硅胶柱层析技术
硅胶柱层析分离原理
硅胶柱层析分离原理
硅胶柱层析是一种常用的生物化学分离技术，广泛应用于生物医药、生命科学等领域。
其原理是利用硅胶柱对混合物中的化合物进行分离，通过不同化合物在硅胶柱中的吸附、分配、洗脱等过程，实现目标化合物的纯化和分离。
硅胶柱层析的原理基于化合物在硅胶柱中的吸附和分配行为。
硅胶是一种多孔性固体材料，具有较大的比表面积和吸附能力。
当混合物通过硅胶柱时，化合物会根据其性质在硅胶表面吸附或在孔隙中分配。
不同化合物在硅胶表面或孔隙中的吸附速度和程度不同，从而实现了化合物的分离。
在硅胶柱层析过程中，样品首先通过柱顶部加入，随后以流动相的形式通过硅胶柱。
在流动相的作用下，化合物在硅胶柱中分配，并逐渐被洗脱出来。
根据化合物在硅胶柱中的吸附和分配特性，可以通过控制流动相的组成、流速、温度等条件，实现目标化合物的分离和纯化。
硅胶柱层析分离原理的关键在于控制化合物在硅胶柱中的吸附和分配行为。
在实际操作中，需要根据目标化合物的性质和混合物的组成，选择合适的硅胶柱类型、流动相条件等参数，以实现有效的分离和纯化。
除了硅胶柱层析，还有许多其他类型的层析技术，如凝胶层析、离
子交换层析、亲和层析等。
每种层析技术都有其特定的原理和应用领域，可以根据实际需要选择合适的技术进行分离和纯化。
总的来说，硅胶柱层析是一种简单有效的生物化学分离技术，广泛应用于生物医药和生命科学领域。
通过控制化合物在硅胶柱中的吸附和分配行为，可以实现目标化合物的分离和纯化，为后续研究和应用提供纯净的样品。
希望通过本文对硅胶柱层析分离原理的介绍，读者对该技术有更深入的了解，为实验研究提供参考和指导。
硅胶层析原理及操作
硅胶层析原理及操作硅胶层析原理及操作硅胶柱层析原理⼀．硅胶柱层析原理⼀． 硅胶层析法分离原理是根据物质在硅胶上的吸附⼒不同⽽得到分离，极性较⼤的物质与硅胶作⽤强，保留时间长，极性弱的物质与硅胶作⽤弱，保留时间短，物质在固定相与流动相间通过反复的吸附、解吸过程，得以分离。
流动相选择，极性⼩的⽤⼄酸⼄酯/⽯油醚系统；极性较⼤的⽤甲醇/氯仿系统；极性⼤的⽤甲醇/⽔/正丁醇/醋酸系统；如有拖尾，可根据具体情况，加⼊少量氨⽔或冰醋酸操作⽅法硅胶层析操作⽅法⼆．硅胶层析⼆． 1.硅胶量确定。
称取⼀定量的硅胶，根据所要装填的柱⼦体积及上样量来确定（上样量5%以内），极难分的物质，可适当增加硅胶量。
硅胶的密度在0.5-0.6左右，由此可计算出装填⼀定体积的柱⼦需要称取的硅胶质量。
2.制备匀浆。
加⼊⼲硅胶体积⼀倍的溶剂，玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是⽯油醚/⼄酸⼄酯/丙酮体系，就⽤⽯油醚制备匀浆；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就⽤氯仿制备匀浆。
3.装柱。
柱底出⼝关闭，⽆筛板的可⽤棉花替代，加⼊约1/5体积⽯油醚（氯仿），将匀浆⼀次性倾⼊柱⼦中。
然后打开柱⼦底部出⼝，待硅胶床沉降稳定后，关闭出⼝（注意不要使液⾯低于硅胶床）。
4.压实。
沉降完成后，⽤双联球或⽓泵加压，泵⼊洗脱液，直⾄床⾯稳定。
5.上样。
上样后，加⼊洗脱剂洗脱，可将脱脂棉置于硅胶床表⾯。
避免添加流动相时冲坏硅胶表⾯。
6.过柱和收集。
采⽤合适的洗脱液洗脱，根据样品情况可采⽤梯度洗脱。
分离出的样品采⽤分部收集，具体每个馏分的体积可根据实际的分离效果来确定，⼀般情况下以柱体积的10%为⼀个馏分来收集。
7.检测。
使⽤专⽤喷显剂，只使⽤⽤紫外检测，可能会损失⼀些样品，紫外的灵敏度⼀般⽐喷显剂低1-2个数量级。
三．柱层析经验1．柱⼦填装硅胶柱⼦装填，有两种⽅法：即湿法装柱和⼲法装柱。
不论⼲法还是湿法，硅胶（固定相）床的表⾯要平整，柱床径⾼⽐1:10以上，太短塔板数不够，太长会产⽣轴向扩散。
柱层析硅胶
柱层析硅胶
1.原理
柱层析硅胶的原理是根据原理相同的物质在不同条件下移动速度不同的特性，将样品在填充于柱中的硅胶中进行分离。
硅胶作为非极性物质，能够吸附极性物质，不同的硅胶粒度对样品的分离效果均不同。
2.分类
柱层析硅胶根据不同的粒度、孔径及强度，可分为不同的类型。
常见的有：
①L类型：中等孔径（100-200Å），对大多数化合物有良好的分离效果；
3.性质
柱层析硅胶的性质主要包括吸附性、表面积、孔径和粒径等。
其中吸附性越好，分离效果越好，但是也容易出现过度吸附的问题。
硅胶的表面积、孔径和粒径越小，其表面积和孔径比就越大，样品与硅胶的接触面积越大，吸附能力也就越强。
4.注意事项
在柱层析实验中，应注意以下事项：
①硅胶的选择应根据样品的性质和对分离效果的要求来进行。
②实验前要进行柱层析硅胶表面修饰，保证硅胶的表面活性。
③样品在加入前应先进行前处理，如过滤、浓缩或化学修饰等，以保证样品质量。
④严格控制柱层析条件，如移相剂的类型和浓度、流速、温度等，以保证分离效果。
⑤在柱层析后，对分离得到的物质进行鉴定和分析，以判断分离效果。
在实验中，应注意操作安全，避免化学品泼洒和误吸等意外情况的发生。
5.总结。
硅胶柱层析
硅胶柱层析硅胶柱层析技术是一种用于分离和分析分子结构相似或略有不同的有机化合物的有机分离技术。
这种分离技术既可用于混合物的分离纯化，也可用于单组分的准确分析。
硅胶柱层析可以得到高精度的分离分析结果，它与其它分离分析技术相比具有较高的灵敏度，操作方便和分析效率高。
硅胶柱层析分子可以通过两种不同的方式分离：一种是吸附，另一种是偏析。
在吸附过程中，溶质分子被吸附在柱粒子表面上，并且不会溶解，而在偏析过程中，溶质分子会在柱粒子表面上同时进行偏析和均相移动，也就是说，不同结构的分子会以不同的速度移动，从而分离混合物中的分子。
硅胶柱层析过程的主要操作步骤如下：第一步是将硅胶柱放入柱层析装置中；第二步是向硅胶柱中加入待分离分析物；第三步是使用柱层析仪进行柱层析测定，即将分析物在柱中均匀地向下移动；最后一步是收集偏析后的分子产物。
硅胶柱层析技术在有机合成研究和有机分子分析中都有广泛的应用。
它在分离有机混合物、有机废水处理、有机物种鉴定以及其他有机化学应用等方面非常有用。
例如，它可以用于分离混合物中的微量组分；可以用于鉴定相似的有机物；可以用于检测污染物和有毒物质；可以用于分离复杂的有机混合物，如香料中的混合物；还可以用于研究生物分子的三维结构。
此外，硅胶柱层析技术还可以用于食品分析，如可可粉、乳糖、蛋白质分析等，以及药物分析，如抗生素分析、降脂药物分析等。
它甚至可以用于环境分析，如溶解性有机磷、元素烃的分析，在进行环境污染检测中也有重要作用。
硅胶柱层析技术目前已经被广泛应用于各个领域，它具有较高的灵敏度、操作简便、分析效率高以及结果可靠等优点。
硅胶柱层析技术也可以用于大规模分离复杂的物质，这使得它成为有机化学研究中不可或缺的重要技术。
硅胶柱层析
硅胶柱层析一、硅胶柱层析原理根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
二、硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸三、硅胶柱层析惯用方法1.称量200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2.搅成匀浆加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7.检测要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
硅胶柱层析的操作方法及注意事项
硅胶柱层析的操作方法及注意事项硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、结果准确等优点，在化学、生物、医药等领域得到广泛应用。
下面我们来介绍硅胶柱层析的操作方法及注意事项。
1.准备样品及配制溶剂：一般需要将待测物质与适当的溶剂混合，使其溶解度较大，且不产生化学反应。
根据分析目的选用不同的溶剂，以保证分离效果。
2.准备硅胶柱：硅胶柱由无色透明的硅胶胶体组成，直径一般为1-2.5厘米，长约10-40厘米。
硅胶柱层析的分离效果，与柱高、柱径、胶体的大小和分布、溶液的流速等因素有关。
在选择硅胶柱时，应该根据实际需要选用合适的柱径和柱高。
3.测试流速：测试不同流速对分离效果的影响。
测试方法为将流速调节为不同值，测定每个流速下所采集的溶液吸收曲线，最终确定出最佳的流速。
4.样品处理：样品从洗脱液中洗脱出来之后，可以使用各种不同的方法进行处理。
例如可以用过滤膜、离心、深度过滤等方法，来去除样品中的离子、颗粒等。
5.动态洗脱：先在洗脱液用水稀释3-5倍，使液面齐平。
关掉泵阀使得管路只循环搅拌。
将占底部10%的甲醇浸入硅胶柱底部粉末颗粒中，然后打开泵阀。
保持洗脱液的温度和相对湿度稳定，然后逐渐开始动态洗脱。
6.收集洗脱液：可以采用分批收集和连续收集两种方法，最终将洗脱液图谱编制。
1.操作前，务必检查所有设备设施是否完好，液体循环是否通畅，以及所有参数（如气温、流速、洗脱液配比等）是否调整合适。
2.在操作时，不能超量进样，以免产生超过硅胶柱承受能力的负荷。
3.在操作中，应注意洗脱溶液的挥发和流动，以避免水分汽化，在操作过程中，应该密封管路和溶液，防止冷凝积聚。
4.硅胶柱层析法有一定的危险性，提供人员应该具备一定的化学实验经验，同时要持续关注硅胶柱的干燥程度，确定每步操作的效果，以保证精度和安全性。
5.在分析过程中，应注意各种简化重复操作，减少操作依赖，以提高生产效率。
总之，硅胶柱层析法是一种常用的化学分析方法，其操作相对简便，可以大量产生准确的结果，因此在化学、生物、医药等领域都有广泛的应用。
硅胶柱色谱层析 杨列超
The end,thank you!
祝老师同学假期愉快！
• 解决的办法是：第一、硅胶一定要填结实；第二、 一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子 的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也 有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止 添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我的 感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必 要。
• 匀浆法： 搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂 用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙 酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/ 醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明 溶剂中含水量太大，尤其ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ乙酸乙酯/丙酮，如果 不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫 酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过 柱。
• 上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的 样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀 后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子 的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很 平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开 剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性 较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用 胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀 加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较 方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，接着即 用淋洗剂淋洗。
• 淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再 稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同， 即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析 得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大， 所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了 靠扩散作用来分离，效果也不会好。 • 上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶 上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
硅胶柱层析
硅胶柱层析一、硅胶柱层析原理根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
二、硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸三、硅胶柱层析惯用方法1。
称量200—300目硅胶，称30—70倍于上样量;如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以.2.搅成匀浆加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌.如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话,必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1％的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱将柱底用棉花塞紧，不必用海沙,加入约1/3体积石油醚（氯仿）,装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内.随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定.柱床约被压缩至9/10体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步,可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5。
上样干法湿法都可以。
海沙是没必要的.上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面.然后就可以放心地加入大量洗脱剂,而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡.太低的洗脱强度并不好,推荐用梯度洗脱。
收集的例子:10mg上样量，1g硅胶H，0。
5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200—300目），20—50ml收一馏分。
7.检测要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯,会损失较多产品,紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
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关于湿法、干法上样
• 湿法上样，一般用淋洗剂溶解样品，也可 以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少 越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样 品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可 是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般 都是比较大量的样品才会出现，是因为硅 胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比 较好的固体才会发生，这就应该先重结晶 ，得到大部分的产品后再柱分，如果不能 重结晶那就不管它了，直接过就是了，样 品202随0/7/9着淋洗剂流动会溶解的。
2 加样 用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面
的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时 ，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活 塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白 色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压， 等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～ 4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（ 如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
②小型色谱法.用普通的载薄片制成薄板,把欲 分离的物质点载薄板上,放于小型玻璃缸或 广202口0/7/9瓶中展开,干燥后显色,观察斑点分离情
4.2.2 展开
薄层色谱的展开方法有上行法,下行法,双向展 开法,径向展开法等。
• ① 上行法:使展开剂由下向上爬.
• ② 下行法:使展开剂由上向下.该法可使 用极性较弱的展开剂.
2020/7/9
• 现在见到的柱子径高比一般在1：5～10， 书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体 的选择要具体分析。如果所需组分和杂质 分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4 ，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶， 用小柱子（例如200毫克的样品，用 2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1， 就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直 径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极 性等等。 2020/7/9
溶剂的选择
• 当然是最便宜，最安全，最环保的了。所 以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有 写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不 要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快 ，不过因为极性很小，有时还是非它不可 。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注 意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也 就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知 道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所 以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡， 天气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶 解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分
7、检测
要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外 灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般 比喷显剂底1-2个数量级。
8、送谱
收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结 晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝 胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除 去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
2020/7/9
TIPS:
2020/7/9
①微量圆环法:将欲分离的物质,按常规方法点 在薄板,两点相距2-3cm,再用毛细管吸取所 实验的溶剂系统,垂直放于样点中心,让溶剂 自毛细管中依中立流出进行展开,干燥后显 色.观察斑点的分离情况.背试物质为未知化 和物时,常先用低极性溶剂展开,如式样留在 圆点不动,则需增加溶剂的极性或增大洗脱 液的量,如移动过快,则必须用较低极性的溶 剂来调整.
2020/7/9
• 由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装 的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升 的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯 度是较低的。经常能够从送来的大桶底部 看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知 了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂 重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了 ，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在 过柱子后最好也回收使用，一方面环保， 另一方面也能节省部分经费，缺点是要消 耗一定的人工。这里要注意的是，一般在 过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙
②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除 去202空0/7/9气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加
2.3.2试样的加入 ①将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿
色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起 。 ②或将试样溶于适当的溶剂中，与少量吸附 剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状 ；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色 谱柱上面。如试样在常用溶剂中不溶解， 可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混 匀后加入。
• 1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻 物质Rf值之差最大化
• 2.将柱子必须装平整、均匀 • 3.考虑有限柱填料的吸附量 • 4.可考虑用梯度法分开并洗脱
2020/7/9
柱子可以分为：加压，常压，减 压。
• 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产 品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数 。所以其他条件相同的时候，常压柱是效 率最高的，但是时间也最长，比如天然化 合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
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关于操作问题
1 装柱
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被 淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门 （T型四氟节门三通接头）的。干法和湿法 装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实 就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太 密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不 然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的 都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况 下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡 就全下来了。当然如果你装的柱子总是有 气202泡0/7/9就说明需要多练习了。但是柱子更忌
2、操作步骤 2.1 硅胶准备
硅胶一般选用250-400目(即40-63μm直径
2020/7/9
2.3 装柱
2.3.1 吸附剂的加入
①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管 壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开 始层析时使用的流动相，或将色谱管下端 出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活 塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加 入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内 形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保 持有充分的流动相留在吸附层的上面。
3、装柱
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约 1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打 开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。 随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内， 用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4、压实
沉降完成后，加入更多的石油醚（氯仿） ，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。 柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱 或202加0/7/9压柱，都应进行这一步，可使分离度
• ③ 双向展开法:取方形薄板像纸色谱一 样进行双向展开.
• ④ 径向展开法:可将吸附剂涂成圆形或 扇形,在圆心部分加如展开剂,使薄层径向展 开.
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4.3 显色
展开后,如物质有色,可明显的在薄层上观 察到它们的位置.如无色,则要通过一定的方 法显色,定位,一边确定斑点的位置及大小.
4.4 常用溶剂的极性
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2.5.2 正式检测
①点样: 取分部收集的冲洗溶液进行分别直接 点样,如果冲洗溶液太稀,浓度太小,可先浓缩 .点样的容器一般用玻璃毛细管,点样斑点的 直径一般为3-5mm.
②展开:在普通的展开槽中进行,展开方式常选 用上行展开.
③展开剂:使用冲洗溶液.
④显色:一般常用物理检测法和化学检测法.物 理检测法中首先有紫外光法,紫外光常用两 种波长(254nm与365nm).其次是碘蒸气显
常用溶剂的极性顺序：石油醚〈环己烷/己 烷〈苯〈乙醚〈氯仿〈乙酸乙酯〈正丁醇 〈丙酮〈乙醇〈甲醇〈水。
在薄层色谱中,当溶剂的极性太大时. 会使待分离物全部接近溶剂前沿,当溶剂的 极性太小时,又会使待分离物几乎全部保留
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柱层析
• 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 • 极性较大的用甲醇：氯仿系统 • 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 • 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
• 色谱法按固定相的状态可分为柱色谱、平板色谱 和棒色谱三种，而实验室中最常用的是柱层析和 薄层层析，以及它们之间的配合应用。
2020/7/9
柱层析
1、吸附色谱的原理 在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产
生作用，这种作用主要是物理和化学作用 两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质 分子之间的范德华力；化学作用主要是硅 胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键 作00-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如 果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干 硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅 胶，用烧杯量100ml也可以。
2、搅成匀浆
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分 搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮 体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/ 醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆 ，说明 2020/7/9 溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙
5、上样
干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样 后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞 至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入 大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6、过柱和收集
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡 。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗 脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H ，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶 （20220/70/9 0-300目），20-50ml收一馏分。
4 溶剂的选择
溶剂的选择也许是整个柱色谱分离操作中 最困难之处,也是实验成功的最关键之处.溶 剂通常先利用简便的硅胶薄层色谱进行筛 选.
4.1 薄层色谱点样
把样品溶解在一种低沸点的有机溶剂中(如 氯仿,丙酮.甲醇.乙醇等)然后用毛细管或微 量点样管将试液点到薄层板上.点样量要适 当,一般点样量少些,则分离叫清晰.但要注意 到检测灵敏度.
2020/7/9
➢ 常说的过柱子应该叫柱层析分 离，也叫柱色谱。我们常用的是以 硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
➢ 其实硅胶柱层析技术也可以称 作硅胶吸附柱色谱技术
2020/7/9
• 色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理 的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定 相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多 次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差 异，最后达到彼此分离的目的。