硅胶层析柱的填装方法
层析柱装填要点和要求
层析柱装填要点和要求
1. 嘿，一定要注意啊，装填层析柱的时候，颗粒大小可不能马虎呀！就像建房子，砖的大小得合适吧。
比如说用硅胶装填，颗粒太大或太小，效果能好吗？
2. 别忘了均匀装填呀！你想想，要是填得乱七八糟的，那不就像走在坑坑洼洼的路上，能顺顺畅畅吗？比如说填的时候东一块西一块的，那怎么行！
3. 要把气泡赶跑啊！气泡在里面就像个捣蛋鬼，会坏事的呀！就好比你吃饭的时候有颗沙子，多难受啊。
比如装的时候不小心混进了气泡，得想办法弄出去呀。
4. 压实也很关键呀！松松垮垮的可不行，这就好像搭积木不压实会倒一样。
比如说随便弄弄，那后续分离还能靠谱吗？
5. 速度不能太快也不能太慢啊！快了容易出问题，慢了又耽误时间。
就像开车，太快危险，太慢也急人。
比如填充的时候没把握好速度，那不就糟糕了。
6. 注意柱子的垂直哦！歪歪扭扭的可不像话，就跟站没站相一样。
比如说没放垂直，那后续操作能顺利吗？
7. 清洗干净也超级重要！脏兮兮的怎么用啊，就像你穿脏衣服出门一样。
比如装填前不认真清洗，那不是给自己找麻烦嘛。
8. 还有啊，多检查几遍呀！不检查怎么能放心呢，就像考试不检查会丢分一样。
比如说填完了就不管了，万一有问题呢！总之啊，装填层析柱这些要点和要求一定得认真对待，这样才能得到好的结果呀！。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱（Column Chromatography）是一种常见的色谱技术，用于分离和纯化化合物混合物。
它利用样品成分在固定相和流动相之间的差异迁移速率来实现分离。
在这篇文章中，我们将介绍层析柱装柱的基本步骤和相关参考内容，帮助读者了解层析柱技术的应用与操作。
1. 准备工作在进行层析柱装柱前，我们需要准备以下材料和设备：- 色谱柱：选择合适的柱径和柱高，以容纳样品和分离剂。
不同的应用需要不同类型的色谱柱，如硅胶柱、石墨化炭柱、反相柱等。
- 流动相：确定合适的流动相溶剂体系，用于样品的迁移和分离。
通常选择非极性溶剂（如石油醚、丙酮、甲醇等）或极性溶剂（如乙酸乙酯、二甲醚等）。
- 固定相：将合适的固定相装填到色谱柱中，用于分离和吸附样品成分。
选择合适的固定相类型，如硅胶、氧化铝、石墨化炭等。
- 样品：准备需要分离和纯化的混合物样品。
- 旋转蒸发仪：用于去除样品中的溶剂。
2. 装填色谱柱- 将色谱柱固定在柱座上，并根据柱径和柱高的大小调整砂轮，使得柱床均匀。
- 用适当的溶剂湿润色谱柱，避免流动相在柱床中出现间隙和假相。
3. 样品预处理- 将样品溶解在适当的溶剂中，以便在层析柱中迁移。
- 如果样品中有大量杂质，可以使用旋转蒸发仪去除溶剂。
4. 层析柱操作- 使用毛细管或注射器将样品注入色谱柱顶部。
确保样品不超过柱床高度。
- 将流动相逐步加入色谱柱，使其通过柱床。
可以根据实验需要调整流速和溶剂比例。
- 样品成分会根据其在固定相和流动相之间的亲疏水性质而分离。
在柱床中具有更大亲和力的成分会被滞留，而亲和力较小的成分会更快地通过柱床。
- 根据成分的迁移速度和柱床的色谱裂分能力，监测和采集分离后的组分。
常见的监测方法包括紫外可见光谱、红外光谱、荧光检测等。
5. 分离和纯化产物- 根据监测结果，确定目标化合物的峰位置和纯度。
- 通过收集色谱峰和进一步的实验操作，如再层析、结晶、后处理等，将目标化合物从样品中分离和纯化。
硅胶柱层析
硅胶柱层析硅胶柱层析原理硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。
硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。
200-300 目硅胶，称30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用100 倍量的硅胶H。
干硅胶的视密度在0.4 左右，所以要称40g 硅胶，用烧杯量100ml 也可以。
2.搅成匀浆。
加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。
如果洗脱剂是石油醚/ 乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。
如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/ 丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。
氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1% 的醇。
如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
3.装柱。
将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3 体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。
随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
4.压实。
沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。
柱床约被压缩至9/10 体积。
无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5.上样。
干法湿法都可以。
海沙是没必要的。
上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。
然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
6.过柱和收集。
柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。
收集的例子：10mg 上样量，1g 硅胶H，0.5ml 收一馏分；1- 2g 上样量，50g 硅胶（200-300 目），20-50ml 收一馏分。
实验室硅胶柱操作规范
实验室硅胶柱操作规范1、操作步骤1.1 硅胶准备柱硅胶一般选用200-300目，拌样硅胶一般选用100-140目。
拌样硅胶用量为样品量的1-8倍，柱硅胶用量为样品量的8-100倍，对于极难分离的样品，还可以使用硅胶H作为柱硅胶。
1.2 实验仪器准备一支玻璃色谱柱，一个铁架台，烧杯，锥形瓶，径口直径较大的玻璃漏斗，一支玻璃棒，硅胶管，螺旋夹，夹子等。
1.3 装柱1.3.1 将硅胶管与色谱柱下端相连(若色谱柱带活塞则不用)，往硅胶管上加上螺旋夹，取与色谱柱口径相应的棉花，厚薄适中(太厚流速慢，太薄易漏硅胶)，置入色谱柱底部，将色谱柱固定于铁架台上。
1.3.2 吸附剂的加入①干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相；或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。
②湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。
装完柱后需等硅胶沉降压实后再上样，通常需要半天到一天时间。
1.3.3试样的加入①湿法：将试样溶于层析时使用的流动相中，过滤，待填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，再沿色谱管壁缓缓加入滤液。
注意勿使吸附剂翻起。
②干法：选择适当溶剂使样品刚好完全溶解，过滤后取100-140目硅胶适量，将样品溶液缓慢加入到拌样硅胶中，边加入边搅拌，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状（一般需放入通风橱中挥干过夜）；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。
如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。
上完样后可在拌样硅胶上面加入少量100-140目的保护硅胶，在保护硅胶之上还可以加入脱脂棉以防止加流动相时破坏硅胶保护层。
硅胶柱色谱层析 杨列超
The end,thank you!
祝老师同学假期愉快！
• 解决的办法是：第一、硅胶一定要填结实；第二、 一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子 的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也 有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止 添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我的 感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必 要。
• 匀浆法： 搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂 用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙 酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/ 醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明 溶剂中含水量太大，尤其ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ乙酸乙酯/丙酮，如果 不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫 酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过 柱。
• 上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的 样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀 后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子 的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很 平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开 剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性 较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用 胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀 加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较 方便，熟手一般采用此法。 上样完毕后，接着即 用淋洗剂淋洗。
• 淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再 稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同， 即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析 得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大， 所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了 靠扩散作用来分离，效果也不会好。 • 上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶 上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程
层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于《层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程》的方法，供广大用户和科研者参考。
一、柱头安装是否合适及是否严密的检查1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。
3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目以上孔径大小的滤布（网）。
4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。
如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。
5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。
二、充填吸附剂以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：1、干法装柱①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入柱中的硅胶量了）。
②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；且向上下移动敲击。
如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。
③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。
④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。
⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。
2、湿法装柱①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。
②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。
我的过硅胶柱的经验
一、装柱装柱子（添硅胶）时，常用得有两种方法：即湿法装柱与干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还就是湿法，硅胶（称为固定相更为广义）得上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）得高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说，根据自身情况而定，制备得大柱可以长达一米），太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱就是先把硅胶用适当得溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压（土方法可以用养鱼得氧气泵加压或就是用氮气，当然不加压也可以）用淋洗剂"走柱子"，本法最大得优点就是一般柱子装得比较结实，没有气泡。
（我一般都用湿法装柱）干法装柱则就是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧（湿法也要敲得，效果好点），至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装得很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。
接着就是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂就是采用TLC分析得到得展开剂得比例再稀释一倍后得溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大得缺陷在于"走柱子"时，由于溶剂与硅胶之间得吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该情况，比较不好处理，可以缓慢改变溶剂，且置于通风处），容易产生气泡，这一点在使用低沸点得淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最明显），二氯甲烷更为明显。
虽然产生得气泡在加压得情况下不易察觉，但就是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作得时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。
解决得办法就是：第一、硅胶一定要压结实；第二、一定要用较多得溶剂"走柱子"，一定要到柱子得下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。
也有介绍在硅胶得最上层填上一小层石英砂(我一般垫张滤纸，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶剂得时候，使得样品层不再整齐。
硅胶柱层析技术中样品制备与填充优化策略
硅胶柱层析技术中样品制备与填充优化策略硅胶柱层析技术是一种常用的分离纯化方法，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
在进行硅胶柱层析前，样品制备和填充优化策略是非常重要的环节。
本文将就这两个方面进行讨论。
一、样品制备样品制备在硅胶柱层析中起着决定性的作用。
合理的样品制备可以提高分离效果，加快分离速度，获得更高的纯度和产量。
以下是一些常用的样品制备策略：1.溶液浓缩：如果样品的溶液浓度过低，可能导致在填充硅胶柱时样品无法完全被吸附。
因此，将样品浓缩到一定程度，使溶液浓度适中，可提高吸附效率。
2.去除杂质：样品中的杂质可能干扰目标化合物的吸附和洗脱。
因此，在进行硅胶柱层析前，需要通过适当的手段去除样品中的杂质。
例如，可以通过过滤、沉淀、萃取等方法去除悬浮颗粒、溶解物等杂质。
3.酸碱调整：对于酸性或碱性化合物，可以通过调整样品的酸碱性来改变其离子态，从而影响化合物在硅胶柱上的吸附特性。
这种方法可以增加分离效果，提高纯度。
二、填充优化策略填充是硅胶柱层析中另一个重要的环节。
一个均匀、紧密且稳定的填充能够保证柱层析的分离效率和重复性。
以下是一些常用的填充优化策略：1.填充剂的选择：硅胶柱层析的填充剂主要有多孔硅胶和非极性硅胶。
在选择填充剂时，需要根据目标化合物的性质来确定合适的填充剂。
例如，对于极性化合物，可以选择非极性硅胶填充剂。
2.填充工艺控制：填充柱时需要严格控制填充速度、填充压力和填充剂的均匀性。
填充速度过快或过慢都会导致填充不均匀，影响分离效果。
填充剂的均匀性可以通过振实和压实等方法进行调整。
3.填充剂保护：为了保护填充剂，避免在填充过程中因外界因素导致填充剂破碎或磨损，可以在柱床的顶部和底部分别放置一层玻璃纤维棉或亚麻绒。
总结：在硅胶柱层析技术中，样品制备和填充优化是至关重要的。
合理的样品制备可以提高分离效果和产量，填充优化可以保证分离的重复性和稳定性。
同时，在进行硅胶柱层析时还应注意选择合适的液相色谱柱、操作条件的设定等因素。
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硅胶层析柱的填装方法
硅胶层析柱所用的硅胶是试剂级，100-200目，在实验前将10g左右的硅胶放在托盘中，130℃真空干燥箱内活化16h，活化后放在干燥器中冷却，待用。
将无水硫酸钠盛装在托盘中，在450℃马弗炉中活化2h，后取出放在干燥器中冷却，待用。
一、装柱过程：
1、取40ml烧杯4个，100ml量筒2个（分别倒取二氯甲烷100ml，正己烷90ml），40cm玻璃棒1个，250ml烧杯1个（盛装废液用），铁架台1个，层析柱1个（长350mm，内径20mm），不锈钢铁勺1个，20ml注射器（带针头）2个（以上仪器均干净）。
2、拌硅胶。
将活化过的硅胶倒入40ml烧杯中，用另一个20ml烧杯盛取二氯甲烷并缓慢倒入硅胶中，同时用玻璃棒不断搅拌，赶走硅胶中的气泡。
3、倒硅胶。
用少量二氯甲烷淋洗层析柱，玻璃棒引流；之后将上述拌好的硅胶沿着玻璃棒倒入层析柱，倒完后缓慢抽出玻璃棒。
4、敲柱子。
用橡皮管敲击柱子，赶走层析柱硅胶中的气泡，然后打开活塞，流出洗脱液，让硅胶自然沉降；在此期间，用不锈钢小勺舀取一勺无水硫酸钠，倒入层析柱中；等到柱子快干是关闭活塞（二氯甲烷的液面在无水硫酸钠的表面以上）。
5、走柱子。
柱子装好后用20ml二氯甲烷冲洗层析柱2次，注意用玻璃棒引流，缓慢倒下二氯甲烷，并打开活塞，使洗脱液缓慢流下，确保液面保持在硫酸钠表面以上，不能流干；再用40ml正己烷冲洗层析柱，待液面在硫酸钠以上些许时关闭活塞。
6、层析柱至此装好，待用。
二、样品走柱子过程：
1、将样品液转移到装好的层析柱中后，用1-2ml正己烷清洗鸡心瓶，并转移到层析柱内，流出液弃去。
2、用25ml正己烷洗脱层析柱，弃去流出液，关闭活塞。
3、将盛装废液的烧杯移去，将K-D浓缩瓶接在层析柱下，再用30ml二氯甲烷/正己烷淋洗液（体积比2:3）洗脱层析柱，以2-5ml/min流速接收流出液于K-D 浓缩瓶中。
仪器名称规格数量
烧杯40ml 4个250ml 1个
量筒100ml 2个玻璃棒40cm 1个铁架台1个层析柱350mm×20mm 1个不锈钢小勺1个注射器20ml 2个。