蛋白质印迹手册2015
蛋白质印迹法（免疫印迹试验，WesternBlot）
蛋⽩质印迹法（免疫印迹试验，WesternBlot）蛋⽩质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot。
它是分⼦⽣物学、⽣物化学和免疫遗传学中常⽤的⼀种实验⽅法。
其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或⽣物组织样品进⾏着⾊。
通过分析着⾊的位置和着⾊深度获得特定蛋⽩质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋⽩免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织中蛋⽩质从凝胶转移到固相⽀持物NC膜或PVDF膜上，然后⽤特异性抗体检测某特定抗原的⼀种蛋⽩质检测技术，现已⼴泛应⽤于基因在蛋⽩⽔平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个⽅⾯。
⼀提起Western blot，⼤家会不禁联想到Southern blot和Northern blot。
其实它们的名字也是个有趣的故事。
1975年，Edwin Southern教授发明了DNA杂交检测技术，故命名为Southern blot。
之后，James Alwine、David Kemp和George Stark三位教授⼜发明了RNA杂交检测技术，因与Southern blot相似，故命名为Northern。
George Stark这位⽜⼈教授在两年后⼜开发出类似的蛋⽩质检测⽅法。
1981年，Neal Burnette将其命名为Western blot。
为什么当时没叫Eastern blot呢？这⽆从考证，不过科学家们还真是挺有创意的。
30年来， Western blot技术已成为蛋⽩质研究中最常⽤的⼯具。
它的标准流程如下：蛋⽩质⾸先通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相⽀持物上，固相⽀持物包括硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜。
⾸先将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的⾮特异性吸附，这样固定的蛋⽩质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作⽤。
最后通过放射、⽣⾊或化学发光的⽅法进⾏定位。
Western Blot原理与Northern Blot、Southern blot类似。
蛋白免疫印迹杂交技术手册
6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（100
μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
A-4 电泳上样样品的准备
5
A-4-1 变性、还原蛋白样本 一般的抗体只能识别抗原蛋白中的部份序列结构（表位），因此，为使抗体能够达到结合该表位而需要将
1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂
孔号
0
1
2
3
4
5
6
7
蛋白标准溶液（μL）
0
1
2
4
8
12 16 20
去离子水（μL）
20 19 18 16 12
8
4
0
对应蛋白含量（μg）
0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0
2. 根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混
A-4-2 天然和非还原样本 某些抗体识别的表位是非连续氨基酸构成的蛋白三维结构，此种情况则需要进行非变性的 WB，抗体的说明
书一般会标注，这种非变性电泳不加 SDS，样本也不需煮沸。 某些抗体仅识别蛋白的非还原态，如某些 cysteine 基的氧化态，因此 loading buffer 和电泳液中不加入
3 用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，
4 4℃摇动 30 min 5 4℃离心 12,000 rpm，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力） 6 轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.
A-1-2 组织裂解 1 用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解， 2 将组织块放在圆底的微量离心管或 Eppendorf 管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于 -80°C， 3 每约5 mg加入约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇动2小时，裂解液体积与组 织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml, 理想的蛋白浓度应为1-5 mg/ml). 4 4℃离心 12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本， 弃沉淀,
蛋白质印迹分析-WesternBlotanalysis
实验四蛋白质印迹分析【实验目的】了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用。
【实验原理】蛋白质印迹法又称为免疫印迹法，这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术方法。
待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的分离和纯化, 另外这项技术的应用需要利用待测蛋白的单克隆或多克隆抗体进行识别。
如图所示，可溶性抗原，也就是待测蛋白首先要根据其性质，如分子量，分子大小，电荷以及其等电点等采用不同的电泳方法进行分离；通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上；利用抗体(一抗) 与抗原发生特异性结合的原理，以抗体作为探针钓取目的蛋白。
值得注意的是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白，如牛血清白蛋白对膜进行“封阻” 而防止抗体与膜的非特异性结合。
经电泳分离后的蛋白往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上, 我们把这个过程称为电泳印迹。
常用的两种电转移方法分别为:1.半干法: 凝胶和固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿的滤纸之间,通电时间为10 分钟~30 分钟。
2. 湿法：凝胶和固相载体夹心浸放在转移缓冲溶液中，转移时间可从45 分钟延长到过夜进行。
由于湿法的使用弹性更大并且没有明显浪费更多的时间和原料，因此我们在这里只描述湿法的基本操作过程。
对于目的蛋白的识别需要采用能够识别一抗的第二抗体。
该抗体往往是购买的成品，已经被结合或标记了特定的试剂，如辣根过氧化物酶。
这种标记是利用辣根过氧化物酶所催化的一个比色反应，该反应的产物有特定的颜色且固定在固相载体上，容易鉴别。
因此可通过对二抗的识别而识别一抗，进而判断出目标蛋白所在的位置。
其他的识别系统包括碱性磷酸酶系统和125I 标记系统。
【实验材料】1. 实验器材SDS/PAGE实验相关材料；电转移装置；供电设备；PVDF膜 ( Millipore Immobion-P #IPVH 000 10 ); Whatman 3MM纸；其他工具：镊子、海绵垫、剪子、手套、小塑料或玻璃容器、浅盘。
蛋白质免疫印迹实验
蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验原理蛋白质免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的一种蛋白质检测方法。
对已知的表达蛋白，可以用相应的抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可以融合部分的已知片段进行检测，如HA-tag，Flag-tag，c-myc-tag等。
Western Blot采用的是聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳，被检测的是蛋白质，其中检测探针是相应的抗体，显色是使用的标记后的二抗。
经过PAGE凝胶分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，如醋酸纤维素膜，固相载体以非共价键的形式吸附蛋白质。
然后以固相载体上的蛋白质作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，然后再与标记后的二抗起反应，经过底物显色以检测目的蛋白。
蛋白质免疫印迹（Western Blot）原理蛋白免疫印迹法主要分为三个阶段进行第一阶段是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在这个阶段，经过变性处理的蛋白质样品经SDS处理后会带上阴性电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中在电场的作用下从阴极向阳极泳动,且分子量越小,泳动速度就越快。
所以在此阶段，根据蛋白的泳动速度可以将样品中的蛋白质根据其分子量的大小进行分离，此阶段分离效果肉眼不可见。
如果想观察蛋白的电泳情况，可以在电泳完成后进行考马斯亮蓝染色进行观察；第二阶段为电转移，又称为转膜。
即将在凝胶中已经分离的蛋白质条带通过电场的作用转移至硝酸纤维素膜上, 一般选用恒流300 mA，通电90 min即可将凝胶中的蛋白条带转移到醋酸纤维素膜载体上。
转移到载体上的蛋白条带也是肉眼不可见的，如果想观察转移的效果，可以在转移后对载体进行丽春红染液染色。
第三阶段为酶联免疫显色检测将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使目的条带蛋白显色。
蛋白质印迹法
分类
Western Blot显色的方法主要有以下几种： i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光ECF iv.底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底 物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化 物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
其他信息
值得一提的是，Western Blot这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Edwin Southern 的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern Blot。后来出现了两个过程相似，但是对象不同 的印迹方法，一个针对RNA，一个针对蛋白质，人们把这两种技术分别称为Northern Blot（由斯坦福大学的 George Stark发明）和Western Blot。这两个技术的命名与发明人的名字没有关系了。
应注意的是：显影和定影需移动胶片时，尽量拿胶片一角，手指甲不要划伤胶片，否则会对结果产生影响。
将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。
结果分析
可能出现的问题如下。 1．背景过高 ①封闭不充分，应更换封闭液或延长封闭时间； ②抗体浓度过高，应适当增加抗体稀释倍数； ③洗膜不充分，应增加洗涤次数或洗涤时间； ④膜质量较差，应选择高质量的NC膜，并且整个实验过程中保持膜的湿润。 2．没有阳性条带或条带很弱 ①目的蛋白质未充分转移到膜上或洗膜过度，应使用丽春红S染色以检查转膜效果，或减少洗膜次数，缩短洗 膜时间； ②抗体不匹配或一抗过期或一抗不能识别变性或还原的蛋白质，应注意选择特异性的抗体并在有效期内使用， 或改用非变性凝胶系统； ③抗体浓度低，应适当增加抗体浓度，或延长孵育时间；
蛋白印迹实验报告
蛋白印迹实验报告篇一：实验十二Western印迹鉴定目标蛋白实验十二Western印迹鉴定目标蛋白实验目的1.了解Western blot的原理及其意义，掌握Western blot的操作方法；2.应用Western blot 技术分析鉴定经SDS-PAGE分离后转移到尼龙膜上的重组蛋白。
实验原理Western印迹法简称蛋白质印迹法。
蛋白质样品经SDS-PAGE电泳后，凝胶所含的样品蛋白质区带通过电泳方法转移、固定到载体（如尼龙膜、硝酸纤维素膜）上，固相载体以非共价键的形式与蛋白质结合，从而固定住蛋白质；以膜上的蛋白或多肽为抗原，与相应的第一抗体起免疫反应，再和酶标记或同位素标记的第二抗体反应，用适当的溶液漂洗去未结合抗体后，置含底物的溶液中温育，或通过放射自显影显出谱带，即可检测出样品中的特异蛋白组分。
试剂与器材试剂1.转移缓冲液：甘氨酸（39 mmol/L），Tris 碱（48mmol/L），SDS （%），200ml 甲醇（20%），定容至1,000mL；2.封闭液：5% 脱脂奶粉，% 叠氮钠，溶于PBST溶液中；3.丽春红S（Ponceaus）染液：丽春红S溶于1mL 冰乙酸中，加水至100mL；洗膜液：PBS 缓冲液含% Tween 20；5．DAB浓缩显色液（50X）：DAB （二氨基联苯胺）是根过氧化物酶的底物之一，临用前稀释。
6．5 x PBS：在1600mL蒸馏水中溶解Na 2HPO4 , Na H2PO4, 40g Na Cl,用/L NaOH调pH至，加水定容至2升。
高压灭菌20 分钟，室温保存。
用前稀释至1x 。
7．SDS-PAGE电泳用溶液和试剂。
器材电泳装置一套;2.电转移膜装置3.抗体-酶反应摇床操作方法〈一〉电转移1．将蛋白质样品进行SDS-PAGE，待溴酚蓝跑出胶后停止电泳（1）。
2．载手套切6-8张定性滤纸和一张尼龙膜，它们的大小应与凝胶的大小相同。
在尼龙膜的一（左）角作一记号（或剪角），与滤纸和海棉（纤维）垫浸泡于转移缓冲液中。
蛋白质印迹(Western blotting)
蛋白质印迹(Western blotting)一、实验目的：免疫印迹主要用于蛋白质的结构和活性检测等方面，学生掌握与免疫印迹相关的原理和方法，如电泳技术，转膜技术等。
二、实验原理：蛋白质印迹(Western blotting)是将蛋白质转移并固定在化学合成膜的支撑物上，然后以特定的亲和反应、免疫反应或结合反应及显色系统分析此印迹。
蛋白质印迹(免疫印迹)的实验包括5个步骤：1)固定(immobilization)：蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，强度比较差，需要从胶上转移到硝酸纤维素膜上。
2)封闭(blocked)：保持膜上没有特殊抗体结合的场所，使场所处于饱和状态，用以保护特异性抗体结合到膜上,并与蛋白质反应。
3)初级抗体(第一抗体)是特异性的。
4)第二抗体或配体试剂对于初级抗体是特异性结合并作为指示物。
5)适当保温后的酶标记蛋白质区带，产生可见的、不溶解状态的颜色反应。
三、试剂与器材：试剂:(1)人IgG免疫兔的抗血清；(2)辣根过氧化酶一羊抗兔IgG；(3)PBS缓冲液：NaCl 8 g，KCl 0.2 g，KH2P04 O．24 g，Na2HP04·12H20 2.9 g，加蒸馏水至1000 ml，pH值为7.4；(4)PBS-T缓冲液：PBS缓冲液加O.05 9／6 Tween-20；(5)封闭液：0.5％(质量分数)BSA(用PBS缓冲液配制)；(6)底物溶液：A液：溶解30 mg CN在5 ml甲醇中；B液：溶解10 mg DAB在5 ml甲醇中；C液：分别搅拌A液和B液10～15 rain，直到完全溶解，然后将A液和B液混合，加PBS至50 ml，分成10 ml 一份，不用的可冷冻(一20~C)(下次直接化冻运用)；D液：取10 ml C液，运用时加10 ml 30％(体积分数)H202；(7)转移缓冲液：0.025 mol／L Tris，O．192 mol／L甘氨酸(glycine)，20％(体积分数)甲醇(methan01)，pH值为8.3。
蛋白印迹
蛋白质印迹法一.原理：Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。
经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体【例如硝酸纤维素薄膜（nc膜）】上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
二. 步骤：1.制胶（1）将清洁干净的玻璃板对齐后放入架中卡紧。
然后垂直卡在架子上准备灌胶。
（（2）分离胶制法：先将所需量的蒸馏水、30% AcrBis(29:1)、1 MTris,PH8.8、10%SDS、依次加入离心管中，进行摇匀，再将所需量的10%过硫酸铵、TEMED加入，再次进行摇匀(注：要充分摇匀)。
然后用1ml的微量加样器进行灌胶，灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度，待胶面升到接触绿带高度时即可，然后将板内气泡赶至顶部，再在胶上加一层水进行液封并置于恒温箱内，约20分钟即凝固。
待分离胶凝固后倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干再配制浓缩胶。
（注：操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。
加水液封时要很慢，否则胶会被冲变形。
1.0mm板每板大约需5ml分离胶，1.5mm板每板大约需8ml分离胶）。
（3）浓缩胶制法：先将所需量的蒸馏水、30% AcrBis(29:1)、1 MTris,PH6.8、10%SDS、依次加入离心管中，然后进行摇匀，再将所需量的10%过硫酸铵、TEMED加入，再次进行摇匀。
然后用1ml的微量加样器进行灌胶，待胶面升到玻璃板上端时即可，再将梳子插入浓缩胶中，梳子插入浓缩胶时，应确保没有气泡，待浓缩胶凝固约30分钟中后冷却至室温即可用于电泳。
（1.0mm板每板大约需1.5ml浓缩胶，1.5mm板每板大约需2ml浓缩胶）。
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玻璃纤维膜 —— 预过滤
• Millex®针头式过滤器：多种孔径/直径可供选择
尼龙膜 —— 预过滤，单细胞分离
• Steri ip®过滤器：多种孔径可供选择
超滤 —— 蛋白/核酸/病毒的浓缩、除盐、缓冲液置换
再生纤维素膜 —— 超低蛋白吸附超滤膜
• MultiScreen® 96孔板：用于蛋白浓缩、除盐、缓冲液置换（cat# MAUF01010）
其它膜
• MultiScreen® 96孔或384孔板：用于纯化PCR产物、去除dNTPs和引物（cat#LSKMPCR10）
印迹研究 —— 对生物大分子有卓越的吸附能力
疏水性PVDF转印膜 —— 蛋白载量最大的膜
亲水性PTFE膜
• MultiScreen® 96孔板：用于天然产物筛选，可溶性分析，总药物分析（cat# MSRLN0410）
PCF膜
• Millicell® 96孔板：用于Caco-2细胞培养及细胞水平分析，包括细胞渗透性/粘附/培养/ 分化/药物转运等（cat#PSHT004S5）
再生纤维素膜
硝酸纤维素（NC）转印膜 • Immobilon®-NC 0.45μm传统WB常用转印膜（cat# HATF00010）
关于第六版
随着蛋白印迹手册第六版的 出版，默克密理博公司一如 既往地协助研究人员紧跟蛋 白检测的前沿进展。我们在 优化抗体浓度和降低背景方 面增加了更全面的建议，同 时扩展了荧光检测的数据和 操作步骤。
• Immobilon®-P 0.45μm最常用的WB转印膜（cat# IPVH00010） • Immobilon®-PSQ 0.2μm小分子蛋白/肽WB转印膜（cat# ISEQ00010） • Immobilon®-FL 0.45μm背景最低的荧光检测专用转印膜（cat# IPFL00010）
MCE（混合纤维素）膜 —— 经典常用膜
• Millex®针头式过滤器：多种孔径/直径可供选择
亲水性PTFE膜 —— 化学耐受性最好
• Millex®针头式过滤器：多种孔径/直径可供选择 • Ultrafree®系列离心微滤管：处理体积0.5或2mL，提供预除菌形式包装
疏水性Durapore® PVDF膜及疏水性Fluoropore® PTFE膜 —— 气体过滤，在线传感器保护
1
目录（续）
5
操作
31
1 蛋白转印的操作
32
1.1 电转印：槽转印
1.2 电转印：半干转印
1.3 斑点印迹/狭缝印迹：真空过滤法
1.4 Spot印迹：手工点样法
1.5 封闭试剂的优化
1.6 膜干燥方法
1.7 创新方法：间接印迹以避免二抗的非特异性结合
2 蛋白观察的操作
41
2.1 通过透照法观察
2.2 通过可逆染色观察
这本手册代表了我们应用科 学家的集体经验和智慧—— 正是他们一直积极参与推进 蛋白印迹和检测技术。这本 手册也包含了我们技术服务 专家团队所提供的许多最常 见的建议，世界各地的科学 家常常联系他们寻求帮助。
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近四十年来，默克密理博一直是转印膜的领 先供应商。1975年，E.M. Southern使用这些膜 首次创建了从琼脂糖凝胶上转移核酸1。第一 款 用 于 Western印 迹 的 0.45μm-PVDF基 质 ， Immobilon®-P膜，在1985年面市，而第一款 用于蛋白印迹和测序的0.2μm-PVDF基质， Immobilon®-PSQ膜，在1988年面市。
除了Immobilon®膜和试剂，默克密理博还为 蛋白研究提供了广泛的其它工具，包括温和 高效的蛋白提取试剂盒，通过PureProteome™ 磁珠快速分离蛋白，以及通过Amicon®-Ultra 离心超滤管高效浓缩除盐。
从何处获得更多信息 如果您有问题或需要协助，请联系默克密理 博的技术服务专家团队： 电话：400-889-1988-2分机 邮箱：asiatechserv@
默克密理博生命科学部
蛋白印迹技术手册（第六版）
• 基本原理 • 操作详解
• 经验技巧 • 疑难解答
• 常用工具
密理博(Millipore®)公司成立于1954年，总部位于美国麻 省，主要生产膜及以膜为核心的衍生产品。2010年默克 集团成功并购密理博公司，成立了新的具有强大创新能 力默克密理博部门，为全球生命科学用户提供更加有效 的解决方案和完整的产品线。膜的传奇还在继续……
亲水性PVDF膜 —— 蛋白结合最低的膜
• MultiScreen® 96孔板：用于完整细胞/细胞部分受体结合分析， 蛋白激酶/磷酸酶沉淀分析，珠子/树脂形式分析，新生儿 （苯丙酮尿症）筛查（cat#MSHVN4550）
• MultiScreen® 96孔板：通过临床诊断应用验证，用于蛋白激酶/ 磷酸酶分析、样品制备、末端染料去除（测序用）（cat#MAHVN4550）
66
实例分析与建议
68
专家之选——Western Blotting常用工具
74
2
简介
自 1979年 被 建 立 以 来 （ Towbin等 ， 1979）蛋白印迹已成为研究型实验室的 一种常规方法。它通常用于检测复杂样 品中的少量目的蛋白，或监控蛋白表达 与纯化。最简单的蛋白印迹操作被称为 斑点印迹或狭缝印迹，是用真空抽滤将 蛋白转移到一块微孔膜上。尽管这种方 法可提供蛋白整体表达水平的定量信 息，并可以平行开展多个样品的检测， 但它缺乏蛋白分子量的信息。同时特异 性也会受影响，因为蛋白降解产物或翻 译后修饰的异构体也能随着完整蛋白一 起被检测。
PES超滤膜 —— 孔结构松弛，适合浓度/粘度高的样品
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PET（聚乙烯对苯二酸酯）膜：用于贴壁细胞的生长，无需胞外基质
• Millicell® PET悬挂式细胞培养小室（cat#PIHT12R48，cat#PIRP12R48，cat#PIEP12R48）
• Amicon® Ultra系列超滤管（cat# UFC901096等） • Amicon® Pro纯化超滤管：1mg以内蛋白样品操作新标准工具 新！ • D-tube™系列透析管：温和换液、浓缩、电洗脱 • Microcon® 系列超滤管：DNA、蛋白浓缩；法医刑侦专用 • Centricon® Plus-70系列超滤管：15-70mL样品浓缩 • Stirred Cell系列超滤杯：3-400mL高浓度样品温和浓缩，可换膜
Millipore Express® PLUS PES膜 —— 过滤速度最快
• Millex®针头式过滤器：处理体积～200mL，直径33mm 规格系列最常用（cat# SLGP033RB等）
• Steri ip®过滤器：处理体积50mL • Stericup®/Steritop®过滤器：处理体积150mL-1L （cat#SCGPT05RE，cat#SCGPT10RE，cat#SCGPU05RE） • Sterivex®过滤器：处理体积2L（cat#SVGPL10RC） • Stericap®过滤器：处理体积2-10L （cat#SCGPCAPRE） • Steripak®过滤器：处理体积10-20L （cat#SPGPM10RJ，cat#SPGPM20RJ）
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适合150～1000mL培养基过滤、除菌 膜孔径、包装规格齐全 精巧设计带来满意体验 行业领先：最快：Millipore Express® PLUS PES系列
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丽春红
CPTS（酞菁铜四磺酸） 2.3 通过不可逆染色观察
考马斯亮蓝R染料 氨基黑
3 免疫检测的操作
44
3.1 标准的免疫检测方法
3.2 快速的免疫检测方法
3.3 利用SNAP i.d.® 2.0系统进行快速的免疫检测
3.4 高盐溶液清洗以去除顽固的背景
4 剥离膜上抗体的操作
51
4.1 通过加热和去污剂剥离
4.2 通过低pH条件剥离
4.3 利用ReBlot™ Plus Western Blot Recycling Kit剥离
5 蛋白消化的操作
53
5.1 消化膜上蛋白以便进行质谱分析
6 印迹膜保存的操作
54
6.1 印迹膜制备以便长期保存
6
常见问题与改善建议
55
词汇表
参考文献
专利
7
附录
66
经验之谈：从容应对高难度Western Blotting
尝试建立蛋白鉴定的膜
用于染色和免疫检测
通过透照法观察和快速免疫检测
保存 蛋白观察
透照
染色
可逆染料
不可逆染料
4
蛋白鉴定
23
免疫检测
23
标准或快速免疫检测步骤
影响免疫检测的因素
缓冲液
封闭
抗体
清洗
间接印迹
检测底物
显色检测 化学发光检测 荧光检测
多轮杂交Immobilon® PVDF转印膜
质谱分析
29
利用Immobilon® PVDF转印膜进行质谱分析
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