细胞生物学实验教案大全

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细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察

细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察

细胞生物学实验教学备课教案细胞实验的操作与观察细胞生物学实验教学备课教案前言:本教案旨在为细胞生物学实验的准备工作提供指导,包括实验的操作步骤和观察要点。

实验内容涵盖细胞培养、染色和观察等方面,旨在帮助学生了解细胞结构和功能,培养他们的实验技能和科学思维。

实验目的:通过本实验,使学生了解细胞的基本结构和功能,培养他们的实验能力和观察分析能力。

实验材料和仪器:1. 细胞培养物:如细菌培养物、动物细胞培养物等。

2. 细胞培养器具:如培养皿、离心管、移液器等。

3. 染色剂:如荧光染料、溴酶、乙酰酚染料等。

4. 显微镜和载玻片。

实验步骤:步骤一:准备工作1. 检查实验材料和仪器是否齐全。

2. 清洗工作台和实验器具,保持清洁。

步骤二:细胞培养1. 取出细胞培养物,根据需要进行适当的稀释。

2. 将细胞培养物分装到培养皿中,每个培养皿的细胞密度控制在适当水平。

3. 采用无菌操作,将培养皿放入恒温培养箱中,设定适当的温度和培养时间。

步骤三:细胞染色1. 取出培养皿中的细胞,使用适当的方法将细胞附着在载玻片上。

2. 准备染色溶液,根据实验需要选择合适的染色剂。

3. 将染色溶液滴在载玻片上,与细胞接触一定时间。

4. 用适当的方法将载玻片洗净,准备观察。

步骤四:观察和记录1. 将载玻片放置在显微镜上,调整镜头和光源,观察细胞的形态和染色效果。

2. 用目镜和物镜逐步调整焦距,获得清晰的细胞图像。

3. 用规定的倍率进行观察,并记录细胞的结构特征和染色的结果。

步骤五:数据分析与讨论1. 根据观察结果,总结细胞结构和功能的特点,并进行分析讨论。

2. 分析不同染色方式对细胞观察结果的影响。

3. 理解实验中可能出现的误差,并提出改进的方法。

步骤六:实验总结1. 总结实验的目的、步骤和观察结果,梳理实验过程中的关键点和问题。

2. 分析实验结果的意义和应用价值,并展望进一步的研究方向。

3. 总结实验中的收获和不足之处,提出改进的建议。

细胞生物学实验教案

细胞生物学实验教案

植物组织培养一、实验目的1、掌握植物细胞无菌培养技术。

2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。

二、实验原理植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。

它是借用无菌操作方法,培养植物的离体器官,组织或细胞,使其在人工合成的培养基上,通过细胞的分裂、增殖、分化、发育,最终长成完整的再生植株。

植物组织培养技术的研究,不仅具有重大的理论意义,而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。

组织分化与形态建成问题,快速繁殖与去除病毒,花药培养与单倍体育种,幼胚培养与试管受精,抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异,悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用,都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法,深刻理解植物细胞的全能性。

三、实验用品1、材料半夏无菌苗。

2、仪器卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。

3、用具镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。

4、器皿试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9~11cm)。

1、药品与试剂1).药品(见下表)2).70%酒精四、实验方法1、培养基的配制配制培养基前先要配制母液。

母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。

(各类成分浓度、用量详见下表)。

表1 MS培养基母液配制(单位:mg)类别成分规定量称取量母液体积(ml) 扩大倍数配1升培养基的吸取量(ml)大量KNO3 1900 190001000 10 100 NH4NO3 1650 16500元素MgSO4·7H2O 370 3700 KH2PO4170 1700 CaCl2·2H2O 440 4400微量元素MgSO4·4H2O 22.30 22301000 100 10 ZnSO4·7H2O 8.6 860H3BO3 6.2 620KI 0.83 83Na2MoO4·2H2O 0.25 25CuSO4·5H2O 0.025 2.5CoCl2·6H2O 0.025 2.5铁盐Na2-EDTA 37.25 37251000 100 10 FeSO4·7H2O 27.85 2785有机物质甘氨酸 2.0 100500 100 10 盐酸硫胺素0.4 20盐酸吡哆素0.5 25烟酸0.5 25肌醇100 50001).大量元素母液(10倍液)分别称取10倍用量的各种大量无机盐,依次溶解于大约800ml热的(60~80℃)蒸馏水中。

细胞生物教案设计(精选一篇)

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细胞生物教案设计(精选一篇)(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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细胞生物学教案(完整版)

细胞生物学教案(完整版)

细胞生物学教案〔来自〕目录前言第一章绪论第二章细胞结构概观第三章研究方法第四章细胞膜第五章物质运输与信号传递第六章基质与内膜第七章线粒体与叶绿体第八章核与染色体第九章核糖体第十章细胞骨架第十一章细胞增殖及调控第十二章细胞分化第十三章细胞衰老与凋亡前言依照高等师范院校生物学教学方案,我们开设细胞生物学。

一、学科本身的重要性要最终说明生命现象,必须在细胞水平上。

细胞是生命有机体最根本的结构和功能单位,生命寓于细胞之中,只有把各种生命活动同细胞结构相联系,才能在细胞水平上说明各种生命现象。

世界著名生物学家Wilson〔德国人〕曾说过:“一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找〞。

二、学科开展特点细胞生物学涉及知识面广、内容浩繁且更新迅速。

它同生物化学、遗传学形成生命科学的鼎立三足,既是当代生命科学开展的前沿,又是生命科学赖以开展的根底。

三、欲到达的目的通过系统地学习细胞生物学,丰富细胞学知识,以适应当代人类社会知识结构开展的需求,也是为考研做打算。

本课程讲授51学时,实验21学时,共72学时。

参考资料1 De.Robertis,《细胞生物学》,1965年〔第四版〕;1980年〔第七版〕《细胞和分子生物学》2 Avers,“Molecular Cell Biology〞, 1986年3 Alberts,《细胞的分子生物学》,“Molecular biology of the cell〞,1989年4 Darnell,《分子细胞生物学》,1986年〔第一版〕;1990年〔第二版〕“Molecular Cell Biology〞5郑国錩,细胞生物学,1980年,高教出版社;1992年,再版6 郝水,细胞生物学教程,1983年,高教出版社7 翟中和,细胞生物学根底,1987年,X大学出版社8 韩贻仁,分子细胞生物学,1988年,高等教育出版社;202X年由科学出版社再版9 汪堃仁等,细胞生物学,1990年,X师范大学出版社10 翟中和,细胞生物学,1995年,高等教育出版社,202X年再版11 郑国錩、翟中和主编《细胞生物学进展》,12翟中和主编《细胞生物学动态》,从1997年起〔1—3卷〕,北师大出版社13徐承水等,《分子细胞生物学手册》1992,中国农业大学出版社14徐承水等,《现代细胞生物学技术》1995,中国海洋大学出版社15徐承水,《细胞超微结构研究》202X,中国国际教育出版社学术期刊、杂志国外:Cell、Science、Nature、J.Cell Biol.、J.Mol. Biol.国内:中国科学、科学通报、实验生物学报、细胞生物学杂志等第一章绪论教学目的 1 掌握本学科的研究对象及内容;2 了解本学科的来龙去脉〔开展史及开展前景〕;3 掌握与本学科有关的重大事件和名词。

大学课程《细胞生物学》实验教案-几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察

大学课程《细胞生物学》实验教案-几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察

大学课程《细胞生物学》实验教案几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察一、实验目的学会使用相差显微镜,掌握暗视野技术,以及荧光显微镜等技术二、实验原理在活细胞中,原生质流动是细胞活力强弱的重要标志,它的产生与细胞中微丝的作用是密不可分的。

微丝的纤维较细,直径为5-6nm,主要成分是肌动蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白,并像肌肉一样有收缩功能。

微管是由一种叫做微管蛋白的蛋白质组成的,位于原生质(静止的)外质,紧靠在质膜之下,离运动的内质至少有1µm的距离,与胞质川流运动无关,主要起保持细胞形状、承担细胞运动和细胞内物质运输的作用。

另外,用秋水仙素与细胞松弛素B处理也可产生不同的结果。

经秋水仙素处理后,细胞的纤维被扰乱,但不影响川流运动,这是与秋水仙素影响边缘微管作用有关。

相反,用细胞松弛素B处理,就可抑制细胞的川流运动,很明显,微丝担负着川流运动的功能。

胞质环流需要消耗能量,也受温度、渗透压以及离子浓度的影响。

三、实验材料新鲜洋葱鳞茎,刚毛藻等。

四、实验器材相差显微镜,普通光学显微镜,黑卡纸,载玻璃片,盖玻片,镊子,吸水纸,剪刀,滴管,擦镜纸。

五、实验药品100µg/ml秋水仙素溶液,20µg/ml细胞松弛素B(cytochalasin B),蒸馏水,香玻油,二甲苯。

六、实验步骤1.取新鲜洋葱鳞茎内表皮约1cm2 或更小,放在干净的载玻片上,加一小滴水,将盖玻片倾斜盖上,并注意不出现气泡,即制成水封片。

2.取一块黑纸,把它剪成暗视野显微镜用的遮光板,并放入普通光学显微镜的聚光器下的光阑上,制成暗视野显微镜。

(须反复调整遮光板的尺寸以得到最佳效果)。

3.把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察,可以看到在明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或颗粒,仔细观察,可以看出这些正作有向的运动(速度很慢),水封片中多加些水会促进这种运动。

4.学习相差显微镜,荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作技术。

《细胞生物学教案》

《细胞生物学教案》

《细胞生物学教案》word版一、引言1.1 课程介绍:细胞生物学是研究细胞结构、功能、发育和相互关系的科学,是生命科学的基础。

1.2 学习目标:了解细胞生物学的基本概念和研究内容,建立对细胞生物学的学习兴趣。

二、细胞的基本概念2.1 细胞的定义:细胞是生物体的基本结构和功能单位。

2.2 细胞的历史:回顾细胞的发现和细胞学说的建立。

2.3 细胞的作用:讨论细胞在生物体中的重要性和功能。

三、细胞的基本结构3.1 细胞膜:介绍细胞膜的结构和功能,包括物质的进出和信号传递。

3.2 细胞质:介绍细胞质中的细胞器和它们的功能,如线粒体、内质网、高尔基体等。

3.3 细胞核:介绍细胞核的结构和功能,包括DNA的存储和转录。

四、细胞的增殖和分化4.1 细胞增殖:介绍细胞增殖的方式和周期,包括有丝分裂和无丝分裂。

4.2 细胞分化:介绍细胞分化的概念和机制,以及它在多细胞生物发育中的作用。

4.3 干细胞:讨论干细胞的概念和分类,以及它们在再生医学中的应用。

五、细胞代谢5.1 代谢概述:介绍细胞代谢的概念和作用。

5.2 能量代谢:介绍能量的来源和细胞呼吸的过程。

5.3 物质代谢:介绍细胞中各种物质的合成、分解和转化过程。

六、细胞信号传递6.1 信号分子:介绍信号分子的种类和作用方式。

6.2 受体:讨论受体的结构和功能,以及它们如何接收信号。

6.3 信号转导:详细解释信号转导途径及其在细胞内的作用。

七、细胞周期与有丝分裂7.1 细胞周期:介绍细胞周期的概念和各个阶段。

7.2 有丝分裂:详细解释有丝分裂的过程,包括前期、中期、后期和末期。

7.3 细胞周期调控:讨论细胞周期调控机制,包括周期蛋白和细胞周期依赖性激酶。

八、细胞分化与干细胞8.1 细胞分化的深入理解:探讨细胞分化的详细机制。

8.2 干细胞的类型:介绍不同类型的干细胞,包括全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

8.3 干细胞的应用:讨论干细胞在医学研究和治疗中的潜在应用。

细胞生物学教案

细胞生物学教案

细胞生物学教案【篇一:细胞生物学教案】第一章绪论第一节细胞生物学研究的内容与现状一、细胞生物学是现代生命科学的重要基础学科细胞生物学:是在显微、亚显微与分子水平等不同层次上研究细胞结构、功能及生命活动规律的科学。

细胞生物学研究的对象是细胞。

细胞分子生物学是当前细胞生物学发展的主要方向。

细胞生物学研究的主要内容是细胞的形态与结构、代谢与调控、增殖分化、遗传变异、衰老与死亡、起源与进化、兴奋与运动以及细胞的传递等。

细胞生物学不同于细胞学主要表现在:第一,深刻性。

它从细胞整体结构,超微结构和分子结构对细胞进行剖析,并把细胞生命活动同分子水平和超分子水平联系起来。

第二,综合性。

这所研究的内容广泛涉及到许多学科领域,同生理学、遗传学、生物化学、发育生物学等融合到一起。

二、细胞生物学的主要研究内容大致可分为以下几个方面:(一)细胞核、染色体以及基因表达的研究(二)生物膜与细胞器的研究(三)细胞骨架体系的研究(四)细胞增殖及其调控(五)细胞分化及其调控(六)细胞的衰老与程序死亡(七)细胞的起源进化(八)细胞工程三、当前细胞生物学研究的总体趋势与重点领域(一)当前细胞生物学研究中的三大基本问题1、细胞内的基因组是如何在时间与空间上有序表达的?2、基因表达的产物如何逐级装配成基本结构体系及各种细胞器?3、基因表达的产物如何调节细胞最重要的生命活动过程的?(二)当前细胞基本生命活动研究的若干重大课题1、染色体dna与蛋白质相互作用关系——主要是非组蛋白对基因组的作用。

2、细胞增殖、分化、凋亡(程序性死亡)的相互关系及调控3、细胞信号传导的研究4、细胞结构体系的装配第二节细胞学与细胞生物学发展简史一、细胞的发现英国学者胡克于1665年制造了第一台有科研价值的显微镜,第一次描述了植物细胞的构造,细胞的发现是在1665年。

1677—1683年,荷兰人列文胡克用自己设计好的显微镜第一次观察到活细胞。

二、细胞学说的建立及其意义建立:1838—1839年德国植物学家施莱登和动物学家施旺提出:一切植物、动物都是由细胞组成的,细胞是一切动植物的基本单位,这就是著名的“细胞学说”。

《细胞生物学》教案

《细胞生物学》教案

《细胞生物学》教案一、课程概述1.1 课程定位《细胞生物学》是生命科学领域的一门基础课程,旨在帮助学生了解细胞的结构、功能、发育和相互关系,为学生进一步学习生物学相关领域知识打下坚实基础。

1.2 课程目标通过本课程的学习,使学生掌握细胞的基本概念、结构与功能,了解细胞生物学的研究方法和发展趋势,培养学生的观察能力、思考能力和实践能力。

二、教学内容2.1 细胞的基本概念2.2 细胞的发现与发展2.3 细胞的结构与功能2.4 细胞膜的组成与功能2.5 细胞器的结构与功能三、教学方法3.1 讲授法通过系统讲解,使学生掌握细胞生物学的基本概念、原理和知识。

3.2 实验法组织学生进行实验操作,观察细胞结构与功能,培养学生的实践能力。

3.3 讨论法引导学生针对细胞生物学中的热点问题进行思考和讨论,提高学生的分析问题和解决问题的能力。

四、教学评价4.1 平时成绩包括课堂表现、作业完成情况等,占总评的30%。

4.2 实验报告4.3 期末考试闭卷考试,测试学生对细胞生物学知识的掌握程度,占总评的40%。

五、教学资源5.1 教材《细胞生物学》教材,为学生提供系统、全面的细胞生物学知识。

5.2 辅助资料包括课件、实验指导、学术论文等,丰富教学内容,提高学生的学习兴趣。

5.3 网络资源利用网络资源,了解细胞生物学领域的最新研究动态,拓宽学生的知识视野。

六、教学安排6.1 课时分配本课程共计32课时,其中理论讲授24课时,实验操作8课时。

6.2 教学计划第1-8课时:细胞的基本概念及发展史第9-16课时:细胞结构与功能第17-24课时:细胞膜、细胞器及细胞代谢第25-32课时:细胞分裂、生长、分化及调控七、教学重点与难点7.1 教学重点细胞的基本概念、结构与功能;细胞膜的组成与功能;细胞器的结构与功能;细胞代谢;细胞分裂、生长、分化及调控。

7.2 教学难点细胞膜的透析原理;细胞器的精细结构与功能;细胞代谢的调控机制;细胞分裂、生长、分化的分子机制。

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细胞生物学实验教案【经典学习资料,收藏必备】实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察【实验目的】在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构,掌握生物绘图的方法。

【实验原理】细胞在形态上是多种多样的,有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。

虽然细胞的形状各异,但是它们却有共同的基本结构特点,都由细胞膜(动物)、细胞壁(植物)、细胞质和细胞核组成。

细胞中的各种细胞器,如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等,一般经过一定固定染色处理后,大多数在光学显微镜下是可以看见的(图)。

细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。

(自拍图)(a)(b)(c)(d)图 1 细胞形态结构a. 柿胚乳细胞示胞间连丝;b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒;c. 兔的神经细胞中高尔基体;d.小鼠肝细胞线粒体【实验仪器、材料和试剂】1. 仪器:复式显微镜、擦镜纸2.材料:洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3.香柏油或石蜡油、二甲苯【方法与步骤】一、洋葱根尖切片细胞的观察先用低倍镜观察根尖的纵切面,注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同,然后再仔细观察细胞的形态结构,特别注意细胞的形状、大小,以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。

二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察先在低倍镜下找到兔神经节细胞,然后转用高倍镜观察,可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核,核的周围分布着许多深褐色的(硝酸银镀染)高尔基体,呈弯曲的线状,颗粒状,少量分散在细胞质。

三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察先用低倍镜后用高倍镜观察,可见到许多肝小叶,每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞,细胞中央有大而圆的细胞核。

这时,转用油镜观察,可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体,呈颗粒状和线状。

四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察1.取马蛔虫受精卵切片,在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵,每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜,膜内有宽大的围卵腔,各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。

找到分裂中期的细胞,在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构,这就是染色体。

在染色体两侧可见各有一个较小的,亦被染成蓝色的小粒,称中心粒。

在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。

实验一、细胞的显微测量【实验目的】掌握显微测微计的基本原理及使用方法。

【实验原理】细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。

在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计,由目镜测微尺(ocular micrometer)和镜台测微尺(stage micrometer)组成,两尺要配合使用。

目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上,里面有100等分格的刻度尺。

每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。

镜台测微尺是一块特制的载玻片,在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺,标尺全长为lmm,分为100等份的小格,每小格的长度为0.01 mm(10μm),标尺的外围有一小黑环,便于找到标尺的位置。

显微测量时,先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。

在测量细胞时,移去镜台测微尺,换上被测标本,用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。

【实验仪器、材料和试剂】(一)仪器:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针(二)材料:血涂片(三)试剂:生理盐水、瑞氏(Wright)染色液【方法与步骤】1.制片(1)人血涂片:用采血针刺取耳垂血,制成薄血涂片,晾干后瑞氏染色。

(2)蟾蜍血装片:用注射器直接取蟾蜍心脏血,用生理盐水稀释后制成细胞悬液,制成装片。

2.长度测量(1)取下目镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜内的视场光阑上,再旋上上透镜。

(2)将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清镜台测微尺的刻度。

(3)移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐。

然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,分别记录重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。

以下式计算目镜测微尺每小格表示的实际长度:台镜测微尺格数×10μm目镜测微尺每小格实际长度=--------------目镜测微尺格数(4)移去镜台测微尺,换上血涂片,用目镜测微尺测量细胞所占小格数并乘以目镜测微尺每小格代表的实际长度,即为被测细胞的实际长度3.厚度测量法测量细胞的厚度,最简便的方法是利用显微镜上的微调焦轮上的标尺对细胞厚度进行测量。

先将焦点面与被测物体的上端对齐一致,记下轮上的度数,然后旋转微调轮,使焦点面与下端对齐一致,再记下度数,两者之差,便是所测物体的厚度。

此法简单但不精确。

【注意事项】1.如果需换用高倍镜或油镜测量时,要用同样的方法重新计算高倍镜或油镜下目镜测微尺每小格的实际长度。

2.在测量时要注意将被测物体放在视野中央,因为这个位置镜像最清晰,相差最小。

3.每一种被测物体(细胞)需反复测量数个或数十个,采用其平均值。

【作业】1.测量十个红细胞长的长度,求其平均值。

2.根据测量结果写实验报告。

附1:根据长度测量结果计算细胞、细胞核的体积及核质比椭圆形ν=4/3πab2 (a、b分别为长短半径)圆球形ν=4/3πR3 (R为半径)核质比NP=Vn /Vc一Vn(Vn为核体积,Vc为细胞体积)附2:镜台移动尺的使用一些较精细的显微镜的镜台上装有标本推进器,它有纵横可移动的游标尺,既可测量标本的长度,又可确定标本的位置。

游标尺由主标尺和副标尺组成,主标尺刻有lmm的刻度,副标尺刻有9/10刻度,读数精度为0.1mm,读数时先看副标尺的位置,再看副标尺和主标尺的重合点即可读出。

实验二、细胞中多糖和过氧化物酶的定位【实验目的】掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。

【实验原理】高碘酸—雪夫试剂反应,简称PAS反应。

主要是利用高碘酸作为强氧化剂,这种强氧化剂能打开C-C键,使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛,氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。

颜色的深浅与糖类的多少有关。

细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物,根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。

【实验仪器、材料和试剂】(一)仪器显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等(二)材料马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎(三)试剂1.高碘酸溶液:高碘酸(HIO4·2H2O)0.4g,95%乙醇35ml,M/5醋酸钠溶液(2.72g醋酸钠溶于100ml H2O)5ml,蒸馏水10ml2.Schiff试剂(配法见Feulgen反应)3.亚硫酸水溶液(配法见Feulgen反应)4.70%乙醇5.联苯胺溶液:在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止,临用前加入20%体积的H2O2 ,每2ml 加一滴。

6.0.1%钼酸铵溶液:称取0.1g钼酸铵溶于100ml 0.85%盐水【方法与步骤】(一)细胞中多糖的测定:高碘酸—雪夫(PAS)反应1.把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。

2.浸于高碘酸溶液5~15min 。

3.移入70%乙醇中浸片刻。

4.Schiff试剂染色15min 。

5.亚硫酸溶液洗三次,每次1 min。

6.蒸馏水洗片刻。

7.装片镜检。

(二)细胞中过氧化物酶的测定:联苯胺反应1.把洋葱根尖徒手切成20~40μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。

2.浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min(钼酸铵的作用是催化剂)。

3.浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。

4.在0.85%盐水溶液中洗1min 。

5.将薄片置于载玻片上展开,盖上盖玻片,显微镜检查。

【作业】1.简述PAS反应及联苯胺反应的原理。

2.绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。

实验三、细胞融合(一)原理细胞融合(cell fusion)是在自然条件下或利用人工法(生物的、物理的、化学的),使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程,又称细胞杂交(cell hybridization)。

人工诱导细胞融合始于20世纪50年代,并迅速成为一门新兴技术。

不仅同种细胞可以融合,种间远缘细胞也能融合,甚至于动植细胞之间也能融合。

因此,细胞融合技术目前广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域。

诱导细胞融合的方法有三种:生物方法(病毒)、化学方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(电激或激光)。

某些病毒如:仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介导病毒同宿主细胞融合,也可介导细胞与细胞的融合。

紫外线灭活此类病毒后可用于诱导细胞融合。

化学和物理方法可引起细胞膜上膜脂分子结构的改变和重排。

去掉作用因素之后,质膜恢复原有的有序结构,在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)法是目前最常用的细胞融合方法。

此法的优点操作简单,融合效果稳定。

PEG诱导融合的机制尚不完全清楚。

一般认为PEG(化学结构为HOH 2C (CH20CH2)nCH2OH)含有非常丰富的羟基,亲水性非常好,能引起细胞膜上脂质分子的酯键与极性基团的重排,使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组,从而使细胞发生融合。

相对分子质量在200-6000的PEG 均可用作细胞融合剂。

(二)材料1.仪器:光学显微镜,离心机,恒温水浴锅。

2.材料新鲜鸡红细胞,无菌注射器,6号针头,刻度离心管,试管,载玻片,盖玻片。

3.试剂PEG4000,Hanks液,甲基蓝染液,75%乙醇D-hanks液是一种平衡盐溶液主要用于洗涤细胞和组织的也是合成培养基的基础液。

如果含有钙镁离子的话当用消化液消化细胞时钙镁离子会破坏消化液的活力影响消化作用(三)方法1. 取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成5-10%的悬液2. 称取0.5克PEG4000(MW=4,000)放入试管内,在酒精灯上融化之,迅速加入0.5ml 37℃预热的Hanks液,混匀制成50%的PEG溶液.放入37℃水浴中待用。

3. 取上述5-10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中,再加入5ml Hanks液混匀,室温1,000rpm离心5分钟,小心弃去上清液,用指弹法将细胞团块弹散。

4. 取上述50%PEG溶液0.5ml,在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液,边加边轻轻摇动混匀。

待PEG全部加入后静置1分钟左右。

此全部过程都要求在37℃水浴内进行。

5. 缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用,在37℃水浴内静置5分钟。

6. 离心弃上清后,取一滴融合后的细胞悬液滴片,加一滴甲基蓝染液染色,加盖玻片后镜检。

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