显微镜荧光波长详解
500nm 波长
500nm波长
500nm波长是指在可见光谱中，光线的波长为500纳米。
可见光谱是指人眼能够看到的电磁波的一部分，其波长范围从400纳米到700纳米。
在可见光谱中，500nm波长的光线属于绿色波段，是人眼能够感知的颜色之一。
500nm波长的光线在生物荧光显微镜、显微镜和激光器等应用中具有重要的作用。
在生物荧光显微镜中，500nm 波长的光线可以穿透生物组织，并激发荧光染料，从而提供高对比度的图像。
在显微镜中，500nm波长的光线可以提供清晰的图像，并且不会对样品产生破坏。
在激光器中，500nm波长的激光器可以产生高能量的激光束，用于材料加工、医疗美容和科学研究等领域。
此外，500nm波长的光线还可以用于显微分析、光学传感器和光存储等领域。
在显微分析中，500nm波长的光线可以提供高分辨率的图像，并且可以通过选择适当的偏振方式来增强图像对比度。
在光学传感器中，500nm波长的光线可以与特定的化学物质发生共振，并且可以用于检测污染物和化学成分等。
在光存储中，500nm波长的光线可以用于记录和读取数字信息。
总之，500nm波长的光线在生物荧光显微镜、显微镜、激光器、显微分析、光学传感器和光存储等领域都有
广泛的应用。
荧光波长以及颜色
荧光波长以及颜色
荧光波长是指物体吸收光能后所发射的光的波长范围。
不同物质的荧光波长范围各不相同，因此发出的颜色也会有所差异。
常见的荧光颜色包括：
1. 绿色：荧光绿的波长范围大约在500-570纳米之间。
2. 蓝色：荧光蓝的波长范围大约在440-490纳米之间。
3. 红色：荧光红的波长范围大约在570-650纳米之间。
除了这些基本颜色，还有许多其他的荧光颜色，如黄色、橙色、紫色等，其波长范围会有所差异。
需要注意的是，荧光颜色的产生是由物质的性质决定的，不同的物质在吸收和发射光能时会有不同的波长范围和颜色。
显微镜荧光波长详解
⏹人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492～455nm紫色455～350nm⏹常见显微镜滤光片的波长在激发波长在Ex围才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2AEx 510-560DM 575BA 590绿色滤光片B-2AEx 450-490DM 505BA 520蓝色滤光片UV-2AEx 330-380DM 400BA 420其它荧光染料介绍【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。
Cy2和FITC使用相同的滤波片。
由于Cy2比FITC在光下更稳定。
要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。
Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。
Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射光为570nm。
因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯(546nm)下则约75％。
Cy3可以和荧光素一起作双标。
Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。
Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。
在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。
Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。
由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。
通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。
在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。
invitrogen qubit荧光波长
invitrogen qubit荧光波长
【原创实用版】
目录
1.概述
2.Invitrogen QuBit 的荧光波长
3.应用领域
4.结论
正文
1.概述
Invitrogen QuBit 是一种用于生物科学研究的荧光探针。
这种探针具有高度灵敏和快速成熟的特点，使其成为生物实验的理想选择。
荧光波长是衡量荧光探针性能的重要参数之一。
2.Invitrogen QuBit 的荧光波长
Invitrogen QuBit 的荧光波长通常在 350-750 纳米范围内。
具体波长取决于所使用的荧光染料。
例如，如果使用 Alexa Fluor 488，那么荧光波长将为 488 纳米。
同样，如果使用 Orange Fluorescent Protein (mCherry)，那么荧光波长将为 610 纳米。
3.应用领域
Invitrogen QuBit 广泛用于生物科学研究，包括细胞生物学、生物化学、药物筛选、基因编辑等。
荧光波长的选择取决于实验的需要和所研究的分子。
例如，如果研究细胞内蛋白质的位置，可以使用荧光染料标记蛋白质，并通过荧光显微镜观察蛋白质的位置。
在这种情况下，荧光波长的选择将取决于蛋白质的表达和荧光染料的可用性。
4.结论
总的来说，Invitrogen QuBit 是一种非常有用的荧光探针，其荧光波长范围广泛，可以根据实验需要进行选择。
liz荧光波长
liz荧光波长
摘要：
1.荧光波长的概念
2.荧光波长的应用
3.荧光波长的测量方法
4.荧光波长的发展趋势
正文：
荧光波长是指在荧光现象中，荧光物质发射出的光的波长。
荧光是一种物理现象，当物质受到外部能量激发后，内部的电子或原子处于激发态，必须释放出能量才能回到基态，这个过程就会产生荧光。
荧光波长通常与激发光源的波长有关，但也受到荧光物质的性质和环境的影响。
荧光波长在许多领域都有应用，如生物学、化学、环境科学等。
在生物学中，荧光波长被用于标记生物分子，如蛋白质和核酸，以便于研究其功能和运动。
在化学中，荧光波长可以用于检测和测量化学物质的浓度。
在环境科学中，荧光波长可以用于监测水体中的有机污染物。
荧光波长的测量方法通常使用荧光光谱仪。
荧光光谱仪通过测量荧光物质在特定波长下的发光强度，来确定荧光波长。
此外，也可以通过测量荧光物质的激发波长和发射波长来确定荧光波长。
随着科技的发展，荧光波长的应用领域将会越来越广泛。
例如，在医学领域，荧光波长可以用于癌症的早期诊断和治疗。
在能源领域，荧光波长可以用于提高太阳能电池的效率。
在环境领域，荧光波长可以用于监测和防止水污
染。
总的来说，荧光波长是一个重要的科学概念，其在多个领域都有广泛的应用。
罗丹明b激发波长和发射波长
罗丹明b激发波长和发射波长
罗丹明B激发波长和发射波长
罗丹明B是一种广泛应用于细胞荧光显微镜技术的荧光染料，其激发
波长和发射波长是控制荧光显微成像的关键。
激发波长
罗丹明B的激发波长为约555纳米，也就是在这一波长的光照射下，
罗丹明B分子就会被激发并发出亮丽的荧光信号。
这一波长的光通常
由荧光显微镜中的汞弧灯或激光发生器产生，可以对荧光分子进行激发。
通过改变激发波长，可以控制荧光显微镜的成像深度和分辨率。
例如，在使用罗丹明B染色的活体细胞成像中，较短的激发波长可以提供更
好的空间分辨率，但也会导致较深的成像深度。
而较长的激发波长则
可以深入细胞组织成像，但分辨率会降低。
发射波长
罗丹明B的发射波长为约620纳米，也就是它在受到激发后发出的亮
丽荧光信号的波长。
这一波长的荧光信号可以被荧光显微镜中的荧光
探测器捕获和记录。
通过选择合适的发射滤光片，可以对罗丹明B的荧光信号进行进一步的筛选，以提高图像质量和信噪比。
使用较窄的发射滤光片可以减少背景噪声，提高信号的特异性。
结语
在现代细胞学和神经科学研究中，罗丹明B已成为了极其广泛的荧光染料，它的激发波长和发射波长的选择与调整对于成像质量和空间分辨率的提高至关重要。
同时，罗丹明B也为荧光显微成像的高效应用提供了正确而有力的技术支持。
荧光显微镜详解
森林生物工程 黄雅婷
目录
一、荧光显微镜成像原理 二、荧光显微镜的优点及应用 三、荧光显微镜的基本构造 四、荧光显微镜的使用 五、使用荧光显微镜注意事项 六、荧光镜检样品的制作注意事项 七、荧光强度计算
2020/9/23
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一、荧光显微镜成像原理
某些物质在一定短波长的光(如紫 外光等)的照射下吸收光能进入激发态， 从激发态回到基态时, 就能在极短的时 间内放射出比照射光波长更长的光(可 见光)，这种光就称为荧光。
荧光显微镜是利用一个高发光效
率的点光源，经过滤色系统发出一定 波长的光作为激发光，激发标本内的 荧光物质发射出各种不同颜色的荧光 后，再通过物镜和目镜的放大进行观 察。
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二、荧光显微镜的优点及应用
优点：
1.检出能力高，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高（放大作用） 2.对细胞的刺激小（可以活体染色） 3.能进行多重染色等
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六、荧光镜检样品的制作注意事项
1. 不能使用本身能产生荧光的药剂 2. 切片标本不能太厚 3. 因石蜡可产生青色荧光，采用石蜡制片时，脱蜡必须 彻底。切片进入水后，应充分水洗，再经荧光染料处理。 4. 最好采用萤石玻璃制成的载玻片、盖玻片。 5. 封片时可采用甘油等无荧光的封固剂。
３、检测时间每次以1h为宜，超过90min，高压汞灯发光强度逐 渐下降，荧光减弱，标本经激发15min后，荧光亦明显减弱。 标本染色后立刻观察，因存放时间太久，荧光会逐渐猝灭。 可将染好色的标本用黑纸包好，存放在聚乙烯塑料袋中，4℃ 保存，可延缓荧光的猝灭时间。
4、荧光显微镜的激发装置及高压汞灯寿命有限，标本应集中检 查，节省时间
显微镜荧光波长详解
显微镜荧光波长详解人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622nm橙色622~597nm黄色597~577nm绿色577~492nm在激发波长在Ex范围内才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM 才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2AEx510-560DM575BA590绿色滤光片B-2A Ex450-490DM505BA520蓝色滤光片UV-2A Ex330-380DM400BA420Cy2Cy2比在染色耦联基团可使用和Cy375％。
Cy3波长最大(633nm)为63，Cy5很长为发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【AminomethylcoumarinAcetate(AMCA)】耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。
对于荧光显微镜来说，AMCA可以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。
由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用AMCA。
AMCA 和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。
AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。
且由于肉眼不能很好的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。
如果使用在流式细胞仪中，AMCA 可以用汞灯或者水冷却的氩光灯激发，因为它们发出的光线是在光谱的紫外区。
注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。
另外，多标记中对探针色彩区分程度的要求。
例如，若丹明红-X(RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。
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人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492～455nm紫色455～350nm⏹常见显微镜滤光片的波长在激发波长在Ex范围内才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2AEx 510-560DM 575BA 590绿色滤光片B-2AEx 450-490DM 505BA 520蓝色滤光片UV-2AEx 330-380DM 400BA 420⏹其它荧光染料介绍【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2,?Cy3,?Cy5)】Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。
Cy2和FITC使用相同的滤波片。
由于Cy2比FITC在光下更稳定。
要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。
Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。
Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射光为570nm。
因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯(546nm)下则约75％。
Cy3可以和荧光素一起作双标。
Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。
Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。
在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。
Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。
由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。
通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。
在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。
使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光能，吸收后转化成能量，供其发育生长。
当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能转移光能。
藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长为574nm。
藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)】耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。
对于荧光显微镜来说，AMCA可以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。
由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用AMCA。
AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。
AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。
且由于肉眼不能很好的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。
如果使用在流式细胞仪中，AMCA可以用汞灯或者水冷却的氩光灯激发，因为它们发出的光线是在光谱的紫外区。
注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。
另外，多标记中对探针色彩区分程度的要求。
例如，若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。
如果对灵敏度有更高的要求，则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。
西美杰备有全面的二抗现货产品并能提供最完整的二抗产品线。
主要二抗品牌为全球最大的二抗和底物生产厂商KPL以及前沿抗体生产商ProteinTech。
针对荧光标记二抗，有FITC、TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。
The role of filters in epi-fluorescence microscopy在激发波长在Ex范围内才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
As shown in Figure 1, filter blocks are constructed from 2 types of filters and 1 dichroic mirror. Selecting appropriate filters and mirrors for each use allows researchers to attain a high signal to noise (S/N) ratio between the fluorescence and background light. The functions of these optical elements are described below.荧光滤色块组示意图。
每个滤色块组有一个半透半反镜，一个激发光滤光片，两个发射光滤光片。
如前面介绍的，由光源发出的光透过激发光滤光片进入滤色块组，被半透半反镜反射；发射出的荧光透过发射光滤光片进入目镜或相机。
在这一组合中，半透半反镜以及左侧的发射光滤光片是固定在架子上的，而右侧的发射光滤光片则安装在一个可以拆卸的滤片框内。
只要松动螺丝，就可以拆下右侧的滤片框，然后根据需要，更换半透半反镜。
更换时需要注意，不要把固定用的胶水，涂到半透半反镜上，操作要带手套，避免将指纹留在镜面上。
??? 上述体视镜可搭配3各荧光滤色块，以及一个用于明场观察的无滤片块。
观察时，可通过拉动杠杆调节滤色块的位置，每一个滤色块配有不同的标识，便于选择。
Excitation filter (EX)——激发光The excitation filter is the optical element that passes only the wavelength of light necessary for excitation from the excitation light source (usually a mercury lamp) to the fluorophore. As shown in Figure 2, only the excitation wavelength passes through the filter, usually a "band pass filter".Dichroic mirror (DM)The dichroic mirror is the optical element that separates the excitation light from the fluorescence. Dichroic mirrors are special mirrors that reflect only a specific wavelength of light, allowing all other wavelengths to pass through (Figure 3). Dichroic mirrors used in epi-fluorescence microscope filter blocks are placed in a 45° incidence angle to light, creating a "stop band"of reflected light and a "pass band"of transmitted light. Light passing through the excitation filter is reflected 90° toward the objective and the specimen. Finally, light emanating from the specimen is passed through and directed toward the observer (or high-sensitivity camera).Barrier filters (BA) or emission (EM) filtersBarrier filters are optical elements that separate fluorescence emanating from the fluorophore from other background light. As shown in Figure 4, the barrier filter transmits light of the fluorescence wavelength which passes through the dichroic mirror while blocking all other light leaking from the excitation lamp (reflected from the specimen or optical elements). This is necessary because the strength of the fluorescent light is weaker than the excitation light by a factor of more than 100,000:1. Most barrier filters are positioned at a slight angle to allow better fluorescent imaging by suppressing ghost images.Nikon's noise terminatorNikon's epi-fluorescence microscopes have a proprietary Nikon optical element called a "noise terminator" (on models TE2000 and later). As shown in Figure 1, the noise terminator allows efficient processing of light transmitted through the dichroic mirror by preventing the excitation light from scattering within the filter block and leaking into the observed image. This helps to eliminate background light noise and more effective fluorescent images.。