细胞生物学实验指导书09年
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。
通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。
二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。
三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。
细胞膜的渗透性及巨噬细胞的吞噬作用
华南师范大学实验报告学生姓名何茂辉学号20062501302专业生物科学年级、班级06科三课程名称细胞生物学实验实验项目实验类型□验证□设计□综合实验时间09 年 5 月19 日实验指导老师尤蓉、周仁超实验评分细胞膜的渗透性及巨噬细胞的吞噬作用实验目的：1.通过红细胞的溶血过程的观察,了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度。
2.通过小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程，了解巨噬细胞对大分子或颗粒物质的内吞作用。
实验原理：1.红细胞在低渗液中，细胞很快吸水而胀裂，称为溶血。
在等渗液中，由于有些溶质会进入红细胞内、引起细胞渗透压升高，细胞也会吸水胀裂，由于各种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同。
2.高等动物具有大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，为非持异免疫功能的重要组成部分。
3.小鼠腹腔注射淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞大量产生,增强巨噬细胞吞噬活性。
实验步骤：细胞膜的渗透性(兔红细胞)1.取1mL兔的抗凝全血于50mL小烧杯中，再加入10mL0.17 mol/L氯化钠，稀释兔血制成兔的红细胞悬液，观察它的特点为一种不透明的红色浑浊液体。
2.取1支试管加入10ml蒸馏水，再加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，可见溶液由不透明的红色迅速变成红色澄清液3.取6支试管贴上标签，依次加入下列等渗溶液10ml：①0.32M甲醇、②0.32M乙醇、③0.32M丙醇、④0.32M乙二醇、⑤0.32M甘油、⑥0.32M葡萄糖4.向每支试管加入1ml红细胞悬液，摇动2次混匀，观察是否有溶血现象发生，记下溶血时间并给予分析小鼠巨噬细胞的吞噬作用观察1.实验前一天向小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含台盼蓝)1ml2.鸡红细胞悬液制备：取抗凝全血1mL，移入10mL离心管,加入4mL生理盐水混匀, 1500rpm离心5 min。
洗涤2次,最后按压积红细胞体积加生理盐水配成1%鸡红细胞悬液3.小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部使鸡红细胞分散4.20～30min后,颈椎脱臼法处死小鼠5.将小鼠置于解剖盘中，剪开腹腔，把内脏推向一侧，加适量生理盐水与腹腔液混匀,用吸管吸取腹腔液于试管或小烧杯中备用6.吸取腹腔液1～2滴，制作临时装片7.镜检结果与分析：1、2、思考题1、溶液的渗透压主要与哪些因素有关?对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压? 溶液的渗透压主要与溶液中溶质颗粒总数有关。
细胞生物学实验指导书
实验一普通光学显微镜的结构及其使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方法。
2、熟悉光学显微镜细胞的形态与结构。
二、实验用品普通光学显微镜、生物制片标本、擦镜纸。
三、实验原理和方法1、普通光学显微镜的构造从构造上，主要分三部分：①光学放大系统，为两组玻璃透镜：目镜和物镜；②照明系统：光源、折光镜和聚光镜，有时另加各种滤光片以控制光的波长范围；③机械和支架系统：主要保证光学系统的准确配制和灵活调控。
显微镜的质量主要取决于物镜，物镜是显微镜最主要的光学部件。
物镜的种类很多。
2、显微镜的能力显微镜的能力是质量和性能的标志。
能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中最重要的是分辨率。
物镜分辨力是指分辨被检样品微细结构的能力。
通常以能清晰地分辨两个物体点的最短距离来表示。
其公式如下：R=0.61λ/N.A.R：分辨率（两点的最短距离）λ：照明光线波长N.A.：物镜数值孔径分辨率以分辨两个点的最短距离表示，R值愈小，分辨能力愈大。
物镜的分辨率与照明光线的波长成反比，与物镜的数值孔径成正比。
3、显微镜的使用①聚光器的调节②光阑的调节③工作距离④油镜的使用4、观察标本注意观察下列结构：①细胞核及核仁：不同细胞的核及核仁――蚕豆根尖切片、兔肝切片（Unna试剂染色）多核及多核仁现象――蛙卵切片、肌肉切片染色体――蚕豆根尖切片、玉米花粉母细胞切片（Giemsa,地衣红或洋红染色）。
②中心体：蝗虫精巢切片（巴西木素染色）。
③线粒体：蚕豆根尖切片、兔肝切片。
④高尔基体：兔肝切片、蚕豆根尖切片（硝酸银或四氧化锇染色）。
四、实验结果简述显微镜的主要结构和操作要领；绘制细胞显微结构图。
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2、学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
细胞学实验指导
前言一、医学细胞生物学实验课的目的和要求医学细胞生物学实验课是医学细胞生物学教学的重要组成部分，它既与医学细胞生物学课堂讲授的理论部分密切联系，同时又有它独特的目的和要求：1. 实验是科学理论的实践与论证，通过实验，使学生从感性认识加深对课堂所获得的理性知识的认识和理解。
2. 通过光学显微镜的使用，临时标本的制作、细胞培养等技术操作，使学生掌握医学细胞生物学的基本实验方法和技能。
3. 通过实验，培养同学观察、比较、分析、综合等科学思维方法、独立工作能力和实事求是的科学态度。
4. 通过实验，使学生获得书写细胞生物实验报告、绘图、制表等方面的基本知识和技能训练。
二、医学细胞生物学实验报告的写作实验报告是科学研究的记录，同学们必须学会客观地、真实地记载实验过程和结果。
实验报告的形式一般可分以下三种：1. 文字报告：要求学员将观察所得和实验结果客观地用文字给以准确、详细的描述和记录。
文字力求简洁明了，条理清楚。
2. 绘图: 绘图是医学细胞生物学实验中常用的报告形式之一, 它既是根据所观察标本的真实记录和研究资料, 又可通过描绘学习更精细观察描述。
医学生物学实验绘图不同于一般艺术性绘图。
医学细胞生物学绘图的基本要求: ①绘图前应对标本加以仔细观察研究，并在正确的理解后方可动手绘制。
图中各种结构的大小应与实物成比例，力求准确，明暗之处以点疏密表示，切勿以铅笔涂施阴影；②绘图要求洁净明了，整齐有序，图的位置大小，要求分配适宜，线条力求匀整；③图绘好后，各部结构要用铅笔详细标注名称，标注的方法是：由所标注的部位引出直线，并将其名称注于线的末端，所引的线条应与报告纸上下沿平行，书写字应当横排，字迹要求端正。
3. 制表：将观察所得或实验结果，设计一表格，将有关结果逐项填入，表示其相应关系。
三、实验室规则1. 做好课前预习：实验课前，要认真阅读实验指导及与教材的有关内容，明确实验目的、要求和注意事项，了解实验内容、方法和步骤。
细胞生物学实验课程教学大纲
细胞生物学实验课程教学大纲课程名称：细胞生物学Cell Biology课程编号：1313016215课程类别：专业课总学时数：68 实验时数：24学分：3.5开课单位：生命科学学院生物综合教研室适用专业：生物科学适用对象：本科（四年）一、课程的性质、类型、目的和任务细胞生物学是生物科学专业的一门专业课，它从细胞水平、亚细胞水平和分子水平三个不同层次上研究细胞的结构功能和生命活动的基本规律，位于分子生物学与个体生物学之间，同他们互相衔接，互相渗透。
因此，细胞生物学又是一门承上启下的学科。
细胞生物学实验课程教学以理论课教学为基础，理论与实践相结合，加深对所学知识的理解，对实验仪器要求较高，因此开设本课程的目的是使学生掌握细胞生物学实验设备的操作方法，使学生更加牢固地掌握基础知识，更重要的是培养学生的动手能力和科学研究能力，为学生学习生命科学中的其他相关课程作好基础准备。
同时也使学生具备观察和研究细胞结构与功能的基本方法，学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。
本课程的任务是通过实验教学，使学生初步掌握暗视野、相差、荧光显微镜使用；掌握细细胞膜渗透现象的原理、观察及影响因素；掌握荧光显微镜的使用方法；叶绿体分离、制片和观察；初步掌握利用细胞化学方法显示细胞内特定化学物质分布与定位的方法；掌握动、植细胞中高尔基体和线粒体的形态结构特征及分布规律；掌握光镜下观察细胞骨架的基本形态结构操作方法；掌握活体染色法的实验原理；液泡和线粒体的活体染色方法；掌握过碘酸雪夫反应显示细胞内糖原；细胞内过氧化物酶的显示方法和原理。
二、本课程与其它课程的联系与分工本课程宜从三年级第一学期开始，以确保学生学习本课程具有所需要的生物化学、微生物生物学、有机化学等基础。
三、课程内容及教学基本要求[1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；实验一、暗视野、相差、荧光显微镜使用三种特殊光学显微镜的原理和结构特点[2]；三种特殊光镜的使用方法[3]；实验二、细胞膜的渗透性实验细胞膜渗透性原理[1]；渗透现象的观察[2]；各种设置因素对细胞膜通透性的影响[2]；实验三、叶绿体的分离和荧光观察叶绿体分离的一般原理和方法[1]；自发荧光和次生荧光产生的原理[2]；荧光显微镜的使用方法[2]；叶绿体分离、制片和观察[3]；实验四、细胞内特定化学物质的显示细胞内特定化学物质的显示的基本原理[1]；利用细胞化学方法显示细胞内特定化学物质分布与定位的方法[2]；实验五、高尔基体和线粒体的观察动、植细胞中高尔基体和线粒体的形态结构特征[2]；高尔基体和线粒体不同类型细胞中的分布规律[2]；实验六、植物细胞骨架的光学显微镜观察光镜下细胞骨架的基本形态结构[1]；光镜下观察细胞骨架的基本形态结构操作方法[2] ；光镜的使用[2]；实验七、活体染色法显示细胞器活体染色法的实验原理[2]；液泡和线粒体（植物细胞还包括质体）的活体染色方法 [3]；实验八、细胞中多糖和过氧化物酶的定位过碘酸雪夫反应(PAS)—显示细胞内糖原(参照照片和示教片) [2]；细胞内过氧化物酶的显示[2]；实验九、细胞的原代和继代培养原代细胞培养与继代细胞培养基本原理[1]；原代培养与继代培养的基本操作过程[2]；器材及液体的准备和无菌操作[3]；实验十、培养细胞的形态观察和计数培养细胞的形态观察[1]；培养细胞的计数及活细胞的鉴定[2]；实验十一、细胞同步化阻断细胞于G1/S期交界处的TdR双阻断法[2]：机械振荡法收集M期同步化细胞[2]：四、实验方式与要求1．实验前，要求学生预习实验内容，掌握实验目的及设计思路，了解实验步骤。
精编细胞生物学实验指南说明书
生命科学实验指南系列精编细胞生物学实验指南ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ〔美〕Ｊ．Ｓ．博尼费斯农 等 著章静波 方 瑾 王海杰 谭玉珍 主译陈实平 陈誉华 张钦宪 陈克铨 主校北 京图字：０１唱２００５唱３９５４号内 容 简 介 本书内容翔实全面，主要包括：细胞培养、细胞的制备与分离、亚细胞组分分离和细胞器分离、抗体、显微镜技术、细胞蛋白质的特性、电泳与免疫印迹、蛋白标记和免疫沉淀、蛋白质的磷酸化作用、蛋白质转运，以及细胞增殖、衰老和死亡、体外重建、细胞黏附和细胞外基质、细胞的能动性、细胞器运动。
全书还附有各种实用信息和数据，包括试剂与溶液的配制、细胞生物学研究中常用的药物概要和各种常用技术的介绍等。
原书名：ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ憋２００３ｂｙＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．Ｉｎｃ．Ａｌｌｒｉｇｈｔｓｒｅｓｅｒｖｅｄ．ＡｕｔｈｏｒｉｚｅｄｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｆｒｏｍｔｈｅＥｎｇｌｉｓｈｌａｎｇｕａｇｅｅｄｉ唱ｔｉｏｎｂｙＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ． 图书在版编目（ＣＩＰ）数据 精编细胞生物学实验指南／（美）Ｊ．Ｓ．博尼费斯农等著；章静波等译．—北京：科学出版社，２００７ （生命科学实验指南系列） ＩＳＢＮ９７８７唱０３唱０１７５７９唱４ Ⅰ畅精… Ⅱ畅①博…②章… Ⅲ畅细胞生物学实验指南 Ⅳ畅Ｑ２唱３３ 中国版本图书馆ＣＩＰ数据核字（２００６）第０７３９８４号责任编辑：李 悦 彭克里 刘 晶／责任校对：朱光光责任印制：钱玉芬／封面设计：王 浩科学出版社出版北京东黄城根北街１６号邮政编码：１００７１７ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｐ．ｃｏｍ双青印刷厂印刷科学出版社发行 各地新华书店经销倡２００７年１月第 一 版２００７年１月第一次印刷印数：１—３０００ 开本：７８７×１０９２ １／１６印张：５４１／４字数：１２４２０００定价：１２０畅００元（如有印装质量问题，我社负责调换枙科印枛）译校者名单译 者 章静波（中国协和医科大学基础医学院）董 敏（中国医学科学院基础医学研究所）王艳辉（中国医学科学院基础医学研究所）熊伟鹏（中国医学科学院基础医学研究所）陈实平（中国医学科学院基础医学研究所）冯 若（郑州大学医学院）刘书漫（郑州大学医学院）崔景彬（郑州大学医学院）陈鲤翔（郑州大学医学院）朱自强（中国医学科学院基础医学研究所）刘 伟（中国医学科学院基础医学研究所）王艾琳（北华大学医学院）安倍莹（北华大学医学院）曲 莉（北华大学医学院）宋 艳（北华大学医学院）赵永娟（中国医学科学院基础医学研究所）方 瑾（中国医科大学基础医学院）张惠丹（中国医科大学基础医学院）赵伟东（中国医科大学基础医学院）陈 澄（中国医科大学基础医学院）王海杰（复旦大学上海医学院）谭玉珍（复旦大学上海医学院）王莎丽（中国医学科学院基础医学研究所）审校者 陈克铨（中国协和医科大学基础医学院）陈实平（中国医学科学院基础医学研究所）章静波（中国协和医科大学基础医学院）张钦宪（郑州大学医学院）刘 伟（中国医学科学院基础医学研究所）朱自强（中国医学科学院基础医学研究所）方 瑾（中国医科大学基础医学院）陈誉华（中国医科大学基础医学院）译 者 序细胞生物学的重要性及其在生命科学中的重要地位已被科学家们所公认。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。
先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。
如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。
在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。
注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。
四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。
2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。
3．观察细胞中DNA的分布。
（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。
DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。
并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
细胞生物学实验教学指导书
细胞生物学实验教学指导书有丝分裂实验一、实验目的学习植物根尖压片方法的基本技术。
熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化，并学会染色体简易永久片的制片技术。
二、实验原理有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。
在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。
各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。
洋葱体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。
在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。
三、实验材料洋葱(Aillum cepa)根尖蚕豆(Vicia faba)根尖四、实验器具和药品试剂显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、切片架、切片盒、凹面玻片、青霉素瓶、大培养皿、纱布、吸水纸、铅笔、吸管。
卡诺氏固定液(甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份)、改良苯酚品红染色液(见附录:实验试剂的配制)、0.002M8-羟基喹啉水溶液、0.05—0.2%秋水仙素溶液、对二氯苯饱和水溶液、1N HCl、95%乙醇、正丁醇、加拿大树胶。
五、实验方法和步骤(一)材料准备选取蚕豆(或小麦、玉米等)种子放在烧杯中，放清水浸泡过夜，使种子吸水胀大后倒出，再用清水洗几次，用多层纱布包好种子，放进20,25?培养箱内培养。
当根尖长1,3cm 时，即可以进行预处理。
(二)预处理为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应用理化因素进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。
一般是在分裂高峰前处理1.5小时以上。
处理的方法如下: 1(秋水仙素水溶液常用浓度为0.05,0.2%，室温下处理2,4小时。
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实验一普通光学显微镜的构造和使用一、目的要求1了解显微镜的基本构造和使用方法2 掌握油镜的原理和使用方法二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理1．显微镜的基本构造光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。
机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。
2．显微镜的放大倍数和分辨率放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
三、器材1．永久切片2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。
3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。
四、操作步骤1．观察前的准备（1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。
（2）调节光源2．显微镜观察（1）低倍镜观察（2）高倍镜观察（3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。
3．显微镜用毕后的处理观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。
五、思考题1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？实验二胞间连丝的观察一、实验目的观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识．二、实验原理植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。
相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。
用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。
三、实验材料红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片四、实验步骤1.剪取一小块红辣椒．用小刀小心刮除果肉．2.将上述刮除果肉后极薄的表皮放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片，即可往显微镜下观察。
镜检时光线宜稍暗。
五、实验报告绘图：胞间连丝图实验三密度梯度提取叶绿体一、实验目的：了解密度梯度提取叶绿体的方法。
二、实验原理：在不同的密度梯度条件下离心，叶绿体和沉降系数比它小的物质会停留在不同梯度的交界处，而其它细胞组分怎会沉淀咋离心管的底部。
三、实验试剂：15%蔗糖溶液；1000ml50%蔗糖溶液；1000ml匀浆介质；1000ml四、实验步骤：1.选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称5g放于研钵中，加入10ml匀浆介质，迅速研磨。
2.匀浆液用2层纱布过滤于50ml烧杯中。
3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。
弃去沉淀。
4.取新的离心管分别加入15%和50%蔗糖溶液各1.5ml形成梯度，在加入2ml的上清液5.在5000r/min下离心20min。
弃去上清，沉淀即为叶绿体。
6.取一滴叶绿体悬液滴于载片上，加盖片观察：五、作业1.叶绿体是否分离纯净？分析原因？2.整个实验要在低温下迅速完成是何道理？实验四PEG诱导动物细胞融合一、实验目的了解细胞融合的基本原理,并掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。
二、实验原理PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通成为可能,从而造成细胞之间发生融合.。
三、实验试剂生理盐水；GKN 液；Alsver 液；50%聚乙二醇四、实验步骤采取鸡血↓加入Alsver 液取混合液1ml↓加入4ml生理盐水混合液↓1200r/min，离心三次，5min,5min,10min取血细胞沉淀↓加入适量GKN 液稀释取适量稀释液滴于载玻片↓滴加PEG（稀释液的1/2）静置3min镜检五作业图绘所观察到的细胞融合。
实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮兰R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验试剂：1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液；四、实验步骤：1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min；4、3%戊二醛固定30min；5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；6、0.2%考马斯亮兰R250染色20min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
五、实验作业：1、绘制你所观察到的植物细胞骨架图象；2、戊二醛、考马斯亮兰R250、TritonX-100是什么？在本实验中各起什么作用？实验六 X染色质标本的制备和观察一、目的1.通过实验明确X染色质的形态、数量、分布特点。
2.通过实验掌握X染色质标本制作方法。
3.通过实验认识X染色质与X染色体之间的数量关系，学会核性别的判断方法。
二、材料1.器械：显微镜、盖玻片、载玻片、消毒牙签、染色缸、试剂瓶-染色和固定、天平、量筒、恒温水浴箱、白绸2.试剂乙醇、龙胆紫、硫瑾、巴比妥钠、HCL、冰醋酸、醋酸钠、蒸馏水三、方法和步骤1.人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本制备涂片：簌口后用清洁的消毒牙签，从颊部内侧轻轻刮取少许口腔黏膜上皮细胞，均匀涂布于洁净的载玻片上。
固定：在涂片未干燥时用95%酒精固定15分钟✂蒸馏水冲洗。
染色：龙胆紫染色法：1-2分钟，用水冲洗，油镜观察。
硫瑾染色法：5N Hcl（220C）中10分钟✂蒸馏水冲洗✂染色30分钟✂用水冲洗✂油镜观察。
2.人口腔粘膜上皮细胞X染色质标本观察油镜观察✂50个可数细胞✂X染色质出现率正常值：男性，低于1%；女性，高于10%。
四、注意事项1.刮取口腔粘膜上皮细胞时不宜用力过大，涂片时尽量使其均匀，最好能使细胞成单层分散平铺。
2.Hcl水解掌握好时间和温度。
3.染色时间需掌握好，必要时可分别不同时间染色。
4.计数细胞时，细胞核必须完整无缺，无皱褶，染色均匀。
五、染液配制方法(学生不做)1.龙胆紫染液配制法：冰醋酸30ml、龙胆紫0.75g、蒸馏水70ml。
先加温使龙胆紫溶于冰醋酸中，晾凉后再加蒸馏水。
2.硫瑾原液配制法：硫瑾4g、50%酒精100ml。
配制成100ml硫瑾液。
在与缓冲液混合前过滤。
3.缓冲液配制：醋酸钠1.94g、巴比妥钠2.94g、加蒸馏水至100ml 冰箱保存。
4.硫瑾工作液配制法：按下列顺序混合，饱和硫瑾100ml、0.1NHCl70ml、缓冲液60ml。
调至PH5.7冰箱保存。
六、实验报告1.绘出细胞X染色质图，表明细胞膜、细胞质、细胞核、X染色质四部分。
2.写出男女X染色质正常值。
实验七光学显微镜下的细胞和细胞器及其显微测量一、目的与要求1、判断和识别光学显微镜下各种细胞器的形态，大小和数目；2掌握普通光学显微镜及测微尺的使用方法。
二、实验原理细胞器往往由特殊物质组成，因而可通过对特异物质的区别染色把各种结构区分开束，每种细胞器都有特殊的形态、大小、分布位置及数目，这也是我们判断。
识别细咆器的依据。
而每种细胞器在不同细胞、不同发育时期和不同生理状态下的形态大小会有所不同。
所以细胞器的观察可用来判断细胞的生理状和发育情况。
细胞的大小和形态依细胞种类不同各异，因此，测量细胞体积首先要用测微尺测出细胞的长半径和短半径。
常用的测微尺有目镜测微尺和物镜测微尺两种。
目镜测微尺为一块圆形的薄玻璃片，直径20～21mm，正好能放入目镜的镜筒内，其上面刻有不同形式的标尺。
标尺有直线式和网格式两种，直线式又分为“十”字形和“一”字形两种。
直线式测微尺总长10mm，分为10大格，其上有数字指示，每一大格又分10小格，共100小格。
网格式测微尺常用来测量面积或计数。
物镜测微尺是一种特制的载玻片，其中央有一个圆圈，圈内具有一个有刻度的标尺，为直线式标尺，全长1mm，分为10大格，每大格又分10小格，共100小格，每小格长度为0.01mm。
由于目镜测微尺刻度的长度随物镜放大倍数不同而有改变，所以用目镜测微尺测量细胞前，首先要测定目镜测微尺的长度，即使用物镜测微尺来确定目镜测微尺刻度的长度，然后再以目镜测微尺上的刻度作为测量细胞时的度量单位。
三、材料和用具显微镜、载玻片、盖玻片、干消毒棉球、试管、滴管、目镜测微尺、物镜测微尺、75％乙醇、红细胞稀释液、苔藓、洋葱根尖切片。
四、操作与观察：1、用目镜测微尺分别在高倍镜下和油镜下测量镜台测微尺，从而算出称所用显微镜中目镜测微尺每格所代表的实际长度。
2、用高倍镜及油镜检测各种切片，并且用目镜测微尺测量细胞和细胞核的长、短径的长度。
3．选取细胞膜和核膜界限清晰的切片或涂片测量。
测量时可旋转目镜（测微尺)及移动载玻片，置被测细胞于测微尺轴线上。
4．根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。
5将苔藓洗净撕取一小块置于滴有清水的载玻片上，盖上盖玻片，观察细胞形态结构，并测量细胞及细胞器的大小。
为减少误差，同一标本需测5个细胞的数据，取其平均值计算体积。
五、作业1 你所测量的各种血细胞的大小各是多少？2 绘制细胞显微结构图，把你所见到的各种细胞器绘制在一个细胞内。
注意细胞器外形特点、大小、分布位置、数目。
实验八细胞膜的渗透性一、实验目的了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。
二、实验原理当红细胞置于不同等渗溶液中时，由于对各种溶质的通透性不同，因此有的溶质分子可透入，有的溶质分子则不能透入，能透人的溶质分子的速度也不同。
当溶质分子进入红细胞使细胞内溶质浓度增加时，导致水的摄人。
红细胞膨胀到一定程度时，细胞膜破裂，血红素溢出即红细胞发生溶血.由于溶质透人速度不同，溶血时间也不同.三、实验材料材料：鸡血试剂：0.17 mol／L氯化钠，0.17 mol／L 氯化铵，0.17 mol／L硝酸钠，0.12 mol／L硫酸钠，0.10 mol／L草酸钠，0.10mol／L醋酸钠， 0.32 mol／L葡萄糖，0.32 mol／L甘油，0.32 mol／L乙醇，0.32mol／L丙醇。
仪器：显微镜、、载玻片、盖玻片、吸管、小烧杯、试管、秒表。