植物内生菌DNA提取方法
菌dna提取方法
菌dna提取方法
菌DNA提取方法主要有以下几种常用的方法：
1. 热裂解法：将菌株经过培养后，取一部分菌体加入到含有蛋白酶K和SDS等裂解液的管内，经过高温加热和高速离心等步骤，将细胞裂解，使DNA释放到溶液中。
2. 真菌细胞壁裂解法：对于真菌等含有较坚硬的细胞壁的菌株，可以先用混合酶或纤维素酶等酶解细胞壁，然后再用热裂解法或理化方法提取DNA。
3. CTAB方法：CTAB（盐基洗脱法）常用于提取高质量的食管菌和黄杆菌等高GC含量的菌株DNA。
首先，将菌体经过裂解后，使用CTAB裂解液中的盐离子与DNA结合形成沉淀，然后通过洗脱步骤将DNA纯化。
4. 醋酸盐方法：醋酸盐方法适用于提取低GC含量的菌株DNA。
将菌体经过裂解后，通过添加醋酸盐裂解液，使DNA与醋酸和盐结合成为可溶性复合物，后续通过酒精沉淀等步骤将DNA沉淀出来。
5. 商业化基因提取试剂盒：市面上还有许多商业化的基因提取试剂盒，这些试剂盒提供了一套完整的操作流程和试剂，能够方便快速地提取和纯化菌DNA。
不同的菌株和研究目的可能需要使用不同的提取方法，因此在选择提取方法时需
要根据具体情况进行选择。
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。
以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。
接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。
之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。
最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。
接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。
然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。
最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。
3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。
首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。
高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。
然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。
首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。
然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。
这些方法在植物科学研究中被广泛使用。
在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。
植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。
需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。
样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。
此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。
植物提取dna的步骤及原理
植物提取dna的步骤及原理以植物提取DNA的步骤及原理为标题，本文将介绍植物提取DNA 的基本步骤以及相关原理。
植物提取DNA是指从植物细胞中分离出DNA分子的过程。
植物细胞中的DNA包含了植物的遗传信息，因此提取植物DNA对于遗传研究和基因工程具有重要意义。
下面是植物提取DNA的基本步骤：步骤一：准备样品需要选择一种适合的植物样品。
可以选择新鲜的叶片、茎段或种子作为样品。
样品应该尽可能新鲜，并且避免受到污染或损伤。
步骤二：打碎细胞将样品放入冰冻细胞研磨器中，加入研磨缓冲液，并用研磨器将样品研磨成细胞悬浮液。
研磨缓冲液中的盐和洗涤剂有助于破坏细胞壁，并释放细胞内的DNA。
步骤三：溶解细胞膜将研磨后的细胞悬浮液转移到离心管中，并加入含有洗涤剂的细胞裂解液。
洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
步骤四：沉淀DNA将细胞裂解液置于高速离心机中进行离心，离心过程中，DNA会被沉淀到离心管底部形成一个白色的沉淀物。
离心后，将上清液倒掉，只保留沉淀物。
步骤五：洗涤DNA使用75%乙醇溶液洗涤DNA沉淀物，以去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
洗涤后，用吸管或微量移液器将乙醇溶液完全抽尽，避免干燥过程中DNA沉淀物溶解。
步骤六：溶解DNA将洗涤后的DNA沉淀物用适量的溶解液溶解，常用的溶解液包括TE缓冲液或纯净水。
溶解后的DNA溶液可以用于后续的实验操作，如PCR扩增、酶切等。
以上就是植物提取DNA的基本步骤，下面将简要介绍相关的原理。
DNA提取的原理主要基于细胞的破坏和DNA的溶解。
在打碎细胞的过程中，使用研磨缓冲液破坏细胞壁，释放细胞内的DNA。
细胞裂解液中的洗涤剂能够破坏细胞膜，使DNA从细胞中释放出来。
离心过程中，DNA分子由于其较大的分子量而沉淀到离心管底部，而其他细胞碎片和杂质则在上清液中。
洗涤过程中使用的乙醇溶液能够去除离心过程中残留的盐和洗涤剂等杂质。
最后，将DNA沉淀物溶解在适当的溶解液中，得到DNA溶液。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
一种植物根内生细菌DNA的提取方法[发明专利]
![一种植物根内生细菌DNA的提取方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/a6000a8368dc5022aaea998fcc22bcd127ff427f.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810800649.X(22)申请日 2018.07.20(71)申请人 河海大学地址 211100 江苏省南京市江宁开发区佛城西路8号(72)发明人 周淇 (74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204代理人 陈风平(51)Int.Cl.C12N 15/10(2006.01)(54)发明名称一种植物根内生细菌DNA的提取方法(57)摘要本发明公开了一种植物根内生细菌DNA的提取方法，包含以下步骤：(1)样品前期处理：将包含植物根部组织的土柱样品冷冻干燥；(2)去除植物根系松散土壤，使得植物根表面附着的土壤厚度为1-2mm；(3)将经步骤(2)处理后的植物根放入装有PBS缓冲液的离心管中，洗涤、超声处理，获取植物根，随后低温保存；(4)将步骤(3)处理的植物根研磨、均质；(5)取步骤(4)得到的样品，提取植物根内生细菌DNA。
本发明极大减少植物根际部分细菌DNA对根内生细菌DNA的污染，分离操作行之有效，提取步骤简单易行，提取纯度高，省略了纯化步骤，安全实用，提高了植物根内生细菌DNA的提取效率和纯度。
权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 108570467 A 2018.09.25C N 108570467A1.一种植物根内生细菌DNA的提取方法：其特征在于，包含以下步骤：(1)样品前期处理：将包含植物根部组织的土柱样品冷冻干燥；(2)去除植物根系松散土壤，使得植物根表面附着的土壤厚度为1-2mm；(3)将经步骤(2)处理后的植物根放入装有PBS缓冲液的离心管中，洗涤、超声处理，获取植物根，随后低温保存；(4)将步骤(3)处理的植物根研磨、均质；(5)取步骤(4)得到的样品，提取植物根内生细菌DNA。
2.根据权利要求1所述的植物根内生细菌DNA的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，所述超声处理次数不低于10个循环。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案一、实验目的本实验旨在通过提取植物组织中的DNA，了解DNA的结构和功能，学习DNA提取技术。
二、实验原理DNA提取实验基于DNA的特性进行，主要包括以下几个步骤：1.组织破碎：通过物理或化学方法将植物组织破碎，使DNA暴露出来。
2.细胞溶解：使用细胞溶解液使细胞膜破裂，释放DNA。
3.蛋白质消化：加入蛋白酶等物质，将DNA周围的蛋白质降解。
4.DNA沉淀：通过加入乙醇等溶剂，使DNA沉淀。
5.洗涤和纯化：通过洗涤和纯化步骤去除杂质。
6.分析和测定：利用凝胶电泳等技术对提取得到的DNA进行分析和测定。
三、实验材料1.植物材料（如香蕉、草莓等）2.液氮或冰块3.细胞溶解液（如PBS缓冲液、CTAB溶液等）4.蛋白酶K溶液5.乙醇6.盐溶液7. DNase-free水8.1.5mL离心管9.离心机10.电磁振荡器11.热水浴12.紫外分光光度计四、实验步骤1.将所需植物材料切碎，放入离心管中。
2.将离心管放入液氮或冰块中，立即研磨材料，直至完全破碎。
3.加入适量的细胞溶解液，如PBS缓冲液，将混合物混合均匀。
4.将混合物置于电磁振荡器中，振荡5分钟。
5.加入适量的蛋白酶K溶液，混合均匀。
6.将离心管置于热水浴中，温度为55℃，孵育1小时。
7.加入相同体积的酒精，轻轻摇匀离心管，将DNA沉淀。
9.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
10.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
11.倒出上清液，加入适量的乙醇，轻轻摇匀离心管，使DNA沉淀。
12.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
13.倒出上清液，加入适量的盐溶液，轻轻摇匀离心管，使DNA残留在离心管底部。
14.使用离心机将离心管离心，离心条件同上，离心10分钟。
15. 倒出上清液，用DNase-free水洗涤DNA三次，每次离心5分钟。
16. 将离心管中的DNA溶解于适量的DNase-free水中。
植物提取dna的方法
植物提取dna的方法
植物提取DNA的方法可以分为以下几个步骤：
1. 选择合适的植物样本，从新鲜植物中或者干燥的植物材料中取出叶片、茎或花等含量高的组织，避免含有过多的黄色物质或酚类物质。
2. 切碎植物组织，使用细刀或者组织绞碎器等工具将样品切碎成小块，以便更好地释放DNA。
3. 加入破碎缓冲液，包含盐类、洗涤剂、螯合剂等物质，可溶解细胞膜和核膜，使DNA释放。
4. 离心，将上述混合物离心，可使悬浮在上层的细胞碎片沉淀到底部。
5. 分离上清液，去除底部的碎片后，将上层的上清液转移到新的离心管中。
6. 加入蛋白酶和/或RNase酶，可去除DNA污染的蛋白质和RNA等。
7. 加入恒温酶或热梯度PCR仪等装置进行PCR扩增，最终得到核酸条带，然后进行分离纯化。
需要注意的是，每个植物物种的DNA提取方法略有不同，因此需要根据实际情
况进行调整和改进。
植物中dna的提取方法
植物中dna的提取方法
1.取植物样品：从植物中选取新鲜的叶片、花、果实、根等样品，避免使用含有腐烂、干枯或受到污染的样品。
2. 切碎植物组织：用刀片或剪刀将植物材料切成小块，放入细碎的研钵中，加入液氮或干冰，迅速研磨碎成粉末状。
3. 加入提取缓冲液：将粉末状样品转移到离心管中，加入含有CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）的提取缓冲液，并加入蛋白酶K。
缓冲液的配方可以根据不同的植物种类和研究目的进行调整。
4. 热处理样品：将离心管放入水浴中，用80°C的温度加热30分钟，使细胞壁破裂，释放DNA。
5. 加入有机溶剂：将等体积的氯仿：异戊醇（24:1）加入样品中，充分混合后离心，分离出上清液。
6. 沉淀DNA：将上清液转移到装有冰冷乙醇的离心管中，缓慢倒入样品，轻轻摇晃后静置10分钟，将离心管放入高速离心机中离心10分钟，沉淀出DNA。
7. 溶解DNA：将沉淀的DNA用70%的乙醇洗涤，再用TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）将DNA溶解。
以上是一种常用的植物中DNA提取方法，可以根据实验需要进行调整和改进。
- 1 -。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
在提取植物内生菌之前，植物需要表面灭菌，其具体操作为将植物浸泡在添加了0.02%的Tween-20的质量分数为1%的次氯酸钠溶液中1 min，再将植物浸泡在70%酒精中1 min，然后用硫代硫酸盐/Ringer’s（林格氏液）清洗3次，每.次1 min。
根和茎（土表面以上1 cm处）都要灭菌处理，将根茎切成片状。
为了更好地分析细菌的位置，灭菌后茎表皮撕下，茎内部按照之前的方法灭菌。
表皮组织和根最后一次淋洗液中的细胞都用来提取DNA。
植物不同组织的内生菌群落DNA提取通过直接研磨植物组织，步骤为溶解、提取和纯化步骤（方案一），或者在DNA提取前从片状植物组织中淋洗出细胞（方案二）。
东南景天表面灭菌方法：整株植物用自来水冲洗30 min，用蒸馏水洗3次，每次3 min。
用吸水纸吸去植物表面水分，用无菌剪刀在根基部将根系剪下，与植物地上部分开。
将根系用70 %酒精浸泡2 min，无菌水洗3次，3 % NaClO浸泡2次，每次1 min，然后用无菌水冲洗3次，每次2 min，最后一次清洗液涂LB平板。
1. 将2 g左右消毒后植物组织于无菌研钵中，加5 mL磷酸钠缓冲液（19.9 g Na2HPO4·H2O，1.27 g NaH2PO4·2H2O，H2O 定容到1 L）研磨至匀浆。
2. 将植物匀浆转移至50 mL无菌离心管中，摇床200 rpm振荡1-2 h，使细菌细胞尽可能的从植物组织中释放出来。
3. 取4 mL悬液于新的无菌离心管中，12 000×g离心10 min收集菌体细胞。
4. 弃上清，将收集的菌体细胞重新溶于550μL 1×TE buffer（Tris-EDTA；pH8）中加入10 mg mL-1溶菌酶10μL，37℃水浴1-4h。
5. 加入50μL 20% SDS和8μL 20 mg mL-1蛋白酶K，混匀，65℃水浴3h，期间轻轻上下颠倒混匀数次。
6. 加入200μL 5M NaCl，涡旋振荡15 s，12000×g离心10 min。
7．取上清液，并向上清液中加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1），彻底混匀，12000×g离心10 min。
8. 上清液转移至新的无菌离心管中，重复步骤7一次。
9. 上清液转移至新的无菌离心管中，加入0.6倍体积（0.6 vol）的冰冷的异丙醇，4℃放置1 h。
10. 4℃，12000×g离心10 min，弃上清。
11. 沉淀用70%冰乙醇清洗，离心，弃上清。
12. DNA沉淀室温风干后，用无菌超纯水溶解。
13. DNA纯化采用TIANquick Midi Purification Kit。
微生物16S rRNA基因V5-V6-V7区域扩增引物：
799F2：GATGGCCATTACGGCCNNNNNN
1193R：ACGCATCCCCACCTTCCTC
用含10 % SDS提取缓冲液(NaP缓冲液)重新悬浮细胞团块。
用直径0.11mm 的玻璃珠珠打操作50 s，以溶解细胞。
用苯酚-Tris (pH 8)溶液和氯仿/异戊醇提取，用0.6vol的异丙醇和0.5 mol/L NaCl通过沉淀再次获得DNA。
用70 %的乙醇洗涤细胞团块，真空干燥，再溶解在50μl的超纯水中。
原始DNA提取物用Glassmilk purification kit(Bio101, La Jolla, CA)进一步纯化。
所需试剂：Na2HPO4·H2O，NaH2PO4·2H2O，10 % SDS（十二烷基硫酸钠），Tris饱和酚，氯仿/异戊醇（体积比24:1混合），异丙醇，0.5 mol/L NaCl，70 %乙醇。
苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用
抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？
酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相中，因
而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水
不相混溶，不会带走DNA。
所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？
在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一
份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定
Tris平衡苯酚的配制方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。
同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。
因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。
所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。
从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。
该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。
有助于方便识别有机相。
③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④重复操作步骤③。
⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存
唐琳的引物：
F357GC(5’-CGCCC GCCGC GCGCG GCGGG CGGGG CGGGG GCACG GGGGG CCTAC GGGAG GCAGC AG-3’)
R518(5’-ATT ACC GCG GCT GCT GG-3’)。