Clarity 中文色谱工作站操作指导_定量篇_内标法
内标法
一、内标法什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。
在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。
使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。
理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
化学方面的因素包括：1、内标物在样品里混合不好；2、内标物和样品组分之间发生反应，3、内标物纯度可变等。
对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。
GC-2014C Clarity培训教材
岛津 GC-2014C 气相色谱仪（Clarity 工作站）培训教材
Clarity 工作站基本操作
1.1 程序开始
岛津 Clarity 工作站的主要优点之一是可以不需要长时间的准备和设置即可立刻 进行测定。 • 点 击 桌 面 上 的 图 标 或 通 过 选 择 开 始 – 所 有 程 序 – ClarityShimadzu –
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岛津 GC-2014C 气相色谱仪（Clarity 工作站）培训教材
单次分析对话框 在进样针将样品输入 GC 进样口后，点击 GC 控制面板上的“Start”按钮以启动分 析。
当运行时， 当前测定时间和 运行 标记会在 岛津 Clarity 工作站 窗口下方状态 栏中显示。
1.5 分析监控
运行标记及运行时间
2 双流路 FID（流量控制器）
3 毛细管柱 TCD 下面以填充柱单 FID 为例介绍。
4 毛细管柱单检测器（用于单 FID、ECD、FPD、FTD）
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岛津 GC-2014C 气相色谱仪（Clarity 工作站）培训教材
单填充柱，单 FID 检测器操作步骤
1、检查色谱柱、进样垫、衬管是否装好 2、开载气：开钢瓶总阀，减压阀压力设为 0.7Mpa（0.6~0.8Mpa） 3、开电源：开 GC-2014C 主机电源，开 CBM-102 电源，开电脑，双击桌面 CS-LIGHT Real Time Analysis 实时分析工作站 4、调节载气一次稳压用压力（primary）500Kpa 和二次稳压用压力 DINJ 左侧（carrier L） /二次稳压用压力 DINJ 右侧（carrier R）（一般情况下不用调）
ClarityShimadzu 色谱工作站 命令启动程序。
Clarity 色谱工作站操作说明
Clarity 色谱工作站操作SOP
1.双击桌面上的Clarity 图标，打开色谱工作站，进入登录界面，如
图1；
图1
2.点击“登录”按钮，进入登录对话框，如图2，输入用户名和密
码，点击“确定”按钮，进入色谱工作站；
图2
图3
3.通过点击“方法”菜单进入方法编辑界面，如图4，方法编辑完
成后，点击“发送方法”和“确定”按钮；
图4
4、点击方法保存按钮，保存方法；
图5
5、点击“分析”→“单次分析”菜单，点击“发送方法”按钮，方法发送成功后出现“准备”状态，如图6；
图6
6、点击设备监控界面上的数据采集按钮，运行方法；
图7
注意：运行方法前一定要检查各模块状态，确保各模块状态都在“准备”状态。
7、方法运行完毕后点击设备监视器上的STOP 按钮，停止数据采集；
图8
8、点击“系统运行/停止”按钮停止系统；
图9
9、如果运行上一次的方法，直接从步骤6开始操作，如果需要重新编辑方法从步骤3开始操作。
气质联用-内标法定量流程
气质联用-内标法定量流程1.打开工作站，调用标曲离子图（第一级别），点击“色谱图”→“选择积分器”，选择RTE积分器；2.点击“MS信号积分参数”，调整最小峰面积，使峰面积最小的标准品峰能被积分。
点击应用，保存，保存方法建议放在运行标曲离子图的方法文件中。
3.点击“校正”→“设置定量”，输入校正标题（在定量报告中显示的为此标题），选择积分参数文件为2中所保存的积分参数文件。
输入标品及内标物浓度单位，内标物浓度，点击确定。
4.系统自动弹出“编辑化合物”，点击“插入上方”，弹出“定量设置”，在离子图中找到目标峰，右键双击，在质谱图中单击任一位置，系统会自动记录保留时间，输入目标物名称，如果是内标物需勾选“内标物”。
点击“保存”→“退出”，自动弹出“编辑化合物”，左键单击“化合物列表结束”→“插入上方”，依次进行所有目标物的录入。
内标物必须是在所有化合物的第一位，名称前带星号。
5.点击“退出”→“是”，在“更新校正”随便输入一个化合物浓度，在新级别中输入此次校正的标曲的级别。
点击“进行更新”，在弹出窗口中点击内标物前的“+”，拉开此标曲中所有的化合物，点击“校正”，依次修改除内标物外的所有化合物的浓度，点击“确定”，完成此次级别的校正。
6.点击“校正”→“更新一个级别”，以5中所述完成下一级别的校正。
每个级别的编号不能重复，如果需要删除级别，在“更新校正”中点击“删除级别”，选中所要删除的级别点击“进行更新”即可。
如需修改化合物顺序，点击“校正”→“重新排列化合物顺序”。
如需修改化合物信息，点击“校正”→“编辑化合物”。
7.完成所有级别的校正后，点击“方法”→“保存方法”，完成标曲建立。
8.调用所保存的定量方法，选中任一离子图，点击“定量”→“计算”即可计算化合物浓度。
Clarity 中文色谱工作站操作指导_定量篇_内标法-C
Clarity 中文色谱工作站 定量篇 内标法本资料以含乙醇和叔丁醇（内标物）两种物质的样品为例，介绍了如何使用Clarity工作站进行内标法定量。
校准样品：样品1：含0.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
样品2：含1.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
样品3：含2.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
三个校准样品分析完成后得到的校准色谱图文件存在clatiy安装目录下，work1目录内的calib子目录中，文件名分别是cal04.prm、cal14.prm和cal24.prm。
未知样品：含未知量乙醇，1mg/g的叔丁醇。
分析完成后得到的色谱图文件存在cal子目录中，为cal09.prm。
内标法定量步骤：1、进入校准窗口1.1双击桌面上的clarity工作站图标，启动工作站双击图标1.2以任意用户名登陆工作站，默认用户为“Administrator”单击“确定”1.3点击“校准窗口”图标进入校准视图2、制作第一个浓度级别的校准曲线2.1选择“文件”命令下拉菜单中的“新建”命令或者直接点击工具栏上的“新校准”图标新建一个校准文件。
单击“新建”或者“校“校准选项”2.3设置校准选项①显示模式设为“ISTD”②工作模式设为“校准”③校准方式设为“自动”际浓度单位⑤设置完毕后，单击“OK”确认2.4选择“文件”命令下拉菜单中的“OPEN STANDARD”命令或者直接点击工具栏上的“打开标准”图标打开第一个级别的校准色谱图文件cal04.prm。
单击“Open Standard”或者单击“打开标准”图标选择第一级别的校准色谱图cal04.prm125②选择文件后，单击“确定”2.5选择“校准”命令下拉菜单中的“添加峰”命令或者工具栏上的“添加峰”图标登录目标色谱峰，响应值和保留时间将自动登入化合物列表。
单击“添加峰”或者单击“添加峰”图标选择乙醇的色谱峰，单击鼠标左键确认，同样的方法选择叔丁醇的色谱峰。
色谱内标法定量
色谱内标法定量（多点校准）一）校准曲线的绘制１、由主菜单View进入Data Analysis界面；２、由主菜单的File到Load Signal，调出第一种浓度的标准品的色谱图（第一点），并调整其坐标参数和积分参数等；３、由主菜单Calibration进入New Calibration Table，在Automatic Setup Level 后的对话框中输入1，然后点击OK；４、在校准表上分别输入已知组分的名称及其浓度，右下方即出现对应曲线：1)在Compond栏中输入组分名称；2)在Amt(mg) 栏中输入组分浓度；3)在ISTD栏中，内标那一行设为Yes。
５、由主菜单Calibration进入Calibration Settings，分别修改浓度单位、校准曲线类型和时间窗口等：1)在Amount Units栏中输入组分浓度单位；2)在Type栏中输入曲线类型（Linear＝直线，Power=抛物线等）；3)在Origin栏中选择曲线过不过原点（Ignore=忽略，Include=包含，Force=强制，connect=连接）；4)在Other Peaks栏中设定峰识别时间窗口（一般设为５％）；６、点击OK，退出校准表；７、调出第二种浓度的标准品的色谱图（第二点），并调整其坐标参数和积分参数等；８、由主菜单的Calibration进入Add Level，对照响应组分，分别输入第二点的各组分浓度，点击OK退出；第三点、第四点等类推；９、由主菜单的Calibration进入Calibration Table，可检查、修改校准表上的各参数；１０、由主菜单上的Report ，进入Specify Report，将Calculate: 后改为ISTD （内标法），点击OK退出；二）样品分析１、由主菜单的File到Load Method…，在D:\HPCHEM\1\METHOD\…中调出所需方法；２、调出样品色谱图，调整其坐标参数和积分参数等，预览报告及打印；３、对于同一浓度的标样，可多次平行进样，取其平均值，加以校准：调出同一浓度标准品的色谱图，由主菜单Calibration进入Recalibrate取Average,再OK,即得到同一浓度的两次进样的平均校准表。
内标法的操作方法
内标法的操作方法内标法（Intramolecular Standard Method）是一种利用内标物进行定量分析的方法。
内标物是在样品中添加的已知浓度的物质，与待测物具有相似的化学性质，但可以通过不同的检测方法进行区分。
内标法的使用可以提高分析结果的准确性和可靠性。
下面详细介绍内标法的操作方法。
内标法的操作步骤如下：1. 准备样品：首先需要准备待测物样品。
样品可以是固体、液体或气体，根据不同的样品特点选择合适的处理方法。
2. 准备内标物：选择与待测物化学性质相似的内标物，并确保内标物的纯度和浓度已知。
内标物应该与待测物在样品处理和分析过程中不发生反应，并且有明显的检测信号。
3. 加入内标物：将已知浓度的内标物添加到待测物样品中。
添加的内标物的浓度应该与待测物的浓度在一个可以测量的范围内，通常是待测物的浓度的数倍。
4. 样品处理：根据样品的特性，选择适当的样品处理方法。
对于固体样品，可以进行研磨、溶解或提取处理；对于液体样品，可以进行稀释、浓缩或者调整pH值等处理。
5. 仪器分析：将经过样品处理的样品置于分析仪器中进行测量。
根据待测物和内标物的性质，选择合适的检测方法进行分析。
常用的分析方法包括色谱法、质谱法、光谱法等。
6. 数据分析：对测量结果进行数据处理和分析。
首先要确定内标物和待测物的测量响应因子（Response Factor），即单位浓度下的检测信号大小。
然后，通过内标物和待测物的测量信号比值，确定待测物的浓度。
7. 结果计算：根据内标物和待测物的浓度，计算出待测物的分析结果。
通常采用比例法或插值法来计算。
内标法的优点：1. 准确性高：通过比较待测物和内标物的测量信号，可以减小仪器误差和样品处理过程中的变动对结果的影响，提高分析结果的准确性。
2. 可靠性好：内标物的加入可以对样品处理和分析步骤的效果进行验证，提高数据的可靠性。
3. 方便快捷：内标法不需要单独测定内标物的浓度，只需加入已知浓度的内标物，减少了分析时间和操作步骤。
Clarity 中文版安装指南
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软件安装
完成软件安装
查看自述文件
运行 Clarity (如硬件没有安装 请勿执行!)
revision 28. Feb.2006
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硬件安装
关闭计算机 在空闲的 PCI槽中插入INT7 A/D卡 打开计算机 跳出“发现新硬件”对话窗
revision 28. Feb.2006
revision 28. Feb.2006
3
软件安装Βιβλιοθήκη 选择安装 类型 最好选择典型 (Typical)安装
设定所在的开始 程序文件夹名称
revision 28. Feb.2006
4
软件安装
输入硬件卡 (采集卡) 上的用户帐号 如保留空白则仅有 30天(或100次) 的试用期
revision 28. Feb.2006
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外部连接
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GC-14C 设置
GC-14C上设置通讯参数 选择Function 15 进入通讯参数设定
revision 28. Feb.2006
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Clarity 配置
检查默认的 配置 双击气相色谱 设定配置选项
revision 28. Feb.2006
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Clarity 配置
设定通讯参数
设定仪器配置
revision 28. Feb.2006
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添加气相控制模块
未发现气相模块时
“发现新硬件”随后跳出,自动完成安装
revision 28. Feb.2006
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外部连接
先在GC-14C上安装 RS-232 板 用 RS-232 线将主机和 电脑连接 将 Start IN 触发线连到 GC-14C Start Out 接点 用接头将模拟数据输出 接好