蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的生长影响及安全性实验研究
人牙周膜成纤维细胞培养与鉴定
人牙周膜成纤维细胞培养与鉴定沈慧娟;李琳娟;康娜【摘要】目的:培养人牙周膜成纤维细胞,并对其来源进行鉴定,为后期实验提供细胞来源.方法:选择20颗有正畸需求需拔牙矫治的年轻患者所拔的第一或第二前磨牙,采用组织块法分离并培养牙周膜成纤维细胞,通过形态学及免疫细胞化学SP法(对细胞进行波丝蛋白、角蛋白染色)进行鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果:细胞培养成功,表现为漩涡形或放射形生长,形态为长梭形.波丝蛋白染色呈阳性,抗角蛋白阴性,表明细胞来源中胚层.结论:成功从人牙周膜组织中分离培养出入牙周膜成纤维细胞.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】4页(P872-875)【关键词】人牙周膜成纤维细胞;细胞培养;免疫化学【作者】沈慧娟;李琳娟;康娜【作者单位】广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021;广西医科大学附属口腔医院正畸科南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-33牙周膜成纤维细胞是牙周膜组织中数量最多、功能上最重要的细胞。
它能不断合成与降解胶原，维持牙周膜中胶原的更新与重建，以及通过分泌多种细胞活性因子刺激成骨细胞和破骨细胞完成牙周组织的修复与再生[1]。
利用人牙周膜成纤维细胞建立体外细胞系已成为国内外学者研究正畸牙移动的重要手段。
本实验采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞并进行鉴定，为下一步的正畸研究提供细胞来源，奠定了实验基础。
1.1 实验对象：人牙周膜均取自于2015年6月广西医科大学附属口腔医院口腔外科门诊就诊的11～16岁青少年因正畸需要而拔除的20颗健康前磨牙，均经自愿者知情同意，经过伦理委员会同意。
所选牙齿均为健康的第一或第二前磨牙，无龋坏、根尖周炎、牙周炎等，且该前磨牙无正畸治疗史。
1.2 试验材料及主要仪器设备：维森特培养基(DMEM)培养液；维森特胎牛血清(澳洲血源)；维森特胰蛋白酶(0.25%+0.1%EDTA)；维森特磷酸盐缓冲液(PBS)；四甲基偶氨唑盐(MTT，诺维赞)；抗波丝蛋白抗体、抗角蛋白抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)、多聚甲醛、sp试剂盒、辣根素、DAB溶液(二氨基联苯胺)、苏木精；25 mL塑料培养瓶、6孔板，96孔板。
蜂胶对口腔微生物的抗菌作用
蜂胶对口腔微生物的抗菌作用孙婷;吴小波;曾志将【期刊名称】《养蜂科技》【年(卷),期】2006(000)006【摘要】大量的研究发现,变形链球菌的数量与牙菌斑的产生有着密切的联系。
从长期的口腔微生态调查中发现大量的变形链球菌和少量的放线菌等。
研究表明牙菌斑的形成是口腔微生物的侵蚀及积累,和牙齿表面变形链球菌葡萄糖转化共同作用的结果。
很明显的看出微生物在牙菌斑的形成过程中扮演着必不可少的作用。
蜂胶乙醇提取物能够同时抑制细菌生长和葡萄糖转化作用。
本试验的目的在于更深入的研究从巴西不同地区采集的蜂胶的抗菌和抑制葡萄糖转运作用。
1材料和方法:1.1微生物:变形链球菌1600;血链球菌ATCC10556;唾液分离链球菌;放线菌ATCC12104等。
1.2蜂胶样品:从巴西各地收集意蜂蜂胶,蜂胶预先被真空干燥,并提取蜂胶。
蜂胶样品被碾磨成粉。
在一个试管中加入2g蜂胶粉,再加入25ml,80%的乙醇,70℃震30min,然后离心取上清液,所得上清液即为蜂胶乙醇提取物(EEP)。
1.3提取葡糖糖转运产物:将不同的微生物分别装入100ml的锥形瓶中,加入20ml30%的大豆胰蛋白提取物,150rpm37℃下培养48h,厌氧菌则放入厌氧培养皿中培养。
48h后将培养物离心取上清即为葡萄糖转运粗提物。
1.4测定葡糖糖转运的活性:取0.9ml0.25M...【总页数】1页(P37)【作者】孙婷;吴小波;曾志将【作者单位】江西农业大学动科院,330045;江西农业大学动科院,330045;江西农业大学动科院,330045【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.蜂胶抗菌作用的实验室研究 [J], 申慧亭;靳月琴2.蜂胶的抗菌作用及其在医药上的应用 [J], 胡福良3.蜂胶抗菌作用的研究 [J], 梁郁强;王俊4.巴西绿蜂胶和红蜂胶对牙科病作用的介绍 [J], 柯俐5.中链脂肪酸的抗菌作用：辛酸对悉生卤虫无节幼体接种虾致病菌哈维氏弧菌和副溶血性弧菌的抗菌作用 [J], G. Immanuel M. Sivagnanavelmurugan A. Palavesam因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
牙周膜成纤维细胞培养
我的细胞培养计划1、培养目的：人牙周膜成纤维细胞( human periodontal ligamentfibroblasts, PDLFs) 是牙周组织修复与重建的前体细胞之一., 在牙周病病理变化和转归中起着重要作用。
因此, 希望通过较简单的实验方法能较容易地培养出生长状态良好的牙周膜成纤维细胞,为研究牙周膜的生物学特点及各种与牙周膜成纤维细胞相关的实验研究提供较好的体外模型。
2、实验室条件：超净工作台、培养箱、倒置显微镜、冰箱、冷冻保存装置、细胞计数板和电子细胞计数仪、离心机、PH计、天平、水纯化装置、高压蒸汽消毒装置、电热干燥箱、过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器、特殊用具、杂用品。
DMEM 培养基, 胶原酶, 胰蛋白酶, 小牛血清, ABC 免疫组化试剂盒。
3、培养方法：1）、培养基: DMEM 培养基, 内含10%小牛血清、青霉素100u/ ml、链霉素100Lg / ml。
2）具体操作方法及步骤（按实际操作分步列出）；选择12 岁~ 25 岁因正畸或阻生拔牙患者, X 线显示无根尖病变, 无骨质吸收, 牙龈正常, 主诉该牙无既往病史。
在拔牙过程中不增隙也不使用牙挺, 拔除后, 用消毒刮匙刮取拔牙创骨壁中部的牙周膜, 将刮取的牙周膜立即放入盛有培养基的无菌瓶中, 送往实验室处理。
3）、组织块的冲洗: 在洁净工作台上用含双抗( 青霉素100u/ ml, 链霉素100Lg / ml ) 的HANK. S 液反复冲洗3 次, 尽量去除组织块上附着的血污等其它杂质和细菌。
4）、PBS 冲洗2次后, 加入0. 125% 胰蛋白酶及0. 1%胶原酶5ml, 37℃振荡下消化30～60min。
镜下观察, 组织松散、大部分细胞游离时, 用吸管吹打使其彻底分散。
将消化的细胞悬液经190目筛过滤, 收集并离心( 1000 r / min, 10 min) , 弃去上清液。
5）、加入含10%小牛血清的DMEM 培养基, 充分吹打细胞悬液, 血细胞计数板计数,将细胞按4 ×105 / 瓶接种于25cm2 培养瓶, 加入4 mlDMEM 培养基, 内含10%小牛血清、青霉素100u/ ml、链霉素100Lg / ml, 于二氧化碳孵箱内培养。
蜂胶临床药理作用
临床试验
在临床试验中，研究人员通过严 谨的科学实验方法，对蜂胶的药 理作用和效果进行验证。这些试 验有助于确定蜂胶在临床治疗中
的实际效果。
适应症研究
针对不同的疾病，研究人员会探 索蜂胶的适应症。通过不断的研 究，越来越多的适应症被发现，
拓宽了蜂胶的应用范围。
蜂胶的未来发展
01
深入研究
随着科技的发展，蜂胶的深入研究将进一步揭示其作用机制和更多的药
蜂胶临床药理作 用
汇报人： 2023-11-17
目录
• 蜂胶的简介 • 蜂胶的药理作用 • 蜂胶的临床应用 • 蜂胶的不良反应与注意事项 • 蜂胶的研发与未来发展 • 参考文献
01
CATALOGUE
蜂胶的简介
蜂胶的定义
01
蜂胶是一种由蜜蜂采集植物树脂 ，经过蜜蜂的颚腺、蜡腺和蜂蜡 混合加工而成的天然生物活性物 质。
促进愈合
蜂胶能够促进口腔黏膜的 愈合，缩短口腔溃疡的愈 合时间。
胃溃疡
辅助治疗胃溃疡
蜂胶具有抗炎、保护胃黏 膜的作用，可以辅助治疗 胃溃疡。
缓解症状
蜂胶可以缓解胃溃疡引起 的疼痛、反酸、嗳气等症 状，改善患者的生活质量 。
预防复发
蜂胶能够预防胃溃疡的复 发，降低疾病的复发率。
糖尿病足
辅助治疗糖尿病足
蜂胶中的某些成分可能会刺激 肠胃，导致恶心、呕吐、腹泻
等症状。
肝损伤
长期大量使用蜂胶可能导致肝 脏负担加重，引起肝损伤。
免疫抑制
蜂胶中的某些成分可能会影响 免疫系统的正常功能，导致免
疫力下降。
蜂胶的注意事项
孕妇慎用
蜂胶中的某些成分可能对胎儿 发育产生不良影响，因此孕妇
蜂胶的临床应用
蜂胶的临床应用蜂胶，又名蜂蜜胶、蜂胶蜜，是蜜蜂采集花粉、植物汁液等天然物质后，在体内经酶类作用后经常温蜂蜜储存而生成的一种胶状物质。
蜂胶的成分复杂，包含多种氨基酸、糖类、脂肪类、维生素、矿物质等营养成分，还有一定的生物活性物质，因此在临床上具有很广泛的应用价值。
一、蜂胶在口腔领域的应用蜂胶具有很好的抗菌和抗炎作用，可以有效预防和治疗口腔疾病。
经常用蜂胶漱口可以杀灭口腔中的细菌和病毒，清洁口腔，减少龋齿和口腔异味的发生。
另外，蜂胶还对口腔溃疡、牙龈出血等疾病有缓解作用，可以促进口腔组织的修复和愈合。
二、蜂胶在皮肤医学中的应用蜂胶具有抗菌消炎、收敛止血、促进组织愈合等作用，在皮肤损伤、炎症和过敏性皮肤病等方面有很好的疗效。
将蜂胶直接涂抹在受伤部位，可以加速伤口愈合，减少感染和炎症的发生。
此外，蜂胶还对湿疹、疱疹、痱子等皮肤疾病具有一定的治疗效果。
三、蜂胶在呼吸系统疾病中的应用蜂胶还被广泛用于呼吸系统疾病的预防和治疗。
蜂胶具有抗菌和抗炎作用，对咽炎、咳嗽、支气管炎等呼吸道感染有很好的疗效。
可以用蜂胶制成的口服液或口服胶囊，口服后可以在呼吸道黏膜上形成一层保护膜，减少病原体对呼吸道的刺激和侵袭，达到治疗和预防呼吸道感染的目的。
四、蜂胶在免疫调节中的应用蜂胶还有调节免疫功能的作用，可以增强机体的抗病能力。
长期服用蜂胶可以调节机体的免疫系统，提高白细胞的活性，增强免疫细胞的杀菌能力，使身体更加健康。
对于老人、儿童、体弱者或抗疲劳、抗辐射等特殊人群，服用蜂胶有很好的辅助保健作用。
在使用蜂胶的过程中，要注意蜂胶的来源和质量，选择正规生产厂家的产品，并根据具体情况采用合适的剂量和方式进行应用。
此外，由于蜂胶具有一定的过敏原性，对蜜蜂过敏者应避免接触或使用蜂胶制品。
在临床应用过程中，如有不适或过敏反应应及时停止使用，并就医诊治。
综上所述，蜂胶作为一种天然的保健食品和药用品，在临床上有很广泛的应用前景。
通过合理的应用，可以更好地发挥蜂胶的营养和药理作用，为人类健康提供更多的帮助。
蜂产品论文
对蜂胶功效的一些认识摘要：研究表明，蜂胶含有丰富而独特的生物活性物质，具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用。
关键字：蜂胶功效医疗保健作用正文：蜂胶中最主要的成分是黄酮类化合物，它的种类有40多种，含量非常丰富。
如果平时注意看我们日常服用的一些治疗高血压、冠心病、活血化淤的中药成分，就可发现其中含有黄酮类化合物，它具有多种药理作用。
随着研究的进展，还发现蜂胶中的萜烯类化合物、脂类化合物等成分具有抑制肿瘤的作用。
蜂胶成分之间还有协同增效作用。
概括起来，蜂胶的作用主要有以下几类：一、抗菌的作用蜂胶中的黄酮类化合物、芳香酸、脂肪酸、萜烯类化合物等对细菌、真菌、致病菌、霉菌等均有抑制作用。
它只需少量就对许多微生物有抑制作用，但不像抗生素只对单一微生物有效果，而且还有副作用。
在日常生活中，如果有创伤、灼伤、溃疡等，我们可利用蜂胶的这种作用来保护身体不受病菌侵害，达到消炎杀菌的作用。
二、抗病毒的作用蜂胶中的黄酮醇、黄酮、黄烷酮、咖啡酸衍生物等成分均具有抗病毒的作用。
试验证明，蜂胶对流感病毒、牛痘病毒、乙肝病毒、疱疹病毒、骨髓灰质炎病毒、小泡性口腔炎病毒等均有很好的效果。
现在，我们的生活环境变坏，污染严重，一些新的病毒在我们不知情的情况下出现，引发疾病。
因此，我们可用蜂胶来预防病毒性疾病，达到强身健体的目的。
三、抗氧化的作用蜂胶中的黄酮类化合物、甙类、酚类、萜烯类化合物等成分，均具有抗氧化作用。
当生物体在进行氧代谢时，会不断产生废物——活性氧和自由基。
它可作用于细胞膜及血液中的脂类物质，形成脂质过氧化物，沉积在细胞膜上，使组织细胞遭受破坏，从而产生色素、色斑、青春痘、皮肤粗糙等，这些脂质过氧化物也会沉积在血管壁上，形成血栓等，也可能引发动脉粥样硬化和白内障。
另外，它还可抵抗γ-射线照射，减轻放、化疗的副作用。
我们日常生活中的不良习惯，如吸烟、肥胖、压力、过度劳累、过度饮食、环境污染等都会产生过剩的活性氧和自由基等废物。
蜜蜂蜂胶应用研究技术大全
蜜蜂蜂胶应用研究技术大全蜂胶是由蜜蜂采用树脂、花粉、唾液等混合物加工制造的一种天然物质。
它具有广泛的应用价值，被人们广泛用于医疗、保健等领域。
本文将介绍蜜蜂蜂胶的各种应用及相关研究技术，为读者提供一份全面的蜜蜂蜂胶应用研究技术大全。
一、蜂胶的医疗应用1. 蜂胶在口腔保健中的应用蜂胶具有抗菌、消炎、止痛等作用，被广泛应用于口腔保健中。
研究表明，蜂胶可以预防口腔溃疡、龋齿等口腔疾病，缓解口腔炎症，促进口腔伤口愈合。
此外，蜂胶还能改善口腔微生态平衡，提高口腔健康水平。
2. 蜂胶在皮肤护理中的应用蜂胶对皮肤具有抗炎、抗菌、修复等作用，因此在皮肤护理中应用广泛。
蜂胶可以帮助消除痤疮、疱疹等皮肤问题，加速伤口愈合，减轻皮肤炎症。
同时，蜂胶还可以改善皮肤光泽，延缓皮肤衰老，是一种理想的皮肤保健品。
3. 蜂胶在免疫调节中的应用蜂胶具有增强免疫力、调节免疫功能的作用。
研究表明，蜂胶可促进巨噬细胞活性，增加白细胞数量，提高机体免疫力。
因此，蜂胶在免疫调节、预防疾病等方面有重要应用价值。
二、蜂胶的保健应用1. 蜂胶在消化系统保健中的应用蜂胶具有抗菌、抗炎等作用，对于消化系统问题具有良好的保健效果。
蜂胶可以改善胃肠道功能，减少胃酸分泌，缓解消化不良、胃痛等症状。
同时，蜂胶还能改善肠道菌群平衡，促进肠道健康。
2. 蜂胶在心血管保健中的应用蜂胶对心血管系统有一定的保健作用。
蜂胶可以降低血脂、抑制血小板聚集，预防心血管疾病的发生。
研究表明，蜂胶还可以降低动脉粥样硬化的风险，维护心血管健康。
3. 蜂胶在调节情绪中的应用蜂胶对情绪调节有一定的作用。
蜂胶中的某些成分可以增加多巴胺水平，减少压力荷尔蒙的分泌，改善情绪，缓解焦虑和抑郁等心理问题。
因此，蜂胶在调节情绪、改善睡眠中具有一定的应用价值。
三、蜂胶的研究技术1. 蜂胶的提取技术蜂胶的提取是研究蜂胶的重要环节。
目前，常见的蜂胶提取技术包括溶剂提取法、超声波提取法、酶解法等。
不同的提取方法可以获得不同类型的蜂胶，进一步用于不同领域的研究应用。
蜂胶防龋研究现状
Al Shaher A等【 3 研究蜂胶及氢氧化钙对牙髓、 牙周膜成纤维
细胞的毒性 ， 发现氢氧化钙的细胞毒性远远高于蜂胶 ， 暴露
于0.4m l 氢 化 细 存 率 g/m 氧 钙的 胞 活 小于25%， 而4m 或 g/rnl
稍低浓度的蜂胶可以使 75%以上的细胞存活。
pr polis,EEP)是 链G o 变 TF的 效 制 其 制 用 浓 有 抑 物， 抑 作 和 度
基转移酶活性(G TFs) ， 其中三经基黄酮对 GTFs 的抑制作用
最强。Duar e S 等 n4 研究发现巴西东北所产蜂胶醇溶液在 t 1
) ， 硕士研究生， 女， 住院医师
向: 牙体 牙随病 。
重庆医 大学学 00 7 年 科 报2 第32 卷增刊 (Jour alof Chongqing M n edicalUnivers仰)
制 菌 是 龋的 键。 胶(Propolis)是由 脂、 蜂 9 牙 斑 防 关 蜂 树 蜜 上 m
腺分泌物和蜂蜡等组成的一种具有粘性和芳香性的固体胶 状物质， 具有抑制微生物的作用， 近年研究发现其有预防龋 病的作用。现就蜂胶的特性和防龋机制进行综述。
1 蜂胶的来源、 成分及生物学活性
蜂胶是一种具有粘性和芳香性的固体胶状物质， 来源于 植物所分泌的树胶及树脂类物质， 并经蜜蜂采集后， 加人蜂 蜡及蜜蜂上颗分泌所形成的一种褐色胶状物。
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蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的生长影响及安全性实验研究
第一部分、蜂胶提取物对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖、分化的影响[目的]探讨蜂胶提取物对体外培养人牙周膜成纤维细胞(Human periodontalligament fibroblasts,HPDLFs)生长增殖、骨化分化的影响,寻找蜂胶对人牙周膜成纤维细胞促增殖及分化作用的最佳显效浓度,为蜂胶牙周局部缓释制剂的研究提供实验依据。
[方法]采用组织块培养法进行HPDLFs的原代培养,取4～6代HPDLFs用于实验。
分别加入不同浓度梯度的蜂胶提取物配制的水溶液8组,浓度分为150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml和400μg/ml、450μg/ml、500μg/ml;100ng/ml碱性成纤维生长因子(Basic Fibroblast GrowthFactor,bFGF)作为阳性对照;含1%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM为空白对照。
通过检测HPDLFs 的增殖(MTT法)、碱性磷酸酶活性(alkalinephosphatase,ALP)及骨钙素含量(osteocalcin,OC),观察不同浓度梯度蜂胶提取物配制的水溶液对HPDLFs的增殖和分化的影响,并对实验数据进行统计学分析。
[结果]本实验条件下与空白对照组相比,250ug/ml、300 ug/ml、350 ug/ml、400ug/ml、450 ug/ml、500 ug/ml浓度的蜂胶提取物水溶液对促进HPDLFs的增殖有显著性差异(P＜0.05),450 ug/ml浓度作用最佳,优于阳性对照组(P＜0.05);与空白对照组比较250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml、400μg/ml的蜂胶提取物水溶液均可提高碱性磷酶活性(P ＜0.05);250μg/ml、300μg/ml、350μg/ml蜂胶提取物水溶液可以促进骨钙素的合成(P＜0.05)。
[结论]在本实验条件下高浓度的蜂胶提取物水溶液能促进HPDLFs的增殖,低浓度的蜂胶提取物水溶液可促进HPDLFs向成骨方向分化。
蜂胶有望成为一种有效的促进牙周组织修复、再生的局部用药。
第二部分、蜂胶提取物的安全性实验研究实验一、粘膜刺激实验[目的]评价蜂胶提取物潜在的口腔粘膜刺激作用,为其进入临床应用阶段提供依据。
[方法]参照《GB-T 16886.10-2000医疗器械生物学评价第10部分刺激与致敏试验》及《国际标准化组织7406技术报告牙科材料的生物学评价》中的方法。
以平均体重为
2.1kg的大耳白兔为实验动物,常规麻醉后将浸湿蜂胶提取物的小棉球置于白兔的右侧腭粘膜15min,左侧腭粘膜以新鲜调和的熟石膏做阴性对照,分别于去除棉球1h、24h后对测试接触部位进行肉眼观察,处死动物后切取实验部位组织,做常规HE染色组织病理切片,观察受试部位的组织反应。
[结果]肉眼观察动物试验侧和阴性对照侧与材料接触部位的口腔粘膜,均无充血、肿胀、糜烂及溃疡。
组织学检查,试验侧和阴性对照侧粘膜均未见异常,两者无显著性差异。
[结论]所使用的蜂胶提取物对大耳白兔的口腔粘膜无刺激性。
实验二、短期全身急性毒性实验[目的]评价蜂胶提取物潜在的全身毒性作用,为其进入临床应用阶段提供依据。
[方法]采用《中华人民共和国医药行业标准—口腔材料生物试验方法短期全身毒性实验:经口途径》中的方法。
选用130～150g的SD大鼠20只,雌雄各半。
随机分为对照组和试验组,每组10只,雌雄各半。
阴性对照组给服0.154 mol/L的氯化钠溶液,试验组给服蜂胶提取物配制的水溶液,每天每只给服剂量为1000mg/kg,连续给服7d,停服后再观察7d,共14d。
评价动物临床毒性体征,记录动物体重及食物消耗量,计算动物食物利用率、体重相对增长率,并进行统计学分析。
[结果]20只受试SD大鼠,在14d观察期内,未出现临床毒性体征,试验组和对照组动物的体重、体重相对增长率、食物利用率均没有统计学差异(P＞0.05)。
[结论]所使用的蜂胶提取物无短期全身毒性。
实验三、皮肤致敏实验[目的]评价蜂胶提取物潜在的致敏性,为其进入临床应用阶段提供依据。
[方法]采用《中华人民共和国国家标准医疗器械生物学评价第10部分:刺激与致敏试验》中的方法。
选用300～500g成年白化豚鼠15只,随机分为实验组10只、阴性对照组5只。
阴性对照组采用0.9%生理盐水,实验组分别采用蜂胶提取物配制的水溶液,弗氏完全免疫佐剂(FCA)及弗氏完全免疫佐剂与受试物混合的乳化剂进行皮内诱导接触、局部诱导、激发接触,并在24h、48h后观察实验部位激发接触结果。
[结果]激发接触后24h、48h,实验组7只豚鼠的受试部位可以观察到极轻微的红斑,3只无红斑,均无水肿形成:阴性对照组均未见红斑和水肿。
[结论]所使用的蜂胶提取物有致敏性。