(完整)实验计划书
实习计划书范文3篇

实习计划书范文3篇导读:本文是关于实习计划书范文3篇,希望能帮助到您!实习计划书范文篇一:专业实习是高等教育的重要组成部分,是检验教学质量、培养学生动手能力和解决实际问题能力的重要环节,是高等学校教学中必不可少的重要组成部分,是学生在从事实际工作之前,对其能力进行综合性的初步训练的基本形式,是高等院校办学中理论联系实际的有效手段,是教学计划中的重要组成部分,是培养能在科技、教育、经济和金融、保险、证券等部门从事研究、教学工作或在生产、经营及管理部门从事实际应用、开发研究和管理工作的应用型专门人才的重要步骤.我院根据教务处关于xxxx 届毕业生实习的精神,为了确保专业实习的质量,保证专业实习具有针对性,使专业实习收到预期的效果,结合我院实际情况,特制定本实施方案。
一、专业实习的目的1。
使学生将所学的理论知识和基本技能综合应用于实践环节,培养学生具备从事金融实务工作的独立操作能力,初步具备在经济和金融领域从事科学研究、解决实际问题的能力。
2.能熟练应用计算机获取并处理相关的资料和数据信息。
3。
通过实习,检验该方向的办学思路、办学方向和办学方法,找出教学环节中存在的问题。
同时了解金融、保险、证券行业的行情,为我院的办学思路积累信息资料,以便改进教学方式,加强人才培养的针对性和适应性。
二。
学生和实习指导教师安排根据教务处对xxxx届毕业生的实习安排意见,结合本专业本方向的培养目标,根据部分学生报考教师职业资格证和外地州生源的具体情况,xxxx 届XXX班XX名毕业生,主要采取相对集中和分散实习的方式安排实习。
外地州生源中符合教务处《关于学生返回生源地实习的规定》而且手续齐全的名学生回生源地实习.返回生源地实习的学生共有15名,在自己联系并经学院核实的学校和单位进行实习。
集中专业实习的学生共有27名,集中教育实习的有22人.三、专业实习时间专业实习时间为xxxx年2月25日—xxxx年4月19日,总共为八周。
化学实验工作计划书范文(必备21篇)

化学实验工作计划书范文(必备21篇)(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改,请根据实际需要进行调整和使用,谢谢!并且,本店铺为大家提供各种类型的经典范文,如工作总结、工作计划、合同协议、条据书信、讲话致辞、规章制度、策划方案、句子大全、教学资料、其他范文等等,想了解不同范文格式和写法,敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!Moreover, our store provides various types of classic sample texts for everyone, such as work summaries, work plans, contract agreements, document letters, speeches, rules and regulations, planning plans, sentence summaries, teaching materials, other sample texts, etc. If you want to learn about different sample formats and writing methods, please pay attention!化学实验工作计划书范文(必备21篇)化学实验工作计划书范文第1篇化学实验中学生的观察能力是指学生通过观察实验过程及现象,获得生动的感性知识,然后进行积极思维,把观察到的感性材料进行分析、综合、概括、归纳,上升为理性认识,形成正确概念。
实验计划书

实验计划书实验计划书(精选19篇)实验计划书 1药品:半枝莲、95%乙醇、盐酸小檗碱对照品、蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液、碘-碘化钾试剂仪器:722型紫外分光光度计、电子分析天平、电热恒温水浴锅、数据超声波清洗器、微型植物粉碎机、PH计、加热板、循环水式多用真空泵实验方法:超生波提取法、半仿生法、正交实验、生物碱的鉴定方法实验步骤:一、药品、仪器的准备二、对照品溶液的制备、波长的测定、标准曲线的制作、推算出回归方程三、样液的制备四、用半仿生法提取半枝莲中生物碱1、单因素实验(1)温度对提取效果的影响(2)酸度对提取效果的影响(3)碱度对提取效果的影响(4)料液比对提取效果的影响2、因素、水平的确定及进行正交实验设计:由单因素温度、酸度、碱度和料液比作为正交试验的四个水平进行正交实验以确定半仿生法中最优的提取条件五、超声波辅助半仿生法提取半枝莲生物碱:在上述半仿生法得到的最优提取条件下进行超声波提取1、单因素实验(1)温度对提取效果的影响(2)提取次数对提取效果的影响(3)酒精浓度对提取效果的影响2、因素、水平的确定及进行正交实验设计:由单因素温度、提取次数、酒精浓度作为正交试验的三个水平进行正交实验以确定在超声波辅助半仿生法提取中的最优条件六、在超声波辅助半仿生法提取的最优条件下提取半枝莲中生物碱七、利用紫外分光光度计测定上述提取到的生物碱的吸光度,与标准曲线进行比较,计算出生物碱的量及产率。
八、生物碱的鉴定:生物碱沉淀反应1、碘化铋钾试剂反应取渗漉液1ml,加碘化铋钾试剂1滴~2滴,生成棕色至棕红色者为阳性反应在。
2、碘-碘化钾试剂反应取渗漉液1ml,加碘-碘化钾试剂1滴~2滴,生成棕黄色沉淀者为阳性反应。
3、硅钨酸试剂反应取渗漉液1ml,加硅钨酸试剂数滴,生成淡黄色沉淀者为阳性反应。
实验计划书 2一、实验名称:临时装片、切片、涂片的制作、观察和指导二、实验目标:通过自主制作临时装片、切片、涂片,让学生感受细胞的形态结构,让学生对细胞有一定的了解,为以后的教学做铺垫。
生物实验计划书范文(推荐29篇)

生物实验计划书范文(推荐29篇)(经典版)编制人:__________________审核人:__________________审批人:__________________编制单位:__________________编制时间:____年____月____日序言下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。
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实验计划书模板

实验计划书模板篇一:试验室检测计划书样板试验检测计划书编制:审核:审定:单位:XXXXXXXXXX工地试验室二○一四年三月目录1 编制依据 ................................................ ................................................... . (1)2 编制目的和试验宗旨 ................................................ ................................................... .. 33 工程概述 ................................................ ................................................... . (4)3.1 本工程主要工程量 ................................................ (4)3.2 具体实物工程量: .............................................. .. (4)4 试验检测机构设置及试验人员表 ................................................ (5)4.1 试验室机构设置 ................................................ . (5)4.2 试验室人员设置 ................................................ . (6)5 试验检测仪器设备配置 ................................................ . (7)6 工地试验室试验检测项目表 ................................................ (11)7 试验检测项目及规则 ................................................ ...................................................147.1 主体工程试验检测规则 ................................................ .. (14)7.2 涉及结构安全的材料、试块、试验件抽检取样规则及试验项目 (15)8 试验检测计划 ................................................ ................................................... (20)8.1 配合比检测计划(表8.1) ............................................. (20)8.2 原材料试验检测计划(表8.2) ............................................. . (21)8.3 桥梁试验检测计划(表8.3) ............................................. .. (22)8.4 涵洞试验检测计划(表8.4) ............................................. . (25)8.5 隧道试验检测计划(表8.5) ............................................. .. (26)8.6 路基试验试验检测计划(表8.6) ............................................. .. (27)8.7 外委试验检测计划(表8.7) ............................................. . (28)9 试验室岗位职责 ................................................ ................................................... .. (31)9.1 试验室部门职责 ................................................ (31)9.2 试验室主任岗位职责 ................................................ . (32)9.3 技术负责人岗位职责 ................................................ . (32)9.4 质量负责人岗位职责 ................................................ . (32)9.5 试验检测员岗位职责 ................................................ . (33)9.6 试验工人岗位职 (33)9.7 现场试验人员岗位职责 ................................................ (33)9.8 资料管理员岗位职责 ................................................ . (34)9.9 样品保管员岗位职责 ................................................ . (34)9.10 设备管理员岗位职责 ................................................ . (34)10 试验室规章制度 ................................................ ................................................... .. (36)10.1 试验室管理制度 ................................................10.2 试验室工作管理制度 ................................................ .. (36)10.3 试验检测环境管理制度 ................................................ . (37)10.4 安全与环保管理制度 ................................................ .. (37)10.5 检测事故分析制度 ................................................ (38)10.6 不合格品管理制度 ................................................ (38)10.7 试验资料的管理制度 ................................................ .. (39)10.8 试验检测记录、报告的填写与管理制 (39)10.9 试验文件、技术规范、规程管理制度 ................................................ . (40)10.10 建立试验台帐制度 ................................................ (40)10.11 取样、送检管理制度 ................................................ .. (40)10.12 试验样品管理制度 ................................................ (41)10.13 仪器设备管理制度 ................................................ (41)10.14 试验仪器定期保养维修制度 ................................................ .. (42)10.15 试验检测项目外委制度 ................................................ . (42)10.16 化学分析室管理制度 ................................................ .. (43)10.17 集料室管理制度 ................................................ . (43)10.18 水泥室管理制度 ................................................ . (43)10.19 土工室管理制度 ................................................ . (44)10.20 力学室管理制度 ................................................ . (44)10.21 水泥混凝土室管理制度 ................................................ (44)10.22 现场检测室工作制度 ................................................ .. (45)10.23 收样室管理制度 ................................................ . (45)10.24 留样室管理制度 ................................................ . (45)10.25 标养室管理制度 ................................................ . (45)11.1 水泥净浆搅拌机操作规程 ................................................ (47)11.2 水泥胶砂搅拌机操作规程 ................................................ (47)11.3 水泥稠度及凝结时间测定仪操作规程 ................................................ . (47)11.4 水泥胶砂流动度测定仪操作规程 ................................................ (47)11.5 水泥胶砂振实台操作规程 ................................................ (48)11.6 负压筛析仪操作规程 ................................................ . (48)11.7 全自动比表面积测定仪操作规程 ................................................ .. (48)11.8 水泥沸煮箱操作规程 ................................................ .. (49)11.9 标准恒温恒湿养护设备操作规程 ................................................ (50)11.10 震击式标准振筛机操作规程 ................................................ .......................... 50 11.11 洛杉矶磨耗机操作规程 ................................................ .. 错误!未定义书签。
检测实验项目计划书

检测实验项目计划书1. 引言本文档是关于检测实验项目的计划书,旨在明确项目的目标、任务、时间安排和资源需求等重要信息,以确保项目的顺利进行。
该项目旨在开展一项检测实验,使用特定的方法和设备对待测样本进行分析和评估,以获得相关数据和结论。
2. 项目目标本项目的目标是通过实验和检测,获取对待测样本的相关数据和结论。
具体而言,项目要达到以下目标:•确定合适的检测方法和设备;•准备实验所需的试剂和设备;•进行实验操作,并采集数据;•分析和处理数据,得出结论;•撰写实验报告。
3. 项目任务为了实现项目目标,我们将按照以下任务进行执行:3.1 确定检测方法和设备根据待测样本的特性和检测需求,我们将进行市场调研和技术评估,选择合适的检测方法和设备。
在选择过程中,需考虑检测准确性、设备价格、操作简便性等因素。
3.2 准备实验所需的试剂和设备根据选择的检测方法和设备,我们将购买所需的试剂和设备,确保实验进行时不会因资源不足而受到阻碍。
同时,我们也需确保所购买的试剂和设备符合安全要求,并对其进行妥善保管。
3.3 进行实验操作,并采集数据根据所选方法和设备的操作说明,我们将进行实验操作,按照规定的条件和步骤对样本进行检测。
在实验过程中,我们将严格控制变量,并记录每一步骤的操作细节和结果数据。
3.4 分析和处理数据,得出结论通过对实验数据的分析和处理,我们将得出初步结论,并对结果进行评估和解释。
在数据处理过程中,我们将采用适当的统计方法和工具,确保结论的可信度和准确性。
3.5 撰写实验报告根据实验结果和结论,我们将撰写一份详细的实验报告。
报告将包括实验目的、方法、步骤、数据分析和结论等内容,并按照规定的格式进行排版。
4. 时间安排为确保项目的顺利进行,我们将制定以下时间安排:•项目启动和需求分析:1天•检测方法和设备选择:3天•试剂和设备准备:5天•实验操作和数据采集:10天•数据分析和结论得出:3天•实验报告撰写:4天总计约需25天完成整个项目。
实验室项目计划书
实验室项目计划书一、项目简介本项目旨在开展一项实验室研究,重点研究领域为XXX(填写具体研究领域)。
通过实验室的设备和技术,我们将开展一系列实验,以探索相关领域的问题并寻求解决方案。
二、项目目标1.明确研究问题:通过文献调研和前期实验,明确研究问题,并在此基础上制定实验方案。
2.开展实验:根据制定的实验方案,进行实验操作,获取有效数据。
3.数据分析:对实验结果进行数据分析,寻找规律和趋势,提炼关键信息。
4.解决问题:基于数据分析结果,提出解决问题的方案或建议,并进行可行性评估。
三、项目计划1.阶段一:前期准备(时间:1个月)1.1 文献调研:对相关领域的前沿研究进行全面调研,了解当前研究状况和存在的问题。
1.2 设计实验方案:根据研究问题,制定详细的实验方案,包括实验流程、所需材料和设备等。
1.3 采购设备和材料:根据实验方案,购买所需设备和材料,确保实验顺利进行。
2.阶段二:实验操作与数据采集(时间:3个月)2.1 实验操作:按照实验方案,进行实验操作,保证实验的准确性和可重复性。
2.2 数据采集:在实验过程中,及时记录实验数据,并进行整理和存储,确保数据的完整性和可靠性。
3.阶段三:数据分析与结果呈现(时间:2个月)3.1 数据清洗与整理:对采集到的数据进行清洗和整理,排除异常值和干扰因素,保证数据的准确性。
3.2 数据分析:运用统计学方法和相关软件工具,对数据进行分析,寻找数据间的关联性和趋势。
3.3 结果呈现:将数据分析结果进行可视化展示,如绘制图表或制作PPT报告,以便于展示和交流。
4.阶段四:方案提出与评估(时间:1个月)4.1 方案提出:基于数据分析结果,提出解决问题的方案或建议,并进行详细阐述。
4.2 可行性评估:对提出的方案进行可行性评估,包括技术可行性、经济可行性和可操作性等方面的考虑。
四、项目风险及对策1.实验设备故障:定期维护设备,确保设备正常运行,备用设备的准备。
2.实验数据丢失:及时备份实验数据,并采取数据恢复措施。
实验计划书范文(共9篇)
实验计划书范文(共9篇):计划书实验范文计划书怎么写个人工作年计划书范文销售计划书范文图片篇一:实验计划书格式要求广医生化技能大赛实验设计书格式要求(A4纸)一、排版1、页面设置:页边距上下左右各用2.4cm。
2、行距:全部采用1.5倍行距。
3、页码:每页下端居中,全部采用阿拉伯数字排序,如1,2,3等,不要写“第1页”或“-1-”等。
4、页眉:全部不加页眉。
二、标题1、实验名称(居中、三号宋体、加粗)2、参赛者资料(居中、小四宋体):学院年级专业姓名宿舍电话手机号码(按字母排序)三、摘要1、“摘要”两字用黑体加粗4号字居中,字与字之间留4个字距。
摘要正文用宋体小4号字。
2、“关键词”三个字用黑体加粗小4号字,与摘要正文左对齐。
3、关键词宋体小4号字,各关键词之间空2个字距,且不加标点符号。
四、正文(1、前言;2、实验目的;3、实验原理;4、实验设备;5、实验材料及试剂:a.试剂的配制b.材料的处理;6、实验操作步骤;7、结果及计算;8、注意事项;9、费用预算)1、正文层次标题题末不加标点符号。
各层次一律用阿拉伯字连续编号,如:“1”,“2.1”,“3.1.2”,一律左顶格,后空一字距写标题。
一级标题从前言起编,一律用黑体加粗4号字,左顶格;二级标题用黑体加粗小4号字,左顶格;三级标题用楷体加粗小4号字,左顶格。
2、正文其他部分全部用宋体小4号字。
3、图题放图下方居中,用阿拉伯数字编号,如:图1,图号后不加任何符号,空1个字距写图题;表题放表上方居中,用阿拉伯数字编号,如:表1,表号后不加任何符号,空1个字距写表题。
4、文中的拉丁学名采用右斜体字母。
五、参考文献1、“参考文献”四字用黑体加粗4号字居中,字与字之间空1个字符。
2、中文参考文献采用宋体小4号字,英文参考文献采用Times New Roman小4号字。
六、附录如有附录,放在参考文献后。
“附录”两字用黑体加粗4号字居中,字与字之间留4个字距。
试验工作计划
试验工作计划一、背景介绍。
近年来,随着科学技术的不断发展,试验工作在各个领域中扮演着越来越重要的角色。
为了更好地推动科技创新,提高实验室工作效率,我们制定了以下试验工作计划。
二、目标。
1. 提高实验室工作效率,缩短试验周期;2. 确保试验数据的准确性和可靠性;3. 推动实验室科研成果的转化和应用。
三、具体工作安排。
1. 制定试验工作流程,明确各项试验的具体步骤和操作流程,确保每个环节都得到严格执行;2. 规范试验数据记录和管理,建立完善的数据记录和管理制度,确保试验数据的准确性和可追溯性;3. 强化设备维护和保养,定期对实验设备进行维护和保养,确保设备的正常运转;4. 加强实验室安全管理,加强实验室安全意识教育,确保试验工作的安全进行;5. 推动实验室科研成果的转化和应用,加强与产业界的合作,推动科研成果的转化和应用。
四、预期成果。
1. 实验室工作效率得到提高,试验周期缩短;2. 试验数据的准确性和可靠性得到保障;3. 一定数量的科研成果得到转化和应用。
五、工作进度安排。
1. 制定试验工作流程,第一周完成;2. 规范试验数据记录和管理,第二周完成;3. 强化设备维护和保养,第三周完成;4. 加强实验室安全管理,第四周完成;5. 推动实验室科研成果的转化和应用,长期推进。
六、风险及对策。
1. 实验设备故障,建立设备维修保养制度,确保设备的正常运转;2. 试验数据丢失或错误,建立严格的数据记录和管理制度,确保试验数据的准确性和可靠性;3. 安全事故发生,加强实验室安全意识教育,确保试验工作的安全进行。
七、总结。
通过制定以上试验工作计划,我们将全面提升实验室工作效率,确保试验数据的准确性和可靠性,推动实验室科研成果的转化和应用。
希望通过大家的共同努力,实现试验工作的良性循环,为科技创新贡献力量。
实验计划书
实验计划书(初定)xxxxxxx年xx月xx号此为初步计划书,还有很多不成熟甚至错误之处,望老师给予指出!本实验总体上分为三大步。
(1)生理实验部分:本部分主要进行papaya硬度和细胞壁相关酶类活性的测定。
(2)分子实验部分:本部分主要是获得papaya细胞壁相关酶类的基因序列以及由RNA差异表达谱获得细胞壁代谢酶基因等的表达特征。
(3)验证实验部分:本部分主要通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q-PCR)验证并初步确定与“橡皮化”相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
生理实验部分是第一步需要实施的,也是比较独立的部分,初步定为40天左右的时间结束。
分子实验和验证实验部分是本实验的核心,这两部分紧密结合,需要同步进行,首先是各种样本(CK,ETH,1-MCP)的获得,随后是各样本的RNA提取,然后委托深圳华大基因公司进行转录组测序并从转录组中筛选细胞壁代谢相关的基因序列,采用5RACE及3RACE的方法,获得这些基因的全长序列以及构建差异表达谱进行相关差异基因筛选等生物信息分析,最后通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q-PCR)验证并初步确定与“橡皮化”相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
一,买果。
二,采后预处理:采后立即运回实验室,剔除病果和机械损伤果,选用形状、大小、外观颜色相对一致的番木瓜果实,剪留0.5cm长果柄为实验材料。
先用1.0 g/L的次氯酸钠溶液洗果10 min,再用0.5g/L的施保功溶液浸泡果实10 min,取出晾干后备用。
三,样品分组(四组):1.对照组:果实用PE(聚乙烯)保鲜袋包装,轻绑袋口,置于低温(15℃)的恒温箱中贮藏。
2.1.0μl/L的1-MCP处理(橡皮化果实):在室温条件下(25℃),用浓度1.0μl/L的1-MCP密闭熏蒸处理果实24 h,取出果实后用PE 保鲜袋包装,轻绑袋口,置于15℃(冷藏)、RH(相对湿度)为90%的条件下贮藏。
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实验计划书(初定)xxxxxxx年xx月xx号此为初步计划书,还有很多不成熟甚至错误之处,望老师给予指出!本实验总体上分为三大步.(1)生理实验部分:本部分主要进行papaya硬度和细胞壁相关酶类活性的测定。
(2)分子实验部分:本部分主要是获得papaya细胞壁相关酶类的基因序列以及由RNA差异表达谱获得细胞壁代谢酶基因等的表达特征。
(3)验证实验部分:本部分主要通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q-PCR)验证并初步确定与“橡皮化"相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
生理实验部分是第一步需要实施的,也是比较独立的部分,初步定为40天左右的时间结束。
分子实验和验证实验部分是本实验的核心,这两部分紧密结合,需要同步进行,首先是各种样本(CK,ETH,1-MCP)的获得,随后是各样本的RNA提取,然后委托深圳华大基因公司进行转录组测序并从转录组中筛选细胞壁代谢相关的基因序列,采用5RACE及3RACE的方法,获得这些基因的全长序列以及构建差异表达谱进行相关差异基因筛选等生物信息分析,最后通过实时荧光定量PCR的方法(Real time Q—PCR)验证并初步确定与“橡皮化”相关的细胞壁代谢酶基因的家族成员。
一,买果.二,采后预处理:采后立即运回实验室,剔除病果和机械损伤果,选用形状、大小、外观颜色相对一致的番木瓜果实,剪留0.5cm长果柄为实验材料。
先用1。
0 g/L的次氯酸钠溶液洗果10 min,再用0.5g/L的施保功溶液浸泡果实10 min,取出晾干后备用。
三,样品分组(四组):1.对照组:果实用PE(聚乙烯)保鲜袋包装,轻绑袋口,置于低温(15℃)的恒温箱中贮藏.2.1.0μl/L的1-MCP处理(橡皮化果实):在室温条件下(25℃),用浓度1.0μl/L的1—MCP密闭熏蒸处理果实24 h,取出果实后用PE保鲜袋包装,轻绑袋口,置于15℃(冷藏)、RH(相对湿度)为90%的条件下贮藏.3。
0。
5 g/L的乙烯利处理:在室温条件下(25℃),用浓度0.5 g/L 的乙烯利处理果实3分钟,取出果实后用PE保鲜袋包装,轻绑袋口,置于15℃(冷藏)、RH为90%的条件下贮藏。
四,实验过程:贮藏过程中每隔2d(催熟果实)和5d取样一次,鲜果或-70℃贮存,为以后进行基因表达水平的研究.取样的同时,进行以下生理指标的测定:1。
果实硬度:使用果实硬度计(FHM-1型,日本产)进行测定。
2。
PG(多聚半乳糖醛酸酶)活性:称取1g果肉,加入5mL(先加3 mL,后用2mL冲洗) 0.05mol/L,pH4。
6的柠檬酸缓冲液低温存放(含5%NaCl和1.8 mM的EDTA(乙二胺四乙酸)),冰浴研磨匀浆。
然后在10000转离心30min,将上清液进行透析,用0.05mol/L,pH4。
6的柠檬酸缓冲液作为透析液,透析液不含EDTA和NaCl。
透析条件:4℃条件下放24小时,中间换一次缓析液,透析完的溶液用于酶活力的测定.该操作在冰浴下进行.PG活性测定:PG 活性测定以1% 多聚半乳糖醛酸(PGA , 美国Sigma 公司)为底物,反应混合液为:1% PGA0。
5 mL、醋酸钠缓冲液(pH 4.6)1。
5 mL、酶提取液0。
5 mL, 0。
5 mL的水(总反应体系为3mL), 40 ℃反应60 min, 立即加入1mL DNS (3, 5—二硝基水杨酸)终止反应。
再加入沸水中煮沸10 min 后冷却,于波长540 nm 下定量分析酶水解生成的半乳糖醛酸含量.以3mL蒸馏水+1 mLDNS作为对照(CK)。
以每小时释放1mg 的D—半乳糖醛酸(美国Sigma 公司)为1 个酶活性单位(U).以标准D—半乳糖醛酸绘制标准曲线。
试验重复3 次.对照不加酶液,以缓冲液代替.3。
PME(果胶甲酯酶)酶活性:取2g果肉,加3mL 预冷的1 mol/L NaCl和2 g PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)置于研钵中,充分研磨后,转移到离心管中,再用2mL NaCl润洗,倒入离心管中,于冰浴中放置1小时,每隔20 min震荡一次,在4℃下,10000转离心30 min,收集上清液,用0.01 mol/L NaOH调至pH为7.5, 于4℃保存备用。
测定:在试管中依次加入1。
5mL 0。
5% (w/v)的果胶放冰箱备用,有效期5天、0.5 mL0。
01%溴麝香酚兰指示剂棕色瓶(pH为7。
5),1.0 mL水,0.5 mL酶液(酶液最后加入),总反应体系为3。
5 mL .立即将试管放入37℃的水浴锅中30 min,以蒸馏水为CK。
取出试管后冷却,迅速测定其在620 nm波长一分钟内的变化.以每min变化0.01为一个活力单位(U),以U/ g。
FW表示。
4。
纤维素酶(CX):取0.625g羧甲基纤维素钠溶于0。
2 mol/L(pH为4.6)的醋酸钠缓冲液中,加几滴氢氧化钠调PH值到7.0,放低温下溶解,定容至100 mL.酶液的制备同PG。
活性测定:反应体系为 1 mL CMC(羧甲基纤维素钠)溶液,酶液 1 mL,醋酸钠缓冲液(pH 4。
6)1.0 mL(总反应体系为3mL),40 ℃保温60 min,取出加入3,5一二硝基水杨酸(DNS)1 mL终止反应;加入沸水中煮沸5 min,冷却后用分光光度计在540nm处比色测定吸光度值。
以3mL 蒸馏水+1 mLDNS作为对照(CK)。
每小时由底物生产1μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。
纤维素酶活力(U/g)=〔葡萄糖含量(mg)×酶液提取总体积(mL)×5.56〕/〔反应液中酶液加入量(mL)×样品重(g)×时间(h)〕式中5.56--1 mg葡萄糖的微摩尔数(1000/180=5.56);用3, 5-二硝基水杨酸测定生成的葡萄糖做标准曲线。
5.内切木聚糖酶活性:酶液的制备同PG。
活性测定:反应体系为1 mL5mg/mL的燕麦木聚糖溶液,酶液1 mL,醋酸钠缓冲液(pH 4.6)1.0 mL(总反应体系为3mL),40 ℃保温60 min,取出加入3,5一二硝基水杨酸(DNS)1 mL终止反应;加入沸水中煮沸5 min,冷却后用分光光度计在540nm处比色测定吸光度值.以3mL蒸馏水+1 mLDNS作为对照(CK)。
在特定条件下,每分钟水解木聚糖形成1μmol木糖(还原糖)所需酶量为1个酶活力单位(U ).6。
内切葡聚糖酶活性:酶液的制备同PG。
活性测定:反应体系为 1 mL1%昆布多糖,酶液 1 mL,醋酸钠缓冲液(pH 4.6)1.0 mL(总反应体系为3mL),40 ℃保温60 min,取出加入3,5一二硝基水杨酸(DNS)1 mL终止反应;加入沸水中煮沸10 min,冷却后用分光光度计在540nm处比色测定吸光度值。
以3mL蒸馏水+1 mLDNS 作为对照(CK)。
1min 生成1μg还原糖定义为1个酶活力单位。
7。
b—半乳糖苷酶活性:酶液的制备同PG。
活性测定:反应体系为 1 mL20mmol/L邻硝基苯B-D-吡喃半乳糖( ONPG) 底物溶液,酶液 1 mL,柠檬酸钠缓冲液(pH 4。
6)1。
0 mL (总反应体系为3mL),40℃保温60 min,取出加入0。
5mol/L 碳酸钠冷1 mL终止反应;后用分光光度计在420nm处比色测定吸光度值。
以3mL蒸馏水+1 mL0。
5mol/L 冷碳酸钠作为对照(CK)。
酶活力单位U 定义为标准条件下(pH 值为4。
6,40℃)每分钟催化生成1μmol产物邻硝基苯酚( ONP) 所需的酶量为1个单位.五,关键基因的表达调控研究:1,RNA的提取、转录组测序用Trizol法分别提取各处理样品的总RNA,将各样品的总RNA混合后,采用Oligo(dT)富集mRNA,参照打断-反转录—高通量测序的方法进行转录组测序,通过生物信息分析,拼接组装得到大量的EST序列,委托深圳华大基因研究院进行转录组测序。
从转录组中筛选细胞壁代谢相关的基因序列,采用5RACE及3RACE的方法,获得这些基因的全长序列。
Trizol法⑴、准备试剂:氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0。
5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制)。
⑵、操作步骤:①. 匀浆处理:a。
组织将组织在液氮中磨碎,每50—100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。
样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b. 单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。
TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数.TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c. 细胞悬液离心收集细胞,每5—10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。
加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。
一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
②. 将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
③. 可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2—8℃10000×g离心10分钟,取上清.离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。
处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。
取澄清的匀浆液进行下一步操作。
④。
每使用1ml TRIzol加入0。
2ml氯仿,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
⑤. 2-8℃10000×g离心15分钟。
样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
⑥. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。
用异丙醇沉淀水相中的RNA。
每使用1ml TRIzol加入0.5ml 异丙醇,室温放置10分钟。
⑦. 2—8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
移去上清.⑧. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀.每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇.2—8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。