条件下，核酸分子之糖-磷酸骨架中的磷酸基团，是呈离子 化状态的，所以，DNA和RNA多核苷酸链又被称为多聚阴离子 （polyanions），把这些核酸分子放臵在电场当中，它们就会向正 电极的方向迁移。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数 量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度 向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，DNA分子的这种迁移 速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构型。这 就是应用凝胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。
14
PCR原理示意图
PCR Cycle - Step 1 - Denaturation Template DNA by Heat (95oC)
Target Sequence
Target Sequence
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时 间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离 ，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备 ；
16
PCR Cycle - Step 2 – Temperature is lowered (Tm ) and primers anneal to target sequences
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链 后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配 17 对结合；
29
2、循环参数
(1) 变性 使双链DNA解链为单链 95oC 20-30秒
(2) 退火
温度由引物长度和GC含量决定。
增加温度能减少引物与模板的非特异性结合; 降低温度可增加反应的灵敏性。
30
（3）延伸
70-75oC， 延伸时间由扩增片段长度决定 （4）循环次数
主要取决于模版DNA的浓度
一般为25-35次
End of the 1st PCR Cycle –
Results in two copies of target sequence
每完成一
个循环需2 ～4分钟， 2～3小时 就能将待 扩目的基 因扩增放 大几百万 倍。
19
（三）PCR反应
标准的PCR反应条件：
10X缓冲液 4种dNTP混合物 引物 模板DNA Taq DNA聚合酶 Mg2+ 10 μL 各200umol/L 各10～100pmol 0.1～2μg 2.5U 1.5mmol/L
26
4）模板
单、双链DNA均可。
不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂 、DNA结合蛋白类。 一般100ng DNA模板/100L。
模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。
28
5） Mg2+ Mg2+是DNA聚合酶的激活剂。
0.5-2.5mmol/L反应体系。
Mg2+浓度过低会使Taq酶活性丧失、PCR产量下 降； Mg2+过高影响反应特异性。 Mg2+可与负离子结合，所以反应体系中dNTP、 EDTA等的浓度影响反应中游离的Mg2+浓度。
DNA双螺旋
1
2
3
时间（min）
4
5
21
PCR反应
• PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点
灵敏度高
1. 皮克(pg=10-12)量级扩增到微克(ug=10-6)水平
2. 能从100万个细胞中检出一个靶细胞
3. 病毒检测的灵敏度可达3ห้องสมุดไป่ตู้RFU（空斑形成单位） 4. 细菌检测的最小检出率为3个细菌
23
1、PCR反应五要素（反应成分）
1) 引物（primers）
2) 酶 （Taq DNA polymerase）
3) dNTP （dATP,dGTP,dCTP,dTTP）
4) 模板 （template）
5) Mg2+ （magnesium）
24
2）酶及其浓度
• 目前有两种Taq DNA聚合酶供应
• PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点
20
PCR反应
高温变性 低温退火 适温延伸 温 度 72 （℃）
• PCR反应条件 • PCR过程 • PCR的特点
1
2
3
94
重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上
形 成
DNA 2 条变 单性 链
55 22
子链延伸 DNA加倍 DNA单链 与引物复性
次数过多：扩增效率降低
错误掺入率增加
31
三、PCR技术应用
• 研究
– 基因克隆，DNA测序，分析突变 – 细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 – 遗传图谱的构建，DNA测序，表达图谱 – 犯罪现场标本分析 – 各种肿瘤检测
32
• 诊断
• 人类基因组工程
• 法医
• 肿瘤
• 其他……
6
1）凝胶浓度选择
琼脂糖凝胶浓度与DNA分离范围
凝胶的分辨能力 同凝胶的类型和浓 度有关，凝胶浓度 的高低影响凝胶介 质孔隙的大小，浓 度越高，孔隙越小 ，其分辨能力就越 强。反之，浓度降 低，孔隙就增大， 其分辨能力也就随 之减弱。 琼脂糖浓 线型DNA分子的分 度(%) 离范围(Kb) 0.3 5～60 0.6 1～20 0.7 0.8～10 0.9 0.5～7 1.2 0.9～6 1.5 0.2～3 12.0 0.1～2
第一节 凝胶电泳技术
• 一、常规电泳
琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 二、脉冲凝胶电泳
3
一、常规电泳
• 自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来，按分子量大小 分离 DNA 的凝胶电泳技术，已经发展成为一种分析鉴定重组 DNA 分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段，也是现在通用的许 多分子生物学研究方法，如： DNA 分型、 DNA 核苷酸序列分析、 限制性内切酶片段分析以及限制酶切作图等的技术基础，受到科学 界的高度重视。 • 基本原理：生物大分子在一定pH条件下，通常会带电荷。将其放 臵到电场中，就会以一定的速度移向适当的电极。分子在电场作用 下的迁移速度，与电场强度和电泳分子所携带的净电荷数成正比， 与分子的摩擦系数成反比。摩擦系数是分子大小、极性及介质粘度 的函数。根据分子大小、构型或形状的差异和带净电荷数，可通过 电泳将蛋白质或核酸分子混合物中的各种成分彼此分离。
简便、快速
1. 一次性加好反应液，2～4 小时完成扩增 2. 扩增产物一般用电泳分析
对标本的纯度要求低
血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等 组织的粗提DNA
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（四）PCR反应体系
标准的PCR反应体系
10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 (上、下游引物) 10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双蒸水至 100ul
–天然酶：从嗜热水生杆菌中提纯 –基因工程酶：大肠菌合成
• 一个典型的 PCR反应约需酶量 2.5U（指总反 应体积为100 ul时） • 浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则 合成产物量减少
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3）dNTP dNTP浓度取决于扩增片段的长度
四种dNTP浓度应相等
浓度过高易产生错误碱基的掺入，浓度过低 则降低反应产量 dNTP可与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度下降 ，影响DNA聚合酶的活性。
5
1、琼脂糖凝胶电泳
• 琼脂糖凝胶电泳是一种简便、快速、最常用的 分离纯化和鉴定核酸的方法 • 琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物 • 根据琼溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和 低熔点琼脂糖
• 低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在37℃ 下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片段 的回收，质粒与外源性DNA的快速连接等
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4）载样缓冲液
• 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖 400组成载样缓冲液 • 作用：
–①增加样品密度，使其比重增加，以 确保DNA均匀沉入加样孔内 –②在电泳中形成肉眼可见的指示带， 可预测核酸电泳的速度和位臵 –③使样品呈色，使加样操作更方便
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在凝胶电泳中，加入适 量溴化乙锭（ethidium bromide，简称EtBr）染 料对核酸分子进行染色 ，然后将电泳标本放臵 在紫外光下观察，可十 分灵敏而快捷地检测出 凝胶介质中DNA的谱带 部位，即使每条DNA带 中仅含有0.05μg的微量 DNA，也可以被清晰地 检测出来。
从 20 世纪中叶开始，分子生物学研究得到高速 发展，主要原因之一是研究方法，特别是基因操作 和基因工程技术的进步。 基因操作主要包括 DNA分子的切割与连接、核 酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析 以及基因人工合成、定点突变和PCR扩增等，是分 子生物学研究的核心技术。
• 基因组 DNA 提取技术 • 凝胶电泳技术
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一、PCR技术原理
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（二）PCR的基本原理
• 类似于DNA的体内复制。首先将待扩增 DNA•模板加热变性解链，随之将反应混合 物冷却至某一温度，这一温度可使引物与 它的靶序列发生退火，再将温度升高使退 火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。•这 种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循 环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不 断重复。