2015-1 第6章 植物内生菌资源
应该注意四个方面：
4.1 植物内生菌产生的天然产物
①生物于独特甚至极端环境条件下，并拥有自身独特
的生存机制的植物； ②具有民族、土著药用历史的植物，以及药用化学成 分已经被详细研究过的植物，其内生菌有可能产物和 宿主细胞相同或类似或比植物本身活性更强的活性化 合物； ③本土植物，拥有较长的生长时期，或者生长在某个 较为古老的地带； ④生物多样性丰富地区的植物，如生长于热带或亚热 带地区的植物各类比生长于干旱和寒冷地区的植物各 类丰富，其内生菌的多样性也相对较高。
3.3 植物内生放线菌
云南大学云南省微生物所放线菌研究室开展药用植物
内生放线菌的资源研究。 部分成果见教材。 研究进展讨论（基于16sRNA，基因的免培养技术；马 铃薯、水稻、滇南美登木等，放线菌。）
3.4 影响内生菌分布的因素
（一）地理环境 （一个实验；两个地理区域中分布最多 的物种：恶臭假单孢菌、巨大芽孢杆菌；同种菌在不同环 境遗传特征已经发生变化，体现了菌株的适应性与遗传变 迁）
4.2 植物内生菌在农林业生产中 的应用
（二）生防作用 1. 内生真菌在生防中的应用 2. 内生细菌在生防中的应用 （1）产生抗菌物质 （2）酶解活性 （3）竞争优势 （4）诱导宿主系统抗性 （三）增强宿主抗逆性 （四）植物生长抑制剂
4.3内生菌在环境植物修复中的应 用
2.2 表面消毒
1.Samish等总结比较总结不同的消毒技术后，推荐的
标准消毒技术程序：首先用自来水或商品净化剂反复 冲洗植物材料表面，按照材料的不同决定不同次氯酸 钠、乙醇或是升汞的最佳消毒时间，再用无菌水冲洗， 最后，用无菌滤纸吸干水分。其中次氯酸钠与乙醇联 用，是最常用的表面消毒程序。 2.特殊的处理：吐温20、吐温80和TritonX-100等表面 活性剂，可以减少溶剂的表面张力，使其充分作用于 植物表面的凹陷处 3.检验表面消毒效果的方法：3种方法（教材208页）
通常这类内生真菌可以促进植物生物量的积累，提高
其耐旱能力，产生一些对动物有毒害的化学物质。
3.1 植物内生真菌
（二）非麦角类内生真菌
至今有超过1000篇文献对非麦角类内生真菌的报道 分为三类：
1）包含丰富物种，通常能在植物体根、茎、叶部位形
成广泛的定殖；通过种种或地下茎传播；在根际分布 少；可赋予植物非环境适应性和环境适应性；生长于 恶劣环境中的植物被此类内生真菌感染的频率高达 90%~100%。
（一）促生作用
内生菌促进植物生长的机制多样化，包括促进矿物质
和营养物质的吸收和利用，释放促进植物生长的激素， 调节植物自身激素的合成，提供氮、磷元素，或协助 增强植物与菌根真菌或根瘤菌的共生作用。提高植物 对病原菌的抵抗能力，对环境压力的护等也最张达到 促进植物生长的效果。 1）提高营养状况 2）发酵提取物 3）产生促进植物生长的物质（含某些小分子的代谢物）
这一概念为目前比较接受，即教材所说：一切生活在
植物体内的腐生、寄生或共生的真菌、细菌、放线菌 等，也包括了那些潜伏在宿主体内的病原微生物。
第一节 植物内生菌的发现及其研究意义
Petrini 1991:内生微生物的定义应该强调，感染寄主时
不表现出症状，但是经过一段潜伏期后，可能也会引 起病害。 Hirsch & Braun 1992：定殖于于活体植物组织内，且 不引起任何即时的、明显的负面影响的真菌。
3.1 植物内生真菌
依据其宿主类别、定殖方式 、生态功能、进化关系可
将其分为两大类：即麦角类内生真菌 （clavicipitaceous endophyte)和非麦角内生真菌 （nonclavicipitaceous endophyte)。
麦角类内生真菌：一些与禾草、牧草等共生的内生真
菌；（分泌麦角碱，致人畜中毒，无症状、系统和、 种子携带） 裸子和被子植物等维管植物中分离获得的内生真菌。
3.1 植物内生真菌
2）主要或只在植物地上部分的组织内在在 水平传播；
形成高局部性的感染；对宿主植物的有益或有害作用 不存在环境特殊性；多样性水平高。
3.1 植物内生真菌
3）专指深色有隔内生真菌。即一群定殖于植物根内的
小型土壤真菌，包括功能和分类上都不确切的多种真 菌。这类真菌在定殖模式在不同的植物中相似，即菌 丝颜色较深、具有明显的横隔，广泛存在于健康植物 根的表皮、皮层、甚至维管束组织的细胞内或细胞间 隙，能够在植物细胞内或细胞间隙形成“微菌核”， 但不会在根组织内形成病原菌所引起的病理学特征。
R2A培养基也是沉 降法检测环境微 生物的标准配方
/standard/kingsb.htm
2.4 分离培养基
（二）放线菌分离培养基
在内生放线菌的分离中，由于放线菌的生长缓慢，通
常培养一个月左右才在植物表面有菌落长出。因此， 想获得尽可能多的放线菌，既要尽量抑制真菌和其他 细菌的生长，同时也要尽可能避免影响内生放线菌的 生长。
4.1 植物内生菌产生的天然产物
（二）抗生素类物质 植物内生菌产生的抗生素不仅对大量植物病原菌具有抑制或致
死作用，同时对许多引起人类和动物疾病的细菌、真菌、病毒 和原生动物也同样有防治作用。 例：内生真菌-雷公藤中分离的内生真菌、佛罗里达榧树中分离 到的小孢拟盘多毛孢、卷柏、青蒿、玉米；内生细菌-绿黄假单 孢菌、赤杨、蛇藤、银桦、蓬莱蕉、姜科植物…… （三）抗肿瘤物质 最典型的例子：1993年美国学者Stierle等首次从短叶紫杉的树皮 中分离获得一株能产紫杉醇(taxol)和其他紫杉烷类化合物的内 生菌新物种-安德紫杉菌。这一发现的意义在于，为利用微生物 发酵法生产紫杉醇，并为解决紫杉醇药源危机提供了一条新途 径，由此掀起了从药用植物中分离内生菌的热潮。
非麦角类内生真菌：能从无症状Fra bibliotek非维管植物及蕨类、
3.1 植物内生真菌
（一）麦角类内生真菌
一小部分进化上相关的麦角菌物种，比较难于培养，
且仅与一些冷暖型草种共生，通常能在植物的茎内形 成细胞间的系统性感染，主要通过垂直形式传播，从 植物母体通过种子传播给下一代。 Clay &Schardl又将这一类内生真菌分为Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ型。 （含义掌握）
Strobel教授的研究成果：从巴塔哥尼亚北部植物心叶 船型果木中分离到一株粉红黏帚菌（G.roseum)可以产 生数十种中等碳链长度的碳氢化合物，而且这类化合 物正是很好的生物能源材料。
参考资料：生物燃料（biofuel）泛指由生物质组成或萃取的固体、液
4.1 植物内生菌产生的天然产物
紫杉醇类：红豆杉属植物、落羽松等中广泛存在紫杉
醇产生菌，同时这些菌也分属许多不同的属中。（教 材225页）
生物碱类：主要从传统药用植物中提取，如雷公藤、
长春花、喜树、……，也还包括一些内生放线菌。 （四）其他类活性物质
4.2 植物内生菌在农林业生产中 的应用
要处理方法要求。 2、植物内生菌样品预处理的基本方式有哪些（列举即可） 3、查网络资源，写出下列培养基的配方。TSA; R2A ; SNA
附SNA：SNA培养基是synthetic low nutrient agar的缩写，即合成低营养
琼脂，是用来培养串珠镰刀菌的。在SNA上培养产生小型分生孢子， 成链状或假头状。 配方：磷酸二氢钾 1.0g/L，硝酸钾1.0g/L，七水硫酸镁0.5g/L，氯化 钾0.5g/L，葡萄糖0.2g/L，蔗糖0.2g/L，琼脂15g/L。 使用：将菌株接种到SNA平板上，持续的黑光灯（Philips TL 40W/08），17℃培养。经过10~14天后检查：取1平方厘米左右的带菌 培养基涂片，在显微镜下观察。记载小孢子产生与否及其产生方式， 大型分生孢子的形状和大小，足孢有无，顶细胞特点以及产孢细胞的 性状，子囊壳的产生及色泽等，按其分种检索特征初步鉴定到“种”。
2.3 样品预处理
（一）组织块分离法
（二）组织浸渍法 （三）组织离心法
（四）真空与压力抽取植物体液
（五）其他方法
2.4 分离培养基
（一）细菌分离培养基
TSA：大豆酪蛋白琼脂培养基。 酪蛋白胰酶消化物 15g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 氯化钠 5g 琼脂 15g 纯化水 1000ml
本节为重点掌握内容。
2.1 样品的采集
1.植物样品的鉴定与采集地点的具体定位与记录；
2.根据研究目的与经验采集植物的不同部位； 3.样品的预处理：①修剪成长短适宜的组织块，用75%
乙醇擦拭样品表面，或短时间浸泡、灼烧，使表面干 燥后，用石蜡封住切口，放入无菌塑料袋，并保存于 低温盒中带回实验室；②将乙醇初步处理后的样品保 存于磷酸缓冲液中。 4. 样品的保存：通常保存于4℃中，并尽量缩短从采 样到分离操作的时间，减少组织表面腐生菌对内生菌 的影响。
Entophytic Relationship
第一节 植物内生菌的发现及其研究意义
一、内生菌现象及概念
1879年 De Bary对这一现象进行了描述。 Stone的定义：植物内生菌（endophyte)指这样一类微
生物，即被它们所感染的宿主植物不会或至少暂时不 会表现出明显的症状，能超乎在植物组织内观察到或 是从严格表面消毒的植物组织中分离得到，抑或是从 植物组织中直接扩增到其核酸DNA。
许多研究者认为，一些贫营养的培养基和土壤放线菌
分离常用的部分经典培养基，在内生放线菌的分离中 均取得了较好的效果。
2.4 分离培养基
（三）真菌分离培养基
（四）特殊目的菌选择性分离培养基 （五）添加抑制剂
推测地球上每一种植物，无论是单子叶还是双子叶植物都有内 生菌存在。 植物内生菌资源的研究主要采用纯培养（culture-dependent)和 免培养（culture-ihdependent)技术与手段。
微生物资源
产抗癌药物内生真菌
1.产紫杉醇内生真菌：多数为小盘 多拉毛霉 1963 年美国化学家 MCWani 和Monre E Wall 首次从 太平洋紫杉树皮中分离到了紫杉 醇的粗提物, 该活性物质为一 种四环二萜化合物, 1979 年美 国NCI 证实紫杉醇独特的抗癌机 理。
注： National Cancer Institute, USA （美国国家癌症研究院）
内生真菌资源运用存在的问题
(1)有些内生真菌专一性地寄生在植物体内, 不能在人工培养基上生长, 即使使用不同的 营养培养基培养, 也不能确保把生活在植物 组织内的所有真菌全部分离出来。 (2)有些已分离到的内生真菌在人工培养基上 不产生可育性孢子, 就会由于菌丝体的死亡 而造成菌种丢失, 因此不能准确地反映出植 物组织内生菌的数量和种群。 (3)内生真菌所产生的次生代谢产物含量很低, 目前每升发酵液中仅能获得很少的活性成分, 一般的检测手段很难检测到, 加大了新化合 物的分离难度, 很难达到工业生产水平, 而 且在分离纯化及多次传代后内生真菌的生物 特性退化, 其代谢产物特性不稳定, 这也给 产物的检测带来困难。
植物内生菌的生物多样性
• 植物内生菌为植物组织内的正常菌群, 包括 植物内生真菌、内生细菌和内生放线菌, 广 泛分布于各种陆生及水生的低等植物和高等 植物中。植物内生菌具有丰富的生物多样性, 主要有以下三方面: 寄主物种类多样性、 内生菌在寄主植物不同部位分布多样性和内 生菌自身种类多样性。
植物内生菌的分类
4.其它生物学作用
• 植物的他感作用是指植物植株向环境中释放某些化学 物质, 影响周围其它植株生理生化代谢及生长过程的 现象。这种作用是种间关系的一部分, 是生存竞争的 一种特殊形式, 种内关系也有此现象。他感作用是自 然界存在的普遍现象。 • 研究表明：有的感染内生菌植物会对周围的其它植物 产生抑制或促进其生长的他感作用, 其中牧草内生菌 产生的毒麦碱对邻近植物有较强的他感作用。感染内 生细菌的红花车轴草( T rif olium p r atense ) 也具有 抑制玉米生长的他感作用[ 31] 。在植物与内生菌的 作用过程中, 有的内生菌成为了分解宿主植物自身组 织的先锋, 有的内生菌能够诱导宿主植物细胞的活性 物质代谢[ 33~ 35] 。植物内生菌的上述生物学作用使 其在菌- 植物- 动物- 环境生态系统中扮演着重要角色。
植物内生菌的生态学作用与天然产物研究现状及展望
植物内生菌的生态学作用与天然产物研究现状及展望植物内生菌（Endophytic fungi）是一类生活在植物内部组织中的真菌。
它们和植物形成共生关系，对植物生长和生态系统的稳定性起着重要的作用。
近年来，随着对植物内生菌的研究不断深入，人们发现它们具有丰富的天然产物资源，对农业、医药等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍植物内生菌的生态学作用、天然产物研究现状及展望。
一、植物内生菌的生态学作用植物内生菌是一类生活在植物内部组织中的微生物。
它们与植物形成共生关系，通过与植物共生，植物内生菌可以帮助植物提高对环境胁迫的适应能力，增强植物的抗病能力和抗逆性。
植物内生菌对于植物的生长发育、养分吸收、抗病抗逆等方面起着重要的作用。
1.1 植物内生菌与植物生长发育植物内生菌能够通过产生生长激素和植物生长调节物质等方式促进植物的生长发育。
一些研究表明，植物内生菌可以促进植物根系的生长和发育，提高植物的营养吸收和养分利用效率。
1.2 植物内生菌对植物的抗病抗逆作用1.3 植物内生菌对土壤和生态系统的影响植物内生菌的存在和活动对土壤的肥力、结构和生物多样性等起着重要的影响。
它们可以促进土壤中的养分循环，提高土壤的养分利用效率，维持土壤的生态平衡。
植物内生菌还可以影响植物群落的结构和功能，对生态系统的稳定性和健康起着重要的作用。
二、植物内生菌天然产物的研究现状随着对植物内生菌的研究不断深入，人们发现植物内生菌具有丰富的次生代谢产物资源，其中包括抗生素、生物碱、多糖、酶等多种物质。
这些物质在农业、医药等领域具有重要的应用价值，受到人们的广泛关注。
植物内生菌产生的抗生素具有抑制细菌、真菌和病毒等微生物的活性，对一些重要的农业病害具有良好的控制效果。
青霉素、链霉素等广泛应用于农业生产中的抗生素就是通过发酵生产的方式从植物内生菌中获得的。
植物内生菌产生的生物碱具有广泛的抗肿瘤、抗炎、抗氧化等生物活性。
一些研究表明，植物内生菌产生的生物碱对一些重要的医学问题具有重要的应用前景，受到人们的广泛关注。
18株植物内生真菌的分离纯化及鉴定
采摘部位 果实、叶、茎
叶、柄、根 叶、茎 叶、茎 叶、根
果实、叶、茎 果实、叶、茎
叶、根 果实、叶、茎
叶 叶、茎
叶
植物样品 日本东北大学药用植物园，分别采 集植物 的 果 实、叶、茎、根 等 部 位，并 做 好 详 细 记 录， 见表 1； Prime STAR TAKARA 公 司； QIAEX II Gel Extraction Kit 德国 Qiangen 公司； 选择性分离培养 基 马铃薯葡萄糖琼脂 （ PDA） 加氯霉素，氯霉素终 浓度为 50 μg / mL。
苯酚 / 氯 仿 / 异 戊 醇 （ 体 积 比 25 ∶ 24 ∶ 1 ） 。 涡 旋， 15000 r / min离心 5 min，上清液转移。加 1 mL 无水 乙 醇 和 40 μL 3 mmol / L NaAc，15000 r / min 离 心 15 min，舍弃上清液。加 200 μL 70% 乙醇，15000 r / min 离心 5 min，舍弃上清液。 1.2.3 目标 DNA 片段的 PCR 扩增 真菌基因组中 编码核糖体的基因 28S rDNA 中 D1 / D2 区域序列长 度适中，适 用 于 真 菌 鉴 定［10］。 以 提 取 的 DNA 为 模 板，利用 rDNA 的保守序列设计引物，PCR 扩增未知 真菌 的 28S rDNA D1 / D2 区 域，引 物 为 NL1 （ 5' － GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG－3'） 和 NL4 （ 5' － GGTCCGTGTTTCAAGACGG － 3'） 。使 用 Prime STAR 体系，反应液总体积为 15 μL，其组成见表 2。
植物内生真菌
植物内生真菌一、内生真菌的概念内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。
这类真菌中，有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不容易识别。
真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。
与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。
草本植物内生真菌侵染种子内部，播种后，真菌随着幼苗的生长和植株的发育成熟而生长，这些真菌没有吸器，出现在茎、叶、花序组织，而不出现在根内，这一点与菌根真菌不同。
受侵染的植株在营养生长阶段不表现出被内生真菌侵染的特点，但是，当植物开花的时候，就可以观察到浸染的真菌。
与内生真菌容易混淆的一个概念是内生菌根，菌根是高等植物的根与真菌形成的共生联合体，内生苗根是菌根当中的一种类型，内生菌根的共同特征是根的表面不产生菌套，仅有稀疏的外生菌丝，菌丝在根部皮层组织的细胞间延伸，但不产生哈蒂氏网，菌丝体可侵入细胞内部，并形成不同形状的吸器，而宿主植物的根一般无形态及颜色的变化。
故内生菌根用肉眼很难识别。
二、内生真菌的一般特征内生真菌存在于根以外的植物组织细胞，可以用显微镜观察，也可以通过纯培养把它们分离出来进行研究。
分离内生真菌时要对植物组织进行表面消毒，然后切成小片放在培养基上培养3～5天，内生真菌就生长在培养基上，可根据孢子和菌丝的特征，对它们进行分类鉴定。
可以按常规方法把内生真菌从多种植物上分离出来，已经发现的内生真菌包括许多子囊菌和半知菌、一些担子菌及少量的卵菌。
主要的内生真菌包括药用Chloroscypha和Lophodermium（散斑壳属）中的一些种类以及Cryptoxline、Cryptosporriopsis（拟隐孢菌属）、Phomopsis（拟茎点霉属）和 Phyllosticta（叶点霉属）中的一些种类。
其中许多可以从植物组织中偶然分离到。
这类真菌的共生生活方式与其占主导地位的腐生生活方式来讲，似乎是次要的。
内生真菌资源学
• 2.1.2 产鬼臼毒素内生菌 鬼臼毒素(Podophyllotoxin)：一类 天然木脂类化合物1946 年King 和Sullivan 证实鬼臼树脂和 鬼臼毒素对动物实验癌细胞有破坏作用。 • 2.1.3 产喜树碱内生真菌喜树碱属于喹啉类生物碱, 是继紫 杉醇之后第二个获准上市的具高效抗癌活性的天然药物。 • 2.1.4 产长春碱内生真菌长春花(Catharanthus roseus(L.)Don) 全草可入药。目前已经从长春花中分离出了70多种生物碱, 具较强的抗肿瘤活性成分主要是二聚吲哚类化合物, 如长 春碱(VLB)、长春新碱(VCR)等。 • 2.1.5 产球毛壳甲素A 内生真菌球毛壳甲素 A(Chaetoglobosin A)是20 世纪80 年代发现的一种新抗癌化 合物。张玲琪等[11] 首次报道了从美登木(Maytenus hookeri.)的茎、叶中分离出一株内生真菌———球毛壳菌 (Chaetomium globosum.), 可产球毛壳甲素。
植物内生真菌资源的研 究进展
苏晨曦
概述
物内生真菌(Plant endophytic fungi)是指寄生在 健康植物茎干或叶片及根部，完成其全部或部分生 活周期，但不形成明显侵染的一类真菌。植物内生 真菌由于长期生活在稳定的植物微生物系统中，和 宿主建立了共生或半共生关系，因此它是植物体内 的正常菌群，可通过组织学方法或严格表面消毒从 植物体中分理处内生真菌，也可以直接从植物组织 中扩增出真菌DNA的方法来证明其内生，宿主植 物与其内生真菌彼此互影响，研究表明已分离出的 大多数植物内生真菌能够产生与宿主相同或相似的 活性成分。由于植物内生菌来自独特的生存环境而 成为人们寻找微生物新药的一个重要药源，具有重 要的药用价值。
• (2)有些已分离到的内生真菌在人工培养基上不产生 可育性孢子, 就会由于菌丝体的死亡而造成菌种丢 失, 因此不能准确地反映出植物组织内生菌的数量 和种群。 • (3)内生真菌所产生的次生代谢产物含量很低, 目前 每升发酵液中仅能获得很少的活性成分,一般的检测 手段很难检测到, 加大了新化合物的分离难度, 很难 达到工业生产水平, 而且在分离纯化及多次传代后 内生真菌的生物特性退化, 其代谢产物特性不稳定, 这也给产物的检测带来困难。
211021823_桑树内生菌的生物活性及应用前景
植物内生菌是指生活于健康宿主植物组织或器官内部，不会对宿主植物引起明显病害的一类微生物群，包括真菌、细菌和放线菌[1]。
自1993年Stierle 等[2]首次从短叶红豆杉中分离到1株能产生抗癌活性成分———紫杉醇的内生真菌以来，内生菌逐渐成为许多学科研究的热点，在农业、食品、医药领域展现出重要的开发价值和广阔的应用前景[3]。
对内生菌进行研究，不仅能丰富紧缺药用资源材料，还能促进物种保护和可持续发展。
桑（Morus alba L.）为桑科桑属落叶乔木或灌木，属温带和亚热带植物，原产并广泛种植于中国中部和北部地区，是集食用、药用、饲用、观赏等于一体的生态经济型树种。
桑树全身都是宝，上至桑枝、桑摘要：桑树全身是宝。
植物内生菌是生活于健康宿主植物组织或器官内部的微生物，其能够产生特殊的活性代谢产物，一直是食品、药品、农业等领域研究的热点。
介绍了桑树内生菌的多样性，以及桑树内生菌在抑菌、抑制α-葡萄糖苷酶、调节植物生长、抗氧化等方面的生物活性；并对桑树内生菌作为新型微生物资源，在桑树病害防治、果蔬采后保鲜剂开发、1-脱氧野尻霉素（DNJ ）发酵生产以及降糖药物开发方面的应用前景进行了展望。
以期为桑树内生菌发酵生产功能性物质，开发功能性食品、药品以及果蔬采后生物保鲜剂提供理论参考。
关键词：应用微生物学；桑树；内生菌；生物活性；1-脱氧野尻霉素中图分类号：S182文献标识码：A 文章编号：1008-1631（2023）01-0085-06收稿日期：2022-11-14基金项目：河北省重点研发计划项目（20327122D ，21327115D ）作者简介：张锦锦（1996-），女，河南商丘人，硕士研究生在读，研究方向为食品微生物与食品安全。
E-mail ：1435533144@qq.com 。
通讯作者：韩俊华（1977-），女，河北景县人，教授，博士，主要从事食品微生物与食品安全研究工作。
E-mail ：teach2003@126.com 。
植物内生真菌的研究概况
37BIOTECHWORLD 生物技术世界自从20世纪30年代,人们发现感染内生菌的牧草能使牲畜中毒,内生菌才受到关注[1]。
目前已在植物体内不仅发现额大量的内生细菌,而且还发现了大量内生真菌。
这些菌类与植物互利共生,会产生很多种生物学作用,还可以为植物提供营养物质,促进植物快速生长,增强植物抗病害、逆境和动物的危害,参与植物的防御功能[2]。
因此,可以利用内生菌开发新农药,以减轻化学农药对环境的污染,诱导病原菌产生抗性,破坏生态平衡还有农药残留等问题。
植物内生真菌是一类长期寄生在没有外在感染症状的健康植物组织中的一类真核微生物。
由于它的寄生环境相对比较特殊,所以长期以来受到人们的忽视。
在食物宿主-内生菌-食草动物生态系统中,起着众多未知的生态作用[3]。
本文主要从内生真菌的分离、存在现状等两个方面对植物内生真菌的研究概况进行综述。
1 植物内生真菌的分离、检测和筛选方法1.1 植物内生真菌的分离植物内生真菌在植物的根、茎、叶、花、果实等器官中均有存在[4]。
通常会挑取无病、长势比较好的健康植株进行分离,在分离预处理的时候依据不同的器官,表面消毒时长各不相同,消毒的时候可选取酒精、高锰酸钾、次氯酸钠、氯化汞等溶液进行初次和再次消毒,每次消毒后都需要用无菌水浸泡洗涤表面残留的消毒液3-5次。
消毒结束后可采用榨取植物汁液稀释法进行分离,也可直接切取植物的组织进行分离。
在选用培养基时,一般选用PDA 培养,当然也可依据实验需求选取其他培养基,或对PDA培养基进行改良。
培养温度一般在25℃-28℃为宜。
分离纯化后的真菌需接种在试管斜面上,4℃-5℃下保存[5],以便做进一步的筛选。
当然,也可采用分子生物学技术,用真菌检测通用引物,从植物组织中直接扩增出微生物DNA,来证明内生真菌的存在。
1.2 植物内生真菌的检测方法各种生物技术的不断发展,使得内生真菌的检测方法也有了不断的发展。
最早用的苯胺蓝染色在光学显微镜下检测内生真菌的存在,该方法不仅简便易行,而且结果直观,到目前为止仍在使用。
植物内生菌
(3)植物内生菌在果蔬保鲜中的作用
感谢提出批评与指正！
内生放线菌
内生放线菌侵入多种被子植物，形成根瘤共生固氮体 系。早在十九世纪后期，人们就发现了这类非豆科的 根瘤，并发现根瘤内有生微生物。因内生放线菌生长 缓慢且分离比较困难，故对其研究相对较少。
促生作用
生物固氮作用
外源基因载体ຫໍສະໝຸດ 防病作用 组培污染植物内生菌的 生物学作用
病理学作用
生物治理 focus
植物内生菌
XXX 2017-10-22
目录
1 植物内生菌定义 2 植物内生菌种类 3 植物内生菌功能 4 植物内生菌应用
1.内生菌的发 De Bary
现与定义
1866
植物内生菌 Endophyte
Kleopper 1992
与“E表nd生op菌hy（teE”p一ip词hy最te早） 用来相特区指别那，些首不先引提起出症了状、
• 内生菌（Endophyte）是指那些在其生活 史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物 的各种组织和器官内部的微生物。
2.种类
1 内生真菌 （Endophytic fungi） 2 内生细菌
（Endophytic bacteria）
3 内生放线菌
（Endophytic actinomyces）
内生真菌
种子内携生带菌的的内概生念真菌
能够定殖在植物 细突 寄并和胞出 主与谐间强植寄联隙调物主合或了的植关细内共物系胞生生建的内菌关立，与系
一类微生物
Wilon 1995
生部活分史腐或生某个菌阶、段
普遍 潜能伏进性入病活原体植菌物和组菌织根内菌，等 认可 并也不应引包起涵明在显内组生织菌变化
的真范菌畴或之细内菌
植物内生菌
分类：共生固氮菌，自生固 氮菌
3.3植物内生放线菌
除根瘤菌外，还有放线菌侵入多种被子植物宿主，形成根瘤的共生固氮体系。早 在十九世纪后期，人们就发现了这类非豆科的根瘤，并发现根瘤内有生微生物， １８８１年布隆科斯特（Brunchost）将它称为Frankia，但当时并不知道它是什么 微生物。确定内生菌是放线菌，将它分离出来，在人工培养上获得纯培养，并回 接成功，则是１９７８年卡拉汉姆在杨梅科香蕨木上首次证实的 。
黄 瓜 内 生 菌
3.植物内生菌的分类
1.植物内生真菌 2.植物内生细菌 3.植物内生放线菌
3.1内生真菌
内生真菌是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中， 有许多种类很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不 容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同， 这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生 关系，或者是不太密切的共生关系。
4. 3 增强宿主植物对环境胁迫的抗性
内生菌增强植物的抗逆性可分为非生物胁迫和生物胁迫两 类。非生物胁迫主要表现在可增强抗高温、 抗干旱、抗盐碱等方面, 有研究结果表明感染内生菌的牧 草对环境胁迫如干旱 具有更强的抗性。生 物胁迫主要表现在可阻抑昆虫和食 草动物的采食、抵抗病 虫害等方面, 保护宿主免受危害。
植物内生菌促生机制及应用研究进展
植物内生菌促生机制及应用研究进展杨立军;李少刚;曹倩;黄豫皖;陈琼;汪金萍【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2024(52)9【摘要】植物内生菌是存在于植物体内并对其生长起促进作用的一种重要微生物资源,在农药、医药、食品、园艺等领域具有广阔的应用前景。
针对植物内生菌,本文从内生菌促生机制、种类及应用等方面进行综述。
在植物内生菌的促生机制方面,内生菌可通过以下4个方面达到促生效果:(1)通过自身作用,诱导植物产生植物激素,使体内的激素大量分泌,本文主要综述了内生菌对于IAA、CTK、GAs共3种植物激素的影响;(2)通过溶磷、解钾、产生铁载体、固氮等方面来达到植物对土壤中微量元素的吸收及利用;(3)对于一些如可溶性糖含量、超氧化物歧化酶活力、脯氨酸含量等植物生理活性指标的提高;(4)提高宿主细胞的抗逆性,如吸引有益微生物、调节土壤结构、抑制病原菌、缓解非生物的胁迫等。
对于具有促生作用的植物内生菌种类,主要有真菌和细菌两大类,并且随着人们研究的不断深入,具有促生能力的内生菌也被人们大量发现。
植物内生促生菌将在农业上应用广泛,将其与生物有机肥、化学肥料、微生物农药等其他农业生产材料混合使用,将大大促进我国农业的发展。
在此基础上,本文对植物内生菌促生作用进行了分析并进行了展望。
【总页数】7页(P35-41)【作者】杨立军;李少刚;曹倩;黄豫皖;陈琼;汪金萍【作者单位】信阳农林学院制药工程学院【正文语种】中文【中图分类】Q945.78;S182【相关文献】1.植物内生放线菌促生作用研究进展2.耐铅植物内生菌的筛选及其促生机制研究3.植物内生菌多样性及其病害生防机制研究进展4.药用植物内生菌促药效成分生物合成的研究进展5.药用植物内生菌促生与生防作用研究进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。