细胞生物学实验指导书09年

实验一普通光学显微镜的构造和使用

一、目的要求

1了解显微镜的基本构造和使用方法

2 掌握油镜的原理和使用方法

二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理

1．显微镜的基本构造

光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。

机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。

2．显微镜的放大倍数和分辨率

放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数

显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理

当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。

三、器材

1．永久切片

2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。

3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。

四、操作步骤

1．观察前的准备

（1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。

（2）调节光源

2．显微镜观察

（1）低倍镜观察

（2）高倍镜观察

（3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理

观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。

五、思考题

1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？

2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？

实验二胞间连丝的观察

一、实验目的

观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识．

二、实验原理

植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。

三、实验材料

红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片

四、实验步骤

1.剪取一小块红辣椒．用小刀小心刮除果肉．

2.将上述刮除果肉后极薄的表皮放在载玻片上，滴一滴水，盖上盖玻片，即可往显微镜下观察。镜检时光线宜稍暗。

五、实验报告

绘图：胞间连丝图

实验三密度梯度提取叶绿体

一、实验目的：了解密度梯度提取叶绿体的方法。

二、实验原理：在不同的密度梯度条件下离心，叶绿体和沉降系数比它小的物质会停留在不同梯度的交界处，而其它细胞组分怎会沉淀咋离心管的底部。

三、实验试剂：15%蔗糖溶液；1000ml

50%蔗糖溶液；1000ml

匀浆介质；1000ml

四、实验步骤：

1.选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称5g放于研钵中，加入10ml匀浆介质，迅速研磨。

2.匀浆液用2层纱布过滤于50ml烧杯中。

3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。弃去沉淀。

4.取新的离心管分别加入15%和50%蔗糖溶液各1.5ml形成梯度，在加入2ml的上清液

5.在5000r/min下离心20min。弃去上清，沉淀即为叶绿体。

6.取一滴叶绿体悬液滴于载片上，加盖片观察：

五、作业

1.叶绿体是否分离纯净？分析原因？

2.整个实验要在低温下迅速完成是何道理？

实验四PEG诱导动物细胞融合

一、实验目的

了解细胞融合的基本原理,并掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。二、实验原理

PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通成为可能,从而造成细胞之间发生融合.。

三、实验试剂

生理盐水；GKN 液；Alsver 液；50%聚乙二醇

四、实验步骤

采取鸡血

↓加入Alsver 液

取混合液1ml

↓加入4ml生理盐水

混合液

↓1200r/min，离心三次，5min,5min,10min

取血细胞沉淀

↓加入适量GKN 液稀释

取适量稀释液滴于载玻片

↓滴加PEG（稀释液的1/2）静置3min

镜检

五作业

图绘所观察到的细胞融合。

实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察

一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。

二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白

质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮兰R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。

三、实验试剂：

1、M-缓冲液；

2、pH6.8磷酸缓冲液；

3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；

4、0.2%考马斯亮兰R250；

5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液；

四、实验步骤：

1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞（约1cm2大小若干片）置于装有

pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉；

2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理20min；

3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次8min；

4、3%戊二醛固定30min；

5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次8min；

6、0.2%考马斯亮兰R250染色20min；

7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺子载玻片上，加盖

玻片，于显微镜下观察。

五、实验作业：

1、绘制你所观察到的植物细胞骨架图象；

2、戊二醛、考马斯亮兰R250、TritonX-100是什么？在本实

验中各起什么作用？

实验六 X染色质标本的制备和观察

一、目的

1.通过实验明确X染色质的形态、数量、分布特点。

2.通过实验掌握X染色质标本制作方法。

3.通过实验认识X染色质与X染色体之间的数量关系，学会核性

别的判断方法。

二、材料

1.器械：显微镜、盖玻片、载玻片、消毒牙签、染色缸、试剂瓶-染色和固定、天平、量筒、恒温水浴箱、白绸