质谱在微生物检验方面的应用
生物质谱技术在微生物学中的应用
生物质谱技术在微生物学中的应用随着现代科技的不断进步，生物学的发展也越来越快速。
其中，生物质谱技术是一种被广泛应用于微生物学领域的高新技术。
它通过对样品中生物大分子如蛋白质、核酸、糖等进行分子解析，提供了微生物领域研究所需的高精度、高通量、高灵敏度、高信息的获得手段，因此在微生物学领域有着广泛的应用。
一、生物质谱技术的基本原理及分类生物质谱技术指用来检测生物样品分子量和结构的一系列物理和化学技术。
生物质谱学包括大量的方法和技术，例如质谱分析、质谱成像等。
质谱分析是基于质谱仪的原理，凭借质量分析仪对分子的质量进行分析，根据分子的质量和质子化程度可以推测分子结构及代谢通路。
质谱成像技术是在分子水平上，对含有多种组分的生物样品进行成像分析。
它利用质谱仪的成像功能，对生物样品进行离子成像，实现在细胞和组织水平上的高分辨率成像。
质谱成像技术不仅可以分析有机化合物、蛋白质和氨基酸等生物分子，还可以发现新的代谢途径、功能基团、化学生物标记物等，成为微生物代谢组学和生物学研究的有力工具。
二、生物质谱技术在微生物代谢组学中的应用微生物代谢组学是在代谢水平上对微生物的全面研究，它是利用各种生物技术单元或方法对微生物的代谢物进行鉴定、分析、识别，从而构建一个完整的微生物代谢物组，进而了解并研究微生物的代谢物谱的整体特点及代谢通路。
在微生物代谢组学领域，生物质谱技术的应用众多，以下列举几种：1.蛋白质谱分析：微生物体内的蛋白质是微生物代谢中最重要的功能性产物之一。
利用生物质谱技术对蛋白质进行分析，不仅可以鉴定新的蛋白质与蛋白复合物，还可以通过拟南芥前体文件夹的生物质谱分析，确定微生物蛋白的后转录修饰。
2. 代谢物质谱分析：微生物代谢产物是微生物代谢组学的重要研究内容，用生物质谱技术对微生物代谢产物进行分析，可以得到微生物的代谢通路和代谢产物谱，精准测定代谢产物的分子式和分子量，加深对微生物代谢的了解。
3. 生物膜成分分析：尤其在酵母细胞中，可以使用生物质谱技术对生物膜结构和成分进行研究，进一步了解细胞内物质运输和信号转导的过程。
质谱分析在生物分子检测中的应用
质谱分析在生物分子检测中的应用质谱分析是一种常见的生物分析方法，广泛应用于生物分子检测和药物研发等领域。
从基础研究到临床诊断，质谱分析都扮演着重要的角色。
本文将介绍质谱分析在生物分子检测中的应用。
一、质谱分析的基本原理质谱分析是利用物质分子的质量谱图对化合物进行分析和鉴定的方法。
质谱分析基于质量谱仪，该仪器能够将分子通过质量分选，并将其转化为电子信号来进行分析。
质谱分析以其高灵敏度、高分辨率和全面性等优势，被广泛应用于生物分子检测领域。
二、质谱分析在生物分子检测中的应用2.1. 质谱分析在蛋白质分析中的应用蛋白质是生物体内功能最为广泛的生物分子之一。
质谱分析在蛋白质分析中发挥了重要作用。
质谱分析法可以利用蛋白质的氨基酸序列信息和质谱图数据来完成蛋白质定性、定量以及结构分析。
如疏水性荧光标记的蛋白质和胜肽通过质谱分析可以快速、高通量地进行定量和比较分析，从而为快速筛选药物靶点提供了方法。
2.2. 质谱分析在代谢物分析中的应用代谢物是生物体内的重要出口分子，帮助人们理解机体的代谢规律，以及对不同病态或药物处理的代谢反应。
质谱分析在代谢物分析中的应用越来越受到研究者的重视。
质谱分析法被广泛应用于代谢物分析中，特别是在代谢产物定量、中草药代谢和毒性测试等领域。
通过质谱分析法去定位并鉴定生物体内的代谢产物并可以为药物的合成和设计提供基础数据，达到了药物研发的目的。
2.3. 质谱分析在核酸分析中的应用核酸在生命体系中有着至关重要的作用。
质谱分析在核酸分析领域中得到了广泛的应用，特别是在核酸鉴定、DNA序列分析、酶促反应等方面。
核酸分析的难度在于分子的紫外吸收测定受到基团的影响，且从合成中的残留物中，或从样品的微量中无法获得足够数量的样品进行分析。
而质谱分析作为一种分析手段，可以将核酸分解为核苷酸，可以用作核酸定量等领域。
2.4. 质谱分析在微生物检测中的应用质谱分析在微生物检测领域中的应用，如细菌鉴定和抗生素靶点筛选等，因其快速、易操作、高效和领先地位而受到了青睐。
质谱在微生物检验方面的应用201512
基质辅助激光解吸电离
三、MALDI Biotyper工作流程
直接涂抹法 (direct transfer ) 单一菌种 (Pure culture)
90-95% 以上的常规样品
涂抹单一菌落于样品盘上
(Single colony on MALDI )Target
可于此制备法得到鉴定结果
加上 1 μl 基质溶液
毛霉属：无匍匐菌丝与假根，囊轴呈鼓槌状
根霉属：有匍匐菌丝与假根，孢囊梗与假根对生，囊轴呈 雨伞状
m/z 4364,33 5095,82 5380,39 6255,39 6315,19 6410,60 7157,74 7273,45 7871,06 8368,76
5380.64
6315.49
6254.64
7870.62
1000
0 4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500 8000
谁 把 你 的 长 发 盘 起
谁 安 慰 爱 哭 的 你
谁 娶 了 多 愁 善 感 的 你
烟曲霉
土曲霉的“莫西干发型”
茄病镰刀菌 菌落颜色 大分生孢子 小分生孢子 瓶梗类型 厚壁孢子 大分生孢子 白、浅黄、淡兰 较多，粗壮 假头状着生 简单瓶梗，瓶梗 较长 有
串珠镰刀菌 浅紫、淡粉、白 较少，披针形， 细长 串状，假头状着 生 简单瓶梗 无
Who are you?!
理 数 微 生 物 显 示 很 少 的 形 态 学 特 征 ！
• • • • • • •
Selective media plating/biochemical tests 生化测试 Pulsed field gel electrophoresis (PFGE)脉冲场凝胶电泳 PCR based detection (several) 基于聚合酶技术的检测方法 Microarrays/FISH hybridization/fluorescence microscopy 核酸探针 RiboPrinter DNA杂交 FT-IR 红外光谱 FAME (fatty acid methyl ester) GC-MS细胞脂肪酸甲基酯
质谱技术及其在临床微生物鉴定中的应用
确 率 分 别 为 ９７．４％、７９％和 ７８．６％。Ｓｅｎｇ等 也 报 道 了 对 ＭＡ『 ＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ和 Ｖｉｔｅｋ２两 种 微 生 物 鉴 定 系 统 进 行 比 对 的 结 果 ，对 １６６０株 临 床 分 离 的 细 菌 进 行 检 测 ，其 中 的 ９５＿４％被 ＭＡＩ ＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ准确 鉴 定 。两 个 实 验 室 的研 究 表 明基 于 ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ鉴 定 微 生 物 的 方 法 具 有 很 高 的准 确性。ｌＪａ Ｓｃｏｌａ等建立 了基于 ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ鉴定血培养 阳性 的致病菌方法。首先通过连续 离心 的方法获得血培养 阳性 培养瓶 中的致病菌 ，然后致病 菌被 甲酸水解后再经离 心处 理 ，所 得 上 清 进行 ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ方 法 鉴 定 。用 此 方 法检测 了 ５６２例血培养 阳性 的致病 菌 ，准确 鉴定率 达到 ７６％。Ｅｉｇｎｅｒ等 应 用 ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ的方 法 检 测 了 １ １ １６株 从 实 验 室 分 离 的细 菌 和 １０８株来 自美 国 菌种 保 藏 中心 的 参 考 菌 株 。结 果显 示 准 确 鉴定 １０１株 参 考 菌株 和 １０６２株 实验 室 分 离的 细菌 ： ２．２ ＥＳＩ ＭＳ Ｘｉａｎｇ等 应 用 ＥＳＩ串 联 质 谱 法 检 测 了 大 肠 杆 菌的裂解液 ，找出了菌种特征峰。Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ等报告了不 经过分离直接分析完整细菌的 ＥＳＩ ＭＳ方法 ，鉴定 了 ２种大 肠杆 菌 、２种芽 胞 杆 菌 和 １种 侧 胞 短芽 胞杆 菌 共 ５种 菌株 。 新 发 展 的 解 吸 电喷 雾 （ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｅｌｅｅｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ，ＤＥ— ｓＩ）质 谱 法 通 过 电喷 雾 产 生 的 带 电 液滴 直 接 打 到 凝 聚 态 的 样 品表面 ，使吸附在表面的被分析物受到带 电离子的撞击 从表面解吸出来并被 电离 ，进入质 量分 析器被分析 。Ｓｏｎｇ 等报道基于 ＤＥＳ１ ＭＳ的方法成功鉴定 了枯草芽孢杆菌 ，分 析 时 间 不 到 两 分钟 。
质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用
《质谱技术在微生物鉴定和检测中的应用》摘要：质谱技术（Mass Spectrometry， MS）是一种根据离子产生的质量图谱来确定样品中分子组成的分析技术。
质谱法不仅可以对传统的目标分析物进行定性和定量分析，还可以用于细菌的快速准确鉴定。
基质辅助激光解吸电离飞行时间（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Time of Flight， MALDI-TOF）质谱仪由于能快速准确地鉴定革兰氏阴性菌和阳性菌的种类，因此是生物学中最常用的质谱仪之一。
质谱法鉴定微生物是以鉴定每个物种的特征光谱为基础的，然后与仪器内的大型数据库进行匹配。
本综述阐述了细菌鉴定面临的挑战和机遇，特别是在微生物学领域中使用MALDI-TOF MS来鉴定微生物和分析抗菌药敏感性。
关键词：质谱技术;MALDI-TOF;特征光谱;细菌鉴定;抗菌药敏感试验质谱（MS）法通过分析电离分子的质荷比（m/z）来对分子进行定性定量分析。
质谱仪扫描的特征图谱可以确定样品内不同分子的组成，并且能够直接分析任何可电离的生物分子。
FENN[1]和TANAKA[2]在MS的基础上，分别建立了电喷雾电离（Electrospray Ionization，ESI）技术和基质辅助激光解吸电离（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization，MALDI）技术。
MALDI最大的优势在于不需要复杂的预分析，就可以直接对样品与化学基质混合后产生的离子进行分析。
离子飞行时间（TOF）是指用探测器精确测量离子到达飞行管末端所花费的时间。
基质辅助激光解吸电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱技术是将MALDI技术和TOF技术整合在一起的一种技术。
自从关于MALDI-TOF技术的构想诞生以来，因其快速、高通量、低成本和高效的优点，该技术已经彻底改变了微生物实验室中鉴定微生物的方法。
MALDI-TOF MS的主要优点之一是节省时间，因为细菌鉴定不再需要经过24～48 h，只需不到一小时即可完成。
质谱仪在微生物中的应用及标准化操作
质谱仪在微生物中的应用及标准化操作
质谱仪在微生物中的应用及标准化操作如下：
质谱仪在微生物鉴定中具有重要作用。
微生物鉴定是临床诊断的重要环节，传统的生化原理检测方法流程复杂且能鉴别的种类有限。
相比之下，质谱技术凭借高通量、快速性、准确性和特异性等优点，在微生物检验方面的应用越来越多。
在质谱技术应用过程中，微生物样本和基质置于靶板上，两者混合干燥后形成晶体。
当紫外激光脉冲作用于晶体时，基质受到激发从固相转为气相，微生物蛋白和基质分子从靶板表面被喷射出去（解吸），质子从基质转移到蛋白（电离），使带正电荷的气相蛋白在静电场高电压作用下加速进入飞行管。
进入飞行管后，离子就以一定的速度飞向离子检测器，该速度取决于它们的“质核比”。
低“质核比”的小离子先到达，随后是“质核比”稍高的大分子。
用离子检测器可以检测每个离子的飞行时间，“质核比”可以计算出来，进而产生质谱图。
质谱图上显示的“质核比”数值在x轴上，信号强度在y轴上，因此已知m/z的越高丰度的蛋白会在质谱图上产生越高的峰。
通过该微生物全部蛋白质所构成的图形与数据库进行比对，从而完成微生物的鉴定。
此外，基质分子所吸收的能量可以使结晶体出现电离反应，并生成不同质荷比的带电离子。
样品离子可以在加速电场的作用下获得相同功能，经由高压加速处理及聚焦处理以后，研究者可以在样品离子进入时间质谱分析器以后进行质量分析。
就质谱技术的实施情况而言，离子的质荷比与飞行时间的平方之间具有正比例关系，相关人员在绘制质量图谱以后请确定的特异性图谱的软件分析比较可以为目标微生物菌种及菌株的区分提供帮助。
质谱技术在检验医学领域的应用
质谱技术在检验医学领域的应用在现代医学的发展进程中，检验医学扮演着至关重要的角色。
它为疾病的诊断、治疗和预防提供了关键的依据和指导。
而在众多的检验技术中，质谱技术犹如一颗璀璨的新星，逐渐展现出其独特的优势和广阔的应用前景。
质谱技术，简单来说，就是一种通过测量物质的质量和电荷比来确定其分子结构和组成的分析技术。
它具有高灵敏度、高特异性、高准确性等特点，能够对生物样本中的微量物质进行精准检测。
在临床生化检验方面，质谱技术为我们带来了更精准的检测结果。
传统的生化检测方法，如比色法、酶法等，在某些情况下可能会受到干扰，导致检测结果出现偏差。
而质谱技术能够直接对目标物质进行检测，避免了其他物质的干扰，从而大大提高了检测的准确性。
例如，对于一些小分子代谢物，如氨基酸、脂肪酸等，质谱技术可以实现对其快速、准确的定量分析。
这对于诊断某些遗传代谢性疾病，如苯丙酮尿症、枫糖尿症等，具有重要的意义。
通过检测患者血液或尿液中这些代谢物的含量变化，医生可以及时做出诊断，并制定相应的治疗方案。
在临床免疫学检验中，质谱技术也发挥着重要作用。
免疫分析方法常用于检测蛋白质、激素等生物大分子，但传统方法可能存在交叉反应等问题，影响检测结果的特异性。
质谱技术可以对蛋白质进行精确的分子量测定和肽段序列分析，从而更准确地鉴定和定量蛋白质。
例如，在肿瘤标志物的检测中，质谱技术能够检测到低浓度的肿瘤标志物，并且可以区分不同形式的标志物，为肿瘤的早期诊断和治疗监测提供更有价值的信息。
在微生物检验领域，质谱技术的应用更是为临床带来了革命性的改变。
传统的微生物鉴定方法通常需要较长的时间，而且准确性有限。
而基于质谱技术的微生物质谱分析系统，可以在短时间内对细菌、真菌等微生物进行快速鉴定。
其原理是通过对微生物的蛋白质指纹图谱进行分析，与数据库中的已知图谱进行比对，从而确定微生物的种类。
这不仅大大缩短了检测时间，提高了检测效率，而且能够准确鉴定一些难以通过传统方法鉴定的微生物，为临床抗感染治疗提供及时的指导。
谈一谈质谱技术在临床微生物检测中的应用
谈一谈质谱技术在临床微生物检测中的应用随着医疗技术水平的不断进步，临床检验中引入了越来越多的高新技术，质谱技术就是其中之一，其主要是一种对蛋白质进行分析的较为强大的工具，其存在高通量、快速准确、自动化、操作简便等优点，所以在临床的微生物检验中应用较为广泛，在鉴定病原体方面具有显著效果。
这一技术从出现到发展对传统检验模式进行了挑战，令检验的实效性和灵敏度得以提升。
因此，为帮助病人们进行了解，下面就来介绍一下质谱技术在临床微生物检测中的主要应用。
一、质谱技术的原理和优点质谱技术的主要工作原理是把基质和样品进行混合，而后将其点在相应的金属靶盘上，构成一个共结晶，而后将激光当做能量的来源对结晶体进行辐射，此时基质分子会对能量进行吸收，令样品开始吸附，而后发生电离反应，形成质荷比不同的带电离子。
而样品离子处于加速的电场下，可以产生相同的动能，而后经过高压的加速和聚焦，进入到飞行时间的质谱分析器中，完成质量分析的操作。
其中，飞行时间的平方和离子质荷比呈现正相关的关系，通过计算机的处理，可以形成质量图谱，经过相关的软件进行分析和比较，可以筛选以及确定特异性的图谱，进而鉴定或者区分菌株以及微生物。
现今的临床微生物实验中，在鉴定细菌方面大都依靠传统生化反应以及形态学技术等，在鉴定细菌方面也需首先进分离纯化，就算利用相关的自动化鉴定仪，也需保证时效性的要求，特别是在检测菌血症这类重症感染的过程中。
而质谱技术一般不要求样品纯度，所以样品检测过程中可以不进分离和纯化，可以进行直接的点样。
该方式的操作较为简便，还可不断扩展数据库，所以可准确且快速地完成检测，还可保证高通量。
二、质谱技术在临床微生物检测中的应用就现今的情况来看，质谱技术现已被广泛应用于临床微生物检测中，主要检测的菌种包括霉菌、酵母菌、分枝杆菌、厌氧菌、需氧菌、革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌等。
1、鉴定及分析细菌质谱技术可对多种细菌进行充分分析，其中，检测的样本既可为进分离培养的一些纯菌落，同样也可为原始的临床样本，其可以被直接用来检测。
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质谱图:多数为核糖体蛋白(ribosomal proteins) 信号
Intens. [a.u.]
4364.06
ribosomal Protein m/z
5000
RL36
4364,33
6315.49 6254.64
5380.64
RS32
• MALDI-TOF 微生物特征蛋白指纹图谱分析
20世纪80年代，基质辅助激光解析电离技 术(MALDI)的发明使得质谱能够检测生物大 分子
Fox, A ed. 1990. Analytical microbiology methods: chromatography and mass spectrometry.
皮肤、眼、肺部 感染，角膜炎， 耳炎等, 也是外耳 道炎常见菌之一
可引起肺部、皮肤、眼 等感染
壳细胞
足细胞
烟 曲 霉
谁谁谁谁
为把安娶
你你慰了
做的爱多
的长哭愁
嫁发的善
衣盘你感
起
的
你
烟曲霉
土曲霉的“莫西干发型”
菌落颜色 大分生孢子 小分生孢子 瓶梗类型 厚壁孢子 大分生孢子
茄病镰刀菌 白、浅黄、淡兰 较多，粗壮
A 土曲霉 B 黄曲霉 C 镰刀菌 D 青霉菌
男，21岁，大学生，主因 “胸痛两周，发热4天, 咯血1天。体温最高39.5℃伴 畏寒“ 就诊。住院检查：WBC: 14 ×109 /L , 中性：84%。6个月前诊断溃疡 性结肠炎，糖激素治疗6个月（强的松50mg/d，逐渐减量）万古霉素、头孢 米诺、阿奇霉素、拜复乐治疗无效。支气管肺泡灌洗液培养48小时菌落和镜
最重要的临床环境菌， 确诊需谨慎。常见实验 室污染菌之一。
黄曲 霉
黄色 有放射 沟纹
球形\ 近球形
双层或单层，第一 层长，放射状，布 满顶囊表面。
孢子梗粗糙
过敏性支气管肺曲霉病 主要病原之一，可产真 菌毒素，如黄曲霉素
黑曲 霉
白→黄→ 黑，菌落 背面白色
土曲 霉
淡褐色 /褐色、 肉桂色
球形\ 近球形
基质辅助激光解吸电离
三、MALDI Biotyper工作流程
直接涂抹法 (direct transfer ) 单一菌种 (Pure culture)
涂抹单一菌落于样品盘上
(Single colony on MALDI )Target
90-95% 以上的常规样品 可于此制备法得到鉴定结果
加上 1 μl 基质溶液
下
理想很丰满，现实很骨感…
Wh 数 微 生 物 显 示 很 少 的 形 态 学 特 征 ！
• Selective media plating/biochemical tests 生化测试 • Pulsed field gel electrophoresis (PFGE)脉冲场凝胶电泳 • PCR based detection (several) 基于聚合酶技术的检测方法 • Microarrays/FISH hybridization/fluorescence microscopy 核酸探针 • RiboPrinter DNA杂交 • FT-IR 红外光谱 • FAME (fatty acid methyl ester) GC-MS细胞脂肪酸甲基酯
镜下 菌落
治疗
尖端赛多孢(独生子女) 分赛多型和粘束孢型，可以耐受放线菌酮 有性期：波氏阿利什菌，不能耐受放线菌 酮 环痕孢子多以单个存在，分生孢子梗细长 白色至灰色羊毛样
对伊曲康唑有一定活性，伏立康唑，、泊 沙康唑、卡泊芬净有活性，对AMB耐药
多育赛多孢（多产多耐） 无有性阶段及粘束孢阶段，不能耐受放 线菌酮
对疑难菌鉴定优于生化法，即使不能鉴定 到种，大多数能鉴定到属水平
一些草绿色链球菌易被鉴定为肺炎链球菌，需要加以OP试验或胆汁溶 菌试验。最近一项全面评价试验表明，与OP敏感试验（约有4-11%遗 漏）相比，胆汁溶解试验显示出良好的灵敏性与特异性—Manual of Clinical Microbiology_11th
菌落形态相似的奈瑟菌，质谱鉴定完胜。无条件者可用超触酶试验加以区别。
100%淋病奈瑟菌+
卡他布兰汉+
JCM2012: Bruker MS能鉴定绝大多数奴卡
NTM除MTB复合群和麻风风枝 杆菌之外的分枝杆菌，有154种， 13亚种。大多数NTM对常用的抗
分枝杆菌药物均耐药，
生物安全防护水平3级BSL-3!需加热灭活！
微生物鉴定（纯菌种的鉴定和标本直接鉴 定）
菌种分型
细菌耐药分析
Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014, 33(3):337-46. J Clin Microbiol. 2013,51(7):2225-31.
对常见细菌鉴定快速准确
对干燥、细小菌落鉴定表现出色
- 白色、干燥、短 粗糙细长真菌
绒状，有同心圈， 丝和关节孢子，
边缘放射状
关节孢子一角
可有芽管生出，
无芽生孢子
环痕分生孢 子 环痕分生孢子
芽生孢子 关节孢子
真菌丝
假菌丝
芽生裂殖菌、毛孢子菌、念珠地丝菌鉴别 （感谢东科老师、邹老师提供的图片）
以菌落形态与镜检特征为主要依据 根据真菌内转录间隔区（internal transcribed spacer， ITS）基因测序 丝状真菌质谱鉴定仍然比较困难，主要因为培养条件和蛋白质的提取
Description highly probable species identification
完全可靠地鉴定到种的水平
secure genus identification, probable species identification 鉴定到种的水平
probable genus identification
伏立康唑、伊曲康唑、AMB
条件致病菌，常见于免疫低下及慢性 消耗性疾病患者。临床常见眼眶及中 枢神经系统感染，也可见于播散性全 身感染，预后差
AMB、泊沙康唑、伊曲康唑（效果不 如前二者）
G\GM 阳性 试验
阴性
分生孢子梗茎
菌名
烟曲 霉
菌落 绿/深绿
顶囊
小梗
烧瓶状 单层，顶囊上部， 栅栏状
临床疾病
6410.90
1000
0 4000
4500
5000
5500
6000
6500
7000
7500
8000
m/z
步骤 3:数据库比对
绿色线条代表完全吻合的峰， 黄色线条表示在较宽边缘吻合， 红色线条表示在范围内没有吻合， 表格给出了评估和排序的结果。
Range 2.300 ... 3.000 2.000 ... 2.299 1.700 ... 1.999 0.000 ... 1.699
双层，第一层长， 并列柱状、放射状， 密生于顶囊全部表 面，形似“黑瞳”
半球形
双层，占顶囊2/3， 放射状，类似“莫 西干发型”
构巢 绿色
半球形 双层，顶囊上半部，
曲霉 暗绿色
放射状。小梗短弯 曲，易见足细胞，
较多壳细胞，可见
闭囊壳。
五种常见致病性曲霉菌的比较（图片资料来自已出版书籍及网络）
肺曲霉球中最常见，也 是引起外耳道炎最常见 的曲霉菌。常见实验室 污染菌之一。
咽拭子标本的停乳链，做与不做？
以前称营养缺陷链球菌，细菌难
培养，血平板需添加半胱氨酸和 吡哆醛，CO2或者厌氧环境下生 长，有些种初生代能在血平板上 生长。
光滑湿润、透明/半透明、露滴状 H. Influenzae
粗糙干燥微黄 H.parainfluenzae
菌落形态相似的嗜血杆菌，质谱快速鉴定，优势凸显。常规鉴定需注意区分。
5095,82
RL34
5380,39
RL33meth.
6255,39
4000
RL32Βιβλιοθήκη 6315,19RL30
6410,60
RL35
7157,74
RL29
7273,45
3000
RL31
7871,06
RS21
8368,76
5096.01
2000
7157.65 7273.87 7870.62 8368.99
- 头状芽生裂 白色或黄棕色、 有出芽酵母、
殖菌（头状 奶油状或干燥、 真菌丝、关节 地丝菌） 可有短绒，有同 孢子和环痕分
心圈，边缘放射 生孢子 状
+ 毛孢子菌属 酵母样，白色至 具关节孢子、 奶油色，中央突 芽生孢子、真 起，放射状或脑 /假菌丝
回状，有些质地 较硬不易乳化
念珠地丝菌 （地霉菌）
方法难以标准化 最近有研究对Broker Daltonik霉菌数据库进行验证，选则厂家推荐的
操作方法、丝状真菌鉴定软件(the Filamentous Fungi Library 1．0)以及 判断标准，丝状真菌属及种的鉴定率分别为78．3％及54．2％
曲霉菌
毛霉菌
属别 子囊菌门散囊菌目
接合菌门毛霉目
毛霉属：无匍匐菌丝与假根，囊轴呈鼓槌状
根霉属：有匍匐菌丝与假根，孢囊梗与假根对生，囊轴呈 雨伞状
囊轴和囊领
根毛霉属：有匍匐菌丝与假根，孢囊梗与假根不对生，囊轴呈 鼓槌状
小克银汉霉属：偶见匍匐菌丝，假根指状分枝，孢囊梗末端形成肿 大囊泡，表面有排列成球形齿轮状孢子囊
s
囊轴和囊领
七布鲁氏菌
柯氏染色方法：革兰4液加热至冒烟2分钟，冲洗，抗酸3液1分钟。
柯氏染色 Bruker MS 数据库不包括布鲁氏菌，生物安全手册亦不推荐在二级实验室用 全自动仪器鉴定（推荐柯氏染色和快速尿酶试验、血清凝集、接触史）