【分子生物学】 考博真题
同济考博-分子生物学真题-答案

9、原癌基因细胞癌基因,正常情况下静止或极少表达,其表达产物对于细胞生长、分化、增殖有重要作用。一旦激活可以导致细胞恶变,诱发肿瘤的基因。激活方式有:点突变、获得启动子、基因扩增、染色体易位或重排。
10、多克隆位点:载体中有多个限制性内切酶的识别位点,能够插入多个外源基因并且能否复制的位点。
4.提取IL-2高表达的组织的mRNA,RT-PCR,T载体克隆或直接酶切克隆至表达载体中、测序。
2.真核细胞中基因表达的特异性转录调控因子是指什么?根据它们的结构特征可以分为哪些类型?它们和DNA相互识别的原理是什么?
特异性转录调控因子是指是除基本转录因子之外,与转录核心区以外的顺式作用元件相结合,影响基因转录的因子,分为DNA结合结构域和转录激活结构域。与GGGCGG结合的特异性转录调控因子叫Sp1。与CCAAT结合的转录因子叫CBF。大多数类固醇激素与受体结合之后,构成特异性转录因子,与顺式作用元件结合,激活基因转录。也有转录调控抑制因子,可以覆盖转录活化区,覆盖转录起始区。还有HSP。与DNA的识别模式有:(1)螺旋-转角-螺旋,helix3识别结合DNA,helix1,helix2结合其它蛋白质因子。(2)Zenic finger与DNA大沟相结合,可以与RNA-pol3及其它转录因子相互作用。(3)亮氨酸拉链:N-末端由碱性氨基酸构成的a-helix可以与DNA相结合.(4)helix-loop-helix兼性a-helix具有疏水侧面和亲水侧面,两个具有这种motif的反式因子可以形成dimer。紧靠helix N-末端的碱性氨基酸组成的序列可以结合DNA。
5.回文结构:两个序列相同的DNA单链反向碱基互补,串联重复,又叫反向重复序列,是限制性内切酶II的识别位点,也是转录终止的识别区。可以构成十字状结构。
中国海洋大学等(还有农科院农大浙江大学等)分子生物学往年考博试题

中国海洋大学等(还有农科院农大浙江大学等)分子生物学往年考博试题中科院2002年分子遗传学(博士)三、目前已经有一些现成的软件用来预测基因组全序列中的基因。
为了设计这些软件,你觉得哪些关于基因和基因组的分子遗传学知识是必须的?请说明理由。
四、在真核生物中转座子可以分为几种类型?请分述每种类型的结构和特征。
如何利用转座子进行分子遗传学的研究和功能基因组的研究。
五、自从克隆的多利羊诞生以来,报界经常传播所谓克隆动物的缺陷,有一种说法是克隆动物会早衰,有人推测早衰的原因可能是:(1)被克隆的体细胞核的染色体端粒变短或(2)被克隆的体细胞核的基因表达程序已经处在发育上成熟的阶段。
现在请你从染色体DNA复制的角度作支持第(1)种可能的阐述,并从基因表达调控的角度做反对第(2)中可能的阐述。
中国海洋大学博士入学考试试题分子生物学2002年名词解释:基因组学基因组大小基因组复杂度基因表达正控制顺势调控元件开放阅读框架基因芯片内含子肽核酸内含肽问答题:1、叙述遗传中心法则,目前在用的重要分子生物学技术有哪些?请用中心法则解释这些技术的工作原理。
2、基因基本结构如何?(即含有基因的DNA区域具有什么结构能使基因遗传信息传递给蛋白质?)3、什么是遗传变异?变异的本质是什么?现在使用的分子标记系统各利用了哪些变异?都是如何利用的?4、用哪些方法可以获得一段DNA的大量拷贝?分子克隆是获得大量拷贝的技术之一。
请对历史上使用过的和目前仍在使用的分子克隆载体做评述(描述特点,比较异同)5、DNA测序的方法是什么?目前在用的方法和原始方法有什么不同?有一段100千碱基对的DNA片断(没有重复区段),请设计最佳测序策略。
6、分子标记连锁图、物理图、序列图各是什么?相互有什么关系?中国在人类基因组水稻基因组序列草图绘制上有什么贡献?请评价这些贡献的原创性。
7、如果我们测定了某生物的一段DNA序列,你认为通过哪些可能的途径可以了解此段序列的功能?比较一下DNA复制与PCR扩增有和异同?简述分子标记的种类。
分子生物学试题考博历年考题复习题问答题集锦最全

1.写出分子生物学广义的与狭义的定义,现代分子生物学研究的主要内容,以及5个分子生物学发展的主要大事纪(年代、发明者、简要内容)。
广义上:分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究、以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。
狭义概念:既将分子生物学的范畴偏重于核酸(基因)的分子生物学,主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。
其中也涉及到与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
现代分子生物学研究的主要内容有:基因与基因组的结构与功能,DNA的复制、转录和翻译,基因表达调控的研究,DNA重组技术,结构分子生物学等。
几个分子生物学发展的主要大事纪(年代、发明者、简要内容):1.1944年,著名微生物学家Avery 等人在对肺炎双球菌的转化实验中证实了DNA是生物的遗传物质。
这一重大发现打破了长期以来,许多生物学家认为的只有象蛋白质那样的大分子才能作为细胞遗传物质的观点,在遗传学上树立了DNA是遗传信息载体的理论。
2.1953年,是开创生命科学新时代具有里程碑意义的一年,Watson和Crick发表了“脱氧核糖核酸的结构”的著名论文,他们在Franklin和Wilkins X-射线衍射研究结果的基础上,推导出DNA双螺旋结构模型,为人类充分揭示遗传信息的传递规律奠定了坚实的理论基础。
同年,Sanger历经8年,完成了第一个蛋白质——胰岛素的氨基酸全序列分析。
3.1954年Gamnow从理论上研究了遗传密码的编码规律, Crick在前人研究工作基础上,提出了中心法则理论,对正在兴起的分子生物学研究起了重要的推动作用。
4.1985年,Saiki等发明了聚合酶链式反应(PCR)2. 作为主要遗传物质的DNA具有哪些特性,研究DNA一级结构有什么重要意义? DNA拓扑异构体之间互变异构依赖于什么?简述真核生物的染色体结构,它们是如何组装的?有几种组蛋白参与核小体的形成?作为遗传物质的DNA具有以下特性:①贮存并表达遗传信息;②能把遗传信息传递给子代;③物理和化学性质稳定;④有遗传变异的能力。
军事医学科学院分子生物学试题(博士)

军事医学科学院分子生物学试题(博士)军事医学科学院攻读博士学位研究生入学考试试题分子生物学2021年名词解释:超二级结构变构调节与变构酶真核生物DNA组装泛素与蛋白酶体电子传递链与酶复合体端粒与端粒酶带正电的R基氨基酸 SAM 问答题1 稳定蛋白质结构的作用力有那些?球状蛋白质三维结构的特点2 TPK的两类型,其信号转导途径有何不同?3 真核生物基因组的结构特点,转录因子主要有哪些结构域,举到两例说明结构域的功能。
4 以核苷酸序列推测蛋白质氨基酸序列的步骤,并提出一种可以弥补该方法不足的方法。
5 指出SOD与谷胱甘肽过氧化物酶的类型及催化功能。
.军事医学科学院分子生物学试题(博士)2000年1.如何发现/寻找新基因。
2.什么是蛋白质组?于基因组的区别?及其内容/策略?3.名词解释:①基因knock out与knock in、②差异显示、③酵母双杂交、④gene chip 4.DNA结合域/激活域的几种结构motif(画简图)。
5.真核基因在原核表达的难题及对策。
军事医学科学院分子生物学试题(博士)1999年1.基因治疗的种类及其优缺点?2.基因组计划\四张图\进展,主要内容?后基因组计划主要内容? 3. DNA复制主要方式及所需的酶?4.转录生成mRNA主要过程,涉及的调控序列及因子? 5.基因的分子生物学定义? 6.转座及其机理,作用(或后果)? 7.原癌基因是如何被激活的?8.真核基因在原核表达有那些困难?外源基因在宿主表达需要哪些元件? 9.顺反子比例的基本机理? 10.转录的基本特征?11.基因治疗外源基因导入方式军事医学科学院博士入学考试试题生物化学1998年一、名词解释(5*5分)1 抗体酶 2克隆动物 3 PKC 4 线粒体ATP合成酶系 5 G蛋白二问答题(15*5分)1 酶的竞争与非竞争抑制剂的区别?动力学上如何区别?2 蛋白质纯度鉴定有哪几种方法?基本原理是什么?3 生物膜上蛋白质担任的膜功能主要有哪三种?分别举例说明?4 何谓蛋白质磷酸话作用?它属于哪类酶学修饰?此种修饰有何特点?5 基因文库和cDNA文库的主要区别是什么?建立两种文库各需要哪些步骤?6 真核细胞rRNA转录后加工有哪些步骤?其研究进展导致哪些理论及应用上的重突破?7 下列试剂常被用于蛋白质化学:CNBr 丹磺酰氯脲 6mol/L HCl β-巯基乙醇水合茚三酮胰蛋白酶异硫氢酸酯过甲酸糜蛋白酶其中哪一最适合完成下列任务(1)小肽氨基酸顺序(2)肽氨基酸末端残基(肽量<10-7)(3)不含S-S的蛋白变性,有S-S时如何?(4)芳香族(5)甲硫氨酸(6)Cys Arg军事医学科学院分子生物学试题(博士)1996年1 什么是原癌基因?(4)它们怎样被反转录病毒激活?(16分)2 什么是tumor supperssor gene?(4分)举例说明它的调控功能。
(完整版)分子生物学考博历年试题

2009年山东大学考博–分子生物学试题by admin on 2010 年01月25日· 2 commentsin 专业真题一、名词解释:1、顺式作用元件;2、模序与结构域;3、岗崎片段;4、Southern Blotting ;5、遗传密码的简并性和摇摆性二、简答:1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点?2、IP3-PKB介导的受体信号转导途径?3、蛋白质(酶)活性的快速调节方法有哪些?举三例说明磷酸/ 脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。
4、细胞死亡受体蛋白的分类,组成成员的作用?5、细胞周期Cdk 的调控作用。
6、原核生物DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用?7、举出 5 种类型RNA并简述其作用。
三、论述:1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些?调控机制。
2、原核生物和真核生物DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点?复制过程参与的因子及功能?08 中科院分子生物学试题1、表观遗传,及调控方式,还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能?2、蛋白质与DNA结合的方法和比较,EMSA和DNase1足迹法?3、密码子改造研究新蛋白药物,原理,关键和方法4、设计研究未知基因(预测两个跨膜区域)功能的实验方案(不低于 4 个)5、质粒改造原则6、诱导全能干细胞的方法,实验方案等。
(去年的nature 上发表的)个人认为除了第二和五题之外,其它的题目都属于一骑绝尘的,要么会,要么不会,想蒙是绝对没门的。
这门专业课能及格,我想都不错了,特别是1,3,6 题。
不知道大家做的如何,反正第一题,我是意思都没看懂,不知道连续的3 问是不是指1 个东西。
还是最后1 问是单独的,与前面的2 问无关2008 年中科院动物所生物化学与分子生物学博士题一名词解释密码子的变偶性程序性死亡冈崎片断单克隆抗体基因治疗SD 序列移码突变Z 型DNA 蛋白质组学反向PCR二大题简述真核生物5'帽子结构和功能。
分子生物学考博真题

分子生物学考博真题中国疾控中心2005年分子生物学(博士)一、名词解释1.EST2.YAC3.Sense DNA4.RNAi5.Race二、问答题1、乳糖操纵子的结构。
IPTG如何诱导结构基因表达?2、正向突变、抑制突变及回复突变的定义及与突变的关系。
3、PUC18克隆载体的结构特征。
4、在做PCR过程中,常遇到的问题及解决方法。
5、已知蛋白A、B之间相互作用,C、D分别与A、B 相似,如何签定C、D之间的相互作用,两种方法说明之。
6、试用分子生物学相关知识建立动物模型的方法,如何建立病原生物学的动物模型。
军事医学科学院1995年分子生物学试题(博士)1. Apoptosis的生物学意义及其调控基因。
2.基因转移的概念及基因转移载体应具备的条件。
3.原癌基因的功能及其转化为癌基因的机理。
4.人主要组织相容性抗原在细胞识别中的作用及原理。
5.染色体重排对生物体的影响及其主要类型。
6.噬菌体显示技术原理及其在生物学研究中的意义。
军事医学科学院1996年分子生物学试题(博士)1.什么是原癌基因?它们怎样被反转录病毒激活?2.什么是tumor supperssor gene?举例说明它的调控功能。
3.细胞染色体的异常如何导致癌基因的激活?4 解释以下名词:(1) gene knock-out (2) molecularhybridization (3) restriction fragment length polymorphism (4) human genome project5.G蛋白的结构特点信其功能.6 .apoptosis的特征与其生理及病理意义,已知它的调控基因有哪些?2006 协和生物化学与分子生物学专业博士试题一、填空(24空24分)1.---------年,由-------和-------(英文姓)首次提出了DNA的双螺旋模型,其结果发表在----杂志,他们提出的实验依据是-------和--------。
农科院分子生物学考博真题

中科院微生物所分子生物学(专业)
一、英文缩写,要求写出英文全称,共15个,ﻫRT-PCR、MHC、EST、AUS、
二、解释并比较,共5个,全是英文名词。
1。antigenicshift和antigenicdriftﻫ其他的记不得了ﻫ三、简答题6个ﻫ2。σ因子和ρ因子在转录过程中的作用。
3。16SrRNA的分子大小、结构特点和生物学作用。
6.关于基因CDNA克隆和蛋白表达的方法的实验设计题!有一植物中共有的基因与某重要功能有关。请设计试验并叙述相关试验技术和方法,在烟叶中克隆该基因的CDNA全长,并获得用于获取抗体的蛋白!ﻫ7.基因靶向技术的原理和意义!(这个话题这两年很火,情理之中,呵呵!)
2008年最新协和医科大学博士生入学专业分子生物学考试试题ﻫ第一部分:填空ﻫ疯牛病的致病原因
二.二.问答题:
1.试举例说明蛋白质的结构与功能关系:
2.试述糖异生原料的来源,糖异生途径的调节及其意义?ﻫ3.试述真核细胞基因表达转录水平调节机制?
中科院遗传所博士研究生入学考试试题ﻫﻫ一九九六年分子遗传学
一、请说明高等动植物的基因工程与大肠杆菌基因工程的异同。什么是当前真核生物基因工程的前沿?你认为目前动植物基因工程进一步发展的瓶颈是什么?(20分)
分子生物学(甲)
名词解释(每个4分)ﻫ原位杂交、顺式作用元件、信号肽、选择性剪接、C-值矛盾(c-valueparadox)ﻫ问答题(每个20分)ﻫ1、RNAi的优缺点,如何避免改正
武汉大学分子生物学2004,2008,2013--2014年考博真题

四,简答题:16分 1.为什么rRNA分子和tRNA分子比mRNA分子更为稳定? 2.试比较一下原核和真核热休克基因转录起始机制有何异同点?
第1页 ห้องสมุดไป่ตู้1页
3.请叙述一下你的硕士论文的情况,具体方法,结果和意义等等 4.用限制性内切酶切割DNA后,经电泳检查,发现有脱尾现象,其可能的原因 是什么呢? 五,问答题:33分 1.请叙述原核生物当中从核酸指导到蛋白? 3.请叙述一种从接受信号到调控基因表达的信号转导途径
第1页 共1页
6.分裂间期的早期,DNA处于( )状态 A.单体连续的线性双螺旋分子 B.半保留复制的双螺旋结构 C.保留复制的双螺旋结构 D.单链DNA E.以上都不正确 7、能够证明DNA是遗传物质的2个关键性实验是:肺炎链球菌在老鼠体内的毒 性和T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验主要的论点证据是: (A)从被感染的生物体内重新分离得到DNA,作为疾病的致病剂 (B)DNA突变导致毒性丧失 (C)生物体吸收的外源DNA(而并非蛋白质)改变了其遗传潜能 (D)DNA是不能在生物体间转移的,因此它一定是一种非常保守的分子 8.沉默基因座 A.因为沉默子区域的存在与MAT基因座不同 B.在SIR基因产物的作用下,保持转录失活 C.存在几个DNase I超敏位点 D.与DNA复制起点结合在一起 E.因为染色质结构保持转录失活 9.基因组是 A.一个生物体内所有基因的分子总量 B.一个二倍体细胞中的染色体数 C.遗传单位 D.生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量 10、原核细胞mRNA含有几个功能所必需的特征区段,它们是 (A)启动子,SD序列,起始密码子,终止密码子,茎环结构 (B)启动子,转录起始位点,前导序列,由顺反子间区序列隔开的SD序列和OR F,尾部序列,茎环结构 (C)转录起始位点,尾部序列,由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF,茎环 结构
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浙江大学 2010 博分子生物学试题名解,基因组问答1、什么是转化医学2、如果某信号对某蛋白有作用,设计一个试验来确定这条信号通路3、表观遗传学及其意义4、如何解释细胞基因组相同但是蛋白质组不相同的现象简答1、细胞死亡的几种方式2、转录,翻译,蛋白表达的概念名词解释:基因和基因组;ncRNA;问答题:1.转化医学:2、研究信号通路,信号从细胞外传至细胞内,往往是形成一个复合物,从而引起效应,请你设计一个方法,了解整个信号通路的传递过程。
3.表观遗传学。
浙江大学 2009 博分子生物学试题名词解释1、种系分析法2、癌基因和抑癌基因3、顺式作用元件和反式作用因子4、表观遗传学5、简答1、什么是基因、基因组,蛋白质和蛋白质组2、蛋白质之间相互作用的方法有哪些3、什么是基因表达及其调控机制?4、设计一个实验以证明DNA是遗传物质。
5、基因操作中的常用工具有哪些?6、举例说明蛋白质结构与功能的关系。
论述1、有一个蛋白X,发现其在血管内皮细胞中与信号转导通路A有密切联系,如何证明在此细胞中与蛋白X相互作用的蛋白。
2、HGP已完成,谈谈你对其后续计划的认识。
浙江大学 2008 博分子生物学试题名词解释1、蛋白质的超二级结构2、核酸分子杂交3、基因组4、操纵子5、反式作用原件6、小卫星DNA7、基因表达8、逆转录9、管家基因10、信号肽11、基因打靶12、基因治疗论述题1、DNA的复制过程的基本特点和要点。
2、G-蛋白信号介导的信号转导途径。
3、DNA损伤可以分为哪几类?其相应分类分别是?4、蛋白质组的概念及其研究意义。
2009年中国海洋大学分子生物学考博试题第一题,5翻译题,每题8分,共40分。
包括siRNA,Sanger(1953年,其确定了牛胰岛素的一级结构)等第二题问答题1、某学生在大肠杆菌的培养基中1)加葡萄糖2)加乳糖3)加葡萄糖和乳糖,详述操纵子调控。
2、请说明分子标记的方法3、一个功能基因,如果已经知道其序列,如何知道它的功能?4、一个蛋白酶,要选择什么样的载体,才能高量表达和易纯化?山东大学2009博分生一、名词解释:1、顺式作用元件2、模序与结构域3、岗崎片段4、Southern Blotting5、遗传密码的简并性和摇摆性二、简答:1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点?2、IP3-PKB介导的受体信号转导途径?3、蛋白质(酶)活性的快速调节方法有哪些?举三例说明磷酸/脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。
4、细胞死亡受体蛋白的分类,组成成员的作用?5、细胞周期Cdk的调控作用。
6、原核生物DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用?7、举出5种类型RNA并简述其作用。
三、论述:1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些调控机制。
2、原核生物和真核生物DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点?复制过程参与的因子及功能?华中同济2009 博分生一.名词解释1. genome2. gene mapping 3 .house keeping gene4. Restriction endoclease5 .multiple cloning site6 .Cis-acting element7 .PCR8 .gene therapy9. operon10. 原位杂交二.问答题1、简述反式作用因子的结构特点。
2、何谓基因克隆?阐述一下基因克隆的基本过程。
3、PCR的原理及引物设计的原则。
4、简述逆转录病毒的结构特点。
5、人类基因定位的常用方法及其原理浙大2006 博分生题及答案一、名词解释:(25%)1、RFLP:限制性片段长度多态性,是由DNA变异(产生新的酶切位点或消除原有的酶切位点)导致在限制性核酸内切酶酶切时产生不同的长度片段。
可借助Southern Blotting或PCR的方法进行检测。
2、SSR:简章序列重复多态性,引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计,用来扩增重复序列本身。
由于重复的长度变化极大,所以是检测多态性的一种有效方法。
其特点包括:一般检测到的是一个单一的多等位基因位点,共显性遗传,故可鉴别杂合子与纯合子;得到的结果重复性很高。
3、EST:表达序列标签,是指从不同的组织构建的cDNA文库中,随机挑选不同的克隆,进行克隆的部分测序所产生的cDNA序列。
随着高通量测序技术的进步,使人们越来越相信,大规模地产生EST,结合生物信息学的手段,将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。
4、STS:序列标签位点,是由特定引物序列所界定的一类标记的统称,短的在基因组上是可以被唯一操作的序列,因而可以确定在物理图谱上的特定位置。
5、CAP: CAP即分解代谢物基因活化蛋白是一种激活蛋白,因为细菌的许多启动子为弱启动子,本身与RNA聚合酶的作用较弱,在有CAP蛋白这类活蛋白存在下,可使RNA聚合酶与启动子的亲和力增强,CAP蛋白的活性强烈依赖cAMP。
6、AFLP:扩增片段长度多态性,其特点是把RFLP 和PCR结合了起来。
其基本步骤是:把DNA进行限制性内切酶酶切,然后选择特定的片段进行PCR 扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”,用与接头互补的但3?端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增,只有那些与3?端严格配对的片段才能得到扩增),再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物,用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。
7、SNP:单核苷酸多态性,是一种较为新型的分子标记,其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异,因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。
8、FISH:荧光原位杂交技术,是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。
它将荧光信号的高灵敏度、安全性,荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来,通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交,在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数,从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断,为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。
9、Genome:基因组,有机体或细胞中的所有DNA,包括核中的染色体和线粒体中的DNA。
10、RNA in situ hybridization:RNA原位杂交,是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA链在细菌或其他真核细胞中的位置,是检测基因组织特性表达的常用方法。
11、单克隆抗体:每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。
当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。
被激活的B 细胞分裂增殖形成该细胞的子孙,即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆,并合成多种抗体。
如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。
单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
12、基因芯片:所谓基因芯片,是指将大量探针分子固定于支持物,上,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。
由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上,所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析,从而解决了传统核酸印迹杂交,技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低,等不足,而且,通过设计不同的探针阵列,,用一定的分析方法,还可以用于序列分析,称作杂交测序。
二、描述cDNA文库构建原理与方法(25%):(1)cDNA获得方法,(2)克隆方法,(3)文库质量定义。
答:cDNA:以mRNA为模板,利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary DNA,cDNA),再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后转入受菌体,扩增为cDNA文库(cDNA library),然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。
与基因组DNA文库类似,由总mRNA制作的cDNA 文库包括了细胞全部mRNA信息,自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。
当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。
(1)cDNA获得方法:①Total RNA的提取;②mRNA的分离;③cDNA双链合成:Superscipt II—RT合成第一链,cDNA第二链的合成,双链cDNA末端补平,EcoR I adaptor 加接,双链cDNA 末端的磷酸化及Xho I酶切,胶回收cDNA。
(2)克隆方法:①载体制备:pBlueScriptII的提取,pBlueScriptII的双酶切消化,载体去磷酸化,载体效率检测;②cDNA双链和载体的连接:连接,检测(PCR方法);③电转化:电转化感受态细胞的制备,连接产物纯化,电转化;④快速鉴定、菌落PCR⑤pBlueScript cDNA文库扩增。
(3)文库质量定义:评价一个文库是否有实用价值主要在于文库的含量和插入片段的大小两个方面。
所构建的文库中必须有足够多的克隆数, 这样才能确保基因组cDNA 中的每一个序列至少有一个拷贝存在于重组文库中, 为达到这一要求, 文库的容量应不小于1.7×105 , 同时为保证cDNA片段的完整性, 插入片段的平均大小应不小于1kb。
三、阐述基因突变的概念及引起突变的可能途径(25%):(1)化学诱变,(2)物理诱变,(3)T-DNA插入,(4)缺失、插入,(5)无意突变概念,(6)碱基修复概念1l>9|+T` 答:基因突变属分子水平上的变异,是指染色体上个别基因所发生的分子结构的变化,基因突变在自然界普遍存在。
基因突变的方式很多,主要有:(1)化学诱变,基因突变可以由某些化学物质所引起,这些化学物质称为化学诱变剂。
现已知很多的化学诱变剂,它们诱变的机制是不同的。
在DNA复制过程由于碱基类似物的取代,碱基的化学修饰以及碱基的插入和缺失都会引起突变。
(2)物理诱变,利用物理因素引起基因突变的称物理诱变,如X射线、紫外线、电离辐射等物理因素可造成(3)T-DNA插入,改变读码或变成假基因。
(4)移码突变:基因中插入或者缺失一个或几个碱基对,会使DNA的阅读框架(读码框)发生改变,导致插入或缺失部位之后的所有密码子都跟着发生变化,结果产生一种异常的多肽链。
移码突变诱发的原因是一些像吖啶类染料分子能插入DNA分子,使DNA 复制时发生差错,导致移码突变。
(5)无意突变,由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密码子的基因突变。
(6)碱基修复:DNA损伤的修复系统主要有以下几个:①损伤碱基的直接修复;②切除修复,包括碱基切除修复、核苷酸切除修复和DNA交链的切除修复;③错配修复;④重组修复,又称复制后修复;⑤跨损伤DNA合成,这是一种利用损伤核苷酸为模板,通过DNA聚合酶I使碱基掺入到复制终止处进行DNA 合成,从而延长DNA链的修复。