神经元特异性烯醇化酶(NSE)作业指导书
NSE中文说明书
０．０５０─３７０ｎｇ／ｍｌ
先在－７０度以下速冻，然后转移至－２０度。
稀释：
含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠
高于检测范围的标本可用ＮＳＥ稀释液稀释。建议１：５稀释。
防腐。
稀释后的标本ＮＳＥ含量必须高于５０ｎｇ／ｍｌ。
如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。
检测步骤：
· Ｅｌｅｃｓｙｓ系统缓冲液／测量池清洗液预热杯（ＰＣ／ＣＣ－Ｃｕｐ）货号０３０２３１４１
区别开来。α亚单位可出现在哺乳动物的多种类型组织中，而β亚单位主要存在于 · Ｅｌｅｃｓｙｓ反应杯／吸样头盒（ＡｓｓａｙＣｕｐｓ／ＡｓｓａｙＴｉｐｓ Ｃｏｍｂｉｍａｇａｚｉｎｅ Ｍ）
心肌和横纹肌组织中。二聚体烯醇化酶αγ和γγ称为ＮＳＥ或γ－烯醇化酶，主要存
货号１２１０２１３７
在于神经组织、神经内分泌细胞和这些组织来源的肿瘤组织中。
· Ｅｌｅｃｓｙｓ废物盒（ｗａｓｔｅｌｉｎｅｒ）货号０３０２３１５０
支气管癌：ＮＳＥ被认为是监测小细胞支气管癌的首选标志物。而ＣＹＦＲＡ２１－１则适合于 · Ｅｌｅｃｓｙｓ系统清洗液支架（ＳｙｓＣｌｅａｎ Ａｄａｐｔｅｒ Ｍ） ）货号０３０２７６５１
如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。
提供的材料：
货号：１２１３３１１３，１００人份的Ｅｌｅｃｓｙｓ ＮＳＥ试剂盒包含： · Ｍ 链霉亲和素包被的微粒 · Ｒ１ 生物素化的抗ＮＳＥ抗体
正常参考值： ≤１５．２ｎｇ／ｍｌ。如有必要，各实验室应自联吡啶钌标记的抗ＮＳＥ抗体
一周或首轮治疗结束后，ＮＳＥ含量迅速降低。而治疗无反应者，血中ＮＳＥ持续升高或 按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒使用说明书
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中 1，25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)的含量。
小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)检测试剂盒实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠1，25-二羟基维生素 D3(1,25-(OH)2D3)水平。
用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 1,25-(OH)2D3，再与 HRP 标记的 1,25-(OH)2D3 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的 1,25-(OH)2D3 呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠1，25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48 孔配置 96 孔配置保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：90ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存终止液 3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20 倍）×1 瓶（20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。
NSE中文说明书
质控：
试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
Ｅｌｅｃｓｙｓ肿瘤标志物质控品（Ｐｒｅｃｉｃｏｎｔｒｏｌ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒ）１和２以及其它合适的质
控。
试剂：
各浓度区域的质控至少每２４小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各
Ｍ：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），１瓶，６．５ｍｌ。粒子浓度０．７２ｍｇ／ｍｌ，生
需要的材料（未提供）：
注意：
· Ｅｌｅｃｓｙｓ ＮＳＥ定标液（ＣａｌＳｅｔ）货号１２１３３１２１
神经元特异性烯醇化酶（ｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ，ＮＳＥ）测定值的高低与所采用 · Ｅｌｅｃｓｙｓ 肿瘤标志物质控品（ＰｒｅｃｉＣｏｎｔｒｏｌ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒ）１和２
的检测方法密切相关。因此检测报告应注明所采用的方法。用两种方法测出的含量 不能相互直接比较，以免出错。在疗效观察过程中，如因检测方法改动引起的含量 变化，必须用原法同时测定核实过。
神经元特异性烯醇化酶
Neuron-specific enolase
12133113 １００ 人份
Elecsys® Systems 1010/2010/MODULAR ANALYTICS E170
中文 - 2001-05 - 2179202001 01 03
实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应
结合能力： ４７０ｎｇ生物素／ｍｇ粒子。含防腐剂。物素
采取校正措施。
Ｒ１：生物素化的抗ＮＳＥ单克隆抗体（灰盖），１瓶，１０ｍｌ。浓度１．０ｍｇ／ｌ，磷酸缓冲
液０．０５ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ７．２。含防腐剂。
计算：Ｒ２ຫໍສະໝຸດ Ｒｕ（ｂｐｙ）３２＋标记的抗ＮＳＥ单克隆抗体（黑盖），１瓶，１０ｍｌ，浓度１．０ｍｇ／ｌ，磷
大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析(NSE-ELISA)试剂盒使用
大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析（NSE-ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0537r预期应用ELISA法定量测定大鼠血清中NSE含量，有助于诊断小细胞肺癌及相关性疾病。
概述烯醇化酶（Enolase）是参与糖酵解的酶，催化2-磷酸甘油酸向磷酸烯醇丙酮酸的转化，由三种亚基（α、β、γ）组成的二聚体同功酶。
其中αγ和γγ烯醇化酶同功酶存在于神经元及神经来源的细胞中，也称为神经元特异性烯醇化酶（Neurone specific enolase ，NSE）。
在正常大鼠群中NSE含量较低，但在某些神经内皮细胞增生的恶性疾病，如神经母细胞瘤（Neuroblastoma），其含量往往上升。
由于小细胞肺癌（Small cell lung carcinoma，SCLC）是最常表现有神经内分泌性质的肿瘤，目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。
肺癌是近年来发病率日趋增高的癌种，在种种肺癌中小细胞肺癌占大约20%，因此正确诊断肺癌的类型，特别是确定小细胞肺癌的诊断很重要。
小细胞肺癌患者的αγ和γγ同功酶含量均有不同比例的增高，因些必须在同一敏感度下同时检测NSE的αγ和γγ同功酶含量。
本试剂盒所用单抗只针对NSE的γ亚基，而与α或β亚基无交差反应。
据文献报道，NSE含量测定可作为肺癌、成神经细胞瘤、黑素瘤、精原细胞瘤以及中枢精神系统损伤的诊断指标。
同时，也可用于SCLC治疗前后疗效的监测与预后，以及SCLC 与其它型肺癌的鉴别诊断。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定血清中NSE水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NSE抗原、生物素化的抗大鼠NSE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NSE呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
神经元特异烯醇化酶检测作业指导书医学检验
《文件已阅声明表》《Procedure circulation form》文件名称: 神经元特异烯醇化酶检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02《文件修改记录页》《Procedure amendment form》表号:KM-MP03.02.03《文件信息表》《Procedure information form》表号:KM-MP03•02•04神经元烯醇化酶（NSE）检测作业指导书（Standard operation procedure for analysis of NSE）1.原理（Test principle）:反应原理“三明治”法，总检测时间：18 分钟。
第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗NSE 特异性单克隆抗体一起孵育，一份钌复合体标记的NSE 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合体。
第二次孵育：加入链酶亲和素包被的微粒，复合体在链酶亲和素和生物素相互作用下形成固相。
将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。
未结合的物质通过ProCell 除去。
在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。
通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2 定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。
2.样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:2.1样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）50μL，仪器加样量（sample volume ）20μL。
2.2拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血（hemolysis）标本拒收2.3标本储存条件(sample storage conditions)：室温（room temperature）保存6小时； 2-8℃24小时； -20℃3个月；十五天后处理标本。
神经元特异性烯醇化酶(NSE)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求参考版
医疗器械产品技术要求编号：
神经元特异性烯醇化酶(NSE)测定试剂盒(化学发光免疫分析法) 1.产品型号/规格及其划分说明
1.1型号规格
480测试/盒，96测试/盒。
1.2结构组成
校准品靶值批特异，详见定值单。
不同批号的组分不得混用。
1.3适用范围
用于体外定量测定人血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量。
2.性能指标
2.1外观
组分齐全、完整；溶液无混浊，无沉淀或絮状物；微孔板包装袋无破损、漏气现象。
2.2准确度
回收率应在90%～110%范围内。
2.3线性
在[0.5，200]ng/mL范围内，r应不小于0.9900。
2.4空白限
应不大于0.50ng/mL。
2.5精密度
2.5.1批内精密度
手工操作应不大于10.0%，全自动操作应不大于8%。
2.5.2批间精密度
应不大于15.0%。
2.6特异性
根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》规定了校准品的来源、赋值以及不确定度等内容，溯源至企业工作校准品。
2.8稳定性
2.8.1效期末稳定性
NSE试剂盒在2～8℃保存，有效期12个月。
在NSE试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1～2.4，2.5.1项，结果应符合各项要求。
2.8.2校准品复溶后稳定性
复溶后的校准品在2～8℃条件下保存7天后检测2.2～2.4，2.5.1项，结果应符合各项要求。
神经元特异性烯醇化酶抗体-说明书
Similarity: Belongs to the enolase family.
Gene ID: 2026
Database links: Entrez Gene: 2026 Human
Entrez Gene: 13807 Mouse Entrez Gene: 24334 Rat Omim: 131360 Human SwissProt: P09104 Human SwissProt: P17183 Mouse SwissProt: P07323 Rat Unigene: 511915 Human
Tissue/cell: Neuroblastoma cells; Block endogenous peroxidase by 3% Hydrogen peroxide for 30min; Blocking buffer (normal goat serum,C-0005) at 37℃ for 20 min; Incubation: Anti-NSE/ENO2/γ Enolase Polyclonal Antibody, Unconjugated(bs-1027R) 1:200, overnight at 4°C, followed by conjugation to the secondary antibody(SP-0023) and DAB(C-0010) staining
Tissue Specificity: The alpha/alpha homodimer is expressed in embryo and in most adult tissues. The alpha/beta heterodimer and the beta/beta homodimer are found in striated muscle, and the alpha/gamma heterodimer and the gamma/gamma homodimer in neurons.
神经元特异性烯醇化酶NSE时间分辨荧光免疫分析试剂盒的临床性能评价
【 关键词 神经元特异性烯醇化酶 】 (NSE);时间分辨荧光免疫分析(TRFIA);体外诊断 (IVD)
The Clinic Study of the Neuron Specific Enolase (NSE) Diagnost c Kit by Time-Resolved Fluoroimi munoassay 仃RFIA) CUI Xiaobing', WANG Biao', ZHANG Guolanz DONG ZhiningZ XU Weiwen'* , , (I. Souther M n edical Universit , GuangDong, GuangZhou 510515, China; 2. GuangZhou Darui Antibody COI TD; y GuangDong, GuangZhou 510663, China; 3. School of Biotechnology, Souther M n edical Universit , GuangDong, y GuangZhou 510515, China) [ABSTRAC刀 Objective To investigate the value of the newkit (NSE-TRFIA) for detection of NSE by the time- resolved f uoroimm l unoassay 口 RFIA M ). ethods Compared with the techniques of ECLIA, m easuring the level' of NSE from the 1008 blood samples with the NSE -TRFIA. Verified 师 W ALLC ` NSE-TRFIA. Results The positive accordant ratio was 98.04%, the negative accordant ratio was 98.39%. The
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物的反应曲线。
5.2 样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择 Workplace- Testslection ，在 Sequence No 栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个
项目或组合项目，点 SAVE键，样本号自动累加。
批量常规标本的输入，在主菜单下选择 Workplace- Testslection ，在 Sequence No 栏输入起始标本号，然后选择该标本所
4. 仪器和校准
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产 Elecsys 2010/E 170/E 411 全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准 ：每批 NSE试剂盒必须用新鲜试剂和 NSE Cal 1, Cal 2 定标一次。另外，以下情况需要再次定标： Elecsys E170 分析仪：
· 一个月（同一批号试剂）
Elecsys 添加剂液（ SysWash）货号 11930346
Elecsys
适配器 （Adapter for SysClean ），货号 11933159,
Elecsys
反应杯（ CUP），货号 11706829
Elecsys
加样头（ TIP），货号 11706802
Elecsys E170 分析仪
成夹心复合物。
· 第 2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，
通过光电倍增管进行测定。仪器通过 2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。
标（ BLANK键）或两点定标（ TWO POINT键）、全点定标（ FULL 键），再选择其它项目进行相应选择，最后点 SAVE，将定标物放
入在 Calibration —Calibrator 中定义好的位置，点 Start ，再点 Start ，仪器开始定标。 在 Calibration —Status 菜单中看定标结果，点 Calibration Result 键看定标结果，点 Reaction Monitor 键看每个定标
糖分解烯醇酶 (2-phospho-D-glycerate hydrolase. EC 4.2.4.11
，分子量约为 80kD)有多种二聚异构体，由三种亚
单位 α、 β 和γ组成。烯醇酶 α亚单位见于哺乳动物多种类型组织中，而 β 亚单位则主要见于心脏和肌肉组织。 αγ和 γγ酶异构体称为神经元特异烯醇化酶（ NSE）或 γ－酶，高浓度存在于神经细胞和神经内分泌细胞以及这些细胞所引发
脑脊膜瘤、纤维神经瘤和神经瘤仅偶尔有血清 NSE值升高。在原发脑瘤或脑转移性瘤 10和恶性黑色素瘤及肾上腺嗜铬细胞
瘤（ PC）患者中，可发现中枢神经系统 CNS的NSE值升高 1。14%器官排斥和 46％转移性肾癌患者 NSE浓度升高，与病情有关，
可作为一个独立的预后因子 1,12 。良性疾病：良性肺部和脑部疾病 NSE浓度略有升高（ <12ng/ml ），主要见于 CSF中，包括
其他所需材料：
Elecsys E170/E411 分析仪
Elecsys NSE 稀释液货号 03004864
Elecsys 系统清洗液（ SysClean）货号 11298500
Elecsys E411 分析仪
Elecsys 系统缓冲液（ ProCell ）货号 11662988
Elecsys 测量池清洗液（ CleanCell ）货号 11662970
与疾病进展有关。异常 NSE值大小或频率与疾病严重程度有明显的相关性；与无病生存期呈负相关性
1。 Apudoma神经内分
泌肿瘤： 34％患者血清 NSE浓度升高（ >12.5ng/ml ）1,4 。精原细胞瘤：临床上 68-73 ％患者有明显的 NSE浓度增加 1，与疾
病临床分期有关。其他肿瘤： 22％非肺部恶性疾病患者（任何期别肿瘤） NSE浓度高于 25ng/ml 。脑部肿瘤如神经胶质瘤、
患者（ > 5mg/天），必须在末次生物素治疗 8小时后采集标本。浓度达 1500U/ml的风湿因子对测定无影响。体外对 21种常用
药物进行试验未发现有药物影响检测结果。高达 100000ng/ml 大剂量不产生钩状效应。由于检测试剂中含有单克隆抗体，因
此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者标本检测结果可能有误。
一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
7. 计算方法
仪器会自动计算标本的浓度（ ng/ml 或者 ug/l ）。
8. 参考范围
德国 3家临床中心和罗氏内部总计 547例健康人群结果统计如下：
16.3ng/ml （95%的范围）， 15.7-17.0ng/ml （95％可信区间） 9. 分析性能
Elecsys 系统缓冲液（ ProCell ）货号 04880340
Elecsys 测量池清洗液（ CleanCell ）货号 04880293
Elecsys 试剂针清洗液（ ProbeWash）货号 03005712
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书
Elecsys E 170/E 411
XXXXXX 医院 检验科免疫室 分析项目作业指导书
Elecsys E 170/E 411
神经元特异性烯醇化酶
(NSE)
文件编号： LAB－ OP－MY020
第糖1 页，共 1 页
版本： A/0
生效日期： 2008-02-01
1. 分析原理
采用双抗体夹心法原理，整个过程 18分钟完成。
· 第 1步： 20μl 标本、生物素化的抗 NSE特异性的单克隆抗体和钌（ Ru）标记的抗 NSE特异性的单克隆抗体混匀，形
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖）， 1瓶， 6.5ml 。粒子浓度 0.72mg/ml 。含防腐剂。
R1：生物素化的抗 NSE单克隆抗体（灰盖）， 1瓶， 10ml，1.0mg/l ，磷酸缓冲液 50mmol/l ， Ph 7.2 ；含防腐剂。 R2： Ru(bpy) 3 2+标记的抗 NSE单克隆抗体（黑盖）， 1瓶， 10ml。浓度 1.0mg/l ，磷酸缓冲液 50mmol/l ，pH 7.2, 含防腐剂。
需做的单个项目或组合项目，点 REPEA，T 输入该批标本的最后一个标本号，点 OK即可。 进样分析，将标本按在 Workplace 菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内
, 按 START键，输入该批上机标
本的起始标本号，再点 START键，仪器自动开始推架检测标本。
6. 质量控制 用Elecsys 肿瘤标志物质控品 1和2 （PreciControl Tumor Marker ）。质控品 1和质控品 2至少每 24小时或每一次定标后测定
· 7 天（放置仪器上的同一试剂盒）
各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。
5. 操作步骤 （以 E 170 为例）
5.1 校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在 Application —Calib 菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时， 只需在定标菜单 Calibration 中进行即可。进入 Calibration —Status 菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定
2. 标本要求
血清：按标准常规方法采集。
o
不要使用血浆。离心 1小时。样本 15－25度稳定 6小时， 2－ 8度可稳定 24小时， -20 C可稳定 3个月。只能冻融一次。不要使用
加热灭活的标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。
标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。
3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料
CYFRA21-1 Compared with Carcinoembryonic Antigen, SquamousCell Carcinoma Antigen and Neuron-Specific Enolase in Lung
神经元特异性烯醇化酶
(NSE)
文件编号： LAB－ OP－MY020
第 2 页，共 2 页 版本： A/0 生效日期： 2008-02-01
Elecsys PC/CC 杯, 货号 03023141
Elecsys
反应杯 / 加针头 / 废物袋（ CUP/TIP），货号 12102137
Elecsys
系统清洗适配器（ SysClean Adapter M ），货号 03027651
或首个化疗周期结束时血清浓度迅速下降（治疗前浓度增加）。相反地，对化疗无反应的患者
NSE浓度持续升高或没有下
将到参考范围 1,8 。病情缓解期间， 80-96 ％患者 NSE浓度正常，而病情复发时 NSE浓度升高。一些病例其 1-4 月潜伏期中 NSE
浓度升高，常为指数式升高（ 10-94 天浓度翻倍），这与生存期有关 1。 NSE可用于评估小细胞肺癌患者预后情况、治疗有 效性和相关病因：诊断灵敏度 93％，阳性预测值 92％1,7,8 。神经母细胞瘤： 62％患儿 NSE血清浓度高于 30ng/ml ，升高值
的肿瘤细胞中 1。肺癌： NSE可作为检测小细胞肺癌首选标志物 1，而 CYFRA21-1 在非小细胞肺癌检测中优于 NSE2,3,9 。60-
81 ％小细胞肺癌病例 NSE浓度升高 1,7 。尽管 NSE浓度与转移部位或脑部转移没有相关性，但是与临床分期如疾病进展有很
好的相关性 1。首个化疗周期开始后 24-72 小时 NSE浓度有短暂的升高，原因是肿瘤细胞溶解 1。这种 NSE浓度升高可持续 1周
Elecsys NSE试剂盒附带有试剂添加剂以减少以上不良